本发明属于水产动物疾病防治，尤其涉及鱼类疫苗开发，具体涉及一种鲈鱼干扰素及其制备方法和应用。
背景技术：
1、鲈鱼(lateolabrax japonicus)是一种常见的经济鱼类，随着养殖规模的扩大和养殖环境的变化，鲈鱼病害频繁发生，尤其是由柱状黄杆菌引起的病害较为泛滥。柱状黄杆菌(flavobacterium columnare)是一种常见的水生生物病原菌，广泛分布于池塘、湖泊、河流等多种水体，其宿主范围极为广泛，可感染包括鲤科、鲈科、鲶科、鲑科、太阳科、鲻科等多个科的鱼类，并出现不同的感染症状。柱状黄杆菌通常损害鱼类的皮肤、鳍和鳃，其临床症状取决于其毒性的强弱，如表现出烂鳃、体表溃疡、出血等症状。柱状黄杆菌还会引起高死亡率，给渔业造成巨大的经济损失，严重危害渔业养殖。
2、鱼用疫苗能提高水产动物体特异性和非特异性免疫水平，具有不污染环境、无药物残留等诸多优势，是防治鱼类疾病最有效的方法之一。鱼类疫苗按制备方式可分为灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗及dna疫苗。其接种免疫途径主要包括三种方式：注射免疫、口服免疫、浸泡免疫。而对于鱼类来说，通过口服免疫的方式接种，比注射免疫和浸泡免疫疫苗使用方便，更节省劳动力，并具有不受鱼体大小限制的优点。
3、目前的鱼类口服疫苗开发的障碍主要是如何将抗原更高效地传递到肠道免疫系统中。佐剂对疫苗的作用是能增加抗原表面面积，延长其在机体内存留时间，让抗原在鱼体内持续缓慢的释放，使其与淋巴系统细胞充分的接触，从而增强巨噬细胞和浆细胞的活性，增强细胞介导的致敏反应能力，提高抗体水平。常见渔用口服疫苗的佐剂有聚合微球体、免疫复合刺激物、霍乱毒素、大肠杆菌不耐热肠毒素和细胞因子等，使用这些佐剂需要考虑到佐剂生产操作的繁琐程度、使用量、价格以及外环境影响因素等，需要考虑到整体疫苗的安全、高效、毒副作用等各种方面。一个理想的佐剂应该特异性的辅助疫苗刺激免疫系统，同时不会对动物产生副作用，免疫佐剂不仅可以改变免疫球蛋白的种类，还可以改变免疫反应强度、增强免疫应答、诱导机体产生特异性免疫、消除机体产生的免疫耐受、减少机体免疫副反应等。在鱼类中发现的i型和ii型干扰素，是一种在先天性免疫和获得性免疫中起着重要作用的细胞因子，具有抑制细胞分裂、调节免疫、抗病毒、抗肿瘤等多种作用。但是，目前还未发现使用鱼类干扰素作为免疫佐剂成功制备口服疫苗并取得有效的免疫效果的报道。
技术实现思路
1、基于上述问题，本发明提供一种鲈鱼干扰素ifn-α3。本发明中通过将鲈鱼干扰素ifn-α3-like的基因进行优化后，连接至质粒中构建得到重组质粒；该重组质粒经过转化、培养、阳性单克隆筛选、质粒重提、单克隆培养得到重组表达菌株，该重组表达菌株经过活化、扩大培养、诱导表达、纯化后得到该鲈鱼干扰素ifn-α3。将该鲈鱼干扰素ifn-α3用作鱼类口服疫苗佐剂，比单纯口服致病菌抗原的免疫效果更稳定，保护效率更高。
2、具体地，本发明第一个目的是提供一种鲈鱼干扰素ifn-α3，所述鲈鱼干扰素ifn-α3的氨基酸序列如seq id no.1所示。
3、本发明第二个目的是提供编码所述鲈鱼干扰素ifn-α3的核酸分子。
4、在优选的方案中，所述核酸分子的核苷酸序列如seq id no.2所示。
5、本发明第三个目的是提供一种重组质粒，所述重组质粒包含所述核酸分子。
6、本发明第四个目的是提供一种基因工程菌，所述基因工程菌包含所述重组质粒，或所述基因工程菌的基因组中整合有所述核酸分子。
7、本发明第五个目的是提供所述鲈鱼干扰素ifn-α3的制备方法，包括以下步骤：构建所述重组质粒，所述重组质粒经过转化、培养、阳性单克隆筛选、质粒重提、单克隆培养得到重组表达菌株，所述重组表达菌株经过活化、扩大培养、诱导表达、纯化后得到所述鲈鱼干扰素ifn-α3。
8、在优选的方案中，所述重组质粒是将所述核酸分子连接到质粒pet-28a中得到。
9、本发明第六个目的是提供所述鲈鱼干扰素ifn-α3或所述核酸分子或所述重组质粒或所述基因工程菌或所述鲈鱼干扰素ifn-α3的制备方法在制备水产动物疾病防治产品中的应用。
10、在优选的方案中，所述水产动物疾病防治产品用于防治由柱状黄杆菌引起的水产动物疾病。
11、本发明第七个目的是提供一种水产动物疾病防治产品，所述水产动物疾病防治产品包含所述鲈鱼干扰素ifn-α3。
12、在优选的方案中，所述水产动物疾病防治产品由所述鲈鱼干扰素ifn-α3和柱状黄杆菌抗原按照质量比1:10混合得到。
13、与现有技术相比，本发明的技术方案具有以下有益效果：(1)本发明中通过对鲈鱼干扰素ifn-α3-like基因进行优化、构建重组质粒和重组表达菌株，筛选重组表达菌株经过活化、扩大培养、诱导表达和纯化等步骤，得到鲈鱼干扰素ifn-α3。该鲈鱼干扰素ifn-α3作为水产动物尤其是鱼类的疫苗佐剂，能够为受体提供广谱性的保护，降低水产动物感染不同病毒的风险；与常规的渔用疫苗佐剂相比，其生产操作简单，价格低廉，安全性更高，毒副作用更小；与一些化学药物和抗生素相比，能减少对水产动物的毒副作用和药物残留问题。(2)本发明中将鲈鱼干扰素ifn-α3作为佐剂与柱状黄杆菌抗原联合使用，与单独的柱状黄杆菌抗原相比，对鲈鱼的保护效果增效17％。(3)本发明的鲈鱼干扰素ifn-α3是免疫细胞因子，因此不仅仅针对于鲈鱼柱状黄杆菌抗原有增效的效果，对鲈鱼其他致病菌和病毒感染也具有一定保护效果，进一步提高了该佐剂的广谱性。
1.一种鲈鱼干扰素ifn-α3，其特征在于，所述鲈鱼干扰素ifn-α3的氨基酸序列如seqid no.1所示。
2.编码权利要求1所述的鲈鱼干扰素ifn-α3的核酸分子。
3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如seq idno.2所示。
4.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包含权利要求2或权利要求3所述的核酸分子。
5.一种基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌包含权利要求4所述的重组质粒；或所述基因工程菌的基因组中整合有权利要求2或权利要求3所述的核酸分子。
6.权利要求1所述的鲈鱼干扰素ifn-α3的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：构建权利要求4所述的重组质粒，所述重组质粒经过转化、培养、阳性筛选、质粒重提、单克隆培养得到重组表达菌株，所述重组表达菌株经过活化、扩大培养、诱导表达、纯化后得到所述鲈鱼干扰素ifn-α3。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述重组质粒是将权利要求2或权利要求3所述的核酸分子连接到质粒pet-28a中得到。
8.权利要求1所述的鲈鱼干扰素ifn-α3或权利要求2所述的核酸分子或权利要求4所述的重组质粒或权利要求5所述的基因工程菌或权利要求6所述的制备方法在制备水产动物疾病防治产品中的应用。
9.一种水产动物疾病防治产品，其特征在于，所述水产动物疾病防治产品包括权利要求1所述的鲈鱼干扰素ifn-α3。
10.根据权利要求9所述的水产动物疾病防治产品，其特征在于，所述水产动物疾病防治产品由所述鲈鱼干扰素ifn-α3和柱状黄杆菌抗原按照质量比1:10混合得到。
