1.本发明涉及高血压防治技术领域，特别涉及嗜粘蛋白阿克曼菌在制备防治高血压的组合物中的应用和含有其的组合物。
背景技术：2.高血压(hypertension)是指以体循环动脉血压(收缩压和/或舒张压)增高为主要特征(收缩压≥140毫米汞柱，舒张压≥90毫米汞柱)，还伴有心、脑、肾等器官的功能或器质性损害的临床综合征。高血压是最常见的慢性病之一，血压水平与心脑血管病发病和死亡风险之间存在密切的因果关系。与高血压最相关的并发症包括脑卒中、心力衰竭、左心室肥厚、心房颤动、终末期肾病等。高血压治疗的方式包括生活方式干预、降压药和器械干预，在具有其他危险因素，如高血脂、高血糖、缺血性心脑血管疾病时，还需要针对性的采用其他干预治疗。生活方式干预是最基础的治疗方式，包括减少钠盐摄入、彻底戒烟及避免被动吸烟、不饮酒、减轻精神压力等，但由于患者情况不同，通常具有依从性问题。
3.因此，开发有效的高血压防治药物是必要的。
技术实现要素：4.基于此，本发明的目的是提供嗜粘蛋白阿克曼菌以及含有所述嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物在制备防治高血压的药物组合物或者在制备改善血压水平的保健品组合物中的应用，所述嗜粘蛋白阿克曼菌为嗜粘蛋白阿克曼菌am06、嗜粘蛋白阿克曼菌am02或者两者的组合；其中，
5.所述嗜粘蛋白阿克曼菌am06于2021年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.22793；
6.所述嗜粘蛋白阿克曼菌am02于2021年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.22794。
7.在本发明的第一方面，提供嗜粘蛋白阿克曼菌在制备防治高血压的药物组合物或者在制备改善血压水平的保健品组合物中的应用，所述嗜粘蛋白阿克曼菌为嗜粘蛋白阿克曼菌am06、嗜粘蛋白阿克曼菌am02或者两者的组合；其中，
8.所述嗜粘蛋白阿克曼菌am06于2021年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.22793；
9.所述嗜粘蛋白阿克曼菌am02于2021年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.22794。
10.在一些实施方式中，所述嗜粘蛋白阿克曼菌am06和所述嗜粘蛋白阿克曼菌am02各自独立地为活菌、灭活菌或者活菌和灭活菌的组合。
11.在一些实施方式中，所述高血压包括防治肾性高血压、自发性高血压、复合饮食因素所致代谢性高血压或者单纯收缩期高血压。
12.在一些实施方式中，所述药物组合物为药品，其剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂或管饲制剂。
13.在一些实施方式中，所述保健品品组合物为保健食品，其种类为乳制品或发酵谷类食品。
14.在一些实施方式中，所述药物组合物或者所述保健品组合物中含有有效量的所述嗜粘蛋白阿克曼菌。
15.在一些实施方式中，受试者为哺乳动物。
16.在一些实施方式中，所述受试者为人或者小鼠。
17.在本发明的第二方面，提供含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物在制备防治高血压的药物组合物或者在制备改善血压水平的保健品组合物中的应用，其中，所述嗜粘蛋白阿克曼菌如本发明的第一方面所定义。
18.在一些实施方式中，所述含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物为保健品组合物、药物组合物或益生菌组合物。
19.在一些实施方式中，所述含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物还包括第二活性成分，所述第二活性成分为不同于所述嗜粘蛋白阿克曼菌的药物。
20.在一些实施方式中，所述含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物为益生菌组合物，所述益生菌组合物还含有不同于所述嗜粘蛋白阿克曼菌的益生菌。
21.在本发明的第三方面，提供含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物，所述组合物还包含替米沙坦、卡托普利、缬沙坦和氨氯地平中的一种或者多种；所述嗜粘蛋白阿克曼菌如第一方面中所定义。
22.相对于传统技术，本发明具备如下有益效果：
23.本技术的发明人经分离得到了菌株am06(保藏号cgmcc no.22793)和am02(保藏号cgmcc no.22794)，根据16s rrna分析、形态分析、代谢物成分分析、功效分析(如人工胃液和人工肠液的耐受性)等综合分析，两者均属于嗜粘蛋白阿克曼菌，而且鉴定为不同于atcc baa-835(标准菌株)等嗜粘蛋白阿克曼菌的新菌种。
24.发明人发现，上述分离得到的嗜粘蛋白阿克曼菌am06和/或am02可用于高血压。上述分离得到的嗜粘蛋白阿克曼菌am06和/或am02，能够通过改善et-1、no、angii等血压调节因子的水平，有效防治高血压。
附图说明
25.为了更清楚地说明本技术实施例中的技术方案、更完整地理解本技术及其有益效果，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本技术的一些实施例，对本领域技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
26.图1为本发明一实施中培养得到的嗜粘蛋白阿克曼菌am02的菌落特征图；
27.图2为本发明一实施中得到的嗜粘蛋白阿克曼菌am06的菌落特征图；
28.图3为本发明一实施中培养得到的嗜粘蛋白阿克曼菌am02进行革兰氏染色后的显微镜观察图；
29.图4为本发明一实施中培养得到的嗜粘蛋白阿克曼菌am06进行革兰氏染色后的显
微镜观察图；
30.图5为本发明一实施中几种嗜粘蛋白阿克曼菌培养上清代谢物pca分析图。
31.本发明中分离得到的嗜粘蛋白阿克曼菌am06，其分类命名为akkermansia muciniphila，已于2021年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmcc no.22793；该菌株于2021年06月28日由保藏中心收到并登记入册，经保藏中心于2021年06月28日检测为存活菌株。
32.本发明中分离得到的嗜粘蛋白阿克曼菌am02，其分类命名为akkermansia muciniphila，已于2021年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmcc no.22794；该菌株于2021年06月28日由保藏中心收到并登记入册，经保藏中心于2021年06月28日检测为存活菌株。
具体实施方式
33.下面结合附图、实施方式和实施例，对本发明作进一步详细的说明。应理解，这些实施方式和实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，提供这些实施方式和实施例的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。还应理解，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式和实施例，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本发明的保护范围。此外，在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本发明更为充分地理解，应理解，本发明可以无需一个或多个这些细节而得以实施。
34.除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述实施方式和实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
35.术语
36.除非另外说明或存在矛盾之处，本文中使用的术语或短语具有以下含义：
37.本文所使用的术语“和/或”、“或/和”、“及/或”的选择范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个项目，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。需要说明的是，当用至少两个选自“和/或”、“或/和”、“及/或”的连词组合连接至少三个项目时，应当理解，在本技术中，该技术方案毫无疑问地包括均用“逻辑与”连接的技术方案，还毫无疑问地包括均用“逻辑或”连接的技术方案。比如，“a及/或b”包括a、b和a+b三种并列方案。又比如，“a，及/或，b，及/或，c，及/或，d”的技术方案，包括a、b、c、d中任一项(也即均用“逻辑或”连接的技术方案)，也包括a、b、c、d的任意的和所有的组合，也即包括a、b、c、d中任两项或任三项的组合，还包括a、b、c、d的四项组合(也即均用“逻辑与”连接的技术方案)。
38.本发明中涉及“多个”、“多种”、“多次”等，如无特别限定，指在数量上大于2或等于2。例如，“一种或多种”表示一种或大于等于两种。
39.本文中所使用的“其组合”、“其任意组合”、“其任意组合方式”等中包括所列项目中任两个或任两个以上项目的所有合适的组合方式。
40.本文中，“合适的组合方式”、“合适的方式”、“任意合适的方式”等中所述“合适”，
以能够实施本发明的技术方案、解决本发明的技术问题、实现本发明预期的技术效果为准。
41.本文中，“优选”、“更好”、“更佳”、“为宜”仅为描述效果更好的实施方式或实施例，应当理解，并不构成对本发明保护范围的限制。如果一个技术方案中出现多处“优选”，如无特别说明，且无矛盾之处或相互制约关系，则每项“优选”各自独立。
42.本发明中，“进一步”、“更进一步”、“特别”等用于描述目的，表示内容上的差异，但并不应理解为对本发明保护范围的限制。
43.本发明中，“可选地”、“可选的”、“可选”，指可有可无，也即指选自“有”或“无”两种并列方案中的任一种。如果一个技术方案中出现多处“可选”，如无特别说明，且无矛盾之处或相互制约关系，则每项“可选”各自独立。
44.本发明中，“第一方面”、“第二方面”、“第三方面”等中，术语“第一”、“第二”、“第三”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。而且“第一”、“第二”、“第三”等仅起到非穷举式的列举描述目的，应当理解并不构成对数量的封闭式限定。
45.本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
46.本发明中，涉及到数值区间(也即数值范围)，如无特别说明，该数值区间内可选的数值的分布视为连续，且包括该数值区间的两个数值端点(即最小值及最大值)，以及这两个数值端点之间的每一个数值。如无特别说明，当数值区间仅仅指向该数值区间内的整数时，包括该数值范围的两个端点整数，以及两个端点之间的每一个整数，相当于直接列举了每一个整数。当提供多个数值范围描述特征或特性时，可以合并这些数值范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之数值范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。该数值区间中的“数值”可以为任意的定量值，比如数字、百分比、比例等。“数值区间”允许广义地包括百分比区间，比例区间，比值区间等定量区间。
47.本发明中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内存在变动。应当理解的是，所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。允许在如
±
5℃、
±
4℃、
±
3℃、
±
2℃、
±
1℃的范围内波动。
48.本发明中，术语“室温”一般指4℃～35℃，较佳地指20℃
±
5℃。在本发明的一些实施例中，室温是指20℃～30℃。
49.在本发明中，涉及数据范围的单位，如果仅在右端点后带有单位，则表示左端点和右端点的单位是相同的。比如，3～5h表示左端点“3”和右端点“5”的单位都是h(小时)。
50.在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。除非和本技术的发明目的和/或技术方案相冲突，否则，本发明涉及的引用文献以全部内容、全部目的被引用。本发明中涉及引用文献时，相关技术特征、术语、名词、短语等在引用文献中的定义也一并被引用。本发明中涉及引用文献时，被引用的相关技术特征的举例、优选方式也可作为参考纳入本技术中，但以能够实施本发明为限。应当理解，当引用内容与本技术中的描述相冲突时，以本技术为准或者适应性地根据本技术的描述进行修正。
51.常用的降压药包括钙离子通道阻滞剂(ccb)、血管紧张素转化酶抑制剂(acei)、血管紧张素受体拮抗剂(arb)、利尿剂和β受体阻滞剂。此外，α受体阻滞剂或其他种类降压药
baa-835(标准菌株)等嗜粘蛋白阿克曼菌的新菌种。
60.嗜粘蛋白阿克曼菌am06于2021年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.22793，可通过实施例1的方法分离得到，还可通过包括但不限于实施例2至实施例8中的一种或多种方法进行菌种鉴定。
61.在一些实施例中，嗜粘蛋白阿克曼菌am06的菌落培养特征包括：圆形凸起、边缘整齐、不透明、白色、大小不均一的菌落。
62.在一些实施例中，嗜黏蛋白阿克曼菌am06分离自母乳。
63.嗜粘蛋白阿克曼菌am02于2021年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.22794，可通过实施例1的方法分离得到，还可通过包括但不限于实施例2至实施例8中的一种或多种方法进行菌种鉴定。
64.在一些实施例中，cgmcc no.22794的嗜粘蛋白阿克曼菌am02的菌落培养特征包括：圆形凸起、边缘整齐、不透明、白色、大小不均一的菌落。
65.在一些实施例中，申请人还进行了人工胃液、人工肠液的耐受性考察。其中，人工胃液耐受性考察中，对0.9wt％nacl溶液组、ph3人工胃液组和ph2人工胃液组不同组别37
±
2℃，厌氧孵育0h、1.5h和3h后的活菌数进行统计分析，结果表明，嗜粘蛋白阿克曼菌株的人工胃液耐受性依次为am02＞am06＞标准株atcc baa-835。其中，人工肠液耐受性考察实验中，对37
±
2℃厌氧孵育0h、4h、8h后的活菌数进行统计分析，人工肠液耐受性优于am06》am02》atcc baa-835。
66.在一些体外实验中，嗜粘蛋白阿克曼菌am06和am02，对人工胃液和人工肠液的具有耐受性，能够通过改善et-1、no、angii等血压调节因子的水平，有效防治高血压。
67.发明人经大量实验发现，上述分离得到的嗜粘蛋白阿克曼菌am06和/或am02可用于高血压。上述分离得到的嗜粘蛋白阿克曼菌am06和/或am02，能够通过改善et-1、no、angii等血压调节因子的水平，有效防治高血压。
68.在本发明中，“防治”包括预防、治疗、辅助治疗等方面。如本文所用，如本文所用，“防治”是指减轻、延缓进展、衰减、预防，或维持现有疾病或病症。“防治”还包括将疾病或病症的一个或多个症状治愈、预防其发展或减轻到某种程度。
69.在本发明中，“组合物”可以为多种物质的组合，进一步地，可以为组合使用，也可以为组合而成的混合物。
70.在一些实施例中，所述高血压包括肾性高血压、自发性高血压、复合饮食因素所致代谢性高血压或者单纯收缩期高血压。
71.在本发明中，“食品”指可食用的物质。“食品组合物”指可食用的组合物。应当理解，本发明中的食品组合物除包含前述的嗜粘蛋白阿克曼菌外，还允许包含任意合适的其他可食用物质。在一些实施例中，其他可食用物质可选自保健品管理规范中允许添加的物质，进一步地，不包含保健品牌管理规范中禁止添加的物质。如无特别限定，保健品管理规范指生产时的现行规范。在本发明中，“保健品组合物”不以治疗疾病为目的，但可用于预防高血压。
72.在本发明中，“药物”包括在体内或体外提供生理和/或药理作用的任何药剂、化合物、组合物或混合物，且往往提供的是有益效果。“药物”在体内产生生理和/或药理作用的范围没有特别限制，可以为全身效果，也可以只在局部产生效果。所述“药物”的活性没有特
别限制，可以为能与其它物质发生相互作用的活性物质，也可以为不发生相互作用的惰性物质。
73.在本发明中，“药物组合物”指具有药学上防治作用、可作为药物使用的组合物。
74.在一些实施方式中，防治高血压的组合物为液体制剂或固体制剂。液体制剂指含有液相的制剂，非限制性举例如溶液剂、混悬剂、乳剂等。固体制剂的非限制性举例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂等。
75.在一些实施方式中，根据施用方式的不同，可以为口服剂、注射剂、滴剂、贴剂、管饲制剂等。
76.在一些实施方式中，保健品组合物为乳制品或发酵谷类食品。乳制品例如奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌等，发酵谷类食品如饼干等。
77.在一些实施方式中，药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂或管饲制剂。
78.在一些实施方式中，防治高血压的药物组合物或者改善血压水平的保健品组合物包括所述嗜粘蛋白阿克曼菌以及辅料。根据剂型的不同，所选择的辅料可以不同。
79.在一些实施方式中，保健品组合物包括所述嗜粘蛋白阿克曼菌以及可食用辅料。在本发明中，食品添加剂也属于可食用辅料。可食用辅料的举例如食糖，果糖，蜂蜜，葡萄糖，淀粉，维生素，有益微量元素和中量元素包括钙粉，大豆粉，绿豆粉，麦芽糊精，奶粉，蔬菜汁，水果汁，香料或香精，本发明的可食用辅料可以单一或复合的使用。
80.在一些实施方式中，药物组合物包括所述嗜粘蛋白阿克曼菌以及药学上可接受的载体。
81.本发明中，“载体”包括但不限于甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素c、edta二钠、edta钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁。
82.在本发明中，“药学上可接受的”指在合理医学判断范围内适于施用患者且与合理益处/风险比相称的那些配体、材料、组合物和/或剂型。
83.在本发明中，“药学上可接受的载体”指药学上可接受的材料、组合物或媒剂，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或囊封材料。如本文所用，语言“药学上可接受的载体”包括与药物施用相容的缓冲剂、注射用无菌水、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗剂及吸收延迟剂及诸如此类。在与配制物中其他成分兼容且对患者无害的意义上，每种体必须为“药学上可接受的”。合适的实例包括但不限于：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉及经取代或未经取代的β-环糊精；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素及乙酸纤维素；(4)粉状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂及栓剂蜡；(9)油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁及氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)
乙醇；(20)磷酸盐缓冲液；及(21)药物配制物中所采用的其他无毒兼容物质。
84.在一些实施方式中，防治高血压的药物组合物或者改善血压水平的保健品组合物中含有有效量的所述嗜粘蛋白阿克曼菌。
85.在本发明中，“有效量”是指该术语所对应的组分在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解特定疾病、病症和/或症状的剂量，本发明中，如无特别限定，指实现治疗、预防、减轻和/或缓解高血压疾病、病症和/或症状的剂量。
86.本发明中，“受试者”是动物，优选为哺乳动物，更优选地为人，受试者包括但不限于食品的食用者和具有疾病、病症和/或症状的患者。本发明中的受试者优选为哺乳动物。术语“哺乳动物”主要是指温血脊椎类哺乳动物，包括但不限于：如猫、狗、兔、熊、狐狸、狼、猴子、鹿、鼠(如大鼠、小鼠)、猪、牛、羊、马、人等，优选灵长类动物，更优选为人。
87.在一些实施方式中，受试者为哺乳动物。
88.在一些实施方式中，受试者为人或者小鼠。
89.本发明中，“患者”是指一种动物，优选为哺乳动物，更好的为人。术语“哺乳动物”主要是指温血脊椎类哺乳动物，包括但不限于：如猫、狗、兔、熊、狐狸、狼、猴子、鹿、鼠、猪、牛、羊、马、人等，优选灵长类动物，更优选为人。
90.在一些实施方式中，防治高血压的药物组合物中含有治疗有效量的所述嗜粘蛋白阿克曼菌。
91.在本发明中，“治疗有效量”是指针对疾病、病症和/或症状，将引起个体的生物学或医学响应的药物活性成分的量，例如为个体带来生理和/或药理上积极效果的本发明化合物的量，所述生理和/或药理上积极效果包括但不限于降低或抑制酶或蛋白质活性或改善症状、缓解病症、减缓或延迟疾病进程或预防疾病等。
92.本发明的第二方面
93.在本发明的第二方面，提供含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物在制备防治高血压的药物组合物或者在制备改善血压水平的保健品组合物中的应用，所述嗜粘蛋白阿克曼菌的定义可参考本发明第一方面。
94.进一步地，所述嗜粘蛋白阿克曼菌为嗜粘蛋白阿克曼菌am06(保藏编号为cgmcc no.22793)、嗜粘蛋白阿克曼菌am02(保藏编号为cgmcc no.22794)或者两者的组合。
95.在一些实施方式中，含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物为保健品组合物、药物组合物或益生菌组合物。
[0096]“组合物”、“防治”、“高血压”、“防治高血压的组合物”、“保健品组合物”、“药物组合物”的定义可参考本发明第一方面。
[0097]
在一些实施方式中，含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物中的活性成分为嗜粘蛋白阿克曼菌am06和/或嗜粘蛋白阿克曼菌am02，也即不含有其他的具有高血压防治作用的成分。
[0098]
在本发明中，“活性成分”指具有高血压防治作用的成分。本发明中的活性成分至少包括嗜粘蛋白阿克曼菌am06和/或嗜粘蛋白阿克曼菌am02。
[0099]
在一些实施方式中，含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物还包括第二活性成分。
[0100]
在一些实施方式中，第二活性成分的非限制性举包括：替米沙坦、卡托普利、缬沙坦、氨氯地平等中的一种或多种。
[0101]
在一些实施方式中，含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物为益生菌组合物，除含有嗜
粘蛋白阿克曼菌am06和/或嗜粘蛋白阿克曼菌am02外，还含有不同于嗜粘蛋白阿克曼菌的其他益生菌。
[0102]
在一些实施例中，不同于嗜粘蛋白阿克曼菌的其他益生菌可选自脆弱拟杆菌、克里斯特森氏菌、布拉氏酵母菌、鼠李唐乳杆菌和双栖乳杆菌中的一种或多种。
[0103]
本发明的第三方面
[0104]
本发明提供含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物，所述组合物还包含替米沙坦、卡托普利、缬沙坦和氨氯地平中的一种或者多种；所述嗜粘蛋白阿克曼菌如第一方面中所定义。“组合物”的定义可参考本发明第一方面。
[0105]
本发明的第四方面
[0106]
在本发明的第四方面，提供一种高血压的防治方法，包括给予受试者有效量的嗜粘蛋白阿克曼菌(也即向受试者施用有效量的嗜粘蛋白阿克曼菌)。
[0107]
在本发明的第四方面，提供一种高血压的防治方法，包括给予受试者有效量的含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物(也即向受试者施用有效量的含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物)。
[0108]“嗜粘蛋白阿克曼菌”、“组合物”、“含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物”、“防治”、“高血压”、“有效量”、“活性成分”的定义可参考本发明第一方面或第二方面。
[0109]
在一些实施方式中，药物的施用方式包括但不限于：口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)注射、和局部给药、吸入。
[0110]
在其中一些实施例中，药物组合物可通过口服、灌肠或肠胃外的形式给药。
[0111]
在其中一些实施例中，药物组合物的给药周期可为间歇给药、周期性给药、持续给药或长期给药。
[0112]
用于口服给药的固体剂型可以包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
[0113]
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性成分外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，具体例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物。除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。如悬浮液可包含悬浮剂，具体例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和
脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物。
[0114]
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，以及用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水或非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
[0115]
用于局部给药的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。由活性成分在无菌条件下与药学上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合而成。
[0116]
食品组合物的剂型还可以选自上述药物组合物的剂型中的合适方式，本领域技术可根据施用方式选择。
[0117]
可以理解的是，本发明实施例的药物可以添加不同的药学上可接受的辅料从而制备成合适的临床剂型，这些临床剂型包括但不限于上文所述剂型。
[0118]
以下提供一些具体实施例。
[0119]
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，优先参考本发明中给出的指引，还可以按照本领域的实验手册或常规条件，还可以按照制造厂商所建议的条件，或者参考本领域已知的实验方法。
[0120]
下述的具体实施例中，涉及原料组分的量度参数，如无特别说明，可能存在称量精度范围内的细微偏差。涉及温度和时间参数，允许仪器测试精度或操作精度导致的可接受的偏差。
[0121]
实施例1、嗜粘蛋白阿克曼菌的分离及鉴定
[0122]
1.1.am02菌株的分离及鉴定
[0123]
用无菌取样勺，取黄豆粒大小粪便(样本来源于成年健康男性)于10ml离心管中，取样完成后将样本立即转移至37℃厌氧工作站中(85％n2、10％h2、5％co2)，按1：10的稀释方式将样本稀释至10-9
，取各稀释度溶液各1ml接种至9ml以黏蛋白为唯一碳源的基础培养基中，厌氧培养7天。取10-4
稀释度接种的培养液1ml，按1：10的稀释方式将培养液稀释至10-6
，分别取各稀释度100μl分别于黏蛋白琼脂培养基上涂布，厌氧培养7天，挑取单菌落接种至2ml的bhi肉汤(含n-乙酰-d-氨基葡萄糖培养基，可记为添加了glcnac的bhi肉汤)。对培养后的菌液进行16s rrna测序，将16s rrna序列于ncbi数据库上进行序列比对。分离得到的菌株鉴定为嗜粘蛋白阿克曼氏菌，16s rrna测序结果如下seq id no.1所示：
[0124]
gtgacgggcggggtgcatagacatgcagtcgaacgagagaattgctagcttgctaataattctctagtggcgcacgggtgagtaacacgtgagtaacctgcccccgagagcgggatagccctgggaaactgggattaataccgcatagtatcgaaagattaaagcagcaatgcgcttggggatgggctcgcggcctattagttagttggtgaggtaacggctcaccaaggcgatgacgggtagccggtctgagaggatgtccggccacactggaactgagacacggtccagacacctacgggtggcagcagtcgagaatcattcacaatgggggaaaccctgatggtgcgacgccgcgtgggggaatgaaggtcttcggattgtaaacccctgtcatgtgggagcaaattaaaaagatagtaccacaagaggaagagacggctaactctgtgccagcagccgcggtaatacagaggtctcaagcgttgttcggaatcactgggcgtaaagcgtgcgtaggctgtttcgtaagtcgtgtgtgaaaggcgcgggctcaacccgcggacggcacatgatactgcgagactagagtaatggagggggaaccggaattctcggtgtagcagtgaaatgcgtagatatcgagaggaacactcgtggcgaaggcgggttcctggacattaactgacgctgaggcacgaaggccaggggagcgaaagggattagatacccctgtagtcctggcagtaaacggtgcacgct
tggtgtgcggggaatcgaccccctgcgtgccggagctaacgcgttaagcgtgccgcctggggagtacggtcgcaagattaaaactcaaagaaattgacggggacccgcacaagcggtggagtatgtggcttaattcgatgcaacgcgaagaaccttacctgggcttgacatgtaatgaacaacatgtgaaagcatgcgactcttcggaggcgttacaacaggtgctgcatggccgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgtttggttaagtccagcaacgagcgcaacccctgttgccagttaccagcacgtgaaggtggggactctggcgagactgcccagatcaactgggaggaaggtggggacgacgtcaggtcagtatggcccttatgcccagggctgcacacgtactacaatgcccagtacagagggggccgaagccgcgaggcggaggaaatcctgaaaactgggcccagttcggactgtaggctgcaacccgcctacacgaagccggaatcgctagtaatggcgcatcagctacggcgccgtgaatacgttcccgggtcttgtacacaccgcccgtcacatcatggaagccggtcgcacccgaagtatctgaagccaaccgcaaggaggcaggtcctaaggtagactactgtctat
[0125]
seq id no:1与atcc baa-835的16s序列比对结果显示per.ident值为99.43％。
[0126]
1.2.am06菌株的分离及鉴定
[0127]
将新鲜采集的母乳样本(来源于成年健康女性)立即注射于5ml厌氧西林瓶中保存，然后将样本转移至37℃厌氧工作站中(85％n2、10％h2、5％co2)，按1：10的稀释方式将样本稀释至10-6
，取各稀释度溶液各1ml接种至9ml以黏蛋白为唯一碳源的基础培养基中，厌氧培养约1个月。取10-1
～10-4
稀释度接种的培养液1ml，按1：10的稀释方式将培养液稀释至10-6
，分别取各稀释度100μl分别于黏蛋白琼脂培养基上涂布，厌氧培养7天，挑取单菌落接种至2ml的bhi肉汤(含n-乙酰-d-氨基葡萄糖培养基)。对培养后的菌液进行16s rrna测序鉴定，将16s rrna序列于ncbi数据库上进行序列比对，结果鉴定为嗜粘蛋白阿克曼氏菌，16s rrna的测序结果如下seq id no.2所示：
[0128]
cggattacggcgtgctaagactgcagtcgacgagagattgctagcttgctaataattctctagtggcgcacgggtgagtaacacgtgagtaacctgcccccgagagcgggatagccctgggaaactgggattaataccgcatagtatcgaaagattaaagcagcaatgcgcttggggatgggctcgcggcctattagttagttggtgaggtaacggctcaccaaggcgatgacgggtagccggtctgagaggatgtccggccacactggaactgagacacggtccagacacctacgggtggcagcagtcgagaatcattcacaatgggggaaaccctgatggtgcgacgccgcgtgggggaatgaaggtcttcggattgtaaacccctgtcatgtgggagcaaattaaaaagatagtaccacaagaggaagagacggctaactctgtgccagcagccgcggtaatacagaggtctcaagcgttgttcggaatcactgggcgtaaagcgtgcgtaggctgtttcgtaagtcgtgtgtgaaaggcgcgggctcaacccgcggacggcacatgatactgcgagactagagtaatggagggggaaccggaattctcggtgtagcagtgaaatgcgtagatatcgagaggaacactcgtggcgaaggcgggttcctggacattaactgacgctgaggcacgaaggccaggggagcgaaagggattagatacccctgtagtcctggcagtaaacggtgcacgcttggtgtgcggggaatcgaccccctgcgtgccggagctaacgcgttaagcgtgccgcctggggagtacggtcgcaagattaaaactcaaagaaattgacggggacccgcacaagcggtggagtatgtggcttaattcgatgcaacgcgaagaaccttacctgggcttgacatgtaatgaacaacatgtgaaagcatgcgactcttcggaggcgttacacaggtgctgcatggccgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgtttggttaagtccagcaacgagcgcaacccctgttgccagttaccagcacgtgaaggtggggactctggcgagactgcccagatcaactgggaggaaggtggggacgacgtcaggtcagtatggcccttatgcccagggctgcacacgtactacaatgcccagtacagagggggccgaagccgcgaggcggaggaaatcctaaaaactgggcccagttcggactgtaggctgcaacccgcctacacgaagccggaatcgctagtaatggcgcatcagctacggcgccgtgaatacgttcccgggtcttgtacacaccgcccgtcacatcatggaagccggtcgcacccgaagtcattactgaagccaaccgcaaggaggcaggtcctaaagtgagactataacaa
[0129]
seq id no:2与atcc baa-835的16s序列比对结果显示per.ident值为99.22％。
[0130]
1.3.嗜粘蛋白阿克曼菌的培养
[0131]
将嗜黏蛋白阿克曼菌种划线接种于bha平板，厌氧培养3天。观察菌落形态特征、染色特性、大小、球杆状和分布情况等。
[0132]
菌落特征：嗜黏蛋白阿克曼菌在上述培养基上培养3天后，呈现圆形凸起、边缘整齐、不透明、白色、大小不均一的菌落，参见图1和图2。
[0133]
显微镜下形态：嗜黏蛋白阿克曼菌进行革兰氏染色镜检，为革兰阴性细菌，椭圆形、单个或成链状排列，参见图3和图4。
[0134]
选取单个菌落接种于bhi肉汤中培养48小时(温度为37℃)，所得菌液离心沉淀，转速16000
×
g，离心30min，去上清，收集沉淀物，即得嗜黏蛋白阿克曼菌菌泥。
[0135]
对所得嗜黏蛋白阿克曼菌菌泥进行巴氏灭活，得嗜黏蛋白阿克曼菌灭活菌。
[0136]
实施例2、嗜粘蛋白阿克曼菌对于人工胃液的耐受性
[0137]
(1)实验方法及分组
[0138]
表1、实验分组
[0139][0140]
表2、实验方法
[0141][0142][0143]“+”表示需要检测
[0144]
1)取嗜粘蛋白阿克曼菌菌种1支，去除标签，75％酒精对甘油冻存管外表面进行擦拭消毒，涡旋振荡混匀，开启。吸取100-500μl菌液接种至10ml/管的bhi肉汤中，摇匀，共制备3管，同时不接菌作阴性对照，置于37℃厌氧培养2-4天，得一级种子液。
[0145]
一级种子液进行革兰氏染色镜检，应为g-杆菌，无芽孢，无杂菌。
[0146]
2)取上述一级种子液10ml，12000
×
g、4℃离心10min，弃上清，加入1ml0.9％nacl溶液重悬，分别制得菌液，备用。
[0147]
3)按表2将am06、am02及标准菌株菌液分别加入至0.9％nacl、ph3以及ph2的人工胃液中，混匀，分装成5ml/管，置于厌氧手套箱37℃孵育0h，1.5h以及3h后取出检测各样品的菌浓度。每个实验组做3个平行。
[0148]
4)活菌数测定：
[0149]
取实验样品，10倍系列稀释后取100μl稀释液接种至bha平板上，涂布均匀，每个稀
释度共做2个平皿，一般做2～3个稀释度，同时取稀释液100μl于bha平板上，作为阴性对照，所有涂布平皿正置厌氧条件下培养约3-5天，观察平皿上菌落生长情况，并计数。
[0150]
根据2个平皿菌落数之和按下列公式计算活菌数：
[0151]
活菌数(cfu/ml)＝2个平皿菌落数之和/2
×
10
×
最终稀释度
[0152]
存活率计算：
[0153][0154]
(2)实验结果
[0155]
表3、嗜粘蛋白阿克曼菌人工胃液耐受性存活率结果统计表
[0156][0157]
由表可见，不同嗜粘蛋白阿克曼菌株的人工胃液耐受性依次为am02＞am06＞标准株。
[0158]
实施例3、嗜粘蛋白阿克曼菌对于人工肠液的耐受性
[0159]
(1)实验方法及分组
[0160]
表4、实验分组
[0161][0162][0163]
1)一级种子液制备
[0164]
取嗜粘蛋白阿克曼菌菌种1支去除标签，75％酒精对甘油冻存管外表面进行擦拭消毒，涡旋振荡混匀，开启。吸取100μl菌液接种至10ml/管的bhi肉汤中，摇匀，共制备3管，同时不接菌作阴性对照，置于37℃厌氧培养2-4天，得一级种子液。
[0165]
一级种子液进行革兰氏染色镜检，应为g-杆菌，无芽孢，无杂菌。
[0166]
2)菌泥制备
[0167]
分别上述一级种子液分装成1.5ml/管，12000rpm、离心10min，弃上清，制得菌泥，am06、am02及标准菌株各制备3管菌泥。
[0168]
3)菌株人工肠液耐受性评价
[0169]
如表5所示，向2)中制得的菌泥中每管分别加入1.5ml人工肠液，混匀，然后每管溶液按照0.5ml/支进行分装，分装3管，分别于37℃厌氧孵育0、4h和8h，取样检测活菌数。每组各做3个平行。
[0170]
表5、实验方法
[0171][0172]“+”表示需要检测
[0173]
4)活菌数测定
[0174]
分别取孵育后的样品进行10倍系列稀释后取100μl稀释液接种至bha平板上，涂布均匀，每个稀释度共做2个平皿，一般做2～3个稀释度，同时取100μl于bha平板上，作为阴性对照，所有涂布平皿正置厌氧条件下培养约3-5天，观察平皿上菌落生长情况，并计数。
[0175]
活菌数(cfu/ml)＝2个平皿菌落数之和/2
×
10
×
最终稀释度
[0176]
存活率计算
[0177]
存活率＝各时间点活菌数/对应0h活菌数
×
100％
[0178]
(2)实验结果
[0179]
表6、存活率统计表
[0180][0181]
如表所示，atcc baa-835、am02、am06菌株人工肠液耐受性良好。
[0182]
实施例4、嗜粘蛋白阿克曼菌培养上清非靶向代谢学差异分析
[0183]
(1)样本制备
[0184]
取实施例1中培养结束后的各个嗜粘蛋白阿克曼菌(am02、am06、atcc baa-835)的培养上清，各取1ml菌液12000rpm离心5min后，上清过0.22μm滤膜后，取滤液作为待测样本，进行非靶向代谢组学分析。每个菌株各制备5份平行的待测样本。
[0185]
(2)实验结果
[0186]
pca是一种数据降维方法，即把多个变量降维到一组新的综合变量，再从中选取尽可能多地反映原有变量信息的前几个主成分，从而达到降维的目的。pca图反应样本的真实分布情况，主要用于观察样本组间分离趋势，以及是否有异常点出现，同时从原始数据上反映组间和组内的变异度。
[0187]
实验结果如图5所示，包含了qc样本和所有样本的pca分析。其中各个qc样本在两个主成分分析图中均聚集在一起，说明检测期间仪器稳定，采集数据的重复性好。同时结果还显示，am06培养上清中的代谢物与baa-835的较接近，am02与baa-835的培养上清代谢物差异较大。
[0188]
各菌株之间差异代谢物的数量比较结果如表7所示。可见am02与标准株baa-835相比，正离子(pos)模式检测的差异代谢物和负离子(neg)模式检测的差异代谢物分别为205和135个，am06与标准株baa-835相比，正离子(pos)模式检测的差异代谢物和负离子(neg)
模式检测的差异代谢物分别为111和62个。
[0189]
表7、差异代谢物统计表
[0190][0191]
实施例5、嗜黏蛋白阿克曼菌治疗大鼠肾性高血压的药效实验
[0192]
1、实验设计和流程
[0193]
spf级健康wistar大鼠120只，雌雄各半，体质量(200
±
20)g，按体重随机分为12组，每组10只：正常对照组，模型组，替米沙坦组(阳性药，5mg/kg)，akk菌am06活菌低剂量(106cfu/只)、高剂量(10
10
cfu/只)组，am02活菌(10
10
cfu/只)组，am06和am02活菌联用组(10
10
cfu/只，10
10
cfu/只)，baa-835活菌(10
10
cfu/只)组，akk菌am06、am02灭活菌组(10
10
cell/只)，am06和am02灭活菌联用组(10
10
cfu/只，10
10
cfu/只)，baa-835灭活菌(10
10
cell/只)组。
[0194]
采用双肾-夹法手术方法造模，除空白组外，给予戊巴比妥钠0.01g/ml麻醉各组大鼠。取仰卧位固定大鼠，备皮后手术区域给予碘伏消毒，于大鼠腹正中线旁0.5cm、左肋弓下缘0.5cm处行2.0～2.5cm纵切口，然后逐层分离皮下组织进入腹腔，采用钝性分离腹主动脉鞘，且剥离腹主动脉，然后于大鼠左右肾动脉分支的下方穿入1.0号手术缝线结扎，从而造成肾动脉部分狭窄。缝合伤口，消毒，包扎，且注射青霉素2-3万单位/只，每日1次，连续5d。造模成功判定标准：于造模2周后测量大鼠平均收缩压(sbp)，于造模前血压差值≥20mmhg，且高于115mmhg确定造模成功。所有大鼠均造模成功。空白组行相同开腹手术，但不结扎腹主动脉。
[0195]
造模成功后(d0)开始给药。正常对照组、模型组给予1ml生理盐水灌胃，各给药组给予相应剂量药物，各组大鼠均连续灌胃8周，每日一次。
[0196]
末次给药后，测量各组大鼠血压后麻醉大鼠，眼眶取血3ml，采用放射免疫法测定et-1水平，采用硝酸还原酶比色法检测大鼠血浆中亚硝酸盐和硝酸盐含量来间接反映no水平。
[0197]
所有数据采用spss 25.0进行统计学分析。p＜0.05视为有统计学差异。
[0198]
2、实验结果
[0199]
(1)大鼠血压
[0200]
表8、各组大鼠收缩压(mean
±
sd)
[0201][0202][0203]
注：与模型组比较，*表示差异显著p《0.05；**表示差异极显著p《0.01。
[0204]
如上表所示，与正常对照组相比，模型组大鼠血压显著上升，造模成功；与模型组相比，各给药组均下调了大鼠血压。
[0205]
(2)血浆et-1、no含量
[0206]
表9、各组大鼠血浆et-1、no含量(mean
±
sd)
[0207]
组别et-1(pg/ml)no(mmol/g)正常对照65.82
±
4.42*26.45
±
4.58*模型124.19
±
11.739.19
±
1.03替米沙坦73.40
±
6.7621.47
±
3.26*am06活菌低剂量80.89
±
6.4018.12
±
2.98*am06活菌高剂量81.05
±
4.7418.36
±
3.38*am02活菌高剂量85.70
±
6.8417.74
±
2.95am06活菌+am02活菌76.28
±
5.58*21.42
±
3.45*baa-835活菌88.85
±
6.4815.38
±
2.87am06灭活菌79.09
±
5.4318.20
±
3.86*am02灭活菌86.32
±
4.8517.35
±
3.22am06灭活菌+am02灭活菌79.39
±
5.2720.34
±
3.66*baa-835灭活菌89.99
±
6.2115.86
±
3.17
[0208]
注：与模型组比较，*表示差异显著p《0.05；**表示差异极显著p《0.01。
[0209]
et-1和no均由血管内皮细胞分泌，et-1具有收缩血管及升高血压的作用，而no是重要的血管舒张因子。
[0210]
如上表所示，与正常对照组相比，模型组et-1显著上升；与模型组相比，各给药组均下调了大鼠血浆中et-1含量。
[0211]
与正常对照组相比，模型组no显著下降；与模型组相比，各给药组均上调了大鼠血浆中no含量，阳性药替米沙坦及am06各组具有显著性差异。这说明akk菌能够改善血管内皮分泌的血压调节因子水平，进而降低血压。
[0212]
综上所述，嗜黏蛋白阿克曼菌能够有效防治大鼠肾性高血压。
[0213]
实施例6、嗜黏蛋白阿克曼菌治疗大鼠自发性高血压的药效实验
[0214]
1、实验设计和流程
[0215]
自发性高血压大鼠(shr)110只，雌雄各半，体质量(200
±
20)g，按体重随机分为11组，每组10只：模型组，卡托普利组(阳性药，6.25mg/kg)，akk菌am06活菌低剂量(106cfu/只)、高剂量(10
10
cfu/只)组，am02活菌(10
10
cfu/只)组，baa-835活菌(10
10
cfu/只)组，akk菌am06、am02灭活菌组(10
10
cell/只)，am06灭活菌和卡托普利联用组，am02灭活菌和卡托普利联用组，baa-835灭活菌(10
10
cell/只)组。另取wky大鼠10只，作为正常对照组。
[0216]
所有大鼠适应性饲养一周后开始给药(d0)，正常对照组和模型组给予1ml生理盐水灌胃，各给药组给予相应剂量药物，每日一次，共给药21天。
[0217]
开始治疗时和末次给药后测量大鼠血压，末次给药后禁食不禁水24h，各组大鼠尾动脉取血，elisa法测定血管紧张素ii(angii)含量，化学一步法测定no含量。
[0218]
所有数据采用spss 25.0进行统计学分析。p＜0.05视为有统计学差异。
[0219]
2、实验结果
[0220]
(1)大鼠血压
[0221]
表10、各组大鼠血压(mean
±
sd)
[0222][0223][0224]
注：与模型组比较，*表示差异显著p《0.05；**表示差异极显著p《0.01。
[0225]
如上表所示，模型组整个实验期间血压均高于正常对照组，符合自发性高血压的特征；与模型组相比，各给药组均下调大鼠血压。
[0226]
(2)血管紧张素ii(angii)和no含量
[0227]
表11、各组大鼠血管紧张素ii和no含量(mean
±
sd)
[0228]
组别angii(pg/ml)no(μmol/l)正常对照36.57
±
8.03**85.43
±
12.36模型285.54
±
22.1568.77
±
8.84卡托普利232.68
±
19.6472.71
±
9.63am06活菌低剂量244.57
±
14.34125.24
±
8.92*am06活菌高剂量229.71
±
12.24122.38
±
10.83*am02活菌高剂量248.99
±
11.37120.32
±
9.48*baa-835活菌250.65
±
13.68110.88
±
9.47am06灭活菌236.78
±
19.63119.56
±
10.11
am02灭活菌251.12
±
13.43118.49
±
8.26am06灭活菌+卡托普利71.47
±
11.42**90.37
±
23.42*am02灭活菌+卡托普利80.32
±
12.74**98.84
±
20.53*baa-835灭活菌267.38
±
16.58103.73
±
11.45
[0229]
注：与模型组比较，*表示差异显著p《0.05；**表示差异极显著p《0.01。
[0230]
肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensin-aldosterone system，raas)属于内分泌系统，是血压和水盐代谢的重要调节器。血管紧张素ii为该系统中的强烈血管收缩剂，在高血压的发病过程中起重要作用。
[0231]
与正常对照组相比，模型组angii水平有所上升；与模型组相比，各给药组均下调了大鼠血浆angii水平。
[0232]
与正常对照组相比，模型组no水平有所下降；与模型组相比，各给药组均上调了大鼠血清no水平，其中am06、am02活菌具有显著性差异。这说明akk菌能够改善大鼠血压调节因子水平，进而降低血压。
[0233]
综上所述，嗜黏蛋白阿克曼菌能够有效防治大鼠自发性高血压。
[0234]
实施例7、嗜黏蛋白阿克曼菌治疗大鼠复合饮食因素所致代谢性高血压的药效实验
[0235]
1、实验设计和流程
[0236]
雄性sd大鼠130只，8周龄，体质量130-150g，适应性喂养1周后，随机选取110只大鼠给予高糖高脂饲料及梯度饮酒进行造模，其余20只给予普通饲料，自由饮水。
[0237]
喂养4周后(d0)进行分组给药：以血压数据进行分组，选取造模成功的110只大鼠，分为模型组、缬沙坦组(阳性药，5.7mg/kg)，akk菌am06活菌低剂量(106cfu/只)、高剂量(10
10
cfu/只)组，am02活菌(10
10
cfu/只)组，am06活菌和缬沙坦联用组，am02活菌和缬沙坦联用组(10
10
cfu/只，5.7mg/kg)，baa-835活菌(10
10
cfu/只)组，akk菌am06、am02灭活菌(10
10
cell/只)组，baa-835灭活菌(10
10
cell/只)组。另取未造模大鼠10只，作为正常对照组。正常对照组和模型组给予1ml生理盐水灌胃，各给药组给予相应剂量药物，每日一次，连续6周。
[0238]
开始给药时和末次给药后测量大鼠血压；末次给药后禁食不禁水12h，眼眶静脉丛取血4ml，elisa法测定血浆中et-1含量，化学一步法测量血浆中no含量。
[0239]
所有数据采用spss 25.0进行统计学分析。p＜0.05视为有统计学差异。
[0240]
2、实验结果
[0241]
(1)大鼠血压
[0242]
表12、各组大鼠血压(mean
±
sd)
[0243][0244]
注：与模型组比较，*表示差异显著p《0.05；**表示差异极显著p《0.01。
[0245]
如上表所示，造模结束后，造模大鼠血压高于正常对照组大鼠，模型组及各给药组大鼠血压无显著差别，造模成功。给药6周后，正常对照组大鼠血压稳定，与给药前水平相当；模型组大鼠血压进一步上升，而各给药组大鼠血压均有所下降。
[0246]
(2)血浆et-1和no
[0247]
表13、各组大鼠血浆et-1和no含量(mean
±
sd)
[0248]
组别et-1(ng/l)no(μmol/l)正常对照60.28
±
6.94*40.11
±
6.04**模型74.46
±
7.597.55
±
1.26缬沙坦66.64
±
7.4828.92
±
5.40*am06活菌低剂量68.37
±
5.0126.51
±
5.98*am06活菌高剂量67.86
±
9.6125.88
±
6.06*am02活菌68.82
±
7.3625.86
±
7.52*am06活菌+缬沙坦62.46
±
7.23*34.69
±
8.26**am02活菌+缬沙坦63.18
±
8.2932.53
±
7.47**baa-835活菌70.27
±
8.7624.37
±
6.82*am06灭活菌68.74
±
6.2126.92
±
5.89*am02灭活菌69.78
±
8.2525.26
±
7.99*baa-835灭活菌71.35
±
7.8923.28
±
6.78*
[0249]
注：与模型组比较，*表示差异显著p《0.05；**表示差异极显著p《0.01。
[0250]
如上表所示，与正常对照组相比，模型组et-1显著上升；与模型组相比，各给药组均下调了大鼠血浆et-1的含量。
[0251]
与正常对照组相比，模型组no极显著下降；与模型组相比，各给药组均显著上调了大鼠血浆no的含量。
[0252]
综上所述，嗜黏蛋白阿克曼菌能够有效防治大鼠复合饮食因素所致代谢性高血压。
[0253]
实施例8、嗜黏蛋白阿克曼菌联用氨氯地平治疗单纯收缩期高血压大鼠的药效实验
[0254]
1、实验设计及流程
[0255]
6-7周龄wistar-kyoto大鼠(wky)100只，雄性，体质量(190
±
10)g，按体重随机选取80只，适应性饲养1周后，开始造模：予以维生素k1注射液，10mg/(kg
·
d)背部皮下注射，每日一次；华法林钠片(5mg/片，齐鲁制药有限公司)研成粉末，蒸馏水配成悬浊液，按华法林钠片15mg/(kg
·
d)灌胃，每日一次。维生素k1比华法林钠提前一周用药。造模6周后，判定造模结果，收缩压升高且持续大于18.67kpa为造模成功。剩余20只大鼠同频次灌胃、注射生理盐水。
[0256]
造模结束后，选取造模成功的80只大鼠，分为8组，每组10只：模型组，氨氯地平组(阳性药，0.45mg/kg，辉瑞制药有限公司)，akk菌am06活菌组(10
10
cfu/只)、am06活菌联用氨氯地平组，baa-835活菌组(10
10
cfu/只)，akk菌am06灭活菌组(10
10
cell/只)，am06灭活菌联用氨氯地平组，baa-835灭活菌组(10
10
cell/只)。另取10只未造模大鼠，作为正常对照组。正常对照组及模型组给予1ml生理盐水灌胃，每日一次；各给药组同频次给予相应剂量药物。给药8周。
[0257]
末次给药后，测量大鼠血压；禁食不禁水12h，10％水合氯醛麻醉，腹主动脉取血5ml，elisa法测定血清no、angii水平。
[0258]
所有数据采用spss 25.0进行统计学分析。p＜0.05视为有统计学差异。
[0259]
2、实验结果
[0260]
(1)大鼠血压
[0261]
表14、各组大鼠血压(mean
±
sd)
[0262]
组别收缩压(kpa)正常对照11.41
±
0.98*模型19.46
±
1.83氨氯地平13.24
±
1.21am06活菌14.58
±
1.16am06活菌+氨氯地平10.76
±
0.88*baa-835活菌15.67
±
1.25am06灭活菌14.97
±
1.67am06灭活菌+氨氯地平11.22
±
1.04*baa-835灭活菌16.85
±
1.34
[0263]
注：与模型组比较，*表示差异显著p《0.05；**表示差异极显著p《0.01。
[0264]
如上表所示，与正常对照组相比，模型组大鼠收缩压显著升高；与模型组相比，各给药组大鼠收缩压均有所下降，联用组与模型组间具有显著性差异。这说明akk菌能够调节大鼠血压，与氨氯地平联用时效果更佳。
[0265]
(2)血清no、angii水平
[0266]
表15、各组大鼠血清no和angii含量(mean
±
sd)
[0267]
组别no(μmol/l)angii(pgl/ml)正常对照96.78
±
14.32*34.54
±
8.87**模型52.89
±
9.21292.77
±
30.66氨氯地平97.71
±
16.53*151.49
±
18.24*
am06活菌88.56
±
10.59*173.93
±
12.08*am06活菌+氨氯地平198.64
±
17.75**48.26
±
9.78**baa-835活菌78.46
±
9.37*192.46
±
17.78*am06灭活菌85.24
±
11.67*176.15
±
12.27*am06灭活菌+氨氯地平192.48
±
19.79**54.53
±
9.59**baa-835灭活菌77.46
±
11.67*185.53
±
14.38*
[0268]
注：与模型组比较，*表示差异显著p《0.05；**表示差异极显著p《0.01。
[0269]
如上表所示，与正常对照组相比，模型组大鼠血清no水平显著下降。与模型组相比，各给药组大鼠血清no均有所上升，单药组与模型组具有显著差别，联用组与模型组具有极显著差别。
[0270]
与正常对照组相比，模型组大鼠血清angii水平显著上升。与模型组相比，各给药组大鼠血清angii均有所下降，单药组与模型组具有显著差别，联用组与模型组具有极显著差别。这说明akk菌能够有效调节大鼠血清no、angii水平，与氨氯地平联用时效果更佳。
[0271]
综上，akk菌联用氨氯地平能够有效防治大鼠单纯收缩期高血压。
[0272]
以上各实施方式和实施例的各技术特征可以进行任意合适方式的组合，为使描述简洁，未对上述实施方式和实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为在本说明书记载的范围中。
[0273]
以上各实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对本发明保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，得到的等价形式同样落于本发明的保护范围。还应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。
技术特征：1.嗜粘蛋白阿克曼菌在制备防治高血压的药物组合物或者在制备改善血压水平的保健品组合物中的应用，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼菌为嗜粘蛋白阿克曼菌am06、嗜粘蛋白阿克曼菌am02或者两者的组合；其中，所述嗜粘蛋白阿克曼菌am06于2021年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.22793；所述嗜粘蛋白阿克曼菌am02于2021年06月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.22794。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼菌am06和所述嗜粘蛋白阿克曼菌am02各自独立地为活菌、灭活菌或者活菌和灭活菌的组合。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述高血压包括肾性高血压、自发性高血压、复合饮食因素所致代谢性高血压或者单纯收缩期高血压。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物组合物为药品，其剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂或管饲制剂；或/和，所述保健品组合物为保健食品，其种类为乳制品或发酵谷类食品。5.如权利要求1至4中任一项所述的应用，其特征在于，所述药物组合物或者所述保健品组合物中含有有效量的所述嗜粘蛋白阿克曼菌。6.如权利要求1至4中任一项所述的应用，其特征在于，受试者为哺乳动物；可选地，所述受试者为人或者小鼠。7.含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物在制备防治高血压的药物组合物或者在制备改善血压水平的保健品组合物中的应用，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼菌如权利要求1或2中所定义。8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物为保健品组合物、药物组合物或益生菌组合物，所述益生菌组合物还含有不同于所述嗜粘蛋白阿克曼菌的益生菌。9.如权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物还包括第二活性成分，所述第二活性成分为不同于所述嗜粘蛋白阿克曼菌的药物。10.含有嗜粘蛋白阿克曼菌的组合物，其特征在于，所述组合物还包含替米沙坦、卡托普利、缬沙坦和氨氯地平中的一种或者多种；所述嗜粘蛋白阿克曼菌如权利要求1或2中所定义。
技术总结本发明涉及嗜粘蛋白阿克曼菌在制备防治高血压的组合物中的应用，该嗜粘蛋白阿克曼菌为嗜粘蛋白阿克曼菌AM06、嗜粘蛋白阿克曼菌AM02或者两者的组合；其中，嗜粘蛋白阿克曼菌AM06的保藏编号为CGMCC No.22793，嗜粘蛋白阿克曼菌AM02的保藏编号为CGMCC No.22794。该应用中，上述分离得到的嗜粘蛋白阿克曼菌AM06和/或AM02，能够通过改善ET-1、NO、AngII等血压调节因子的水平，有效防治高血压。有效防治高血压。有效防治高血压。
技术研发人员：邝高波 吴家棋 林渝清 丁靖志 周秋云 王晔
受保护的技术使用者：广州知易生物科技有限公司
技术研发日：2022.06.08
技术公布日：2022/11/1
