本发明涉及组织芯片,尤其涉及一种冰冻组织芯片及其制备方法。
背景技术:
1、组织芯片,又称组织微阵列,是将数十至上千个小组织片以规则阵列方式排列在一载玻片上而制成的组织切片,主要用来研究同一基因或蛋白在不同组织或细胞中的表达情况,科研中应用最多的是肿瘤组织芯片。组织芯片是继基因芯片、蛋白质芯片后出现的另一种重要的“生物芯片”。组织芯片将基因、蛋白水平的研究与组织形态学研究相结合,有体积小、信息量大、制作周期短、检测通量高、储存方便的特点。
2、但是常规的组织芯片对核酸特别是rna的保护较差,对rna的检测特别是拷贝数少的rna不理想。因此,开发一种新型的组织芯片,解决常规组织芯片的问题,尤为重要。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种冰冻组织芯片及其制备方法,克服了常规组织芯片对rna保护效果不佳的问题。
2、为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
3、本发明提供了一种冰冻组织芯片的制备方法,包括如下步骤:
4、(1)在模具内加入oct包埋剂,静置后插入金属针,直至oct包埋剂完全凝固,取出金属针,得到带孔的oct阵列块;
5、(2)将组织样品冷冻后保存,逐步升温后采样;
6、(3)将采样得到的样品冷冻,放入oct阵列块的孔中,用oct包埋剂覆盖,继续冷冻得到含有样品的oct阵列块;
7、(4)将含有样品的oct阵列块升温,切片得到样品片;
8、(5)将样品片用固定液固定,干燥后得到冰冻组织芯片。
9、作为优选,步骤(1)中所述模具的长度为1~5cm,宽度为1~3cm,所述静置的温度为-55~-60℃,所述金属针的直径为1.8~2.2mm,所述孔的间距为2.5~3.5mm。
10、作为优选,步骤(2)中所述冷冻的温度为-55~-60℃,所述保存的时间为1~3h,所述逐步升温的速度为1~2℃/min,所述采样的温度为-18~-22℃,所述采样时采用he染色。
11、作为优选,步骤(3)中所述冷冻的温度为-55~-60℃,所述覆盖的标准为没过样品1~3mm,所述继续冷冻的温度为-55~-60℃。
12、作为优选,步骤(4)中所述切片时的温度为-13~-17℃,刀片的角度为4~6度,所述样品片的厚度为6~8μm。
13、作为优选,步骤(5)中所述固定液为5~8%的多聚甲醛,所述固定的时间为8~12min,所述干燥时采用冷冻干燥。
14、本发明还提供了所述制备方法得到的冰冻组织芯片。
15、本发明提供了一种冰冻组织芯片及其制备方法,包括如下步骤:(1)在模具内加入oct包埋剂,静置后插入金属针,直至oct包埋剂完全凝固,取出金属针,得到带孔的oct阵列块;(2)将组织样品冷冻后保存,逐步升温后采样;(3)将采样得到的样品冷冻,放入oct阵列块的孔中,用oct包埋剂覆盖,继续冷冻得到含有样品的oct阵列块;(4)将含有样品的oct阵列块升温,切片得到样品片;(5)将样品片用固定液固定,干燥后得到冰冻组织芯片。本发明的方法制备工艺简单,克服了常规组织芯片对rna保护效果不佳的问题,有良好的应用前景。
1.一种冰冻组织芯片的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述模具的长度为1~5cm,宽度为1~3cm,所述静置的温度为-55~-60℃,所述金属针的直径为1.8~2.2mm,所述孔的间距为2.5~3.5mm。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述冷冻的温度为-55~-60℃,所述保存的时间为1~3h,所述逐步升温的速度为1~2℃/min,所述采样的温度为-18~-22℃,所述采样时采用he染色。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述冷冻的温度为-55~-60℃,所述覆盖的标准为没过样品1~3mm,所述继续冷冻的温度为-55~-60℃。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)中所述切片时的温度为-13~-17℃,刀片的角度为4~6度,所述样品片的厚度为6~8μm。
6.根据权利要求1~5任意一项所述的制备方法,其特征在于,步骤(5)中所述固定液为5~8%的多聚甲醛,所述固定的时间为8~12min,所述干燥时采用冷冻干燥。
7.权利要求1~6任意一项所述制备方法得到的冰冻组织芯片。
