本发明属于植物学和基因工程，更具体地，本发明涉及水稻mir169i-5p.2在水稻抗褐飞虱中的应用。
背景技术：
1、水稻，是我国和世界主要粮食作物，水稻生产直接关系到我国粮食安全、农民增收和农村稳定。褐飞虱是水稻生产中发生和为害面积最大的首要害虫，主要聚集在水稻叶鞘基部，以针状口器刺吸水稻韧皮部汁液，引起稻株下部变黑，瘫痪倒伏，稻田成片枯萎，减产甚至失收。因此，遏制褐飞虱的发展和危害，是保障水稻生产安全的重大需求。发掘和利用水稻抗褐飞虱基因，阐明抗虫机理，培育抗褐飞虱水稻品种在生产中推广应用，是防治褐飞虱这一重大农业害虫的最经济、有效、环境友好和生态安全的首选措施。
2、microrna(mirna)是一类广泛存在于植物内，大小约20～24个核苷酸的非编码小分子rna。它们能够结合靶基因mrna的互补序列，降解靶基因或抑制其翻译，通过在转录后水平控制基因的表达来参与植物各种生物功能的调控，譬如调控植物生长发育，对病虫害的抗性等。
技术实现思路
1、针对上述问题，本发明公开了水稻mir169i-5p.2在水稻抗褐飞虱中的应用。
2、本发明的目的是通过下述技术方案予以实现的。
3、在本发明的第一方面，提供一种改良水稻的性状的方法，所述方法包括：下调水稻中mir169i-5p.2或其前体的表达，或敲除水稻中mir169i-5p.2或其前体。
4、在一个优选例中，所述的改良水稻的性状包括：
5、增加水稻对褐飞虱的抗性；
6、在另一优选例中，所述的下调水稻中mir169i-5p.2或其前体的表达包括：利用基于target mimicry技术的mir169i-5p.2沉默体下调mir3169i-5p.2或其前体的表达，或利用基于crispr/cas9技术的sgrna表达盒敲除mir169i-5p.2或其前体。
7、在另一优选例中，所述利用基于target mimicry技术的mir169i-5p.2沉默体下调mir169i-5p.2表达的方法包括：
8、(1)将mimicry mir169i-5p.2序列置于ips基因序列中，获得ips-mim169序列片段；
9、(2)将ips-mim169序列片段转入水稻中，获得转基因植物，其为改良的水稻。
10、在另一优选例中，所述利用基于crispr/cas9技术的sgrna表达盒敲除mir169i-5p.2或前体的方法包括：
11、(1)使用在线软件crispr-p根据mirna前体序列分析敲除位点，在mirna正义链和反义链分别选择两个靶点，设计接头引物，构建mir169i-5p.2的sgrna表达盒，获得sgrnamir169i-5p.2序列片段；
12、(2)将sgrna表达盒连入到crispr/cas9载体上转入水稻中，获得mir169i-5p.2敲除植物，其为改良的水稻。
13、在另一优选例中，采用农杆菌发将ips-mim169序列片段或mir169i-5p.2的sgrna表达盒转入水稻中。
14、在本发明的另一方面，提供一种mir169i-5p.2或其前体的下调或敲除的用途，用于改良水稻的性状，包括：增加水稻对褐飞虱的抗性。
15、在一个优选例中，所述的下调或敲除是特异性下调mir169i-5p.2或其前体表达的基于target mimicry技术的mir169i-5p.2沉默体，或是基于crispr/cas9的sgrna表达盒。
16、在另一优选例中，所述的水稻是禾本科谷类作物。
17、在本发明的另一方面，提供一种用于改良水稻性状的mir169i-5p.2沉默体，所述mir169i-5p.2沉默体基于target mimicry技术建立，其包括ips基因序列中以及位于该序列中的mimicry mir169i-5p.2序列。
18、在本发明的另一方面，提供包含所述mir169i-5p.2沉默体的表达载体。
19、在本发明的另一方面，提供包含所述mir169i-5p.2沉默体的宿主细胞。
20、与现有的技术相比，本发明具有如下优点和有益效果：
21、1.提高水稻抗虫性：通过下调或敲除mir169i-5p.2或其前体，显著增强了水稻对褐飞虱的抗性。这有助于减少农药使用，降低生产成本，同时保护生态环境。
22、2.改良水稻生长性状：改良后的水稻在受到褐飞虱取食时，其叶鞘增重降低、蜜露量分泌减少，表明植株受损程度减轻，有利于维持水稻的正常生长和产量稳定。
23、3.提供多种技术手段：本发明提供了基于target mimicry技术的mir169i-5p.2沉默体和基于crispr/cas9技术的sgrna表达盒两种技术路径来实现mir169i-5p.2的下调或敲除，为科研人员提供了多样化的选择。
1.水稻mir169i-5p.2在水稻抗褐飞虱中的应用，其特征在于，当下调水稻中mir169i-5p.2或其前体的表达，或敲除水稻中mir169i-5p.2或其前体，则水稻对褐飞虱抗性增加；所述mir169i-5p.2序列如seq no.1所示，所述mir169i-5p.2前体序列如seq no.2所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的下调水稻中mir169i-5p.2或其前体的表达包括：利用基于target mimicry技术的mir169i-5p.2沉默体下调mir169i-5p.2或其前体的表达。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述利用基于target mimicry技术的mir169i-5p.2沉默体下调mir169i-5p.2表达的方法包括：
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(1)中所述mir169i-5p.2沉默体基于target mimicry技术建立，其包括位于ips基因序列中的mimicry mir169i-5p.2序列。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的敲除水稻中mir169i-5p.2或其前体的序列包括：利用基于crispr/cas9技术的sgrna表达盒，所述表达盒序列如seq no.8所示，用于敲除mir169i-5p.2或其前体。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述利用基于crispr/cas9技术的sgrna表达盒敲除mir169i-5p.2或前体的方法包括：
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，步骤(2)中mir169i-5p.2的sgrna表达盒基于crispr/cas9技术建立，其包括位于中间载体的sgrna mir169i-5p.2序列；所述的sgrnamir169i-5p.2序列如seq id no.13和seq id no.14所示。
8.下调或敲除mir169i-5p.2或其前体在用于改良水稻的性状中的用途，其特征在于，提高水稻对褐飞虱的抗性。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的下调是使用基于target mimicry技术的mir169i-5p.2沉默体特异性下调水稻mir169i-5p.2或其前体表达；所述的敲除是基于crispr/cas9的sgrna表达盒敲除水稻中mir169i-5p.2或其前体。
