本发明属于生物,具体涉及一种检测尿路感染病原体的组合物、试剂盒及检测方法。
背景技术:
1、气球菌属(aerococcus)是气球菌科中的一类革兰氏阳性菌,包含8个菌种,广泛存在于空气、土壤、植物、医疗环境中,是潜在的机会性感染病原菌,可引起尿路感染、血流感染、心内膜炎、骨和关节感染、软组织感染、脑膜炎、腹膜炎、脓肿等,甚至造成严重的耐药性,难以治愈。大量报道显示气球菌属菌株可引起临床患者尿路感染,老年女性有基础尿路障碍的患者居多,对于一些无症状患者的检出,提示该菌属可能存在一定的定殖,在一定条件下可引起患者的感染,目前因生化等鉴定技术的不足而被低估。
2、普罗威登菌属(providencia)是肠杆菌科中一种产尿素酶的革兰氏阴性杆菌,包含5个菌种,不仅会引起患者的不适和疼痛,还可能导致严重的并发症,例如肾盂肾炎、败血症以及慢性肾病,还可能导致复发、复杂的尿路感染。它们甚至经常对多种抗生素表现出耐药性,有时还会导致严重并发症,如菌血症或全身性疾病。
3、尿路感染的标准诊断方法,主要是尿液分析和培养,通常因其在各种条件下(如细菌计数低、近期使用抗生素或尿液稀释)易出现假阴性而受到限制。此外,培养物虽然信息丰富,但耗时且易受污染,而且往往无法检测到病原体。而一直以来的错误鉴定造成该菌属的检出率被低估,使得在临床上对该菌属的关注度不高。
技术实现思路
1、为解决上述现有技术问题,本发明的目的在于提供一种检测尿路感染病原体的组合物、试剂盒及检测方法。
2、本发明提供一种检测尿路感染病原体的组合物,所述组合物包括组分a、组分b、组分c、组分d、组分e中的至少一种;
3、所述组分a包括:引物对seq id no:1~2,探针seq id no:3;所述组分a检测脲气球菌;
4、所述组分b包括:引物对seq id no:4~5,探针seq id no:6;所述组分b检测血气球菌;
5、所述组分c包括:引物对seq id no:7~8,探针seq id no:9;所述组分c检测绿色气球菌;
6、所述组分d包括:引物对seq id no:10~11,探针seq id no:12;所述组分d检测斯氏普罗威登菌;
7、所述组分e包括:引物对seq id no:13~14,探针seq id no:15;所述组分e检测雷氏普罗威登菌。
8、本发明采用实时荧光定量pcr技术,通过对检测各尿路感染病原体的上游引物、下游引物及对应探针的精心设计,提供的检测尿路感染病原体的组合物能够实现对脲气球菌、血气球菌、绿色气球菌、斯氏普罗威登菌、雷氏普罗威登菌中的至少一种的检测与区分,更适用于早期检测,具有较高的灵敏度、特异性以及精密度,能准确快速地检测脲气球菌、血气球菌、绿色气球菌、斯氏普罗威登菌、雷氏普罗威登菌,提高检测效率、缩短检测周期,对防止尿路感染并发症和抗生素耐药性的发展至关重要。
9、优选地,所述组合物包括所述组分a、所述组分b、所述组分c、所述组分d和所述组分e。
10、本方案所述组合物包括所述组分a、所述组分b、所述组分c、所述组分d和所述组分e,可同时实现对脲气球菌、血气球菌、绿色气球菌、斯氏普罗威登菌和雷氏普罗威登菌联检和区分,不存在非特异扩增,整体检测效果好。
11、优选地,所述组分a、所述组分b、所述组分c、所述组分d和所述组分e中探针上均标记有荧光报告基团且彼此之间互不相同且互不干扰。
12、优选地,所述荧光报告基团包括fam、hex、rox、cy5或quasar 705中的一种。
13、优选地,所述组合物的各组分以混合的形式存在。
14、本发明提供一种检测尿路感染病原体的试剂盒,所述试剂盒包括所述检测尿路感染病原体的组合物。
15、优选地,在每个反应体系中,每对所述引物对的浓度均为0.05μm~1μm,每个所述探针的浓度为0.05μm~1μm。
16、进一步优选地,在每个反应体系中,每对所述引物对的浓度为0.2μm,每个所述探针的浓度均为0.1μm。
17、优选地,所述试剂盒还包括核酸释放试剂、核酸提取试剂、dna聚合酶、ung酶、核糖核酸酶抑制剂、dntp(u)s、pcr缓冲液以及mg2+中的至少一种。
18、优选地,在每个反应体系中,所述dna聚合酶的浓度为0.1u/μl~1u/μl,mg2+的浓度为1mm~25mm,dntp(u)s的浓度为0.02mm~1mm。
19、进一步优选地,在每个反应体系中,所述dna聚合酶的浓度为0.18u/μl,mg2+的浓度为4mm,dntp(u)s的浓度为0.1mm。
20、优选地,所述检测尿路感染病原体的试剂盒还包括阳性质控品、阴性质控品中的至少一种。
21、本发明还提供一种用于非诊断目的检测尿路感染病原体的方法,其特征在于,包括如下步骤:
22、s1、提取待测样本的核酸,得到核酸样本;
23、s2、使用所述检测尿路感染病原体的试剂盒对所述核酸样本进行pcr扩增;
24、s3、获得并分析结果。
1.一种检测尿路感染病原体的组合物,其特征在于,所述组合物包括组分a、组分b、组分c、组分d、组分e中的至少一种;
2.根据权利要求1所述检测尿路感染病原体的组合物,其特征在于,所述组合物包括所述组分a、所述组分b、所述组分c、所述组分d和所述组分e。
3.根据权利要求2所述检测尿路感染病原体的组合物,其特征在于,所述组分a、所述组分b、所述组分c、所述组分d和所述组分e中探针上均标记有荧光报告基团且彼此之间互不相同且互不干扰。
4.根据权利要求3所述检测尿路感染病原体的组合物,其特征在于,所述荧光报告基团包括fam、hex、rox、cy5或quasar 705中的一种。
5.一种检测尿路感染病原体的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括如权利要求1~4任一项所述检测尿路感染病原体的组合物。
6.根据权利要求5所述检测尿路感染病原体的试剂盒,其特征在于,在每个反应体系中,每对所述引物对的浓度均为0.05μm~1μm,每个所述探针的浓度为0.05μm~1μm。
7.根据权利要求5所述检测尿路感染病原体的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括核酸释放试剂、核酸提取试剂、dna聚合酶、ung酶、核糖核酸酶抑制剂、dntp(u)s、pcr缓冲液以及mg2+中的至少一种。
8.根据权利要求7所述检测尿路感染病原体的试剂盒,其特征在于,在每个反应体系中,所述dna聚合酶的浓度为0.1u/μl~1u/μl,mg2+的浓度为1mm~25mm,dntp(u)s的浓度为0.02mm~1mm。
9.根据权利要求5所述检测尿路感染病原体的试剂盒,其特征在于,所述检测尿路感染病原体的试剂盒还包括阳性质控品、阴性质控品中的至少一种。
10.一种用于非诊断目的检测尿路感染病原体的方法,其特征在于,包括如下步骤: