本发明涉及植物线虫,尤其涉及一种植物线虫封养和无症状植物组织检出线虫的方法。
背景技术:
1、现有技术中植物线虫的离体培养,必需有虫源支持,培养时间较较长,保活时间较短,不能长期观察;并且无症状植物不能确诊是否已被线虫浸染或发生症状。其中离体培养是一种可以将植物或动物细胞和组织从真实环境中分离出来,在一定的生长培养基和培养条件下进行的一种体外生长繁殖技术。
2、针对上述技术问题,本领域技术人员急需设计一种方法,无需接种,通过离体培养以实现养出线虫,长时间保活的方法。
技术实现思路
1、针对上述不足,本发明所要解决的技术问题是:提供一种植物线虫封养和无症状植体检出线虫的方法,通过采取植物体组织进行实验室线虫封养,无需接种发生线虫,并虫口密度逐渐增大。
2、为解决上述技术问题,本发明的技术方案是:
3、一种植物线虫封养和无症状植体组织检出线虫的方法,包括以下步骤;
4、步骤一、取线虫易发部位的植物体组织100±n克,装入培养盒内,进行离体培养,n为数字;
5、步骤二、一次性加入20±kml线虫培养液,k为数字;
6、步骤三、离体培养过程中,温度控制在21℃到28℃之间;湿度控制在40-60%。
7、步骤四、封盖培养14-21天,材料表面发生粥样变化,活体线虫便呈现出从无到有的发生全过程,虫口密度逐渐增大。
8、优选方式为,在封盖培养过程中,根据培养盒内线虫的活性确定是否添加预处理植体材料。
9、优选方式为,所述预处理植体材料通过以下步骤获得:将植物组织切段1-3cm,植入容器,加入线虫培养液浸泡,放置恒温12℃环境下,7天后取出备用,容器为非玻璃制品。
10、优选方式为,植物组织可为植物的根、植物的茎或植物的叶。
11、优选方式为,所述步骤一中:依据植物线虫局限寄生和共生发展的规律,以及在不同植物上线虫有主寄部位的特点,选取线虫易发部位的植物体组织。
12、优选方式为,所述培养盒可长期保存活体线虫,线虫在不同培养材料中会发生差异性形态变化,形成固定种群,镜检时先取培养液检测,后检培养材料,通过线虫对比判定其活性。
13、优选方式为,所述培养盒为直径8cm,高7cm的塑制旋盖盒。
14、采用上述技术方案后,本发明的有益效果是:
15、本发明植物线虫封养和无症状植体组织检出线虫的方法,包括以下步骤;取线虫易发部位的植物体组织100克,装入培养盒内,进行离体培养;一次性加入20ml线虫培养液;离体培养过程中,温度控制在21℃到28℃之间,湿度控制40-60%;封盖培养14-21天,活体线虫便呈现出从无到有的发生全过程,并能长期存活,以便于观察线虫的生活习性和繁殖方式及形态变化。本方法对于研究植物线虫的发生发展、生活习性和繁殖方式及变化规律具有重要的现实意义,特别是无症状检出是预判线虫发生的重要手段。
1.一种植物线虫封养和无症状植物组织检出线虫的方法,其特征在于,包括以下步骤;
2.根据权利要求1所述的植物线虫封养和无症状植物组织检出线虫的方法,其特征在于,在封盖培养过程中,根据培养盒内线虫的活性确定是否添加预处理植体材料。
3.根据权利要求2所述的植物线虫封养和无症状植体组织检出线虫的方法,其特征在于,所述预处理材料通过以下步骤获得:
4.根据权利要求3所述的植物线虫封养和无症状植物组织检出线虫的方法,其特征在于,植物组织可为植物的根、植物的茎或植物的叶。
5.根据权利要求1所述的植物线虫封养和无症状植物组织检出线虫的方法,其特征在于,所述步骤一中:依据植物线虫局限寄生和共生发展的规律,以及在不同植物上线虫有主寄部位的特点,选取线虫易发部位的植物体组织。
6.根据权利要求1所述的植物线虫封养和无症状植物组织检出线虫的方法,其特征在于,所述培养盒可长期保存活体线虫,线虫在不同培养材料中,随着虫龄的增长会发生差异性形态变化,形成优势种群,镜检时先取培养液检测,后检培养材料。
7.根据权利要求6所述的植物线虫封养和无症状植物组织检出线虫方法,其特征在于,所述培养盒为直径8cm,高7cm的塑制旋盖盒。