本发明涉及宿主细胞残留dna检测相关，具体为宿主细胞残留dna检测试剂盒制备方法。
背景技术：
1、生物制品常用于可预防、治疗疾病，关系到使用者的用药安全，所以产品质量尤为重要，而其中生物制品中宿主细胞残留dna具有潜在致瘤和传染风险，对dna杂质的限量要求非常严格。qpcr反应目前在生物技术领域的应用较广，可以将qpcr技术可以用于任何dna、rna相关的检测。qpcr反应存在重要的五因素：标准品、引物探针、预混液、dna稀释液、反应体系。而现有的检测中采用的是宿主细胞全断dna进行检测，这样导致检测难度大，检测试剂制备难度大。
技术实现思路
1、为解决现有技术存在现有的检测中采用的是宿主细胞全断dna进行检测，这样导致检测难度大，检测试剂制备难度大的缺陷，本发明提供宿主细胞残留dna检测试剂盒制备方法。
2、为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：
3、本发明宿主细胞残留dna检测试剂盒制备方法，包括以下步骤：
4、步骤1：对宿主细胞进行中的dna进行提取，确定宿主细胞中关键的dna信息，然后根据宿主细胞进行dna类型信息，来确定最佳对对宿主细胞残留dna检测的方法；同时选择相应的dna检测用原材料的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物；
5、步骤2：然后对选定的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物进行ph值调节，将对核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物调节到所需的ph值内到的初步检测试剂；
6、步骤3：对初步检测试剂进行灭菌，灌装，并标明核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物的信息以及使用条件；
7、步骤4：利用低温试剂盒来对包装好的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物进行低温运输。
8、作为本发明的一种优选技术方案，所述的对宿主细胞进行中的dna进行提取，确定宿主细胞中关键的dna信息的方法是，首先选取若干组洁净的宿主细胞为对照组，然后选取若干组含有病毒的宿主细胞，对洁净的宿主细胞中的dna进行提取，然后对含有病毒的宿主细胞进行混合dna取样，对洁净的宿主细胞中的dna信息以及含有病毒的宿主细胞的混合dna信息进行并对，找到存在的差异dna信息；同时对病毒的单体的dna信息进行采集，然后根据差异dna信息与病毒的单体的dna信息进行对比，找出检测的需要检测的dna信息片段。
9、作为本发明的一种优选技术方案，所述对含有病毒的宿主细胞进行混合dna取样的方法是，将含有病毒的宿主细胞进行打碎，并且进行分解混合，使得病毒与宿主细胞的dna混合在一起，然后进行dna提取，得到混合后的混合dna信息。
10、作为本发明的一种优选技术方案，所述将含有病毒的宿主细胞混合dna取样的方法是，
11、步骤1：将含有病毒的宿主细胞的打碎样品置于无水乙醇中，然后进行离心震荡洗脱20s～40s，得到洗脱液；
12、步骤2：向洗脱液中加入浓度为3m-5m的醋酸钠溶液，洗脱液和醋酸钠溶液的体积比为1ml：0.05ml-0.1ml，混匀，离心，得到富集的含有病毒的宿主细胞释放的宿主dna以及病毒dna；
13、步骤3：向含有病毒的宿主细胞释放的宿主dna以及病毒dna加入75％乙醇清洗，离心，干燥，得到收集物；
14、步骤4：使用微量dna提取试剂盒从收集物中提取梅花鹿核基因组dna。
15、作为本发明的一种优选技术方案，所述的根据宿主细胞进行dna类型信息，来确定最佳对对宿主细胞残留dna检测的方法，利用现有的检测方法，来对宿主细胞以及寄生在宿主细胞上的病毒进行提取dna，然后比对各自的提取效果，选择效果最好的现有的检测方法。
16、作为本发明的一种优选技术方案，所述的选择相应的dna检测用原材料的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物，则首先根据确定好的最佳检测方法，然后宿主细胞的类型，以及寄生在宿主细胞的病毒类型初步选择多种不同类型的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物；
17、然后对每种类型的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物对宿主细胞的dna以及洁净的病毒的dna进行提取，并进行比较，比较每种类型核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物之间的提取效果，以及差异，然后根据需要的灵敏度以及生产使用成本，选择合适的类型的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物；然后根据需要检测的dna信息片段的来对核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物进行确定。
18、作为本发明的一种优选技术方案，所述的根据需要检测的dna信息片段的来对核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物进行确定的方法是，对选定类型的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物进行实验，并对在不同的温度、ph值下对核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物，得到最优的使用温度以及ph值，在步骤3中则按照实验得到的最优的ph值来对对选定的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物进行ph值调节。
19、本发明的有益效果是：
20、该种宿主细胞残留dna检测试剂盒制备方法在对宿主细胞进行中的dna进行提取，确定宿主细胞中关键的dna信息的方法是，首先选取若干组洁净的宿主细胞为对照组，然后选取若干组含有病毒的宿主细胞，对洁净的宿主细胞中的dna进行提取，然后对含有病毒的宿主细胞进行混合dna取样，对洁净的宿主细胞中的dna信息以及含有病毒的宿主细胞的混合dna信息进行并对，找到存在的差异dna信息；同时对病毒的单体的dna信息进行采集，然后根据差异dna信息与病毒的单体的dna信息进行对比，找出检测的需要检测的dna信息片段，这样只需对关键的片段信息进行检测即可，有效缩减的检测范围，从而极大地降低了检测试剂的制备难度。
1.宿主细胞残留dna检测试剂盒制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的宿主细胞残留dna检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述的对宿主细胞进行中的dna进行提取，确定宿主细胞中关键的dna信息的方法是，首先选取若干组洁净的宿主细胞为对照组，然后选取若干组含有病毒的宿主细胞，对洁净的宿主细胞中的dna进行提取，然后对含有病毒的宿主细胞进行混合dna取样，对洁净的宿主细胞中的dna信息以及含有病毒的宿主细胞的混合dna信息进行并对，找到存在的差异dna信息；同时对病毒的单体的dna信息进行采集，然后根据差异dna信息与病毒的单体的dna信息进行对比，找出检测的需要检测的dna信息片段。
3.根据权利要求2所述的宿主细胞残留dna检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述对含有病毒的宿主细胞进行混合dna取样的方法是，将含有病毒的宿主细胞进行打碎，并且进行分解混合，使得病毒与宿主细胞的dna混合在一起，然后进行dna提取，得到混合后的混合dna信息。
4.根据权利要求3所述的宿主细胞残留dna检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述将含有病毒的宿主细胞混合dna取样的方法是，
5.根据权利要求1所述的宿主细胞残留dna检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述的根据宿主细胞进行dna类型信息，来确定最佳对对宿主细胞残留dna检测的方法，利用现有的检测方法，来对宿主细胞以及寄生在宿主细胞上的病毒进行提取dna，然后比对各自的提取效果，选择效果最好的现有的检测方法。
6.根据权利要求1所述的宿主细胞残留dna检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述的选择相应的dna检测用原材料的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物，则首先根据确定好的最佳检测方法，然后宿主细胞的类型，以及寄生在宿主细胞的病毒类型初步选择多种不同类型的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物；
7.根据权利要求5所述的宿主细胞残留dna检测试剂盒制备方法，其特征在于，所述的根据需要检测的dna信息片段的来对核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物进行确定的方法是，对选定类型的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物进行实验，并对在不同的温度、ph值下对核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物，得到最优的使用温度以及ph值，在步骤3中则按照实验得到的最优的ph值来对对选定的核酸提取试剂、酶、引物以及缓冲物进行ph值调节。
