本公开涉及分子和细胞生物学领域，并且还涉及医学治疗和预防的方法。
背景技术：
1、纤层蛋白a/c是位于内核膜下方的核纤层的一个组成部分，被认为可以为细胞核提供机械支撑(burke和stewart，2013)。编码纤层蛋白a和c的lmna突变会导致大量被称为核纤层蛋白病的疾病产生。破坏核骨架和细胞骨架连接子(linc)复合物是最近被提出的一种治疗核纤层蛋白病的策略。linc复合物由内核膜的sun结构域蛋白和外核膜的kash结构域蛋白组成(lee和burke，2018)。旁系同源的sun1和sun2是主要的sun结构域蛋白，在哺乳动物组织中广泛表达。在kash结构域蛋白中，nesprin-1、nesprin-2和nesprin-3是表达最广泛的。
2、crisp等人，2006描述了通过过度表达显性负性形式的小鼠sun1(dnsun1)蛋白来破坏linc复合物。dnsun1包括sun1的整个内腔结构域、n端信号序列和c端的高尔基体至er驻留序列kdel。它被认为是通过破坏linc复合物内的sun-kash相互作用发挥作用的，可能是通过与内源性含sun结构域的蛋白质(如sun1和sun2)竞争性地与含kash结构域的蛋白结合。与野生型sun1不同，dnsun1不锚定在核纤层上，因此来自细胞骨架的传递到kash结构域蛋白的力不会通过dnsun1进一步传递到核内部。在wo 2019/143300a1中描述了dnsun1的人源化版本。
3、dnsun1的编码序列相对较大(～1.5kb)，对其递送(例如作为基因治疗)提出了挑战。举例来说，在自互补腺相关病毒载体(scaav)系统中，包括病毒反向末端重复序列(itrs)、启动子和其他调控序列、以及编码序列本身的整个转基因不能超过2.3kb。
4、含sun结构域的蛋白质的c末端sun结构已被证明是与含kash结构域的蛋白相互作用所必需的，但不足以与之相互作用，并且上游螺旋和卷曲区介导的sun结构区的三聚作用被认为是与kash相互作用所需的(sosa等人，2012；wang等人，2012年；zhou等人，2012，jahed等人，2018b；nie等人，2016；xu等人，2018)。
5、zhou等人，2012和sosa等人，2012证明了在cc1结构域开始之前被截短的内腔sun构建体能够与kash结构域蛋白结合。zhou等人，2012年，wang等人，2012，jahed等人，2018b和nie等人，2016表明，包含cc1-cc2-sun的构建体能够在凝胶过滤测定中形成三聚体，或者在拉下测定中与kash结构域相互作用。zhou等人，2012和jahed等人，2018b进一步表明，从cc1结构域中间开始并包含cc2和sun的截短体在拉下测定中不与kash相互作用，并在凝胶过滤测定中形成单体。wang等人，2012和nie等人，2016表明，cc2-sun构建体在体外同样不与kash相互作用，在凝胶过滤测定中仅形成单体。
6、虽然大多数研究都集中在sun2上，但sun1和sun2之间存在高度的序列保守性，特别是在它们的内腔结构域中，并且在对sun1本身进行的研究中，sun1和sun2之间在结构水平上存在明显的保守性(xu等人，2018；gurusaran和davies，2021)。
7、重要的是，关于包括内腔结构域的某些截短的sun蛋白变体是否能够形成三聚体并与kash结构域蛋白相互作用，存在相互矛盾的报道(jahed等人，2018a)。
8、在zhou等人，2012和wang等人，2012年的研究中，由位点g522至h717组成的sun2截短变体能够与含有kash结构域的蛋白质相互作用(通过共免疫沉淀分析所测定的)，并且由位点v520至h717构成的sun2截断变体能够形成三聚体，并且用于通过x射线晶体学解析sun三聚体结构(sun三聚体的形成被认为是与含有kash结构域的蛋白的结合所必需的)。nie等人，2016确定，从cc2-sun中去除α1(α2-α3-sun)或α1和α2(α3-sun)螺旋消除了cc2的自身抑制功能，并且所得的sun2构建体可以与kash结构域蛋白相互作用。有趣的是，虽然α2-α3-sun在凝胶过滤测定中形成三聚体，但α3-sun是单体和三聚体的混合物。
9、相比之下，sosa等人，2012年报道称，虽然由507至717位组成的sun2截短变体(对应于α2-α3-sun)能够与kash结构域结合，但进一步的截短导致与kash域结合的能力弱(在sun2(514-717)截短变体的情况下)或可忽略(在sun2(521-717)截断变体的情况下，其对应于α3-sun)。虽然文献已经研究了sun蛋白内腔结构域的截短如何影响与kash结合，但尚不清楚三聚体的形成和体外kash结构域的结合是否能预测在细胞水平上破坏linc复合物的能力。
10、因此，尚不清楚sun内腔区域的哪些截短可以用作linc复合体破坏的试剂。
技术实现思路
1、在第一方面，本公开提供了编码linc复合物抑制多肽的核酸，其中所述linc复合物抑制多肽包括：(i)抑制区，包含对应于cc2区的α3螺旋和含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列，和(ii)内质网滞留基序；并且其中所述linc复合物抑制多肽不包含seq id no:43、45或58中任一个的氨基酸序列。
2、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽的抑制区基本上不由seq id no:44或46的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽的抑制区基本上不由seq idno：49、50、51、52、53、54、55、56、57、59、60、61或62的氨基酸序列组成。
3、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽的抑制区基本上由以下组成：
4、(i)与seq id no:66的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；
5、(ii)与seq id no:94的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
6、(iii)与seq id no:65的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
7、(iv)与seq id no:63的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
8、(v)与seq id no:64的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或(vi)与seq id no:67的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
9、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包括或基本上由以下组成：
10、(i)与seq id no:72的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；
11、(ii)与seq id no:95的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
12、(iii)与seq id no:71的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
13、(iv)与seq id no:69的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
14、(v)与seq id no:70的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或(vi)与seq id no:73的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
15、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包括信号肽。在一些实施方案中，所述核酸是适于递送编码linc复合物抑制多肽的核酸作为基因治疗的载体。在一些实施方案中，所述载体是腺相关病毒(aav)载体。
16、本公开还提供了一种linc复合物抑制多肽，其包含：(i)抑制区，包含对应于cc2区的α3螺旋和含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列，和(ii)内质网滞留基序；
17、并且所述linc复合物抑制多肽不包含seq id no:43或45的氨基酸序列。
18、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽的抑制区基本上不由seq id no:44或46的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，根据权利要求9或权利要求10所述的linc复合体抑制多肽，其中所述linc复合体抑制剂多肽的抑制区基本上不由seq id no：49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62的氨基酸序列组成。
19、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽的抑制区基本上由以下组成：
20、(i)与seq id no:66的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；
21、(ii)与seq id no:94的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
22、(iii)与seq id no:65的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
23、(iv)与seq id no:63的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
24、(v)与seq id no:64的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
25、(vi)与seq id no:67的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
26、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包括或基本上由以下组成：
27、(i)与seq id no:72的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；
28、(ii)与seq id no:95的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
29、(iii)与seq id no:71的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
30、(iv)与seq id no:69的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或
31、(v)与seq id no:70的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或(vi)与seq id no:73的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
32、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包括信号肽。
33、本公开还提供了一种鉴定linc复合物抑制多肽的方法，包括：
34、引入编码候选linc复合物抑制多肽的核酸，所述候选linc复合体抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列；和
35、随后分析细胞以确定含有sun结构域的蛋白质的相互作用伴侣的亚细胞定位；
36、其中当检测到含有sun结构域的蛋白质的相互作用伴侣的亚细胞定位的变化时，候选linc复合物抑制多肽被确定为linc复合体抑制多肽。
37、本公开还提供了一种鉴定linc复合物抑制多肽的方法，包括：
38、引入编码候选linc复合体抑制多肽的核酸，所述候选linc复合物抑制多肽包含对应于含有kash结构域的蛋白质的kash结构区的氨基酸序列；和
39、随后分析细胞以确定含有kash结构域的蛋白质的相互作用伴侣的亚细胞定位；
40、其中当检测到含有kash结构域的蛋白质的相互作用伴侣的亚细胞定位的变化时，候选的linc复合物抑制多肽被确定为linc复合体抑制多肽。
41、在一些实施方案中，当检测到定位于内质网的含有sun/kash结构域的蛋白质的相互作用伴侣的比例增加时，候选linc复合体抑制多肽被确定为linc复合体抑制剂多肽。
42、本公开还提供了通过根据本公开的方法鉴定的linc复合物抑制多肽。
43、本公开还提供了编码本公开的linc复合物抑制多肽的核酸。
44、本公开还提供了包含本公开的核酸的载体，所述载体是适于递送编码linc复合物抑制多肽的核酸作为基因治疗的载体。
45、在一些实施方案中，所述载体是腺相关病毒(aav)载体。
46、本公开还提供了包含本公开的核酸、linc复合物抑制多肽或载体的细胞。
47、本公开还提供了包含本公开的核酸、linc复合物抑制多肽、载体或细胞的药物组合物。
48、本公开还提供了本公开的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物用于药物治疗或预防的方法。
49、本公开还提供了本公开的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物用于治疗或预防核纤层蛋白病的方法。
50、本公开还提供了本公开的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物在制备用于治疗或预防核纤层蛋白病的药物中的用途。
51、本公开还提供了治疗或预防核纤层蛋白病的方法，包括向受试者施用治疗有效量或预防有效量的本公开的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物。
52、在本公开的各个方面的一些实施方案中，核纤层蛋白病的特征在于肌病、心肌病、扩张型心肌病、肌营养不良、心肌营养不良、骨骼肌营养不良、早衰症、神经病变、脂肪萎缩、骨骼发育不良、脂肪营养不良、白质营养不良或皮肤病中的一种或多种。在一些实施方案中，核纤层蛋白病与lmna的突变相关。在一些实施方案中，核纤层蛋白病选自：哈钦森-吉尔福德早衰综合征；扩张型心肌病；肌肉营养不良，先天性，lmna相关；emery dreifuss肌营养不良2型，常染色体显性；肌肉营养不良；下颌骨发育不良伴a型脂营养不良；扩张型心肌病，1a；腓骨肌萎缩症；四肢围带肌营养不良；扩张型心肌病伴高促性腺功能减退；emerydreifuss肌肉营养不良3型，常染色体隐性遗传；脂营养不良，家族性部分性，2型；emerydreifuss肌肉营养不良；腓骨肌萎缩症，轴突型，2b1型；心手综合征，斯洛文尼亚型；衰老；家族性部分性脂营养不良；限制性皮肤病，致死型；致心律失常性右心室心肌病；牙病；心脏病；维尔纳综合征；肥厚型心肌病；左心室不充盈；房室传导阻滞；钙化；肢端骨溶解；常染色体显性肢环肌营养不良；糖尿病，非胰岛素依赖型；骨质疏松症；心房颤动；心房静止1；黑棘皮病；心传导缺陷；儿茶酚胺能多态性室性心动过速；下颌骨发育不全、耳聋、前体特征和脂营养不良综合征；病态窦房结综合征；pelger huet异常；腓骨肌萎缩症，轴索型，2e型；先天性全身性脂营养不良；限制性心肌病；先天性纤维型比例失调；脂营养不良，先天性全身性，1型；肌纤维性肌病；脂营养不良，家族性部分性，1型；轴索神经病变；非典型沃纳综合征；卵巢囊腺瘤；范可尼贫血，补体a组；体重指数定量性状位点11；皮肤病；强直性脊柱肌肉营养不良1例；神经肌肉疾病；颅面骨畸形综合征；
53、bethlem肌病1；获得性全身性脂营养不良；扩张型心肌病，1e；脂营养不良，先天性全身性，4型；未分化多形性肉瘤；脂营养不良，家族性部分性，3型；肌肉营养不良，先天性肌肽缺乏，1a；脊髓近端肌肉萎缩；肌肉营养不良多糖障碍，b型，5；先天性肌营养不良，1b；雷诺兹综合征；wiedemann-rautenstrauch综合征；emery dreifuss肌营养不良1，x连锁；脂营养不良，先天性全身性，2型；单基因糖尿病；扩张型心肌病，1d；近视、近端和眼麻痹；肌肉组织疾病；脂营养不良，家族性部分性，4型；扩张型心肌病，1h；二度房室传导阻滞；正中神经病变；内源性心肌病；女性生殖器官脱垂；完全性全身性脂营养不良；强直性脊柱肌肉营养不良；紧急情况；尺神经损伤；肢环肌营养不良1b型；
54、lmna相关扩张型心肌病；骨盆肌肉损耗；广泛性脂营养不良相关孕激素综合征；肌肉疾病；扩张型心肌病，1b；常染色体遗传病；家族性孤立性致心律失常性心室发育不良，右显性；家族性孤立性致心律失常性心室发育不良，双心室型；家族性孤立性致心律失常性心室发育不良，左显性；lmna相关的心皮早衰综合征；和常染色体半显性重度脂营养不良层病变。
55、本公开还提供了本公开的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物用于治疗或预防以高脂血症为特征的疾病的方法。
56、本公开还提供了本公开的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物在制备用于治疗或预防以高脂血症为特征的疾病的药物中的用途。
57、本公开还提供了治疗或预防以高脂血症为特征的疾病的方法，包括向受试者施用治疗有效量或预防有效量的本公开的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物。
58、在本公开的各个方面的一些实施方案中，以高脂血症为特征的疾病选自动脉粥样硬化、心血管疾病、中风和家族性高脂血症。
59、描述
60、本公开基于发明人的意外发现，尽管现有技术中有报道称含有sun结构域的蛋白质的内腔结构域的各种截短变体不能与含有kash结构域的蛋白结合，因此被认为不会起到linc复合物抑制剂的作用，但广泛的这种截短变体实际上起到了linc复合体抑制剂的作用。
61、使用基于细胞的测定法，通过观察内源性含有kash结构域的蛋白质的正常亚细胞定位的破坏来确定linc复合物破坏(具体地，其中含有kash域的蛋白质在linc复合体破坏后定位于内质网而不是核膜)，发明人阐述了对应于含有sun结构域的蛋白的内腔结构域的各种不同截短体，以及包含其不同结构基序(即，其卷曲螺旋区、α螺旋)的多肽能够影响linc复合物的破坏。本发明人进一步证实，在通过心肌细胞特异性缺失lmna建立的减少扩张型心肌病(dcm)dcm小鼠模型中，通过aav递送的作为基因治疗的各种不同的显性负性linc复合物抑制多肽在体内dcm的病理学。
62、本公开提供了大量的linc复合物抑制多肽，其适用于与现有和未来的基因治疗技术相关的应用。特别地，尺寸小于wo 2019/143300a1中描述的含有显性负性sun结构域的蛋白质构建体的linc复合物抑制多肽更适合用于具有中等包装限度的载体系统，例如具有～2.3kb包装限度的scaav载体。
63、linc复合物的结构和功能
64、核骨架和细胞骨架连接子(linc)复合物是包含含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白的多肽复合物。linc复合物的结构在例如sosa等人的curr opin structbiol.(2013)23(2):285-91和hieda，cells(2017)6(1):3和hieda，细胞(2017)6(1):3中进行了综述，这两个文献通过引用的方式全部并入本文。
65、linc复合物连接核膜的内核膜(inm)和外核膜(onm)。含有sun结构域的蛋白质横跨inm，与inm核质侧的核纤层蛋白和染色质结合蛋白以及inm核周侧的含有kash结构域的蛋白相关。含有kash结构域的蛋白质横跨onm，与细胞骨架结构成分，如onm细胞质侧的肌动蛋白丝、微管马达和中间丝，以及与onm核周侧的含有sun结构域的蛋白相关。sun结构域蛋白在onm中起到kash结构域蛋白的经腔系链的作用。
66、在此，“含sun结构域的蛋白质”是指包含sun结构域的任何多肽。sun(sad1和unc-84)结构域蛋白是重要的inm组分，包括定位于核周空间的保守的羧基末端sun结构域。sun结构域包含约175个残基，并且位于螺旋茎区的末端。sun蛋白的核质结构域与核骨架的结构成分相互作用。
67、sun结构域可包含或由seq id no:5、14、27、28、29或30所示的氨基酸序列，或与seq id no:5、14、27、28、29或30所示的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
68、在一些实施方案中，含有sun结构域的蛋白质选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco。
69、在一些实施方案中，含有sun结构域的蛋白质是sun1或sun2。
70、在一些实施方案中，含有sun结构域的蛋白质能够形成linc复合物。在一些实施方案中，含有sun结构域的蛋白质能够与kash结构域和/或含有kash结构域的蛋白质相互作用。
71、人sun1是id为uniprotkb o94901的多肽，其氨基酸序列如seq id no:1所示。人sun2是id为uniprotkb q9uh99的多肽，其氨基酸序列如seq id no:13所示。人sun3是id为uniprotkb q8taq9的多肽，其氨基酸序列如seq id no:23所示。人sun5是id为uniprotkba9z1w8的多肽，其氨基酸序列如seq id no:24所示。人spag4是id为uniprotkb q9npe6的多肽，其氨基酸序列如seq id no:25所示。人suco是iduniprotkb q9ubs9的多肽，其氨基酸序列如seq id no:26所述。
72、在本说明书中，“sun1”、“sun2”、“sun3”、“sun5”、“spag4”和“suco”分别指任何物种的sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco，包括其异构体、片段、变体或同源物。
73、如本文所用，蛋白质的“片段”、“变体”或“同源物”可任选地被表征为与参考蛋白质的氨基酸序列(例如参考蛋白质的参考同种型)具有至少60％，优选70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在一些实施方案中，片段/变体/异构体/同源物可以通过执行由参考蛋白执行的功能的能力来表征。
74、“片段”通常指参考蛋白的一部分。“变体”通常是指具有相对于参考蛋白质的氨基酸序列包含一个或多个氨基酸取代、插入、缺失或其他修饰的氨基酸序列，但与参考蛋白质的氨基序列保持相当程度的序列同一性(例如至少60％)的蛋白质。“同种型”通常是指由与参考蛋白物种相同的物种表达的参考蛋白变体。“同源物”通常是指与参考蛋白的物种相比，由不同物种产生的参考蛋白的变体。同源包括直系同源。
75、“片段”可以是任何长度(按氨基酸数量)，尽管可以任选地是参考蛋白(即片段来源的蛋白)长度的至少20％，并且最大可以具有参考蛋白长度的50％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％中的一个长度。
76、异构体、片段、变体或同源物可以任选地是功能性异构体、碎片、变体或同系物，例如具有参考蛋白的功能性性质/活性，如通过适当的功能性/活性测定法的分析所确定的。
77、在本说明书中，“sun1”是指具有seq id no:1所示氨基酸序列的蛋白质及其片段、变体或同源物。在一些实施方案中，sun1包含或由与seq id no:1具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
78、在本说明书中，“sun2”是指具有seq id no:13所示氨基酸序列的蛋白质及其片段、变体或同源物。在一些实施方案中，sun2包含或由与seq id no:13具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
79、在本说明书中，“sun3”是指具有seq id no:23所示氨基酸序列的蛋白质及其片段、变体或同源物。在一些实施方案中，sun3包含或由与seq id no:23具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
80、在本说明书中，“sun5”是指具有seq id no:24所示氨基酸序列的蛋白质及其片段、变体或同源物。在一些实施方案中，sun5包含或由与seq id no:24具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
81、在本说明书中，“spag4”是指具有seq id no:25所示氨基酸序列的蛋白质及其片段、变体或同源物。在一些实施方案中，spag4包含或由与seq id no:25具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
82、在本说明书中，“suco”是指具有seq id no:26所示氨基酸序列的蛋白质及其片段、变体或同源物。在一些实施方案中，suco包含或由与seq id no:26具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
83、这里，“含有kash结构域的蛋白质”是指包含kash结构域的任何多肽。kash(klarsicht，anc-1，syne同源性)结构域蛋白是靶向核膜的羧基末端锚定的膜蛋白。在c末端发现50-60个氨基酸的kash结构域。kash结构域是疏水性的，包括一个横跨onm的单次跨膜螺旋和一个延伸到核周空间的约30个氨基酸区域。
84、kash结构域可包含或由seq id no:37、38、39、40、41或42中所示的氨基酸序列，或与seq id no:30、38、39、40、41或42中所示氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
85、在一些实施方案中，含有kash结构域的蛋白质选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4(也分别称为syne1、syne2、syne3和syne4)、kash5和lrmp。在一些实施方案中，含有kash结构域的蛋白质是nesprin-1、nesprin-2或nesprin-3。
86、在一些实施方案中，含有kash结构域的蛋白质能够形成linc复合物。在一些实施方案中，含有kash结构域的蛋白质能够与sun结构域和/或含有sun结构区的蛋白质相互作用。
87、人nesprin-1是id为uniprotkb q8nf91的多肽，其氨基酸序列显示在seq id no:31中。人nesprin-2是id为uniprotkb q8wxh0的多肽，其氨基酸序列显示在seq id no:32中。人nesprin-3是id为uniprotkb q6zmz3的多肽，其氨基酸序列显示在seq id no:33中。人nesprin-4是id为uniprotkb q8n205的多肽，其氨基酸序列显示在seq id no:34中。人kash5是id为uniprotkb q8n6l0的多肽，其氨基酸序列显示在seq id no:35中。人lrmp是id为uniprotkb q12912的多肽，其氨基酸序列显示在seq id no:36中。
88、在本说明书中，“nesprin-1”、“nesprin-2”、“nesprin-3”、“nesprin-4”、“kash5”和“lrmp”分别指任何物种的nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp，包括其异构体、片段、变体或同源物。
89、在本说明书中，“nesprin-1”是指具有seq id no:31所示氨基酸序列的蛋白质及其片段、变体或同源物。在一些实施方案中，nesprin-1包含或由与seq id no:31具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
90、在本说明书中，“nesprin-2”是指具有seq id no:32所示氨基酸序列的蛋白质及其片段、变体或同源物。在一些实施方案中，nesprin-2包含或由与seq id no:32具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
91、在本说明书中，“nesprin-3”是指具有seq id no:33所示氨基酸序列的蛋白质及其片段、变体或同源物。在一些实施方案中，nesprin-3包含或由与seq id no:33具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
92、在本说明书中，“nesprin-4”是指具有seq id no:34所示氨基酸序列的蛋白质及其片段、变体或同源物。在一些实施方案中，nesprin-4包含或由与seq id no:34具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
93、在本说明书中，“kash5”是指具有seq id no:35所示氨基酸序列的蛋白质及其片段、变体或同源物。在一些实施方案中，kash5包含或由与seq id no:35具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
94、在本说明书中，“lrmp”是指具有seq id no:36所示氨基酸序列的蛋白质及其片段、变体或同源物。在一些实施方案中，lmrp包含或由与seq id no:36具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
95、如本文所用，“linc复合物”是指包含含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白的多肽复合物。
96、linc复合物是由含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白之间的蛋白质-蛋白质相互作用形成的。linc复合物可以包括sun结构域和kash结构域之间的非共价和/或共价相互作用。非共价相互作用包括例如氢键、离子相互作用、范德华力和疏水键。共价相互作用包括例如二硫键。
97、sun结构域蛋白被认为是通过其茎区域之间的相互作用寡聚形成三聚体以形成卷曲螺旋的三螺旋(zhou等人，j.biol。化学.(2012)287:5317-5326).sun结构域蛋白茎区的缺失已被证明会破坏linc复合物的形成。sun结构域呈现β三明治结构，三聚体的sun结构区部分通过被称为kash盖的突出β折叠广泛相互作用；一个sun结构域的kash盖与相邻sun结构区的β三明治部分重叠(sosa等人，细胞(2012)149:1035-1047)。
98、kash结构域蛋白也可以寡聚，这可能涉及跨膜螺旋之间的蛋白质-蛋白质相互作用。单个kash域沿着一个sun域的kash盖和相邻sun域β三明治折叠的上部区域之间形成的凹槽与两个相邻的sun域相互作用。通过这种方式，sun和kash结构域被认为相互作用形成3:3的六聚杂环复合物。紧邻kash结构域c末端之前的2-3个脯氨酸残基被认为被容纳在sun结构域表面内的深口袋中。kash的这一区域对sun-kash的相互作用很重要；c末端仅延伸一个氨基酸会破坏linc复合物的形成。sun和kash结构域的保守半胱氨酸残基形成二硫键，进一步稳定sun-kash复合物。二硫键对于通过linc复合物的力传递可能是重要的(jahed等人，biophys.j.(2015)109:501-509)。
99、如上所述，linc复合物被认为是通过三种含有sun结构域的蛋白质的sun结构和三种含有kash结构域的蛋白的kash结构的相互作用而形成的。sun和kash结构域蛋白之间的相互作用被认为是混杂的；sun1和sun2已被证明与nesprin-1、nesprin-2和nesprin-3相互作用。
100、根据本公开的linc复合物可以包括任何含有sun结构域的蛋白质和任何含有kash结构域的蛋白。linc复合物中含有sun结构域的蛋白质可以是相同的或不相同的。linc复合物中含有kash结构域的蛋白质可以是相同的或不相同的。
101、linc复合物功能综述于例如hieda，cells(2017)6(1):3(通过引用并入上文)和stroud，biophys rev.(2018)10(4):1033-1051，通过引用将其全部并入本文。
102、linc复合体具有多种功能，包括为细胞核提供结构支持、塑造和定位细胞核、维持中心体和细胞核之间的连接以及核膜的间距、dna修复、细胞迁移和减数分裂过程中细胞核内染色体的移动。
103、linc复合体具有应力感受作用，可将细胞外基质的机械刺激和变化转化为信号，使细胞通过调节细胞骨架组织、基因表达、核组织和结构来适应环境。
104、整合素介导力从外部微环境传递到细胞内细胞骨架，核-细胞骨架分子连接将力传递到细胞核中的染色体组织。核纤层触发核结构的变形，并启动基因调控的变化。
105、核包膜是这种过程中的一个关键结构。在inm的核质侧，核纤层(由a型和b型纤层组成)形成晶格结构，这有助于核的机械应力抗力，并且对核膜的结构完整性至关重要。核纤层蛋白参与对细胞功能和生存能力至关重要的过程，包括维持核完整性、调节细胞周期、机械转导、细胞信号传导和dna修复。
106、核膜蛋白的正常表达和/或功能的偏离，以及与核膜直接或间接相关的因子的正常表达或功能的偏离与多种疾病有关，包括肌营养不良、心肌疾病、脂肪营养不良、早衰症、癌症和神经疾病。
107、linc复合物抑制多肽
108、本公开涉及linc复合物抑制多肽。这里，“linc复合物抑制多肽”是指抑制linc复合体形成和/或功能的多肽。
109、本公开的linc复合物抑制多肽可以：
110、结合linc复合物的组成蛋白(例如含有kash结构域的蛋白，例如nesprin-1、nesprin-2、
111、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp中的一种或多种)；
112、抑制linc复合物的组成蛋白之间的相互作用(例如，含有sun结构域的蛋白和含有kash结构域的蛋白质之间的相互作用)；
113、抑制linc复合物的形成(即其可抑制linc复合体的组装；例如包含含有sun结构域的蛋白和含有kash结构域的蛋白的linc复合体)；
114、破坏linc复合体(例如引起或促进linc复合体的分解，例如通过linc复合体中一种或多种组成蛋白的置换；例如包含含有sun结构域的蛋白和含有kash结构域的蛋白质的linc复合体)；
115、破坏linc复合物的组成蛋白(例如包含含有sun结构域的蛋白和含有kash结构域的蛋白质的linc复合体)的正常亚细胞定位；
116、增加linc复合物(例如包含含有sun结构域的蛋白和含有kash结构域的蛋白质的linc复合体)的组成蛋白到内质网的定位；
117、降低linc复合物(例如包含含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白的linc复合体)的水平；
118、抑制linc复合物(例如包含含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白的linc复合体)的功能/活性；
119、增加患有核纤层蛋白病的受试者的存活率；
120、增加患有核纤层蛋白病的受试者的寿命；
121、增加或抑制患有核纤层蛋白病的受试者的心脏功能下降；
122、增加或抑制患有核纤层蛋白病的受试者的心肌收缩力的降低；
123、在患有核纤层蛋白病的受试者中增加或抑制射血分数和/或分数缩短的减少；
124、减少或抑制患有核纤层蛋白病的受试者的左心室内径的增加；和/或
125、增加或抑制患有核纤层蛋白病的受试者的左心室后壁厚度的减少。
126、应当理解，本公开的linc复合物抑制多肽可以显示出一种以上在前一段中所述的特性。给定的多肽可以使用合适的测定法来评估上段所述的性质。测定可以是例如体外测定、任选的基于细胞的测定或无细胞测定。测定可以是例如体内测定，即在非人动物中进行。
127、当测定是基于细胞的测定时，它们可以包括工程化细胞(例如通过转染/转导)以表达推定的linc复合物抑制多肽，从而确定多肽是否显示一种或多种所述性质。为了便于检测，检测可以使用用可检测实体标记的种类。应当理解，所述细胞优选是表达linc复合物的组成蛋白的细胞。
128、linc复合物的组成蛋白包括含有sun结构域的蛋白和含有kash结构域的蛋白质。为简明起见，在本说明书中，“linc复合物的组成蛋白”可简称为“linc复合物蛋白”。
129、在优选实施方案中，linc复合物包含含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白。在一些实施方案中，含有sun结构域的蛋白质可以选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco(更优选地选自sun1和sun2)。在一些实施方案中，含有kash结构域的蛋白质可以选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp(更优选地选自nesprin-1、nesprin-2和nesprin-3)。
130、本公开的linc复合物抑制多肽优选与linc复合蛋白结合。结合的特征可以是linc复合物抑制多肽和linc复合蛋白之间的非共价蛋白-蛋白相互作用。相互作用可以包括静电相互作用(例如离子键、氢键)和/或范德华力。
131、本公开特别涉及linc复合物抑制多肽，其结合作为含sun结构域的蛋白质(例如本文所述的含sun构域的蛋白质)的相互作用伴侣的linc复合蛋白。在一些实施方案中，含有sun结构域的蛋白质的相互作用伴侣是含有kash结构域的蛋白(例如本文所述的含有kash结构域的蛋白质，例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)。在一些实施方案中，含有sun结构域的蛋白质的相互作用伴侣是含有sun构造域的蛋白质(例如，含有选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco的sun结构域的蛋白质)；已知含有sun结构域的蛋白质结合形成多聚体(例如三聚体)。
132、本公开的linc复合物抑制多肽可以显示出与含有sun结构域的蛋白质(例如含有kash结构域的蛋白，例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)的相互作用伴侣的特异性结合。如本文所用，“特异性结合”是指选择性的结合，并且可以区别于对非靶分子的非特异性结合。与含有sun结构域的蛋白质的相互作用伴侣特异性结合的linc复合物抑制多肽优选以与其他非靶分子结合与相关蛋白质结合的亲和力更大，和/或持续时间更长。
133、给定多肽特异性结合给定靶分子的能力可以通过根据本领域已知方法的分析来确定，例如通过elisa、表面等离子体共振(spr；参见例如hearty等人，methods mol biol(2012)907:411-442)、生物膜层干涉技术(参见例如lad等人，(2015)j biomol screen 20(4)：498-507)，流式细胞术，或通过放射性标记的抗原结合测定(ria)酶联免疫吸附测定。
134、在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽以微摩尔范围内的亲和力结合含有sun结构域的蛋白质(例如含有kash结构域的蛋白，例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)的相互作用伴侣，即kd＝9.9x10-4至1x10-6m。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽以纳摩尔范围内的亲和力结合含有sun结构域的蛋白质(例如含有kash结构域的蛋白，例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)的相互作用伴侣，即kd＝9.9×10-7至1×10-9m，linc复合物抑制多肽以亚纳摩尔亲和力结合含有sun结构域的蛋白质(例如含有kash结构域的蛋白，例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)的相互作用伴侣，即kd＜1x10-9m。linc复合物抑制多肽以亚皮摩尔亲和力结合含有sun结构域的蛋白质(例如含有kash结构域的蛋白，例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)的相互作用伴侣，即kd＜1x10-12m。
135、本公开的linc复合物抑制多肽可以以含有sun结构域的蛋白质(例如含有sun域的蛋白质，选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco)的方式与含有sun构造域的蛋白质的相互作用伴侣结合(例如含有kash结构域的蛋白，例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽可以与含有sun结构域的蛋白质的相互作用伴侣的与被含有sun构造域的蛋白质结合的区域相同的区域或重叠区域结合。
136、多肽结合的给定靶分子的区域可以由本领域技术人员使用本领域熟知的各种方法来确定，包括抗体-抗原复合物的x射线共晶体学分析、肽扫描、诱变定位、质谱氢氘交换分析、噬菌体展示、竞争elisa和基于蛋白水解的“保护”方法。例如，在gershoni等人.biodrugs，2007，21(3):145-156中描述了这样的方法，该文献通过引用整体并入本文。
137、在一些实施方案中，根据本公开的linc复合物抑制多肽抑制含sun结构域的蛋白质(例如，选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco的含sun域的蛋白质)与含sun构域的蛋白质的相互作用伴侣(例如，含kash结构域的蛋白，例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)之间的相互作用。本文中对含sun结构域的蛋白质与含sun构造域的蛋白质的相互作用配偶体之间的相互作用的抑制包括对含sun结构域蛋白质与含sun构造域蛋白质的相互反应配偶体之间结合的抑制(从而抑制包括这样的蛋白质的复合物的形成)，以及对包括含sun构成域的蛋白质和含sun构成域蛋白质的互相作用伴侣的复合物(例如，通过置换这样的复合物中的组成蛋白质，以及随后对这样的复合体的分解)的破坏。
138、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽抑制含sun结构域的蛋白质(例如，选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco的含sun构域的蛋白质)与含sun构造域的蛋白质的相互作用伴侣(例如，含kash结构域的蛋白，例如，选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)的结合。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽是含有sun结构域的蛋白质与含有sun构造域的蛋白质的相互作用伴侣结合的竞争性抑制剂。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽阻断含有sun结构域的蛋白质与含有sun构造域的蛋白质的相互作用伴侣结合。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽占据含有sun结构域的蛋白质的相互作用伴侣的区域，含有sun的结构域的蛋白与所述相互作用伴侣结合，从而抑制含有sun域的蛋白质与其相互作用伴侣之间的相互作用。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽从包含含有sun结构域的蛋白质和含有sun构域的蛋白质的相互作用伴侣的复合物置换含有sun域的蛋白质。
139、给定多肽抑制两个因子之间相互作用的能力可以通过例如分析在多肽存在下或在一个或两个相互作用伴侣与多肽孵育后这种相互作用的相关性来确定。
140、分析可以包括检测含有sun结构域的蛋白质/含有sun域的蛋白质的相互作用伴侣/包含含有sun构造域的蛋白质和含有sun构域的蛋白质相互作用伴侣的复合物。这种技术是本领域技术人员熟知的，并且包括例如基于抗体/报告基因的方法(蛋白质印迹、elisa、免疫组织/细胞化学等)。
141、抑制给定相互作用的多肽(例如，含有sun结构域的蛋白质与其相互作用伴侣之间的相互作用伴侣，例如，含有kash结构域的蛋白)是通过与不存在该多肽时观察到的水平相比，观察到在存在一个或两个相互作用伴侣与多肽孵育时相互作用伴侣间的相互作用相关性水平的降低/下降来鉴定的(或在存在已知不会抑制相互作用伴侣之间相互作用的适当对照多肽时)。合适的分析可以在体外进行，例如使用重组相互作用伴侣或使用表达相互作用伴侣的细胞。细胞可以内源性地表达相互作用伴侣，或者可以通过引入细胞的核酸来表达。为了这种测定的目的，为了检测和/或测量相互作用水平，可以标记相互作用伴侣和/或多肽中的一个或两个，或将其与可检测实体结合使用。
142、两个相互作用伴侣之间的相互作用的相关性可以是例如由相互作用伴侣间的关联形成的复合体、由相互作用伴侣间的关联所形成的复合体的功能特性、或由相互作用伴侣之间的关联所形成的复合体介导的下游活动的相关性。
143、抑制含sun结构域的蛋白质(例如，选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco的含sun域的蛋白质)和含sun结域的蛋白质的相互作用伴侣(例如，含kash结构域的蛋白，例如，选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)之间相互作用的多肽，例如，抑制包含含sun构造域的蛋白质和包含sun构造区的蛋白质的作用伴侣的复合物的形成的多肽，和/或破坏包含sun结构区的蛋白质和含有sun结构体的蛋白质的互相作用伴侣的复合体的多肽，可以通过观察一种或多种在多肽存在下或在与多肽的一个或两个相互作用伴侣孵育后，与在不存在所述多肽的情况下(或在已知不抑制相互作用伴侣之间的相互作用的适当对照多肽存在的情况下)观察到的水平相比：(i)包含所述含sun结构域的蛋白质和所述含sun结构域蛋白质的相互作用伴侣的所述复合物的水平的降低，(ii)包含所述含有sun结构区的蛋白质和用于含sun构造域的蛋白质的所述相互作用伴侣的所述复合物的功能性质的水平的下降，(iii)由含有sun结构域的蛋白质和含有sun结构域的蛋白质的相互作用伴侣组成的复合物介导的下游活动相关水平的降低，(v)含有sun结构域的自由(即未络合)蛋白质水平的增加，和/或(v)含有sun结构域的蛋白质的自由(即未络合)相互作用伴侣水平的增加。。
144、本公开的linc复合物抑制多肽可破坏linc复合物蛋白(例如，含有sun结构域的蛋白，或含有sun结构域的蛋白质的相互作用伴侣)的正常亚细胞定位。
145、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽降低定位于核膜的linc复合物蛋白的水平/比例。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽降低了定位于核膜的linc复合物抑制多肽的相互作用伴侣的水平/比例。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽降低与外核膜相关的含有kash结构域的蛋白质的水平/比例。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽降低与内核膜相关的含有sun结构域的蛋白质的水平/比例。
146、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽增加了不局限于核膜的linc复合蛋白的水平/比例。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽增加不与外核膜相关的含有kash结构域的蛋白质(例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)的水平/比例。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽增加不与内核膜相关的含有sun结构域的蛋白质(例如选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco)的水平/比例。
147、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽增加定位于内质网的linc复合物蛋白的水平/比例。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽增加定位于内质网的含有kash结构域的蛋白质(例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)的水平/比例。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽增加不与内核膜相关的含有sun结构域的蛋白质(例如选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco)的水平/比例。
148、linc复合物的组成蛋白在细胞内的亚细胞定位可以使用本领域技术人员已知的技术进行分析。这样的技术包括例如通过免疫细胞化学和基于报告基因的方法进行分析。例如，boni等人，j.cell biology(2015)209(5):705-720和smoyer等人，j.cell biologies(2016)215(4):575-590描述了可以对er、inm和onm中的蛋白质成像的报告系统。这种方法可用于分析核包膜、内核膜和外核膜中linc复合物的组成蛋白的水平/比例。
149、破坏linc复合物蛋白的正常亚细胞定位的linc复合物抑制多肽可以使用包括检测给定亚细胞位置中相关蛋白的存在或确定相关蛋白的比例的测定来鉴定，例如使用基于抗体/报告子的方法(蛋白质印迹、elisa、免疫组学/细胞化学等)。亚细胞定位可以例如通过免疫细胞化学或通过从不同细胞组分制备的提取物的蛋白质印迹进行分析，并且可以使用已知亚细胞定位的细胞器标记物和/或标记蛋白。
150、测定可包括在细胞中表达推定的linc复合物抑制多肽(例如从编码引入(例如通过转染/转导)到细胞中的多肽的核酸)，随后将相关linc复合蛋白在这样的细胞中的亚细胞定位与在适当对照条件的细胞(例如未转染的细胞、用空载体转染/转导的细胞、或用编码已知不影响相关linc复合物蛋白亚细胞定位的多肽的核苷酸转染/转导细胞)中观察到的亚细胞定位进行比较。
151、在一些实施方案中，多肽作为linc复合物抑制多肽的能力可以被评估，基本上如本文实施例1中所述。
152、可以将用于表达推定的linc复合物抑制多肽的核酸引入(例如通过转染)到细胞中，并且随后可以评估细胞以确定一种或多种linc复合蛋白(例如含有sun结构域的蛋白(例如选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco)和/或含有sun构域的蛋白的相互作用伴侣(例如含有kash结构域的蛋白质，例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)的亚细胞定位。多肽可被鉴定为linc复合物抑制多肽，其中相对于在适当对照条件的细胞(例如，未转染的细胞、或用编码已知不影响相关linc复合蛋白的亚细胞定位的多肽的核酸转染/转导的细胞)。
153、在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽的细胞表达：与在不存在linc复合物抑制多肽的情况下或在适当的对照条件下，在给定的测定中观察到的水平相比，(i)降低linc复合物的组成蛋白之间的相互作用水平(例如，在含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白之间)，(ii)降低linc复合物(例如，包含含有sun域的蛋白质的linc复合物和含有kash-结构域的蛋白质)的水平，(iii)降低linc复合物(例如包含含有sun-结构域蛋白质和含有kash结构域蛋白的linc复合物)的功能/活性的相关性水平，(iv)降低定位于核膜的linc复合蛋白(例如，含有sun结构域的蛋白质或含有kash/结构域蛋白质的蛋白质)的水平/比例，和/或(v)降低定位于核膜/外核膜的含kash结构域的蛋白质(例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)的水平/比例至小于1倍/小于100％，例如≤0.99倍/≤99％、≤0.95倍/≤95％、≤0.9倍/≤90％、≤0.85倍/≤85％，≤0.8倍/≤80％，≤0.75倍/≤75％，≤0.7倍/≤70％，≤0.65倍/≤65％，≤0.6倍/≤60％，≤0.55倍/≥55％，≤0.5倍/≤50％，≤0.45倍/≤45％，≤0.4倍/≤40％，≤0.35倍/≤35％，≤0.3倍/≤30％，≤0.25倍/≤25％，≤0.2倍/≤20％，≤0.15倍/≤15％，≤0.1倍/≤10％，≤0.05倍/≤5％，或≤0.01倍/≤1％。
154、根据前段所述，优选的降低水平是降低到小于0.5倍/≤50％，例如≤0.4倍/≤40％、≤0.3倍/≤30％、≤0.2倍/≤20％、≤0.15倍/≤15％或≤0.1倍/≤10％。
155、在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽的细胞表达：与在不存在linc复合物抑制多肽的情况下或在适当的对照条件下，在给定的测定中观察到的水平相比，(i)增加不局限于核膜的linc复合蛋白(例如含sun结构域的蛋白或含kash结构域的蛋白质)的水平/比例，和/或(ii)增加局限于内质网的linc复合物蛋白(例如含有sun结构区的蛋白或含有kash结构区的蛋白质)的水平/比例至大于1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍，≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍、≥10倍、≥50倍或≥100倍。
156、多肽可以在适当的体内模型中评估某些功能特性。例如，可以在本文所述的疾病/病症的非人动物模型中评估多肽的体内治疗/预防作用。在这样的测定中，多肽可以以编码蛋白质的核酸的形式递送，例如使用对细胞/组织具有适当嗜性的病毒载体，其中linc复合物抑制将赋予治疗/预防益处。举例来说，在本公开的实验实施例中，在通过诱导的心肌细胞特异性缺失lmna建立的扩张型心肌病小鼠模型中评估推定的linc复合物抑制多肽——参见实施例5。推定的linc复合物抑制多肽以aav9载体的形式作为基因治疗递送，该载体在心肌细胞特异性启动子的控制下表达多肽。
157、受试者的寿命和存活率可以通过在这样的模型中监测一段时间的存活率来评估。心功能和心肌收缩性可以通过测量其相关性来评估，并且可以通过超声心动图/超声测量射血分数、缩短分数、左心室后壁厚度和/或左心室内径来评估。
158、应当理解，优选在特定的时间点，例如在足以观察到在相关模型中施用多肽的效果的一段时间之后，评估受试者的一种或多种前述性质。例如，可以在给予编码推定的linc复合物抑制多肽的病毒载体后7天或更多天对受试者进行评估。
159、在一些实施方案中，将本公开的linc复合物抑制多肽给予患有核纤层蛋白病的受试者(例如与lmna突变相关的心肌病；例如通过编码linc复合抑制多肽的病毒载体)，与不施用或施用适当的对照多肽(例如已知不抑制linc复合物的多肽，例如使用相同的病毒载体递送)相比，增加受试者的存活率或寿命，和/或将受试者中的心功能、心肌收缩力、射血分数、缩短分数和/或左心室后壁厚度增加到大于1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、＞1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、＜1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍，≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍、≥10倍、≥50倍或≥100倍中的一个的水平。
160、在一些实施方案中，将本公开的linc复合物抑制多肽给予患有核纤层蛋白病的受试者(例如，与lmna突变相关的心肌病；例如，通过编码linc复合抑制多肽的病毒载体)，与不施用或施用适当的对照多肽(例如已知不抑制linc复合物的多肽，例如使用相同的病毒载体递送)相比可将受试者的左心室内径降低至小于1倍/小于100％，例如，≤0.99倍/≤99％、≤0.95倍/≤95％、≤0.9倍/≤90％、≤0.85倍/≤85％、≤0.8倍/≤80％、≤0.75倍/≤75％、≤0.7倍/≤70％、≤0.65倍/≥65％、≤0.6倍/≤60％、≤0.55倍/≤55％、≤0.5倍/≤50％、≤0.45倍/≤45％、≤0.4倍/≤40％、≤0.35倍/≤35％、≤0.3倍/≤30％、≤0.25倍/≤25％、≤0.2倍/≤20％、≤0.15倍/≤15％、≤0.1倍/≤10％、≤0.05倍/≤5％或≤0.01倍/≤1％。
161、在一些实施方案中，与由seq id no:99的氨基酸序列组成的linc复合物抑制多肽相比，本公开的linc复合物抑制多肽可以具有一种或多种新的或改进的功能特性。
162、在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽的细胞表达，与由氨基酸序列seq id no:99组成的多肽的细胞表达相比(例如相同类型的细胞)，具有：(i)降低linc复合物的组成蛋白之间的相互作用水平(例如，在含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白之间)，(ii)降低linc复合物(例如，包含含有sun域的蛋白质的linc复合物和含有kash-结构域的蛋白质)的水平，(iii)降低linc复合物(例如包含含有sun-结构域蛋白质和含有kash-结构域蛋白的linc络合物)的功能/活性的相关性水平，(iv)降低定位于核膜的linc复合蛋白(例如，含有sun结构域的蛋白质或含有kash/结构域蛋白质的蛋白质)的水平/比例，和/或(v)降低水平/比例定位于核膜/外核膜的含kash结构域的蛋白质(例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)的含量小于1倍/小于100％，例如≤0.99倍/≤99％、≤0.95倍/≤95％、≤0.9倍/≤90％、≤0.85倍/≤85％，≤0.8倍/≤80％，≤0.75倍/≤75％，≤0.7倍/≤70％，≤0.65倍/≤65％，≤0.6倍/≤60％，≤0.55倍/≥55％，≤0.5倍/≤50％，≤0.45倍/≤45％，≤0.4倍/≤40％，≤0.35倍/≤35％，≤0.3倍/≤30％，≤0.25倍/≤25％，≤0.2倍/≤20％，≤0.15倍/≤15％，≤0.1倍/≤10％，≤0.05倍/≤5％，或≤0.01倍/≤1％。
163、在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽的细胞表达，与由seq id no:99的氨基酸序列组成的多肽的细胞表达上观察到的水平(例如通过相同类型的细胞)相比，具有：(i)增加不局限于核膜的linc复合蛋白(例如含sun结构域的蛋白或含kash结构域的蛋白质)的水平/比例，和/或(ii)增加局限于内质网的linc复合物蛋白(例如含有sun结构区的蛋白或含有kash结构区的蛋白质)水平/比例至大于1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍，≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍、≥10倍、≥50倍或≥100倍。
164、在一些实施方案中，将本公开的linc复合物抑制多肽给予患有核纤层蛋白病的受试者(例如与lmna突变相关的心肌病；例如通过编码linc复合抑制多肽的病毒载体)与施用由seq id no:99的氨基酸序列组成的多肽(例如使用相同的病毒载体递送)后观察到的水平相比，增加受试者的存活率或寿命，和/或将受试者中的心功能、心肌收缩力、射血分数、缩短分数和/或左心室后壁厚度增加到大于1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍，≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍、≥10倍，≥50倍或≥100倍。
165、在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽给予患有核纤层蛋白病的受试者(例如，与lmna突变相关的心肌病；例如，通过编码linc复合抑制多肽的病毒载体)与施用由seq id no:99的氨基酸序列组成的多肽(例如使用相同的病毒载体递送)后观察到的水平相比，可将受试者的左心室内径降低至小于1倍/小于100％，例如，≤0.99倍/≤99％、≤0.95倍/≤95％、≤0.9倍/≤90％、≤0.85倍/≤85％、≤0.8倍/≤80％、≤0.75倍/≤75％、≤0.7倍/≤70％、≤0.65倍/≥65％、≤0.6倍/≤60％、≤0.55倍/≤55％、≤0.5倍/≤50％、≤0.45倍/≤45％、≤0.4倍/≤40％、≤0.35倍/≤35％、≤0.3倍/≤30％、≤0.25倍/≤25％、≤0.2倍/≤20％、≤0.15倍/≤15％、≤0.1倍/≤10％、≤0.05倍/≤5％、或≤0.01倍/≤1％的水平。
166、本公开的linc复合物抑制多肽可以基于含有sun结构域的蛋白质，例如选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco。在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽包含基于含有sun结构域的蛋白质的抑制区，所述蛋白质例如选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco。
167、如本文所用，“基于”参考蛋白的肽/多肽/氨基酸序列包含或由与参考蛋白的全部或部分氨基酸具有高序列同一性(例如至少80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列组成。
168、linc复合物抑制多肽的“抑制区”是指通过其实现linc复合物的抑制的多肽的区域。本公开的抑制区通常与含有sun结构域的蛋白质的氨基酸序列的一部分具有高度序列同一性。本公开的linc复合物抑制多肽的抑制区可以是linc复合物抑制剂多肽通过其与含有sun结构域的蛋白质(例如含有kash结构域的蛋白，例如nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp中的一种或多种)的相互作用伴侣结合的区域。在本公开的方面和实施方案中，linc复合物抑制多肽的抑制区包含对应于含有sun结构域的蛋白质的cc2区的α3螺旋和sun结构区的氨基酸序列。
169、本公开的linc复合物抑制多肽可以包含或基本上由与含有sun结构域的蛋白质的全部或部分的氨基酸序列具有高度序列同一性(例如，至少80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列组成，所述蛋白质例如选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco。本公开的linc复合物抑制多肽可包含抑制区，所述抑制区包含或由与含sun结构域的蛋白质的全部或部分的氨基酸序列具有高度序列同一性(例如至少80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列组成，所述蛋白质例如选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco。
170、所述linc复合物抑制多肽优选地(i)保留它们所基于的含sun结构域的蛋白质与含kash结构域的蛋白(例如，nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp中的一种或多种)结合的能力，但(ii)缺乏或显示出它们所基于之含sun构造域的蛋白质的一个或多种其它特性的降低水平。在优选实施方案中，相对于其所基于的含有sun结构域的蛋白质，linc复合物抑制多肽缺乏或显示出与核纤层蛋白和/或染色质结合蛋白结合的能力降低，和/或缺乏或显示与内核膜结合(例如定位于内核膜)的能力降低。
171、例如，根据本公开的linc复合物抑制多肽/其抑制区可包含与含kash结构域的蛋白质结合所需的氨基酸序列(例如，nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp中的一种或多种)，并且可缺乏其所基于的含sun结构域的蛋白的一个或多个其它特性所需的氨基序列(例如与核纤层蛋白和/或染色质结合蛋白结合所需氨基酸序列，和/或与内核膜结合所需氨基序列)。
172、应当理解，在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽基本上由含有sun结构域的蛋白质的含有kash结构域的蛋白结合片段组成。类似地，在一些实施方案中，根据本公开的linc复合物抑制多肽的抑制区由含有sun结构域的蛋白质的含有kash结构域的蛋白结合片段组成。
173、所述linc复合物抑制多肽可称为其所基于的含有sun结构域的蛋白质的“诱饵”、“显性负性”或“模拟”版本。也就是说，在本公开的方面和实施方案中，linc复合物抑制多肽可以是含有显性负性sun结构域的多肽。
174、本公开的linc复合物抑制多肽优选显示对含有sun结构域的蛋白质(例如选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco)和含有kash结构域的蛋白(例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)之间的相互作用的竞争性抑制。诱饵/显性负性/模拟linc复合物抑制多肽优选与含有kash结构域的蛋白质(例如选自nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5和lrmp)结合，占据与含有内源性sun结构域的蛋白相互作用所需的位点，从而使这些物种不可与之结合。
175、所述linc复合物抑制多肽可以通过抑制内源性相互作用伴侣的组装和/或通过内源性相互作用伴侣的置换来抑制linc复合物的形成和/或破坏现有的linc复合物。诱饵/显性负性/模拟linc复合物抑制多肽形成非功能性linc复合物，或与由野生型、内源性含sun结构域的蛋白质和含kash结构域的蛋白形成的linc复合物相比具有降低的功能水平的linc复合物。
176、如上所述，先前已经描述了含有sun结构域的蛋白质的显性负性版本。例如，crisp等人，细胞生物学杂志.(2006)172(1):41-53描述了小鼠sun1蛋白的显性负性版本，wo2019/143300 a1描述了其人源化版本。
177、在本公开的方面和实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的cc2区的α3螺旋和sun结构区的氨基酸序列。应理解，本文所述的linc复合物抑制多肽的对应于含有sun结构域的蛋白质的一个或多个区域的氨基酸序列可包含在linc复合物抑制多肽的抑制区域中。
178、如本文所用，与参考多肽或氨基酸序列的特定区域“对应”的氨基酸序列与多肽/氨基酸序列的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。与参考多肽或氨基酸序列的特定区域“对应”的氨基酸序列可以通过受试者序列与参考序列的序列比对来鉴定，例如使用序列比对软件如clustalomega(j.2005，bioinformations 21951-960)。举例来说，人sun2的522至717位的氨基酸序列对应于人sun1的616至812位的氨基酸顺序。
179、在一些实施方案中，根据本公开的linc复合物抑制多肽基本上由人氨基酸序列组成。在一些实施方案中，根据本公开的linc复合物抑制多肽的抑制区基本上由人氨基酸序列组成。如本文所用，“人类氨基酸序列”是指由人类基因组的核酸编码的氨基酸序列。也就是说，在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或linc复合物抑制剂多肽的抑制区基本上由与人类受试者基因组编码的氨基酸序列具有100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。应当理解，在一些实施方案中，由人类受试者的基因组编码的氨基酸序列是含有人类sun结构域的蛋白质(例如选自sun1、sun2、sun3、sun5、spag4和suco；例如sun1或sun2)的氨基酸序列。linc复合物抑制多肽的这些实施方案特别是在打算给予人类受试者的情况下，例如在根据本公开的治疗/预防性干预的情况下考虑的。
180、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的cc2区的α3螺旋的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun1的cc2区的α3螺旋的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun2的cc2区的α3螺旋的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seqid no:12的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:22的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
181、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun1的sun结构域的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun2的sun结构域的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:8的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:18的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
182、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的cc2区的α3螺旋和sun结构区的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun1的cc2区的α3螺旋和sun结构域的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含抑制区，所述抑制区包含对应于人sun2的cc2区的α3螺旋和sun结构域的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:44的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:46的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
183、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的cc2区的α2螺旋的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun1的cc2区的α2螺旋的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun2的cc2区的α2螺旋的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seqid no:11的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:21的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
184、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的cc2区的α1螺旋的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun1的cc2区的α1螺旋的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun2的cc2区的α1螺旋的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seqid no:10的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:20的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
185、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的cc1区的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun1的cc1区的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun2的cc1区的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:9的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:19的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
186、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的cc1区和cc2区的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun1的cc1区和cc2区的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun2的cc1区和cc2区的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seqid no:88的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:91的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
187、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的cc2区的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun1的cc2区的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun2的cc2区的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:89的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:92的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、
188、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
189、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的cc2区的α2和α3螺旋的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun1的cc2区的α2和α3螺旋的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun2的cc2区的α2和α3螺旋的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:90的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:93的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
190、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的smart卷曲螺旋2区、cc1区和cc2区的一部分的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun1的483至632位的氨基酸序列(根据seq id no:1编号)。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含对应于人sun2的388至538位的氨基酸序列(根据seqid no:13编号)。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:97的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽包含与seq id no:98的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
191、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽基本上不由现有技术中公开的含有sun结构域的蛋白质的显性负性版本的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽基本上不由现有技术中公开的含有sun结构域的蛋白质的截短变体的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽不包括由现有技术中公开的含有sun结构域的蛋白质的显性负性版本的氨基酸序列组成的抑制区。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽不包括由现有技术中公开的含有sun结构域的蛋白质的截短变体的氨基酸序列组成的抑制区。
192、如本文所用，“基本上由”参考氨基酸序列组成的多肽或氨基酸序列(i)由参考氨基酸序列构成，或(ii)包括参考氨基酸序列，其中参考氨基酸序列占多肽/氨基酸序列的至少80％(例如≥85％、≥86％、≥87％、≥88％、≥89％、≥90％、≥91％、≥92％、≥93％、≥94％、≥95％、≥96％、≥97％、≥98％、≥99％中的一个)。应当理解，“基本上由”参考氨基酸序列组成的多肽或氨基酸序列可以包括参考氨基酸序列和在参考氨基酸序列的n末端和c末端的一个或两个处添加氨基酸，条件是添加的氨基酸构成多肽/氨基酸序列的≤20％。
193、举例来说，由seq id no:74的氨基酸序列组成的多肽基本上由seq id no：44的氨基酸序列构成。seq id no:74包含seq id no:44的氨基酸序列(即从seq id no:84的位置1至197)，并且seq id no:44的氨基酸顺序构成多肽的～98％(即197/201个残基)。seq idno:74包含seq id no:44的氨基酸序列的kdel保留基序(seq id no-77)c-末端。
194、在一些实施方案中，基本上由参考氨基酸序列组成的氨基酸序列由参考氨基酸顺序组成。也就是说，在一些实施方案中，基本上由参考氨基酸序列组成的氨基酸序列与参考氨基酸序列相同。在一些实施方案中，基本上由参考氨基酸序列组成的氨基酸序列包括与参考氨基酸序列相同的氨基酸序列，并且还包括在参考序列的一端或两端的一个或多个附加氨基酸(例如1-5、1-10或1-20个氨基酸)。
195、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽基本上不由seq id no:43或45的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽不包含由seq id no:43或45中任一个的氨基酸序列组成的抑制区。
196、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽基本上不由seq id no:44或46的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽不包含由seq id no:44或46中任一个的氨基酸序列组成的抑制区。
197、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽基本上不由seq id no:43、44、45或46的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽不包含由seq id no:43、44、45或46中任一个的氨基酸序列组成的抑制区。
198、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽基本上不由seq id no:43、44、45、46、47或48中任何一个的氨基酸序列组成。
199、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽基本上不由seq id no:43、44、45、46、47、48、74或75中任何一个的氨基酸序列组成。
200、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽基本上不由seq id no:43、44、45、46、47、48、58、49、50、51、52、53、54、55、56、57、74或75中任何一个的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽不包含由seq id no:43、44、45、46、47、48、58、49、50、51、52、53、54、55、56、57、74或75中任一个的氨基酸序列组成的抑制区。
201、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽基本上不由seq id no:43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、74或75中任何一个的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽不包含由seq id no:43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、74或75中任一个的氨基酸序列组成的抑制区。
202、本公开特别考虑放弃linc复合物抑制多肽，其基本上由seq id no:43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、94或95中任一个的氨基酸序列单独组成，或与一个或多个其它特定序列一起组成。本公开还特别考虑放弃linc复合物抑制多肽，其包含由seq id no:43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、94或95中任意一个的氨基酸序列组成的抑制区，所述氨基酸序列单独地或与一个或多个其它指定序列一起。
203、然而，结合本公开的某些方面和实施方案，linc复合物抑制多肽可包含或基本上由seq id no:43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、94或95中任一个的氨基酸序列组成。类似地，结合本公开的某些方面和实施方案，linc复合物抑制多肽可包含由seq id no:43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、94或95中任一个的氨基酸序列组成的抑制区。
204、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq idno:63的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:64的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:65的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:66的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:67的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:68的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id seq idno:no:69的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:70的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:71的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:72的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:73的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:74的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:94的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:95的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。
205、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq idno:101的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:102的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:103的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。
206、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq idno:104的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:105的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:106的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:107的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:108的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由与seq id no:109的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。
207、在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由对应于以下之一的氨基酸序列组成；seq id no:1的360-812位；seq id no:1的361-812位；seq id no:1的362-812位；seq id no:1的第363-812位；seq id no:1的364-812位；seq idno:1的365-812位；seq id no:1的366-812位；seq id no:1的367-812位；seq id no:1的368-812位；seq id no:1的369-812位；seq id no:1的370-812位；seq id no:1的371-812位；seq id no:1的372-812位；seq id no:1的373-812位；seq id no:1的374-812位；seqid no:1的375-812位；seq id no:1的376-812位；seq id no:1的377-812位；seq id no:1的378-812位；seq id no:1的379-812位；seq id no:1的380-812位；seq id no:1的381-812位；seq id no:1的382-812位；seq id no:1的383-812位；seq id no:1的384-812位；seq id no:1的385-812位；seq id no:1的386-812位；seq id no:1的387-812位；seq idno:1的388-812位；seq id no:1的389-812位；seq id no:1的390-812位；seq id no:1的391-812位；seq id no:1的392-812位；seq id no:1的393-812位；seq id no:1的394-812位；seq id no:1的395-812位；seq id no:1的396-812位；seq id no:1的第397-812位；seqid no:1的398-812位；seq id no:1的399-812位；seq id no:1的400-812位；seq id no:1的401-812位；seq id no:1的402-812位；seq id no:1的第403-812位；seq id 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208、在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽或其抑制区包含或基本上由对应于以下之一的氨基酸序列组成：seq id no:13的258-717位；seq id no:13的259-717位；seq id no:13的260-717位；seq id no:13的261-717位；seq id no:13的262-717位；seqid no:13的263-717位；seq id no:13的264-717位；seq id no:13的265-717位；seq idno:13的266-717位；seq id no:13的267-717位；seq id no:13的268-717位；seq id no:13的269-717位；seq id no:13的270-717位；seq id no:13的271-717位；seq id no:13的第272-717位；seq id no:13的第273-717位；seq id no:13的274-717位；seq id no:13的275-717位；seq id no:13的276-717位；seq id no:13的277-717位；seq id no:13的278-717位；seq id no:13的第279-717位；seq id no:13的280-717位；seq id no:13的281-717位；seq id no:13的第282-717位；seq id no:13的第283-717位；seq id no:13的第284-717位；seq id no:13的第285-717位；seq id no:13的第286-717位；seq id no:13的第287-717位；seq id no:13的第288-717位；seq id no:13的第289-717位；seq id no:13的290-717位；seq id no:13的291-717位；seq id no:13的292-717位；seq id no:13的293-717位；seq id no:13的294-717位；seq id no:13的第295-717位；seq id no:13的296-717位；seq id no:13的297-717位；seq id no:13的298-717位；seq id no:13的299-717位；seq id 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no:13的345-717位；seq id no:13的346-717位；seq id no:13的347-717位；seq id no:13的348-717位；seq id no:13的349-717位；seqid no:13的350-717位；seq id no:13的351-717位；seq id no:13的第352-717位；seq idno:13的第353-717位；seq id no:13的第354-717位；seq id no:13的第355-717位；seq idno:13的356-717位；seq id no:13的第357-717位；seq id no:13的358-717位；seq id no:13的第359-717位；seq id no:13的360-717位；seq id no:13的361-717位；seq id no:13的362-717位；seq id no:13的第363-717位；seq id no:13的364-717位；seq id no:13的365-717位；seq id no:13的366-717位；seq id no:13的367-717位；seq id no:13的368-717位；seq id no:13的369-717位；seq id no:13的370-717位；seq id no:13的371-717位；seq id no:13的372-717位；seq id no:13的373-717位；seq id no:13的374-717位；seq id no:13的375-717位；seq id no:13的376-717位；seq id no:13的377-717位；seqid no:13的378-717位；seq id no:13的379-717位；seq id no:13的380-717位；seq idno:13的381-717位；seq id no:13的382-717位；seq id no:13的383-717位；seq id no:13的384-717位；seq id no:13的385-717位；seq id no:13的386-717位；seq id no:13的387-717位；seq id no:13的388-717位；seq id no:13的389-717位；seq id no:13的390-717位；seq id no:13的391-717位；seq id no:13的392-717位；seq id no:13的393-717位；seq id no:13的394-717位；seq id no:13的395-717位；seq id no:13的396-717位；seq id no:13的第397-717位；seq id no:13的398-717位；seq id no:13的399-717位；seqid no:13的400-717位；seq id no:13的401-717位；seq id no:13的402-717位；seq idno:13的403-717位；seq id no:13的404-717位；seq id no:13的405-717位；seq id no:13的406-717位；seq id no:13的407-717位；seq id no:13的408-717位；seq id no:13的409-717位；seq id no:13的410-717位；seq id no:13的411-717位；seq id no:13的412-717位；seq id no:13的413-717位；seq id no:13的414-717位；seq id no:13的415-717位；seq id no:13的第416-717位；seq id no:13的417-717位；seq id no:13的418-717位；seq id no:13的419-717位；seq id no:13的420-717位；seq id no:13的421-717位；seqid no:13的422-717位；seq id no:13的423-717位；seq id no:13的424-717位；seq idno:13的第425-717位；seq id no:13的426-717位；seq id no:13的427-717位；seq id no:13的第428-717位；seq id no:13的429-717位；seq id no:13的430-717位；seq id no:13的431-717位；seq id no:13的432-717位；seq id no:13的第433-717位；seq id no:13的434-717位；seq id 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209、在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽或其抑制区不包含或基本上不包含对应于以下之一的氨基酸序列：seq id no:1的360-812位；seq id no:1的361-812位；seq id no:1的362-812位；seq id no:1的第363-812位；seq id no:1的364-812位；seq idno:1的365-812位；seq id no:1的366-812位；seq id no:1的367-812位；seq id no:1的368-812位；seq id no:1的369-812位；seq id no:1的370-812位；seq id no:1的371-812位；seq id no:1的372-812位；seq id no:1的373-812位；seq id no:1的374-812位；seqid no:1的375-812位；seq id no:1的376-812位；
210、seq id no:1的377-812位；seq id no:1的378-812位；seq id no:1的379-812位；seq id no:1的380-812位；seq id no:1的381-812位；seq id no:1的382-812位；seq idno:1的383-812位；
211、seq id no:1的384-812位；seq id no:1的385-812位；seq id no:1的386-812位；seq id no:1的387-812位；seq id no:1的388-812位；seq id no:1的389-812位；seq idno:1的390-812位；
212、seq id no:1的391-812位；seq id no:1的392-812位；seq id no:1的393-812位；seq id no:1的394-812位；seq id no:1的395-812位；seq id no:1的396-812位；seq idno:1的第397-812位；seq id no:1的398-812位；seq id no:1的399-812位；seq id no:1的400-812位；seq id no:1的401-812位；seq id no:1的402-812位；seq id no:1的第403-812位；seq id no:1的404-812位；seq id no:1的405-812位；seq id no:1的406-812位；seq id no:1的407-812位；seq id no:1的408-812位；seq id no:1的409-812位；seq idno:1的410-812位；seq id no:1的411-812位；
213、seq id no:1的412-812位；seq id no:1的413-812位；seq id no:1的414-812位；seq id no:1的415-812位；seq id no:1的第416-812位；seq id no:1的417-812位；seq idno:1的418-812位；seq id no:1的419-812位；seq id no:1的420-812位；seq id no:1的421-812位；seq id no:1的422-812位；seq id no:1的423-812位；seq id no:1的424-812位；seq id no:1的第425-812位；seq id no:1的426-812位；seq id no:1的427-812位；seqid no:1的第428-812位；seq id no:1的429-812位；seq id no:1的430-812位；seq id no:1的431-812位；seq id no:1的第432-812位；seq id no:1的第433-812位；seq id no:1的434-812位；seq id no:1的435-812位；seq id no:1的436-812位；seq id no:1的第437-812位；seq id no:1的438-812位；seq id no:1的439-812位；seq id no:1的440-812位；seq id no:1的441-812位；seq id no:1的442-812位；seq id no:1的443-812位；seq idno:1的444-812位；seq id no:1的445-812位；seq id no:1的446-812位；seq id no:1的447-812位；seq id no:1的448-812位；seq id no:1的449-812位；seq id no:1的450-812位；seq id no:1的第451-812位；seq id no:1的452-812位；seq id no:1的第453-812位；seq id no:1的454-812位；seq id no:1的455-812位；seq id no:1的456-812位；
214、seq id no:1的457-812位；seq id no:1的458-812位；seq id no:1的459-812位；seq id no:1的第460-812位；seq id no:1的461-812位；seq id no:1的462-812位；seq idno:1的第463-812位；seq id no:1的464-812位；seq id no:1的第465-812位；seq id no:1的466-812位；seq id no:1的467-812位；seq id no:1的468-812位；seq id no:1的469-812位；seq id no:1的470-812位；seq id no:1的471-812位；seq id no:1的第472-812位；seq id no:1的473-812位；seq id no:1的474-812位；seq id no:1的第475-812位；seq idno:1的476-812位；seq id no:1的477-812位；seq id no:1的478-812位；seq id no:1的479-812位；seq id no:1的第480-812位；seq id no:1的481-812位；seq id no:1的482-812位；seq id no:1的483-812位；seq id no:1的484-812位；seq id no:1的第485-812位；seq id no:1的486-812位；seq id no:1的487-812位；seq id no:1的488-812位；seq idno:1的489-812位；seq id no:1的490-812位；seq id no:1的491-812位；seq id no:1的492-812位；seq id no:1的第493-812位；seq id no:1的第494-812位；seq id no:1的495-812位；seq id no:1的第496-812位；seq id no:1的第497-812位；seq id no:1的498-812位；seq id no:1的499-812位；seq id no:1的500-812位；seq id no:1的501-812位；seqid no:1的502-812位；seq id 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215、本公开的linc复合物抑制多肽可以包含一个或多个额外的氨基酸或氨基酸序列。也就是说，linc复合物抑制多肽除了多肽的抑制区(即，包含对应于cc2区的α3螺旋和含sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列的区域)之外，还可以包含一个或多个氨基酸或氨基酸序列。
216、例如，linc复合物抑制多肽可包含促进表达、折叠、运输、加工、纯化或检测的氨基酸序列。
217、根据本公开的各个方面和实施方案，linc复合物抑制多肽可以包括阻止多肽从表达多肽的细胞分泌的序列。在一些实施方案中，所述多肽包含内质网(er)滞留基序。根据本公开，这样的序列可以被提供到linc复合物抑制多肽的抑制区的c末端。在一些实施方案中，在多肽的氨基酸序列的c末端提供用于防止多肽从表达多肽的细胞分泌的序列(例如er滞留基序)。在一些实施方案中，用于防止多肽从表达多肽的细胞分泌的序列(例如er滞留基序)在多肽的c末端不跟随任何其他氨基酸。
218、内质网滞留序列是本领域已知的。在一些实施方案中，er滞留基序是kdel序列。在一些实施方案中，er滞留基序是kdel基序或其变体，其有效地将包含该基序的c末端的蛋白质保留在内质网中。kdel变体可以包含或由符合原序基序的氨基酸序列组成：[k/r/h/q/s/a]-[d/e/n/q]-e-l(例如在hulo等人，2006，核酸研究34:d227-d230)，或raykhel等人，2007(j.cell biol.179(6)：1193-1204)，提出了一个扩展的原序基序定义。raykhel等人用变体证明了内质网滞留，其中4位(即k位)包括f、wy作为krhqsa的替代，3位(即d位)残基的范围远远超过denq，1位(l位)的f或m，以及2位(即e位)的d。
219、例如，kdel基序的变体可以例如是cdel、kcel或hvel中的一种，如raykhel等人提出的。因此，在本文公开的一些方面中，内质网(er)滞留基序是表现出er滞留活性的kdel或其变体。
220、在一些实施方案中，er滞留基序包含或由seq id no:77的氨基酸序列或包含对seq id no:77的氨基酸序列的一个或多个(例如1或2个)取代的变体组成。
221、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽可以包括信号肽。根据本公开，信号肽可以被提供到linc复合物抑制多肽的抑制区的n末端。在一些实施方案中，在多肽的氨基酸序列的n末端提供信号肽。
222、在一些实施方案中，信号肽在多肽的n末端之前没有任何其他氨基酸。信号肽通常由5-30个疏水性氨基酸的序列组成，这些氨基酸形成单个α螺旋。分泌的蛋白质和在细胞表面表达的蛋白质通常包括信号肽。信号肽可以存在于肽/多肽的n末端，并且可以存在于新合成的肽/多肽中。信号肽通常通过切割去除，因此不包含在成熟肽/多肽中。
223、许多蛋白质的信号肽是已知的，并且被记录在数据库中，例如genbank、uniprot、swiss prot、trembl、protein information resource、protein data bank、ensembl和interpro，和/或可以例如使用氨基酸序列分析工具如signalp来识别/预测(petersen等人，2011nature methods 8:785-786)或signal-blast(frank和sippl，2008bioinformations 24:2172-2176).在一些实施方案中，n末端信号序列衍生自分泌蛋白或i型跨膜蛋白。在一些实施方案中，分泌蛋白或i型跨膜蛋白选自：人血清白蛋白、胰岛素原、转铁蛋白受体、egf受体、前黑素皮质素、羧肽酶、补体蛋白、纤维蛋白原、细胞因子、趋化因子、纤维蛋白原、胰腺消化酶(例如蛋白酶、淀粉酶或脂肪酶)或内质网内腔蛋白(例如蛋白二硫化物异构酶或grp94)。在一些实施方案中，n末端信号肽来源于人血清白蛋白。
224、在一些实施方案中，信号肽包括信号肽酶切割位点。信号肽酶切割位点用于从成熟多肽中去除信号肽。在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽包含来源于分泌蛋白或i型跨膜蛋白(例如上文所述的分泌蛋白或i型跨膜蛋白质)的信号肽酶切割位点。
225、在一些实施方案中，信号肽包含或由与seq id no:76的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，信号肽包含或由与seq id no:100的氨基酸序列具有至少60％，例如至少65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。
226、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽可包含可检测部分，例如荧光标记、磷光标记、发光标记、免疫可检测标记(例如表位标记)、放射性标记、化学标记、核酸标记或酶标记。linc复合物抑制多肽可以用可检测部分共价或非共价标记。
227、在一些实施方案中，可检测部分位于多肽的n末端(在通过信号肽酶处理多肽以去除任何信号肽之前或之后)。在一些实施方案中，可检测部分位于多肽的c末端，例如在用于防止多肽从表达多肽的细胞分泌的序列的下游(之后)(例如er滞留基序的下游)。
228、在一些实施方案中，可检测部分是或包含表位标签。在一些实施方案中，表位标签选自血凝素a(ha)、alfa、组氨酸(his；例如6xhis)、c-myc、谷胱甘肽s-转移酶(gst)、绿色荧光蛋白(gfp)、麦芽糖结合蛋白(mbp)、flag、e、生物素、蛋白a、蛋白g、链亲和素、t7、硫氧还蛋白、v5或水泡性口炎病毒糖蛋白(vsv-g)标签。在一些实施方案中，可检测部分是或包括具有可检测活性的部分，例如在给定底物上的酶活性。这样的部分的实例包括例如辣根过氧化物酶(hrp)和萤光素酶部分。
229、在一些实施方案中，可检测部分是或包括ha标签。在一些实施方案中，可检测部分是或包括alfa标签。
230、在一些实施方案中，可检测部分包含或由seq id no:78的氨基酸序列，或包含对seq id no:88的氨基酸顺序的一个或多个(例如1、2、3或4个)取代的变体组成。在一些实施方案中，可检测部分包含或由seq id no:79的氨基酸序列，或包含对seq id no:99的氨基酸顺序的一个或多个(例如1、2、3或4)取代的变体组成。
231、在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽具有以下结构之一：
232、n-端-[信号肽]-[可检测实体]-[包含对应于cc2区的α3螺旋和含sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列的抑制区]-[阻止多肽从表达多肽的细胞分泌的序列]-c-端
233、n-端-[可检测实体]-[信号肽]-[包含对应于cc2区的α3螺旋和含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列的抑制区]-[阻止多肽从表达多肽的细胞分泌的序列]-c-端
234、n-端-[可检测实体]-[包含对应于cc2区的α3螺旋和含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列的抑制区]-[阻止多肽从表达多肽的细胞分泌的序列]-c-端
235、n-端-[包含对应于cc2区的α3螺旋和含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列的抑制区]-[阻止多肽从表达多肽的细胞分泌的序列]-c-端
236、在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽包含氨基酸序列之间的一个或多个接头序列。在一些实施方案中，接头序列具有1-2、1-3、1-4、1-5或1-10个氨基酸的长度。在一些实施方案中，接头序列可以在一个或多个选自下组区域的一端或两端提供：抑制区，其包含对应于cc2区的α3螺旋和含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列；信号肽；阻止所述多肽从表达所述多肽的细胞分泌的序列；和/或linc复合物抑制多肽的可检测实体。
237、连接子序列是本领域技术人员已知的，并且例如在chen等人的adv drug delivrev(2013)65(10)：1357-1369，其全部内容通过引用并入于此。在一些实施方案中，连接子序列可以是柔性连接子序列。柔性接头序列允许通过接头序列连接的氨基酸序列的相对移动。柔性连接子是本领域技术人员已知的，并且在chen等人，adv drug deliv rev(2013)65(10)：1357-1369.中描述。柔性接头序列通常包含高比例的甘氨酸和/或丝氨酸残基。在一些实施方案中，接头序列包含至少一个甘氨酸残基和/或至少一个丝氨酸残基。在一些实施方案中，接头序列由甘氨酸和丝氨酸残基组成。
238、在优选的实施方案中，linc复合物抑制多肽的大小(即，根据组成linc复合抑制多肽的氨基酸的数量)允许递送linc复合抑制剂多肽作为基因治疗，即以编码多肽的核酸的形式。
239、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽的大小使得编码多肽的多核苷酸的大小(即，根据组成多核苷酸的核苷酸的数量)在用于递送多核苷酸的载体的包装限度内。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽的大小使得编码该多肽的多核苷酸的大小在本文所述载体的包装限度内。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽的大小使得编码该多肽的多核苷酸的大小在腺相关病毒(aav)载体(例如本文所述的aav载体)的包装限度内。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽的大小使得编码该多肽的多核苷酸的大小在scaav载体的包装限度内。
240、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽由包含少于510个氨基酸的氨基酸序列组成。在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽由包含少于457个氨基酸的氨基酸序列组成。
241、在一些实施方案中，linc复合物抑制多肽由包含少于600个氨基酸的氨基酸序列组成，例如≤550、
242、≤500、≤450、≤400、≤350、≤340、≤330、≤320、≤310、≤300、≤290、≤280、≤270、≤260、≤250、
243、≤240、≤230、≤220或≤210个氨基酸中的一个。
244、本公开的linc复合物抑制多肽可以根据本领域技术人员已知的多肽生产方法制备。
245、多肽可以通过化学合成，例如液相或固相合成来制备。例如，肽/多肽可以使用例如chandrudu等人，molecules(2013)，18:4373-4388的方法合成，其全部内容通过引用并入于此。或者，抗原结合分子和多肽可以通过重组表达产生。适用于多肽重组生产的分子生物学技术在本领域是众所周知的，例如green和sambrook，molecular cloning:《实验室手册》(第4版)，冷泉港出版社，2012年，以及nat methods.(2008)；5(2):135-146，这两个文献的全部内容通过引用并入于此。重组生产抗原结合分子的方法也描述在frenzel等人.frontimmunol.(2013)；4.217和kunert和reinhart，appl microbiol biotechnol.(2016)100:3451-3461中，这两个文献的全部内容通过引用合并于此。
246、核酸和编码linc复合物抑制多肽的载体
247、本公开提供编码本公开的linc复合物抑制多肽的核酸。在一些实施方案中，核酸包含dna和/或rna或由其组成。在一些实施方案中，核酸是或包含多核苷酸。核酸可以包含或由具有编码本公开的多肽的核苷酸序列的多核苷酸组成。
248、本公开的linc复合物抑制多肽可以通过编码多肽的rna的翻译在细胞内产生。本公开的linc复合物抑制多肽可以通过编码多肽的核酸的转录和随后的rna的翻译在细胞内产生。
249、在优选的实施方案中，核酸具有允许其作为基因疗法递送的大小，即在合适的载体中。
250、在一些实施方案中，本公开的核酸由大小在用于递送多核苷酸的载体的包装限度内的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，核酸由大小在本文所述载体的包装限度内的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，核酸由大小在腺相关病毒(aav)载体(例如本文所述的aav载体)的包装限度内的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，核酸由大小在scaav载体的包装限度内的核苷酸序列组成。
251、本公开的核酸可以包括编码多肽的核苷酸序列，并且可以另外包括一个或多个非编码的核苷酸序列。非编码核苷酸序列可以是例如5’帽、5’utr、3’utr和/或polya尾部序列。
252、在一些实施方案中，核酸的核苷酸序列由少于6000个核苷酸组成，例如≤5000、≤4500、≤4000、
253、≤3500、≤3000、≤2500、≤2400或≤2300个核苷酸中的一个。
254、在一些实施方案中，本公开的核酸的编码蛋白质的核苷酸序列由少于1530个核苷酸组成。在一些实施方案中，本公开的核酸的编码蛋白质的核苷酸序列由少于1371个核苷酸组成。
255、在一些实施方案中，核酸的蛋白质编码核苷酸序列由少于1800个核苷酸组成，例如≤1650、≤1500、
256、≤1350、≤1200、≤1050、≤1020、≤990、≤960、≤930、≤900、≤870、≤840、≤810、≤780、≤750、≤720、≤690、≤660或≤630个核苷酸中的一个。
257、在一些实施方案中，核酸是载体或包含在载体中。因此，本公开还提供包含编码本公开的linc复合物抑制多肽的核酸的载体。
258、本公开的核酸和载体可以以纯化后或分离的形式提供，即从其他核酸或天然存在的生物材料中提供。本文所用的“载体”是指用作将外源核酸转移到细胞中的载体的核酸。载体可以是用于在细胞中表达核酸的载体(即，载体可以是表达载体)。这样的载体可以包括可操作地连接到编码待表达序列的核苷酸序列的启动子序列。载体还可以包括终止密码子和表达增强子。本领域已知的任何合适的载体、启动子、增强子和终止密码子可用于从本公开的载体表达肽或多肽。
259、术语“可操作连接”可以包括这样的情况，其中所选择的核酸序列和调控核酸序列(例如启动子和/或增强子)共价连接，使得核酸序列的表达在调控序列的影响或控制下(从而形成表达盒)。因此，如果调控序列能够影响核酸序列的转录，则调控序列可操作地连接到所选择的核酸序列。然后可以将得到的转录物翻译成多肽，例如linc复合物抑制多肽。
260、合适的载体包括质粒、二元载体、dna载体、mrna载体、病毒载体(例如γ-逆转录病毒载体(如小鼠白血病病毒(mlv)衍生的载体)、慢病毒载体、腺病毒载体、腺泡相关病毒载体、痘苗病毒载体和疱疹病毒载体)、基于转座子的载体和人工染色体(如酵母人工染色体)，例如maus等人，annu rev immunol(2014)32:189-225或morgan和boyerinas，biomedicies 2016 4，9中所述，其全部通过引用并入本文。在优选的实施方案中，载体是腺相关病毒载体或慢病毒载体。
261、在一些实施方案中，基于期望将核酸递送到的细胞类型/组织/器官的嗜性来选择载体。在一些实施方案中，基于对希望表达linc复合物抑制多肽的细胞类型/组织/器官的嗜性来选择载体。例如，可能希望在受根据本公开要治疗/预防的疾病影响的细胞类型/组织/器官(例如，疾病症状表现的细胞类型、组织/器官)中递送核酸/表达linc复合物抑制多肽。
262、在一些实施方案中，期望将编码linc复合物抑制多肽的核酸递送到肌肉细胞/组织(例如，心脏和/或骨骼肌细胞/组织)，并且在这样的实施方案中可以使用对这样的细胞/组织具有嗜性的载体。在一些实施例中，载体可以是心性的。在一些实施方案中，载体可以是嗜肌性的。
263、在优选的实施方案中，载体是腺相关病毒载体。腺相关病毒载体及其在载体基因治疗中的应用综述于例如wang等人，nat.rev.ddrug discov.(2019)18:358-378和li和samulski，nat.rev.genet.(2020)12:255-272，这两个文献的全部内容通过引用并入于此。在一些实施方案中，载体可以是在wang等人，nat.rev.ddrug discov.(2019)18:358-378.中描述的腺相关病毒载体。在一些实施方案中，载体可以是li和samulski，nat.rev.genet.(2020)12:255-272.中描述的腺相关病毒载体。
264、在一些实施方案中，载体是自互补腺相关病毒(scaav)载体。自互补腺相关病毒载体例如描述于mccarty，mol ther.(2008)16(10):1648-56，其全部内容通过引用并入本文。传统的aav具有单链dna基因组，并依赖于转导细胞的dna复制机制来合成互补链，从而延迟转基因表达。相反，scaav含有互补序列，这些序列在感染时自发退火，消除了转导宿主细胞中dna合成的需要。与经典的单链aav载体相比，scaav载体已被证明可加速转基因表达的开始，并提高转基因表达水平。
265、在一些实施方案中，载体可以是以下血清型之一的腺相关病毒载体：aav1、aav2、aav2i8、aav5、aav6、aav8、aav9、aav9.45、aav10或aavrh74。在一些实施方案中，所述载体是aav9载体。
266、在一些实施方案中，载体可以是嗜心腺相关病毒载体。在一些实施方案中，载体可以是以下血清型之一的腺相关病毒载体：aav1、aav8、aav9、aav9.45。
267、在一些实施方案中，载体可以是嗜骨骼肌腺相关病毒载体。在一些实施方案中，载体可以是以下血清型之一的腺相关病毒载体：aav1，aav6，aav7，aav8，aav9，aav9.45。
268、在一些实施方案中，载体包括修饰以增加与感兴趣的细胞类型的结合和/或转导(即与未修饰的载体的结合/转导水平相比)。在一些实施方案中，修饰是对衣壳蛋白的修饰。
269、在一些实施方案中，载体包含衣壳蛋白，所述衣壳蛋白包含细胞靶向肽。在一些实施方案中，细胞靶向肽如büning和srivastava，分子治疗:方法与临床发展(2019)12:248-265中所述，其通过引用整体并入本文，例如其表1、2、3或4中所示的细胞靶向肽。
270、在一些实施方案中，载体包含衣壳蛋白，所述衣壳蛋白包含对一个或多个酪氨酸残基的取代，例如一个或更多个表面暴露的酪氨酸残基。在一些实施方案中，衣壳蛋白的一个或多个酪氨酸残基被苯丙氨酸取代。在一些实施方案中，载体包含衣壳蛋白，其中一个或多个酪氨酸残基被另一种氨基酸取代，如iida等人，biomed res int.(2013)2013:974819中所述，其全部内容通过引用并入于此。
271、在一些实施方案中，载体可以是上文büning和srivastava中描述的腺相关病毒载体。在一些实施方案中，载体可以是上文iida等人中描述的腺相关病毒载体。
272、在一些实施方案中，核酸/载体包含一个或多个用于控制核酸表达的序列。因此，在一些实施方案中，核酸/载体包含用于诱导表达核酸的控制元件。
273、用于控制核酸表达的序列可以提供特定类型的细胞或组织对核酸的表达。例如，表达可以在细胞类型或组织特异性启动子的控制下进行。
274、根据本发明的核酸的细胞类型或组织特异性表达的启动子可以根据待治疗/预防的疾病来选择。例如，启动子可以驱动受疾病影响的细胞类型/组织/器官(例如，表现出疾病症状的细胞类型、组织/器官)中的表达。
275、在一些实施方案中，启动子可以提供在肌肉细胞/组织(例如，心脏和/或骨骼肌细胞/组织)中的表达。在一些实施方案中，启动子可以是心脏或心肌特异性启动子(例如ctnt、α-mhc或mlc2v启动子)。在一些实施方案中，启动子可以是骨骼肌/横纹肌细胞特异性启动子(例如mck、mhck7或结蛋白启动子)。在一些实施方案中，所述启动子是ctnt。
276、在一些实施方案中，启动子可以是血管内皮细胞特异性启动子(例如tie2启动子)。在一些实施方案中，启动子可以是血管平滑肌细胞特异性启动子(例如sm22a启动子)。在一些实施方案中，启动子可以是单核细胞/巨噬细胞特异性启动子(例如lysm启动子)。
277、用于控制核酸表达的序列可以响应于例如给定的试剂/信号提供核酸的表达。例如，表达可以在诱导型启动子的控制下进行。所述试剂可通过将所述试剂施用至已施用根据本公开的修饰细胞的受试者而在体内提供核酸的诱导表达，或通过将所所述试剂在体外或体外培养物中施用至细胞而在体外/体外提供核酸的可诱导表达。
278、在一些实施方案中，根据本公开的核酸或载体可以采用条件表达系统来控制编码linc复合物抑制多肽的核酸由包含核酸/载体的细胞表达。“条件性表达”在本文中也可称为“诱导型表达”，并指取决于某些条件的表达，例如特定试剂的存在。条件表达系统在本领域中是众所周知的，并且例如在ryding等人.journal of endocrinology(2001)171，1-14中所述，其全部内容通过引用并入本文。
279、编码/包含/表达linc复合物抑制多肽的细胞
280、本公开还提供包含或表达本公开的linc复合物抑制多肽的细胞。还提供了包含或表达本公开的核酸或载体的细胞。
281、该细胞可以是真核细胞，例如哺乳动物细胞。哺乳动物可以是灵长类动物(恒河猴、食蟹猴、非人类灵长类动物或人类)或非人类哺乳动物(例如兔、豚鼠、大鼠、小鼠或其他啮齿动物(包括啮齿目动物)、猫、狗、猪、绵羊、山羊、牛(包括奶牛，例如奶牛，或bos目的任何动物)、马(包括马科动物)、驴和非人类灵长目动物)。在优选的实施方案中，所述细胞可以是人细胞。
282、本公开还提供了一种生产包含本公开的核酸或载体的细胞或包含/表达本公开linc复合物抑制多肽的细胞的方法，该方法包括将本公开核酸或载体引入细胞中。在一些实施方案中，将本公开的核酸/载体引入细胞包括转化、转染、电穿孔或转导(例如腺相关病毒转导)。在一些实施方案中，将核酸/载体在体内引入细胞，例如在给受试者施用本公开的载体(例如病毒载体，例如腺相关病毒载体)之后。在一些实施方案中，在离体培养或体外培养中将核酸/载体引入细胞中。
283、在一些实施方案中，所述方法还包括在适合于细胞表达核酸或载体的条件下培养细胞。
284、本公开还提供通过根据本公开的方法获得或可获得的细胞。
285、组合物
286、本公开还提供包含本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体和细胞的组合物。特别地，本公开提供了包含本公开的linc复合物抑制多肽、核酸、载体和细胞的药物组合物和药物。
287、所述组合物可以包含适合临床使用的制剂中的相关制品(即linc复合物抑制多肽/核酸/载体/细胞)。本公开特别涉及包含本公开的核酸和载体的药物组合物/药物。
288、本公开的组合物可包含一种或多种药学上可接受的载体(例如脂质体、胶束、微球、纳米颗粒)、稀释剂/赋形剂(例如淀粉、纤维素、纤维素衍生物、多元醇、葡萄糖、麦芽糊精、硬脂酸镁)、佐剂、填充剂、缓冲剂、防腐剂(例如维生素a、维生素e、淀粉、纤维素、明胶、聚乙二醇(peg)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、木糖醇、山梨醇、甘露醇)、稳定剂、增溶剂、表面活性剂(例如润湿剂)、掩蔽剂或着色剂(例如氧化钛)。
289、本文所用的术语“药学上可接受的”涉及化合物、成分、材料、组合物、剂型等，在合理的医学判断范围内，其适用于与所述受试者(例如人类受试者)的组织接触，没有过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，且与合理的益处/风险比相称。本公开的组合物的每种载体、稀释剂、赋形剂、佐剂、填料、缓冲液、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、粘合剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂、掩蔽剂、着色剂、调味剂或甜味剂在与制剂的其他成分相容的意义上也必须是“可接受的”。合适的载体、稀释剂、赋形剂、佐剂、填料、缓冲液、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、粘合剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂、掩蔽剂、着色剂、调味剂或甜味剂可以在标准药学文本中找到，例如，雷明顿的《药学科学与实践》
290、(ed.a.adejare)，第23版(2020年)，学术出版社。
291、本公开的药物组合物/药物可以配制用于给药给受试者，例如通过适合于治疗剂的性质和待治疗/预防的疾病的给药途径给药。在一些实施方案中，药物组合物/药物可配制用于胃肠外、全身、局部、腔内、血管内、静脉内、动脉内、肌内、鞘内、眼内、结膜内、肿瘤内、皮下、皮内、口服或透皮给药。在一些实施方案中，药物组合物/药物可以配制用于通过注射或输注给药，或通过摄入给药。
292、药物和药物组合物可配制用于给药至血管或目标的组织/器官(例如，受疾病影响的组织/脏器(例如，表现出疾病/病症症状的组织/器官))。
293、药物组合物/药物可包含在无菌或等渗培养基中的linc复合物抑制多肽/核酸/载体/细胞。药物组合物/药物可以以流体形式提供，包括凝胶形式。流体制剂可以配制成通过注射或输注(例如通过套管)到血管或人体或动物体的选定区域来给药。药物组合物/药物可以以固体形式提供，例如以冻干形式提供。
294、本公开还提供了生产本公开的药物组合物/药物的方法。这样的方法可以包括将本文所述的linc复合物抑制多肽/核酸/载体/细胞与药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂、佐剂、填料、缓冲液、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、粘合剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂、掩蔽剂、着色剂、调味剂或甜味剂混合。这种方法通常包括使linc复合物抑制多肽/核酸/载体/细胞与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，通过使活性化合物与载体(例如，液体载体、细碎固体载体等)均匀而紧密地结合，然后在必要时使产物成型来制备组合物。
295、根据本公开的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞和组合物可以被修饰和/或配制以促进递送到感兴趣的细胞/组织(例如，心肌和/或骨骼肌细胞/组织)和/或被目标的组织摄取。
296、例如在li等人.int.j.mol.sci.(2015)16:19518-19536和fu等人，bioconjugchem.(2014)25(9):1602-1608中所述，其全部内容通过引用合并于此。
297、在一些实施方案中，本公开的制品可以封装在纳米颗粒或脂质体中。在一些实施方案中，本公开的制品可以(共价或非共价)与细胞穿透肽(例如蛋白质转导结构域、特洛伊肽、富含精氨酸的肽、载体细胞肽)、阳离子聚合物、阳离子脂质或病毒载体相关联。
298、纳米粒子可以是有机的，例如胶束、脂质体、蛋白质、固体脂质颗粒、固体聚合物颗粒、树枝状聚合物和聚合物治疗剂。纳米粒子可以是无机的，例如纳米管或金属颗粒，任选地添加有机分子。在一些实施方案中，纳米颗粒是chen等人，mol ther methods clin dev.(2016)3:16023中所述的，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，纳米颗粒是plga、多肽、聚(β-氨基酯)、dope、含β-环糊精的聚阳离子、线性pei、pamam树状大分子、支链pei、壳聚糖或聚多磷酸酯纳米颗粒。
299、在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽、核酸和载体包括修饰，以结合一个或多个有助于递送到目标的细胞类型或组织(例如，心肌和/或骨骼肌细胞/组织)和/或由其摄取的部分。在一些实施方案中，本公开的linc复合物抑制多肽、核酸和载体连接(例如化学缀合)一个或多个部分，促进递送到目标的细胞类型或组织和/或被目标的组织吸收。
300、促进向目标的细胞类型或组织递送和/或被目标的组织摄取的部分描述于例如benizri等人，bioconjug chem.(2019)30(2):366-383中，其全部内容通过引用并入本文。所述部分包括例如n-乙酰氨基半乳糖(galnac)、α-生育酚、细胞穿透肽、核酸适体、抗体及其抗原结合片段/衍生物、胆固醇、角鲨烯、聚乙二醇(peg)、脂肪酸(例如棕榈酸)和核仁脂部分。
301、本公开的制品可以在缓释递送系统中配制，以便以预定速率释放linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物。缓释递送系统可以在特定的时间段内保持恒定的药物/治疗/预防浓度。在一些实施方案中，本公开的制品配制成脂质体、凝胶、植入物、装置或药物-聚合物缀合物，例如水凝胶。
302、linc复合物抑制多肽的鉴定方法
303、本公开还提供了鉴定linc复合物抑制多肽的方法。
304、所述方法通常包括引入编码候选linc复合物抑制多肽的核酸，所述候选linc复合物抑制多肽包含对应于含sun结构域的蛋白质的sun结构区或对应于含kash结构域的蛋白的kash结构区的氨基酸序列，并分析含sun结域的蛋白质相互作用伴侣的亚细胞定位(在候选linc复合物抑制多肽包含与含sun构域的蛋白质中的sun域相对应的氨基酸序列的情况下)，或分析含kash构域的蛋白相互作用伴侣的亚细胞定位(在候选linc复合物抑制多肽包括对应于含kash结构域蛋白的kash-结构域的氨基酸序列)，以确定候选linc复合物抑制多肽是否改变/破坏相关相互作用伴侣的正常亚细胞定位。
305、更具体地，本公开提供了一种鉴定linc复合物抑制多肽的方法，包括：
306、引入编码候选linc复合物抑制多肽的核酸，其中所述候选linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质(例如sun1、sun2、sun3、sun5、spag4或suco)的sun结构区的氨基酸序列；和
307、随后分析细胞以确定含有sun结构域的蛋白质(例如含有kash结构域的蛋白，例如nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5或lrmp)的相互作用伴侣的亚细胞定位；
308、其中候选linc复合物抑制多肽被确定为检测到含有sun结构域的蛋白质的相互作用伴侣的亚细胞定位的变化的linc复合物抑制多肽。
309、还提供了一种鉴定linc复合物抑制多肽的方法，包括：
310、引入编码候选linc复合物抑制多肽的核酸，其中所述候选linc复合物抑制多肽包含与含有kash结构域的蛋白质(例如nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3、nesprin-4、kash5或
311、lrmp)的kash结构相对应的氨基酸序列；和
312、随后分析细胞以确定含有kash结构域的蛋白质(例如含有sun结构域的蛋白，例如sun1、sun2、sun3、sun5、spag4或suco)的相互作用伴侣的亚细胞定位；
313、其中候选的linc复合物抑制多肽被确定为检测到含有kash结构域的蛋白质的相互作用伴侣的亚细胞定位的变化的linc复合物抑制多肽。
314、应理解，如前两段中所述的相关相互作用伴侣的亚细胞定位的变化是指在未引入编码候选linc复合物抑制多肽的核酸的对照细胞中，或在已引入编码已知不影响相关相互作用伴侣的亚细胞定位的对照多肽的核酸中，相对于相互作用伴侣在亚细胞定位发生的变化。
315、所述方法优选使用体外培养的细胞进行。
316、在一些实施方案中，将核酸引入细胞可包括转化、转染、电穿孔或转导(例如腺相关病毒转导)。
317、在一些实施方案中，编码候选linc复合物抑制多肽的核酸可以在载体中提供，例如根据本文所述实施方案的载体。
318、编码候选linc复合物抑制多肽的核酸优选包括调节元件，所述调节元件提供候选linc复合物抑制多肽在核酸已被引入的细胞中的表达。将核酸引入细胞后，优选将细胞维持在适合于在细胞中表达来自核酸的候选linc复合物抑制多肽的条件下。
319、还将认识到，在将核酸引入细胞中之后，在分析细胞之前，优选允许足够的时间来改变相关相互作用伴侣的亚细胞定位，以便评估相关相互作用伴侣的亚细胞位置。
320、给定多肽(例如含有sun结构域的蛋白质或含有kash结构域的蛋白的给定相互作用伴侣)的亚细胞定位可以通过本领域技术人员熟知的方法进行分析。这种方法包括基于抗体/报告基因的方法(蛋白质印迹、elisa、免疫组织/细胞化学等)。例如，可以例如通过免疫细胞化学或通过从不同细胞级分制备的提取物的蛋白质印迹来分析亚细胞定位。这种分析可以使用已知亚细胞定位的细胞器标记物和/或标记的蛋白质。
321、所述方法可以使用与荧光标记缀合的含有sun结构域的蛋白质或含有kash结构域的蛋白的相互作用伴侣，并且可以包括通过荧光显微镜分析所述物质的亚细胞定位。这种方法可以采用基于抗体的对含有sun结构域的蛋白质或含有kash结构域的蛋白的相互作用伴侣的检测，并且可以包括通过免疫荧光显微镜分析这种物种的亚细胞定位。
322、在一些实施方案中，候选linc复合物抑制多肽被确定为linc复合物抑制剂多肽，其中检测到定位于核膜的相关相互作用伴侣的比例降低(相对于编码候选linc络合物抑制多肽的核酸尚未被引入的对照细胞中定位于核包膜的比例，或编码已知不影响相关相互作用伴侣的亚细胞定位的对照多肽的核酸已被引入的对照细胞中)。
323、在一些实施方案中，候选linc复合物抑制多肽被确定为linc复合物抑制剂多肽，其中检测到相关相互作用伴侣未定位于核膜的比例增加，或相关相互作用伴侣定位于内质网的比例增加(相对于未将编码候选linc络合物抑制多肽的核酸引入的对照细胞中定位于核包膜的比例，或已将编码已知不影响相关相互作用伴侣亚细胞定位的对照多肽的核酸导入的对照细胞)。
324、在一些实施方案中，用于鉴定linc复合物抑制多肽的方法可以包括基本上如本文实施例1中所述的候选linc复合抑制多肽的分析。
325、在一些实施方案中，用于鉴定linc复合物抑制多肽的方法包括：
326、将编码候选linc复合物抑制多肽的核酸引入细胞，所述候选linc复合物抑制多肽包含对应于含sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列；和
327、随后分析细胞以确定nesprin-2的亚细胞定位；
328、其中候选linc复合物抑制多肽被确定为检测到定位于内质网的nesprin-2的比例增加的linc复合物抑制剂多肽。
329、本公开还提供了根据本公开的方法鉴定的linc复合物抑制多肽。
330、治疗和预防应用
331、本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞和组合物可用于治疗和预防方法。
332、本公开提供了本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞和组合物用于药物治疗或预防方法。还提供了本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞和组合物在制备用于治疗或预防疾病/病症的药物中的用途。还提供了治疗或预防疾病/病症的方法，包括给受试者施用治疗有效量或预防有效量的本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞和组合物。
333、术语“病症”、“疾病”和“症状”可以互换使用，指的是身体部位、器官或系统的病理问题，其特征可能是一组可识别的体征或症状。
334、本公开的治疗性或预防性干预可以有效地减缓疾病/病症的发展或进展、减轻疾病/病症症状或减少疾病/症状的病理学。干预可以有效地防止疾病/病症的进展，例如防止疾病/病情恶化或减缓疾病/病症发展的速度。在一些实施方案中，干预可导致疾病/状况的改善，例如疾病/状况症状的减少或疾病/状况严重性/活动性的某些其他相关性的减少。在一些实施方案中，干预可以防止疾病/病症发展到后期(例如更严重的阶段或慢性阶段)。
335、本文中使用的术语“发展(develop)”、“发展(developing)”和“发展(development)”，例如疾病，指疾病的发作以及疾病状态/相关疾病的进展、恶化或加重。
336、本公开的各方面涉及linc复合物功能障碍在病理上涉及的疾病的治疗/预防。这类疾病包括例如核包膜病(例如核纤层蛋白病)。本公开的制剂和方法的治疗和预防用途延伸到治疗和/或预防任何疾病，这些疾病将从linc复合物抑制中获得治疗/预防益处。
337、本公开的各方面涉及与给定基因或多个基因的突变相关的疾病的治疗。在此，与给定基因突变“相关”的疾病是由这种突变引起或加剧的疾病，或者这种突变是疾病发展或进展的风险因素。在一些实施方案中，与包含两个拷贝的(即纯合的)基因的非突变(野生型)参考等位基因的细胞相比，突变在包含一个或多个拷贝的基因的突变等位基因细胞中引起以下一种或多种：野生型等位基因基因的基因产物(例如rna和/或蛋白质(或其特定异构体))水平降低；非野生型等位基因的基因产物水平增加；野生型等位基因的基因产物水平增加。
338、本公开的各方面涉及核包膜的治疗/预防。核包膜病是与编码核包膜蛋白(即包含在onm、核周空间或inm中或直接/间接与之相关的蛋白质)的基因突变相关的疾病/病理状况。核包膜在例如由chi等人，journal of biomedical science(2009)16:96中综述，其通过引用整体并入本文。核包膜病包括与lmna、lmnb1、lmnb2、emd、lap2、lbr、zmpste24、syne-1和nup62突变相关的疾病/病理状况。
339、因此，在一些实施方案中，根据本公开要治疗/预防的疾病/病症的特征在于lmna、lmnb1、lmnb2、emd、lap2、lbr、zmpste24、syne-1和nup62突变中的一种或多种。
340、特别地，本公开的各方面涉及核纤层蛋白病的治疗/预防。
341、如burke和stewart，nat rev mol cell biol.(2013)14(1):13-24，以及hah和kim，cells(2019)8(3)：231对核纤层蛋白病进行了综述，其全部内容通过引用并入于此。核纤层蛋白病通常与核水平承重的组织特异性缺陷有关，这会降低细胞对物理力的耐受性。在本文的实验实施例中，发明人证明linc复合物抑制改善了一系列核纤层蛋白病的症状。
342、如本文所用，“核纤层蛋白病”是与编码核纤层蛋白的基因突变相关的疾病/病理状况。
343、编码核纤层蛋白的基因包括lmna(其编码层核纤层蛋白a和c)，以及lmnb1、lmnb2，其编码核纤层蛋白b1和b2。因此，本公开的各方面涉及与lmna、lmnb1和/或lmnb2突变相关的疾病的治疗/预防。
344、在一些实施方案中，已知或预测突变降低由编码核纤层蛋白的基因(例如lmna、lmnb1或lmnb2)的野生型等位基因编码的核纤层蛋白亚型的水平。在一些实施方案中，所述突变是错义突变。在一些实施方案中，已知或预测突变导致由编码核纤层蛋白的基因的野生型等位基因编码的核纤层蛋白截短版本的产生。在一些实施方案中，已知或预测突变导致错误折叠和/或降解的核纤层蛋白的产生。
345、在一些实施方案中，已知或预测突变增加由编码核纤层蛋白的基因(例如lmna、lmnb1或lmnb2)的野生型等位基因编码的核纤层蛋白亚型的水平。
346、在一些实施方案中，已知或预测突变会增加疾病相关核纤层蛋白变体(例如progerin)的水平。在一些实施方案中，已知或预测突变增加由编码核纤层蛋白的基因的疾病相关等位基因编码的核纤层蛋白水平。
347、在一些实施方案中，核纤层蛋白病是骨骼肌核纤层蛋白病。在一些实施方案中，核纤层蛋白病是肌病。在一些实施方案中，核纤层蛋白病是lmna突变相关的肌病。
348、在一些实施方案中，根据本公开要治疗/预防的疾病的特征在于一种或多种肌病、心肌病、扩张型心肌病、肌营养不良、心肌营养不良、骨骼肌营养不良症、早衰症、神经病变、脂肪萎缩、骨骼发育不良、脂肪营养不良、白质营养不良或皮肤病。
349、在一些实施方案中，根据本公开要治疗/预防的疾病的特征在于肌营养不良、心肌营养不良或骨骼肌营养不良中的一种或多种。
350、在一些实施方案中，核纤层蛋白病与lmna、lmnb1和/或lmnb2的突变相关。在一些实施例中，核纤层蛋白病选自：哈钦森-吉尔福德早衰综合征；埃默里-德雷弗斯肌营养不良症；emery-dreifuss肌营养不良2型，常染色体显性；脂肪营养不良，部分，获得性；癫痫，进行性肌阵挛，9；腓骨肌萎缩症，轴突，2e型；肌肉萎缩症；脂肪营养不良，家族性部分，2型；心肌病，扩张性，1小时；pelger-huet异常；雷诺综合征；肌肉疾病；脑白质营养不良；扩张型心肌病；先天性肌萎缩症；下颌肢发育不良伴a型脂肪营养不良；心肌病，扩张型，1a；限制性皮肤病，致死性；家族性部分脂肪营养不良；癫痫；脂肪萎缩伴糖尿病、白质丘疹、肝脂肪变性和肥厚性心肌病；白质营养不良，脱髓鞘，成人发病，常染色体显性；获得性全身性脂肪营养不良；肌营养不良3型，常染色体隐性；疾病腓骨肌萎缩；腓骨肌萎缩症，轴突，2b1型；心肌病，扩张型，1b；心房静止1；四肢带状肌营养不良症；心肌病，扩张性，伴促性腺功能亢进；斯洛文尼亚型心手综合征；单基因糖尿病；心律失常性右室心肌病；心肌病，扩张型，1e；老化；下颌发育不全、耳聋、类早衰特征和脂肪营养不良综合征；肾上腺脑白质营养不良；非典型沃纳综合征；子宫内膜异位症；脊髓小脑性共济失调31；进行性肌萎缩症；神经源性肠；常染色体显性白质营养不良伴自主神经疾病；沃纳综合症；肌病；lmna相关性扩张型心肌病；先天性肌肉萎缩症1b；肥厚性心肌病；左心室不致密；糖尿病，非胰岛素依赖型；心律失常性右心室发育不良，家族性，9例；心脏病；心房颤动；心脏传导缺损；肌阵挛；进行性肌阵挛性癫痫；肌阵挛癫痫；周围神经系统疾病；牙齿疾病；房室传导阻滞；肌纤维肌病；常染色体显性四肢带状肌营养不良；lmna相关性心皮性早衰综合征；肌萎缩侧索硬化症；神经管缺损；子宫颈癌；神经管缺陷，叶酸敏感；脑变性；黑棘皮症；3-羟基酰基辅酶a脱氢酶缺乏；先天性纤维型失调；肢端骨质溶解；wolff-parkinson-white综合症；病态窦性综合征；钙质沉着；未分化多形性肉瘤；室性心动过速，儿茶酚胺能多态性，1，伴有或不伴有心房功能障碍和/或扩张性心肌病；脂肪营养不良，家族性部分，1型；轴突神经病变；阵发性心室颤动；brugada综合征；刚性脊柱肌营养不良；1b型四肢带状肌营养不良；胰岛素抵抗型黑棘皮病；全身性脂肪营养不良相关类早衰综合征；骨质疏松症；刚性脊柱肌营养不良症；神经病变；儿茶酚胺能多态性室性心动过速；白内障；伯利恒肌病；先天性全身性脂肪营养不良；限制性心肌病；肌肉萎缩症，先天性美罗红蛋白缺乏，1a；近端脊髓性肌萎缩症；b型肌营养不良-糖代谢异常5例；先天性广泛性脂肪营养不良，1型；emery-dreifuss肌营养不良症；心肌病，扩张型，1d；肌病、近端肌病和眼麻痹；肌肉组织疾病；卵巢囊腺瘤；胚胎病；fanconi贫血，补体组a；体重指数；数量性状位点11；骨髓增生异常综合征；皮肤疾病；神经性厌食；脊髓性肌萎缩症；包涵体肌炎；无虹膜1；肌炎；毛肝肠综合征1；神经肌肉疾病；营养缺乏症；胸廓出口综合征；肌肉疾病；肌肉萎缩；hallermann-streiff综合症；rere-related障碍；米勒-迪克无脑畸形综合征；脂肪营养不良，先天性广泛性，4型；脂肪营养不良，家族性部分，3型；wiedemann-rautenstrauch综合症；先天性广泛性脂肪营养不良2型；共济失调神经病谱；脱发、神经系统缺陷和内分泌疾病综合征；脂肪营养不良，家族性部分，4型；二度房室传导阻滞；急性坏死性脑病；正中神经病变；内在心肌病；家族性孤立性心律失常性心室发育不良，右侧显性型；女性生殖器官脱垂；家族性孤立性心律失常性心室发育不良；家族性孤立性心律失常性心室发育不良，左显性型；完全性全身性脂肪营养不良；血型——ahonen；常染色体半显性重度脂肪营养不良性椎板病；尺神经病变；盆腔肌萎缩；阿尔茨海默病；缺血性中风；共济失调毛细血管扩张；风湿性脊椎关节病1；人类免疫缺陷病毒1型；神经母细胞瘤；血管疾病；神经系统疾病；呼吸衰竭；特纳综合征；腕管综合征；巴雷特食管；睡眠呼吸暂停；脑血管疾病；蛋白酶体相关自身炎症综合征；joubert综合征；病毒性传染病；老年痴呆症；人格障碍；遗传性感觉和自主神经病变，iii型；罗氏眼脑肾综合征；糖尿病；脂肪肝；利综合征；肌营养不良，杜氏型；脑积水；皮肌炎；巨结肠病1；长qt综合征；如angelman综合征；中枢神经系统疾病；先天性糖基化障碍；肺水肿、失弛缓症和智力迟钝综合征；多囊卵巢综合征；低血糖症；肌肉肥大；kearns-sayre综合症；锥杆营养不良；aicardi-goutieres综合症；安徒生心律失常周期性麻痹；肌肉萎缩症，贝克型；legg-calve-perthes疾病；雄激素不敏感综合征；恰当牵拉；axenfeld-rieger综合症；肌营养不良-糖营养不良，c型，5例；肾小球肾炎；癫痫发作；基孔肯雅热；西方综合症；乌尔里希先天性肌营养不良症；局灶节段性肾小球硬化；walker-warburg综合症；肾发育不良/发育不全1；腘窝翼状胬肉综合征；头小畸型；儿童型皮肌炎；远端关节弯曲；心肌炎；动脉扭曲综合征；脊柱侧弯；膜性肾病；糖尿病3型微血管并发症；表皮松解大疱；短综合症；过度惊骇；非酒精性脂肪肝；肌营养不良-糖代谢异常症，a型，4；先天性脑积水；小脑和外周性共济失调伴听力损失和糖尿病心律失常；肌营养不良-糖代谢异常症，a型，1；上睑下垂；喉炎；ablepharon-macrostomia综合症；瓣上主动脉狭窄；先天性肌病；代谢性脑肌病危象，复发性，伴横纹肌溶解，心律失常和神经变性；无脑回1；多囊性肝病1型伴或不伴肾囊肿；特发性炎性肌病；单纯大疱性表皮松解症；局灶节段性肾小球硬化；性腺的发育不全；脉络膜和视网膜旋转萎缩；脊髓空洞症；寻常型鱼鳞病；关节挛缩，远端，1a型；急性胰岛素反应；指过短；小脑发育不全；颅干骺端发育不良，常染色体显性；alport综合征1,x连锁；lissencephaly；肌营养不良-糖代谢异常病，b型，6；腹泻5例，合并绒毛状肠病，先天性；大疱性结缔组织表皮松解症；aicardii-goutieres综合征；三吉肌营养不良症；视网膜炎；marden-walker综合症；视网膜炎；伴或不伴免疫缺陷的葡聚糖体肌病1型；大疱性表皮松解症，交界性，herlitz型；巨舌；帕金森病15，常染色体隐性早发；肌病，肌原性，3；糖尿病7型微血管并发症；肌眼脑病；melkersson-rosenthal综合症；x连锁肌病伴过度自噬脉络膜炎；肌肉萎缩症，肢带，常染色体隐性8；伴有黑棘皮病的crouzon综合征肌肉萎缩症，肢带，常染色体隐性6；多小脑回；营养不良性疾病；糖尿病6型微血管并发症；糖尿病4型微血管并发症；张力减退；脑桥小脑发育不全；先天性纤维肉瘤；宫内发育迟缓、干骺端发育不良、先天性肾上腺发育不全和生殖器异常肌肉萎缩症，肢带，常染色体隐性7；肌病，先天性，纤维型比例失调；无胚发育不完全性，ig型；难治性贫血；眼外肌纤维化，先天性，1；共济失调和多发性神经病，成人发病；al-raqad综合症；老年性白内障；肌营养不良-糖代谢异常病，c型，1；神经元迁移障碍；ayme-gripp综合症；血中丙种球蛋白缺乏；常染色体隐性肢体带状肌营养不良症2a型；大脑炎；肌肉萎缩症，先天性，巨头型；常染色体隐性肢体带状肌营养不良症；alkuraya-kucinskas综合症；肌营养不良-糖代谢异常症，c型，4；1a型先天性肌营养不良症；贝洱综合症；dandy-walker复杂；c型肌营养不良-糖营养不良2例；埃默里-德雷弗斯肌营养不良症；肌肉萎缩症，肢带，常染色体隐性3；常染色体隐性肢体带状肌营养不良症；伴或不伴眼部异常的脑脑血管病1型；家族性孤立型扩张型心肌病；上皮复发性糜烂性营养不良；肌营养不良；禽分枝杆菌复合感染；常染色体隐性隐性肢带肌营养不良症2l型；视觉癫痫；valsalva窦动脉瘤；常染色体隐性肢体带状肌营养不良2b型；血清肌酸磷酸激酶；痉挛性截瘫、共济失调和智力低下；多核神经元、羊水无、肾发育不良、小脑发育不全、无水脑畸形；扩张性咽鼓管；常染色体遗传病；ck综合症；神经元炎；惊吓病1；减轻肌病；双侧颞枕部多小回症；孤立高血糖；腓骨肌萎缩症，轴突，2b2型；伴透明质团和线状棒的心神经肌病；无智力残疾的先天性肌肉萎缩症；血型，i系统；萨利赫肌病；拇内收综合征；硬脑膜窦畸形；血型，东布罗克系统；血型，科尔顿系统；关节关节病ehlers-danlos综合征；lama2相关肌营养不良；肌肉萎缩症，先天性，伴婴儿白内障和性腺功能减退；宫内感染；肌萎缩症，先天性，分区蛋白阳性；先天性肌营养不良伴小脑受累；福山型肌营养不良症；慢性淋巴细胞增生性疾病；先天性肌营养不良伴智力残疾；无胚发育不完全发育型；雄激素不敏感综合征，轻度；先天性肌肉萎缩症，导致关节挛缩；先天性肌性糖代谢异常伴脑、眼异常vi型胶原相关肌病；优势型埃默里-德赖弗斯肌营养不良症；糖代谢异常所致先天性肌营养不良；近端肌病伴局灶性线粒体缺失小儿脊柱侧凸。
351、在一些实施方案中，核纤层蛋白病是与lmna突变相关的核纤层蛋白病。在一些实施方案中，核纤层蛋白病选自哈钦森-吉尔福德早衰综合征；扩张型心肌病；肌肉营养不良，先天性，lmna相关；emery dreifuss肌营养不良2型，常染色体显性；肌肉营养不良；下颌骨发育不良伴a型脂营养不良；扩张型心肌病，1a；腓骨肌萎缩症；四肢围带肌营养不良；扩张型心肌病伴高促性腺功能减退；emery dreifuss肌肉营养不良3型，常染色体隐性遗传；脂营养不良，家族性部分性，2型；emery dreifuss肌肉营养不良；腓骨肌萎缩症，轴索型，2b1型；心手综合征，斯洛文尼亚型；变老家族性部分性脂营养不良；限制性皮肤病，致命；致心律失常性右心室心肌病；牙病；心脏病；维尔纳综合征；肥厚型心肌病；左心室不充盈；房室传导阻滞；钙化；肢端骨溶解；常染色体显性肢环肌营养不良；糖尿病，非胰岛素依赖型；骨质疏松症；心房颤动；心房静止1；黑棘皮病；心传导缺陷；儿茶酚胺能多态性室性心动过速；下颌骨发育不全、耳聋、前体特征和脂营养不良综合征；病态窦房结综合征；pelger huet异常；腓骨肌萎缩症，轴索型，2e型；先天性全身性脂营养不良；限制性心肌病；先天性纤维型比例失调；脂营养不良，先天性全身性，1型；肌纤维性肌病；脂营养不良，家族性部分性，1型；轴索神经病变；非典型沃纳综合征；卵巢囊腺瘤；范可尼贫血，补体a组；体重指数定量性状位点11；皮肤病；强直性脊柱肌肉营养不良1例；神经肌肉疾病；颅面骨畸形综合征；bethlem肌病1；获得性全身性脂营养不良；扩张型心肌病，1e；脂营养不良，先天性全身性，4型；未分化多形性肉瘤；脂营养不良，家族性部分性，3型；肌肉营养不良，先天性肌肽缺乏，1a；脊髓近端肌肉萎缩；肌肉营养不良多糖障碍，b型，5；先天性肌营养不良，1b；雷诺兹综合征；wiedemann-rautenstrauch综合征；emery dreifuss肌营养不良1，x连锁；脂营养不良，先天性全身性，2型；单基因糖尿病；扩张型心肌病，1d；近视、近端和眼麻痹；肌肉组织疾病；脂营养不良，家族性部分性，4型；扩张型心肌病，1h；二度房室传导阻滞；正中神经病变；内源性心肌病；女性生殖器官脱垂；完全性全身性脂营养不良；强直性脊柱肌肉营养不良；紧急情况；尺神经损伤；肢环肌营养不良1b型；lmna相关扩张型心肌病；骨盆肌肉损耗；广泛性脂营养不良相关孕激素综合征；肌肉疾病；扩张型心肌病，1b；常染色体遗传病；家族性孤立性致心律失常性心室发育不良，右显性；家族性孤立性致心律失常性心室发育不良，双心室型；家族性孤立性致心律失常性心室发育不良，左显性；lmna相关的心皮早衰综合征；常染色体半显性重度脂营养不良层病变。
352、在一些实施方案中，本公开治疗/预防的疾病选自与表1(从下一页开始)中所示的cdna或蛋白质变体相关的疾病。
353、在一些实施方案中，本公开治疗/预防的疾病选自表1所示的疾病。
354、在一些实施方案中，本公开要治疗/预防的疾病选自表1中以正常字体指示的疾病。
355、在一些实施方案中，本公开要治疗/预防的疾病选自表1中用粗体表示的疾病。
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377、
378、
379、
380、
381、
382、
383、
384、
385、
386、
387、本公开的进一步方面涉及以血脂异常为特征的疾病，例如以高脂血症为特征的病症的治疗/预防。linc复合物抑制最近已被证明是对血脂异常，特别是高脂血症如高胆固醇血症的适当治疗/预防干预——参见例如wo 2021/01898a1，例如实施例18。
388、本公开的进一步方面涉及与ldl受体缺乏相关的疾病(即ldl受体蛋白和/或功能水平降低)的治疗/预防。
389、在一些实施方案中，本公开要治疗/预防的疾病/病症是血脂异常和/或高胆固醇血症。在一些实施方案中，所述疾病/病症是以血脂异常和/或高胆固醇血症为特征的疾病/病症。在一些实施方案中，疾病/病症是与血脂异常和/或高胆固醇血症相关的疾病/病症(例如，血脂异常和/或高胆固醇症是疾病/病症的发作、发展或进展的风险因素的疾病/状况)。
390、血脂异常是指血脂水平过高或过低。本公开特别涉及高脂血症的治疗，其中血液中的脂质或脂蛋白水平升高。高脂血症包括高甘油三酯血症、高胆固醇血症和合并高脂血症(高甘油三酯血症和高胆固醇血症的组合)。高脂血症与动脉粥样硬化、高血压和心血管疾病有关。
391、高脂血症是指血液中脂质或脂蛋白水平升高。高脂血症包括高甘油三酯血症、高胆固醇血症和合并高脂血症(高甘油三酯血症和高胆固醇血症的组合)。高脂血症与动脉粥样硬化、高血压和心血管疾病有关。
392、高胆固醇血症是指血液中胆固醇含量过高。在许多情况下，高胆固醇血症是高脂肪饮食和不活跃的生活方式与遗传风险因素相结合的结果。高胆固醇血症也可能是基因突变(如家族性高胆固醇血症)、2型糖尿病、甲状腺功能减退、肾脏疾病的结果，或某些药物(如皮质类固醇)治疗的副作用。
393、高胆固醇血症描述于例如bhatnagar等人，bmj(2008)337:a993中。英国国家医疗服务体系将高胆固醇血症定义为血液总胆固醇水平≥5mmol/l或血液低密度脂蛋白水平≥3mmol/l。美国国立卫生研究院将高胆固醇血症定义为血液总胆固醇水平≥240mg/dl。高甘油三酯血症描述于例如berglund等人的j.clin。内分泌学.metab。(2012)97(9)：2969-89，定义为血液甘油三酯水平≥150mg/dl(≥1.7mmol/l)。高胆固醇血症是公认的心血管疾病发展的风险因素，尤其是动脉粥样硬化引起的心血管疾病——例如，参见nelson primcare.(2013)3月；40(1):195-211.据报道，高胆固醇血症也会导致脂肪变性和非酒精性肝病——例如，参见arguello等人，biochim biophys acta(2015)1852(9)：1765-78。
394、在一些实施方案中，以高脂血症为特征的疾病可以是家族性高脂血症或获得性(继发性)高脂血症。
395、在一些实施方案中，家族性高脂血症选自buerger-gruetz综合征、家族性载脂蛋白cii缺乏症、ic型高脂蛋白血症、家族性高胆固醇血症、家族式合并高脂血症、家族型β脂蛋白异常症、家族式高甘油三酯血症和v型高脂蛋白质血症。在一些实施方案中，家族性高脂血症是家族性高胆固醇血症。
396、ldl受体缺乏可能出现，例如作为ldlr突变的结果。因此，本公开的各方面涉及与ldlr突变相关的疾病的治疗/预防。在一些实施方案中，已知或预测突变降低由野生型ldlr等位基因编码的一种或多种ldl受体亚型的水平和/或增加一种或多种疾病相关的ldl受体变体的水平。在一些实施方案中，与ldlr突变相关的疾病是家族性高胆固醇血症。
397、在一些实施方案中，本公开要治疗/预防的疾病的特征在于高脂血症、高胆固醇血症、动脉粥样硬化、狭窄或高血压中的一种或多种。在一些实施方案中，本公开要治疗/预防的疾病以动脉粥样硬化为特征。
398、在一些实施方案中，待治疗/预防的疾病选自动脉粥样硬化、心血管疾病、中风和家族性高脂血症。
399、根据本公开的各个方面，本公开治疗和/或预防疾病/病症的方法可以包括以下中的一个或多个：
400、提高患病受试者的存活率；
401、延长患病受试者的寿命；
402、增加或抑制心脏功能的下降；
403、延缓心功能下降的发作；
404、增加或抑制心肌收缩力的降低；
405、增加或抑制射血分数和/或分数缩短的减少；
406、减少或抑制左心室内径的增加；
407、增加或抑制左心室后壁厚度的减少；和/或
408、减少或抑制动脉粥样硬化的发展。
409、根据本公开的各个方面，提供了用于或包括(例如在本文所述的疾病/病症的治疗/预防的背景下)以下一种或多种的方法：抑制含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白之间的相互作用；抑制包含含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白的linc复合物的形成；破坏包含含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白的linc复合物；破坏含有sun结构域的蛋白或含有kash结构域的蛋白质的正常亚细胞定位；增加linc复合物的组成蛋白(例如含有kash结构域的蛋白)到内质网的定位；降低包含含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白的linc复合物的水平；和/或抑制包含含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白的linc复合物的功能/活性。还提供了用于这种方法的本公开的试剂，以及本公开试剂在制备用于这种方法中的药物组合物或药物中的用途。应当理解，所述方法通常包括向受试者施用本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物。
410、类似地，在本公开的治疗性或预防性干预之后(例如与干预之前的水平相比)，在受试者中可以观察到以下一种或多种：抑制含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白之间的相互作用；抑制包含含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白的linc复合物的形成；破坏包含含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白的linc复合物；破坏含有sun结构域的蛋白或含有kash结构域的蛋白质的正常亚细胞定位；linc复合物的组成蛋白(例如含有kash结构域的蛋白)向内质网的定位增加；包括含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白的linc复合物的水平的降低；和/或抑制包含含有sun结构域的蛋白质和含有kash结构域的蛋白的linc复合物的功能/活性。
411、在一些实施方案中，本公开的治疗性/预防性干预可以被描述为与前述段落中描述的一种或多种效果“相关”。本领域技术人员能够容易地使用本领域常规实践的技术来评估这种性质。
412、本公开的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞和组合物的给药优选以“治疗有效”或“预防有效”的量，这足以显示对受试者的治疗或预防益处。实际给药量、给药率和给药时间将取决于疾病/病症的性质和严重程度以及给药的特定物品。治疗处方，如剂量决定等，由全科医生和其他医生负责，通常会考虑到要治疗的疾病/病症、个体受试者的状况、分娩地点、给药方法和医生已知的其他因素。上述技术和方案的例子可以在雷明顿的“药学的科学与实践”(ed.a.adejare)，第23版(2020年)，学术出版社。
413、在优选实施方案中，给药是核酸/载体，或包含根据本公开的核酸/载体的组合物。在优选实施方案中，给药导致一个或多个细胞的修饰以包含/表达核酸/载体，和/或包含/表达本公开的linc复合物抑制多肽。
414、本公开的制品的给药可以是例如肠外、全身、局部、腔内、血管内、静脉内、动脉内、肌内、鞘内、眼内、结膜内、肿瘤内、皮下、皮内、口服或透皮给药。给药方式可以是注射、输液或摄入。
415、在一些方面和实施方案中，本公开的制品可以给药于目标的组织/器官(例如，受疾病/病症影响的组织/脏器(例如，表现出疾病/病症症状的组织/器官))。在一些方面和实施方案中，本公开的制品可以通过注射或输注(例如经由套管)施用到血液中(即静脉内/动脉内施用)，或者可以皮下或口服施用。
416、在根据本公开的一些方面和实施方案中，可以有针对性地递送本公开的物质，即，其中在给定的组织/器官中，相对于身体的其他部位，受试者中相关药剂的浓度增加。在一些实施方案中，所述方法包括血管内(例如静脉内或动脉内)、肌内或皮下给药，并且其中相关制品在靶向药物递送系统中配制(例如如上所述)
417、具体的给药模式和/或给药部位可以根据需要linc复合物抑制的位置来选择，例如心脏和/或骨骼肌细胞/组织。
418、在一些实施方案中，本公开的治疗性或预防性干预可以进一步包括给予用于治疗/预防相关疾病/病症的另一种药剂。
419、本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞和组合物的给药可以单独给药，也可以与其他治疗联合给药，同时或依次地给药，取决于待治疗的条件。同时给药是指与另一种治疗剂一起给药，例如作为含有两种药物的药物组合物(联合制剂)，或在彼此之后立即给药，并任选地通过相同的给药途径(例如对相同的组织、动脉、静脉或其他血管)给药。顺序给药是指在给定的时间间隔后给药一种制剂，然后单独给药另一种制剂。不要求通过相同的途径给药这两种药剂，尽管在一些实施方案中是这种情况。时间间隔可以是任何时间间隔。
420、可以提供多剂量的本公开的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞和组合物。一种或多种剂量，或每种剂量，可以同时或顺序给予另一种治疗剂。
421、多个剂量可以通过预定的时间间隔分开，该时间间隔可以选择为1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天或31天中的一个，或者选择为1个月、2个月、3个月、4个月、5个月或6个月。例如，可以每7天、14天、21天或28天(加上或减去3天、2天或1天)给药一次。
422、在一些实施方案中，本公开的方法可以包括确定受试者是否患有本文所述的疾病。在一些实施例中，所述方法包括诊断本文所述的疾病。确定受试者是否患有本文所述的疾病可以包括分析受试者的疾病的一个或多个症状/相关性。
423、在一些实施方案中，例如基于在受试者中或受试者的细胞/组织/器官中存在指示疾病的其他症状，可以怀疑受试者患有或患有疾病。在一些实施方案中，受试者可能被认为有发展该疾病的风险，例如因为该疾病的遗传易感性或其他风险因素。
424、在一些实施方案中，所述方法包括确定受试者是否具有本文所述基因的突变。在一些实施方案中，所述方法包括检测本文所述基因的突变。
425、本文所述基因突变的测定可以证实诊断或疑似诊断，或者可以证实受试者有发展疾病的风险。该测定可以诊断疾病或疾病易感性，用于用本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物进行治疗/预防。
426、遗传因子可以通过本领域普通技术人员已知的方法进行测定，包括基于pcr的测定和测序测定。通过确定遗传因子的存在，例如在从受试者获得的样品中，可以确认诊断，和/或可以将受试者分类为有发展本文所述疾病的风险，和/或者可以将受检者鉴定为适合用本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物进行治疗。
427、可以在体外对从受试者获得的样品进行分析，或者在对从受检者获得的样本进行处理之后进行分析。从受试者身上获得的样本可以是任何种类的。生物样品可以取自任何组织或体液，例如血液样品、源自血液的样品、血清样品、淋巴样品、精液样品、唾液样品、滑液样品。血液来源的样品可以是患者血液的选定部分，例如选定的含细胞部分或血浆或血清部分。样品可以包括组织样品或活组织检查；或从受试者分离的细胞。
428、在一些实施方案中，所述方法包括确定受试者是否包括lmna、lmnb1、lmnb2、emd、lap2、lbr、zmpste24、syne-1和nup62中的一种或多种的等位基因突变。在一些实施方案中，所述方法包括确定受试者是否包括对lmna、lmnb1和lmnb2中的一种或多种的等位基因的突变。在一些实施方案中，所述方法包括确定受试者是否包括lmna等位基因的突变。在一些实施方案中，所述方法包括确定受试者是否包括ldlr等位基因的突变。
429、在这样的实施方案中，突变的检测可以将受试者鉴定为要给予本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物的受试者。因此，在一些实施方案中，所述方法包括选择被确定为包含lmna、lmnb1、lmnb2、emd、lap2、lbr、zmpste24、syne-1和nup62中的一种或多种突变的受试者，用于与本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物一起给药。在一些实施方案中，所述方法包括选择被确定为包含lmna、lmnb1和lmnb2中的一种或多种突变的受试者，用于与本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物一起给药。在一些实施方案中，所述方法包括选择被确定为包含lmna突变的受试者，以与本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物一起给药。在一些实施方案中，所述方法包括选择被确定为包含ldlr突变的受试者，以与本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物一起给药。
430、在一些实施方案中，所述方法包括测试从怀疑患有疾病的受试者获得的样品是否存在至少一种lmna突变；其中所述至少一种lmna突变的存在指示将给予所述受试者本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物。
431、受试者
432、本公开的各个方面的主题可以是任何动物或人类。治疗和预防应用可以用于人类或动物(兽医用途)。要用本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物治疗的受试者可以是需要其的受试对象。受试者优选为哺乳动物，更优选为人类。受试者可以是非人类哺乳动物，但更优选是人类。受试者可能是男性或女性。受试者可能是一名患者。
433、受试者可能已被诊断出患有本文所述的疾病或病症，可能被怀疑患有这种疾病/病症，或者可能有发展/感染这种疾病/状况的风险。在本公开的实施方案中，可以根据基于这种疾病/病症的某些标志物的表征的方法来选择受试者进行治疗。
434、在一些实施方案中，受试者包括根据上文描述的任何实施方案的突变。在一些实施方案中，受试者包括引起本文所述疾病/病症(例如核纤层蛋白病)的突变。
435、试剂盒
436、在本公开的一些方面中，提供了一个试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒可以具有至少一个容器，该容器具有预定量的本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物。
437、在一些实施方案中，试剂盒可包含用于产生本文所述的linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物的材料。
438、该试剂盒可以提供linc复合物抑制多肽、核酸、载体、细胞或组合物以及用于给药给患者以治疗特定疾病/病症的说明书。
439、在一些实施方案中，试剂盒可以进一步包括具有预定量的另一种治疗剂的至少一个容器。在这样的实施方案中，试剂盒还可以包括第二药物或药物组合物，使得这两种药物或药物组成可以同时或单独给药，使得它们提供针对特定疾病或病症的联合治疗。
440、本公开的试剂盒可以包括使用说明书，例如说明书或传单的形式。指令可以包括用于执行本文所描述的方法中的任何一个或多个方法的协议。
441、序列同一性
442、用于确定两个或多个氨基酸或核酸序列之间的同一性百分比的成对和多序列比对可以以本领域技术人员已知的各种方式实现，例如，使用公知的计算机软件如clustalomega(j.2005，bioinformations21951-960)、t-offee(notredame等人.2000年，j.mol.生物学.(2000)302205-217)、kalign(lassmann和sonnhammer 2005，bmc生物信息学，6(298))和mafft(katoh和standley 2013，分子生物学和进化，30(4)772-780)软件。当使用这样的软件时，优选地使用默认参数，例如空位罚分和扩展罚分。
443、序列
444、
445、
446、
447、
448、
449、
450、
451、
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454、
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457、
458、
459、
460、编号的段落
461、以下编号的段落(段落)提供了结合本发明设想的特征和特征组合的进一步陈述：
462、1.一种编码linc复合物抑制多肽的核酸，其中所述linc复合物抑制多肽包含：(i)抑制区，包含对应于cc2区的α3螺旋和含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列，和(ii)内质网滞留基序；
463、并且其中所述linc复合物抑制多肽不包含seq id no:43、45或58中任一个的氨基酸序列。
464、2.根据第1段所述的核酸，其中所述linc复合物抑制多肽的抑制区基本上不由seqid no:44或46的氨基酸序列组成。
465、3.根据第1段或第2段所述的核酸，其中所述linc复合物抑制多肽的抑制区基本上不由seq id no：49、50、51、52、53、54、55、56、57、59、60、61或62中任一个氨基酸序列组成。
466、4.根据第1-3段中任一项所述的核酸，其中所述linc复合物抑制多肽的抑制区基本上由与seq id no:63、64、65、66、67、68或94之一的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
467、5.根据第1-4段中任一项所述的核酸，其中所述linc复合物抑制多肽包含或基本上由与seq id no:69、70、71、72、73、74或95之一的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
468、6.根据第1-5段中任一项所述的核酸，其中所述linc复合物抑制多肽包括信号肽。
469、7.根据第1-6段中任一项所述的核酸，其中所述核酸是适于递送编码linc复合物抑制多肽的核酸用于基因治疗的载体。
470、8.根据第7段所述的核酸，其中所述载体是腺相关病毒(aav)载体。
471、9.一种linc复合物抑制多肽，包括：(i)抑制区，包含对应于cc2区的α3螺旋和含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列，和(ii)内质网滞留基序；
472、并且其中所述linc复合物抑制多肽不包含seq id no:43或45的氨基酸序列。
473、10.根据第9段所述的linc复合物抑制多肽，其中所述linc复合物抑制多肽的抑制区基本上不由seq id no:44或46的氨基酸序列组成。
474、11.根据第9段或第10段所述的linc复合物抑制多肽，其中所述linc复合物抑制多肽的抑制区基本上不由seq id no：49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62。
475、12.根据第9-11段中任一项所述的linc复合物抑制多肽，其中所述linc复合物抑制多肽的抑制区基本上由与seq id no:63、64、65、66、67、68或94之一的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
476、13.根据第9-12段中任一项所述的linc复合物抑制多肽，其中所述linc复合物抑制多肽包含或基本上由与seq id no:69、70、71、72、73、74或95之一的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列组成。
477、14.根据第9-13段中任一项所述的linc复合物抑制多肽，其中所述linc复合物抑制多肽包括信号肽。
478、15.一种鉴定linc复合物抑制多肽的方法，包括：
479、引入编码候选linc复合物抑制多肽的核酸，其中所述候选linc复合物抑制多肽包含对应于含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列；和
480、随后分析细胞以确定含有sun结构域的蛋白质的相互作用伴侣的亚细胞定位；
481、当检测到含有sun结构域的蛋白质的相互作用伴侣的亚细胞定位的变化时，候选linc复合物抑制多肽被确定为linc复合物抑制多肽。
482、16.一种鉴定linc复合物抑制多肽的方法，包括：
483、引入编码候选linc复合物抑制多肽的核酸，其中所述候选linc复合物抑制多肽包含对应于含有kash结构域的蛋白质的kash结构区的氨基酸序列；和
484、随后分析细胞以确定含有kash结构域的蛋白质的相互作用伴侣的亚细胞定位；
485、当检测到含有kash结构域的蛋白质的相互作用伴侣的亚细胞定位的变化时，候选的linc复合物抑制多肽被确定为linc复合物抑制多肽。
486、17.根据第15段或第16段所述的方法，当检测到定位于内质网的含有sun/kash结构域的蛋白质的相互作用伴侣的比例增加时，候选linc复合物抑制多肽被确定为linc复合物抑制多肽。
487、18.一种linc复合物抑制多肽，其通过根据第15至17段中任一项所述的方法鉴定。
488、19.一种核酸，其编码根据第9-14段或第18段中任一项所述的linc复合物抑制多肽。
489、20.一种包含第19段所述核酸的载体，其中所述载体是适于递送编码linc复合物抑制多肽的核酸用于基因治疗的载体。
490、21.根据第20段所述的载体，其中所述载体是腺相关病毒(aav)载体。
491、22.一种细胞，其包含根据第1-8段或第19段中任一项所述的核酸、根据第9-14段或第18段中任一项所述的linc复合物抑制多肽、或根据第20段或第21段所述的载体。
492、23.一种药物组合物，其包含根据第1-8段或第19段中任一项所述的核酸、根据第9-14段或第18段中任一项所述的linc复合物抑制多肽、根据第20段或第21段所述的载体或根据第22段所述的细胞。
493、24.根据第1-8段或第19段中任一项所述的核酸、根据第9-14段或第18段中任一段所述的linc复合物抑制多肽、根据第20段或第21段所述的载体、根据第22段所述的细胞或根据第23段所述的药物组合物的使用，用于医疗或预防的方法。
494、25.根据第1至8段或第19段中任一项所述的核酸、根据第9至14段或第18段中任一项所述的linc复合物抑制多肽、根据第20段或第21段所述的载体、根据第22段所述的细胞或根据第23段所述的药物组合物的使用，用于治疗或预防核纤层蛋白病的方法。
495、26.根据第1-8段或第19段中任一项所述的核酸、根据第9-14段或第18段中任一项所述的linc复合物抑制多肽、根据第20段或第21段所述的载体、根据第22段所述的细胞或根据第23段所述的药物组合物在制备用于治疗或预防核纤层蛋白病的药物中的用途。
496、27.一种治疗或预防核纤层蛋白病的方法，包括向受试者施用治疗或预防有效量的根据第1-8段或第19段中任一项所述的核酸、根据第9-14段或第18段中任一项所述的linc复合物抑制多肽、根据第20段或第21段所述的载体、根据第22段所述的细胞或根据第23段所述的药物组合物。
497、28.根据第25段所述的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物的使用、根据第26段所述的用途或根据第27段所述的方法，其中所述核纤层蛋白病的特征在于一种或多种肌病、心肌病、扩张型心肌病、肌营养不良、心肌营养不良、骨骼肌营养不良、早衰症、神经病变、脂肪萎缩、骨骼发育不良、脂肪营养不良、白质营养不良或皮肤病。
498、29.根据第25至28段中任一项所述的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物的使用、用途或方法，其中所述核纤层蛋白病与lmna突变相关。
499、30.根据第25至29段中任一项所述的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物的使用、用途或方法，其中所述核纤层蛋白病选自：哈钦森-吉尔福德早衰综合征；扩张型心肌病；肌肉营养不良，先天性，lmna相关；emery dreifuss肌营养不良2型，常染色体显性；肌肉营养不良；下颌骨发育不良伴a型脂营养不良；扩张型心肌病，1a；腓骨肌萎缩症；四肢围带肌营养不良；扩张型心肌病伴高促性腺功能减退；emery dreifuss肌肉营养不良3型，常染色体隐性遗传；脂营养不良，家族性部分性，2型；emery dreifuss肌肉营养不良；腓骨肌萎缩症，轴索型，2b1型；心手综合征，斯洛文尼亚型；变老家族性部分性脂营养不良；限制性皮肤病，致命；致心律失常性右心室心肌病；牙病；心脏病；维尔纳综合征；肥厚型心肌病；左心室不充盈；房室传导阻滞；钙化；肢端骨溶解；常染色体显性肢环肌营养不良；糖尿病，非胰岛素依赖型；骨质疏松症；心房颤动；心房静止1；黑棘皮病；心传导缺陷；儿茶酚胺能多态性室性心动过速；下颌骨发育不全、耳聋、前体特征和脂营养不良综合征；病态窦房结综合征；pelger huet异常；腓骨肌萎缩症，轴索型，2e型；先天性广泛性脂营养不良；限制性心肌病；先天性纤维型比例失调；脂营养不良，先天性全身性，1型；肌纤维性肌病；脂营养不良，家族性部分性，1型；轴索神经病变；非典型沃纳综合征；卵巢囊腺瘤；范可尼贫血，补体a组；体重指数定量性状位点11；皮肤病；强直性脊柱肌肉营养不良1例；神经肌肉疾病；hallermann streiff综合征；bethlem肌病1；获得性全身性脂营养不良；扩张型心肌病，1e；脂营养不良，先天性全身性，4型；未分化多形性肉瘤；脂营养不良，家族性部分性，3型；肌肉营养不良，先天性肌肽缺乏，1a；脊髓近端肌肉萎缩；肌肉营养不良多糖障碍，b型，5；先天性肌营养不良，1b；雷诺兹综合征；wiedemann-rautenstrauch综合征；emery dreifuss肌营养不良1，x连锁；脂营养不良，先天性全身性，2型；单基因糖尿病；扩张型心肌病，1d；近视、近端和眼麻痹；肌肉组织疾病；脂营养不良，家族性部分性，4型；扩张型心肌病，1h；二度房室传导阻滞；正中神经病变；内源性心肌病；女性生殖器官脱垂；完全性全身性脂营养不良；强直性脊柱肌肉营养不良；紧急情况；尺神经损伤；肢环肌营养不良1b型；lmna相关扩张型心肌病；骨盆肌肉损耗；广泛性脂营养不良相关孕激素综合征；肌肉疾病；扩张型心肌病，1b；常染色体遗传病；家族性孤立性致心律失常性心室发育不良，右显性；家族性孤立性致心律失常性心室发育不良，双心室型；家族性孤立性致心律失常性心室发育不良，左显性；lmna相关的心皮早衰综合征；和常染色体半显性重度脂营养不良层病变。
500、31.根据第1-8段或第19段中任一项所述的核酸、根据第9-14段或第18段中任一项所述的linc复合物抑制多肽、根据第20段或第21段所述的载体、根据第22段所述的细胞或根据第23段所述的药物组合物用于治疗或预防以高脂血症为特征的疾病的方法。
501、32.根据第1-8段或第19段中任一项所述的核酸、根据第9-14段或第18段中任一项所述的linc复合物抑制多肽、根据第20段或第21段所述的载体、根据第22段所述的细胞或根据第23段所述的药物组合物在制备用于治疗或预防以高脂血症为特征的疾病的药物中的用途。
502、33.一种治疗或预防以高脂血症为特征的疾病的方法，包括向受试者施用治疗或预防有效量的根据第1-8段或第19段中任一项所述的核酸、根据第9-14段或第18段中任一项所述的linc复合物抑制多肽、根据第20段或第21段所述的载体、根据第22段所述的细胞或根据第23段所述的药物组合物。
503、34.根据第31段所述的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物的使用、根据第32段所述的用途或根据第33段所述的方法，其中以高脂血症为特征的疾病选自动脉粥样硬化、心血管疾病、中风和家族性高脂血症。
504、***
505、本发明包括所描述的方面和优选特征的组合，除非这种组合是明显不允许或明确避免的。
506、此处使用的章节标题仅用于组织目的，不得解释为限制所述主题。
507、现在将参考附图以示例的方式说明本公开的各方面和实施例。其他方面和实施例对于本领域技术人员来说将是显而易见的。本文中提及的所有文件均通过引用并入本文。
508、在整个说明书中，包括随后的权利要求书，除非上下文另有要求，否则“包含(comprise)”一词以及诸如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”的变体将被理解为意味着包含所述整数、步骤或整数或步骤的组，而不排除任何其他整数、步骤、整数或步骤的组。
509、必须注意的是，在说明书和所附权利要求中使用的单数形式“a”、“an”和“the”包括复数引用，除非上下文另有明确规定。在此，范围可以表示为从“大约”一个特定值，和/或到“大约”另一特定值。当表达这样的范围时，另一个实施例包括从一个特定值和/或到另一个特定的值。类似地，当值被表示为近似值时，通过使用先行词“约”，将理解为特定值形成另一个实施例。
510、在本文公开核酸序列的情况下，也明确考虑其反向互补序列。
511、本文所述的方法可以在体外或体内进行。在一些实施方案中，本文所述的方法在体外进行。术语“体外”旨在涵盖培养中细胞的实验，而术语“体内”旨在涵盖完整的多细胞生物体的实验。
1.一种编码linc复合物抑制多肽的核酸，其中所述linc复合物抑制多肽包含：(i)包含对应于cc2区的α3螺旋和含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列的抑制区，和(ii)内质网滞留基序；
2.根据权利要求1所述的核酸，其中所述linc复合物抑制多肽的抑制区基本上由以下组成：
3.根据权利要求1或权利要求2所述的核酸，其中所述linc复合物抑制多肽包含或基本上由以下组成：
4.根据权利要求1-3中任一项所述的核酸，其中所述linc复合物抑制多肽包括信号肽。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的核酸，其中所述核酸是适于递送编码linc复合物抑制多肽的核酸用于基因治疗的载体。
6.根据权利要求5所述的核酸，其中所述载体是腺相关病毒(aav)载体。
7.一种linc复合物抑制多肽，包括：(i)包含对应于cc2区的α3螺旋和含有sun结构域的蛋白质的sun结构区的氨基酸序列的抑制区，和(ii)内质网滞留基序；
8.根据权利要求7所述的linc复合物抑制多肽，其中所述linc复合物抑制剂多肽的抑制区基本上由以下组成：
9.根据权利要求7或权利要求8所述的linc复合物抑制多肽，其中所述linc复合物抑制多肽包含或基本上由以下组成：
10.根据权利要求7-9中任一项所述的linc复合物抑制多肽，其中所述linc复合物抑制多肽包含信号肽。
11.一种鉴定linc复合物抑制多肽的方法，包括：
12.一种鉴定linc复合物抑制多肽的方法，包括：
13.根据权利要求11或权利要求12所述的方法，其中检测到定位于内质网的含有sun/kash结构域的蛋白质的相互作用伴侣的比例增加时，候选linc复合物抑制多肽被确定为linc复合物抑制剂多肽。
14.一种linc复合物抑制多肽，其通过根据权利要求11-13中任一项所述的方法鉴定。
15.一种核酸，其编码根据权利要求7-10或权利要求14中任一项所述的linc复合物抑制多肽。
16.一种包含根据权利要求15所述的核酸的载体，其中所述载体是适于递送编码linc复合物抑制多肽的核酸用于基因治疗的载体。
17.根据权利要求16所述的载体，其中所述载体是腺相关病毒(aav)载体。
18.一种细胞，其包含根据权利要求1-6或权利要求15中任一项所述的核酸、根据权利要求7-10或权利要求14中任一项所述的linc复合物抑制多肽、或根据权利要求16或权利要求17所述的载体。
19.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-6或权利要求15中任一项所述的核酸、根据权利要求7-10或权利要求14中任一项所述的linc复合物抑制多肽、根据权利权利要求16或权利要求17所述的载体或根据权利要求18所述的细胞。
20.根据权利要求1-6或权利要求15中任一项所述的核酸、根据权利要求7-10或权利要求14中任一项所述的linc复合物抑制多肽、根据权利要求16或权利要求17所述的载体、根据权利要求18所述的细胞或根据权利要求19所述的药物组合物用于药物治疗或预防的方法。
21.根据权利要求1-6或权利要求15中任一项所述的核酸，根据权利要求7-10或权利要求14中任一项所述的linc复合物抑制多肽、根据权利要求16或权利要求17所述的载体、根据权利权利要求18所述的细胞或根据权利要求19所述的药物组合物用于治疗或预防核纤层蛋白病的方法。
22.根据权利要求1-6或权利要求15中任一项所述的核酸、根据权利要求7-10或权利要求14中任一项所述的linc复合物抑制多肽、权利要求16或权利要求17所述的载体、权利要求18所述的细胞或权利要求19所述的药物组合物在制备用于治疗或预防核纤层蛋白病的药物中的用途。
23.一种治疗或预防核纤层蛋白病的方法，包括向受试者施用治疗或预防有效量的根据权利要求1-6或权利要求15中任一项所述的核酸、根据权利要求7-10或权利要求14中任一项所述的linc复合物抑制多肽、根据权利要求16或权利要求17所述的载体、根据权利要求18所述的细胞或根据权利要求19所述的药物组合物。
24.根据权利要求21所述的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物的使用、根据权利要求22所述的用途或根据权利要求23所述的方法，其中所述核纤层蛋白病的特征在于肌病、心肌病、扩张型心肌病、肌营养不良、心肌营养不良、骨骼肌营养不良症、早衰症、神经病变、脂肪萎缩、骨骼发育不良、脂肪营养不良、白质营养不良或皮肤病中的一种或多种。
25.根据权利要求21-24中任一项所述的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物的使用、用途或方法，其中所述核纤层蛋白病与lmna突变相关。
26.根据权利要求21-25中任一项所述的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物的使用、用途或方法，其中所述核纤层蛋白病选自：哈钦森-吉尔福德早衰综合征；扩张型心肌病；肌肉营养不良，先天性，lmna相关；emery dreifuss肌营养不良2型，常染色体显性；肌肉营养不良；下颌骨发育不良伴a型脂营养不良；扩张型心肌病，1a；腓骨肌萎缩症；四肢围带肌营养不良；扩张型心肌病伴高促性腺功能减退；emery dreifuss肌肉营养不良3型，常染色体隐性遗传；脂营养不良，家族性部分性，2型；emery dreifuss肌肉营养不良；腓骨肌萎缩症，轴索型，2b1型；心手综合征，斯洛文尼亚型；衰老；家族性部分性脂营养不良；限制性皮肤病，致死；致心律失常性右心室心肌病；牙病；心脏病；维尔纳综合征；肥厚型心肌病；左心室不充盈；房室传导阻滞；钙化；肢端骨溶解；常染色体显性肢环肌营养不良；糖尿病，非胰岛素依赖型；骨质疏松症；心房颤动；心房静止1；黑棘皮病；心传导缺陷；儿茶酚胺能多态性室性心动过速；下颌骨发育不全、耳聋、前体特征和脂营养不良综合征；病态窦房结综合征；pelger huet异常；腓骨肌萎缩症，轴索型，2e型；先天性全身脂营养不良；限制性心肌病；先天性纤维型比例失调；先天性全身脂营养不良，1型；肌纤维性肌病；家族性部分脂营养不良，1型；轴索神经病变；非典型沃纳综合征；卵巢囊腺瘤；范可尼贫血，补体a组；体重指数定量性状位点11；皮肤病；强直性脊柱肌肉营养不良1例；神经肌肉疾病；颅面骨畸形综合征；bethlem肌病1；获得性全身性脂营养不良；扩张型心肌病，
27.根据权利要求1-6或权利要求15中任一项所述的核酸，根据权利要求7-10或权利要求14中任一项所述的linc复合物抑制多肽、根据权利要求16或权利要求17所述的载体、根据权利权利要求18所述的细胞或根据权利要求19所述的药物组合物用于治疗或预防以高脂血症为特征的疾病的方法。
28.根据权利要求1-6或权利要求15中任一项所述的核酸、根据权利要求7-10或权利要求14中任一项所述的linc复合物抑制多肽、权利要求16或权利要求17所述的载体、权利要求18所述的细胞或权利要求19所述的药物组合物在制备用于治疗或预防以高脂血症为特征的疾病的药物中的用途。
29.一种治疗或预防以高脂血症为特征的疾病的方法，包括向受试者施用治疗有效量或预防有效量的根据权利要求1-6或权利要求15中任一项的核酸、根据权利要求7-10或权利要求14中任一项所述的linc复合物抑制多肽、如权利要求16或权利要求17所述的载体、根据权利权利要求18所述的细胞或根据权利要求19所述的药物组合物。
30.根据权利要求27所述的核酸、linc复合物抑制多肽、载体、细胞或药物组合物的使用、根据权利要求28所述的用途或根据权利要求29所述的方法，其中以高脂血症为特征的疾病选自动脉粥样硬化、心血管疾病、中风和家族性高脂血症。
