本发明属于生物医药，具体涉及一种透明质酸枝接囊素三肽聚合物及其制备方法和应用。
背景技术：
1、囊素三肽是来源于禽腔上囊的三肽(lys-his-gly-nh2)，研究表明其不仅对禽类具有免疫增强作用，还能够提高哺乳动物的体液免疫和细胞免疫水平。但是，当囊素三肽用于疫苗时，免疫增强作用并不能让人满意。
2、透明质酸，结构如图1，是一种带负电的天然线性多糖，由葡萄糖醛酸和n-乙酰基-d-氨基葡萄糖双糖通过β(1，4)糖苷键反复交替连接构成，透明质酸具有无毒性、无免疫原性、可生物降解、生物相容性好、可修饰等优点，富含可化学修饰改性的羧基和羟基等功能基团。
3、现有技术中缺乏高效的兽用疫苗免疫增强剂。
技术实现思路
1、基于上述问题，本发明的目的是提供一种透明质酸枝接囊素三肽聚合物，可以作为兽用疫苗免疫增强剂，可诱导免疫动物分泌高水平抗体。
2、本发明的另一目的是提供所述透明质酸枝接囊素三肽聚合物的制备方法，该方法简单，成本低廉。
3、本发明的再一目的是提供透明质酸枝接囊素三肽聚合物作为免疫增强剂在兽用灭活疫苗中的应用，可诱导免疫动物分泌高水平抗体。
4、本发明的目的采用如下技术方案实现：
5、一种透明质酸枝接囊素三肽聚合物，是透明质酸与囊素三肽通过酰胺键连接形成的。
6、本发明还提供所述透明质酸枝接囊素三肽聚合物的制备方法，包括如下步骤：
7、(1)透明质酸和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺，在搅拌条件下反应；
8、(2)在步骤(1)反应后所得溶液中加入n-羟基琥珀酰亚胺，在搅拌条件下反应；
9、(3)在步骤(2)反应后所得溶液中加入囊素三肽，在搅拌条件下反应，得到透明质酸枝接囊素三肽聚合物。
10、在本发明中，步骤(1)中，将透明质酸溶于水性溶剂后，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺进行反应；所述水性溶剂为ph5.5-7的缓冲溶液；透明质酸在水性溶剂中的质量百分浓度为0.01％～10％。
11、在本发明中，透明质酸的平均分子质量为20～200kda，优选为40-60kda。
12、在本发明中，步骤(1)中，透明质酸中的羧基与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺的摩尔比为1:1～10，优选为1:3-5；反应时间为15min～6h，优选为1-3h。
13、在本发明中，透明质酸中的羧基与n-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:1～10，优选为1:4-7；步骤(2)中的反应时间为1～24h，优选为2-18h。
14、在本发明中，透明质酸中的羧基与囊素三肽的摩尔比为1:0.1～1:8，优选为1:0.3-2；步骤(3)中所述反应在ph 5～10的缓冲溶液中进行，优选ph为7-7.5；步骤(3)中反应时间为12～48h，优选为14-18h。
15、在本发明中，步骤(3)中反应结束后，进行透析、浓缩和冻干处理。
16、本发明还提供所述透明质酸枝接囊素三肽聚合物作为疫苗增强剂的应用。
17、在本发明中，将所述透明质酸枝接囊素三肽聚合物溶于抗原溶液，再与1313佐剂以体积比1:0.8-1.2混合，乳化，得灭活疫苗。
18、本发明相对于现有技术的有益效果：本发明使用高聚物透明质酸对囊素三肽进行化学修饰，在edc/nhs的作用下，使透明质酸的羧基与囊素三肽的氨基发生酰胺化反应，形成透明质酸枝接囊素三肽聚合物，制备方法简单，高效，成本低。透明质酸枝接囊素三肽聚合物能够更高效地进入腹股沟淋巴结，促进tfh细胞的分化，辅助筛选分泌高亲和力免疫球蛋白的b细胞，诱导其转化为浆细胞，分泌高水平抗体。
1.一种透明质酸枝接囊素三肽聚合物，是透明质酸与囊素三肽通过酰胺键连接形成的。
2.权利要求1所述透明质酸枝接囊素三肽聚合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于步骤(1)中，将透明质酸溶于水性溶剂后，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺进行反应；所述水性溶剂为ph5.5-7的缓冲溶液；透明质酸在水性溶剂中的质量百分浓度为0.01％～10％。
4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于透明质酸的平均分子质量为20～200kda，优选为40-60kda。
5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于步骤(1)中，透明质酸中的羧基与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺的摩尔比为1:1～10，优选为1:3-5；反应时间为15min～6h，优选为1-3h。
6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于透明质酸中的羧基与n-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:1～10，优选为1:4-7；步骤(2)中的反应时间为1～24h，优选为2-18h。
7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于透明质酸中的羧基与囊素三肽的摩尔比为1:0.1～1:8，优选为1:0.3-2；步骤(3)中所述反应在ph 5～10的缓冲溶液中进行，优选ph为7-7.5；步骤(3)中反应时间为12～48h，优选为14-18h。
8.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于步骤(3)中反应结束后，进行透析、浓缩和冻干处理。
9.权利要求8所述透明质酸枝接囊素三肽聚合物作为疫苗增强剂的应用。
10.根据权利要求9所述应用，其特征在于将所述透明质酸枝接囊素三肽聚合物溶于抗原溶液，再与1313佐剂以体积比1:0.8-1.2混合，乳化，得灭活疫苗。
