本申请涉及化学发光免疫检测，尤其涉及游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法。
背景技术：
1、三碘甲状腺原氨酸(3，5，3’-triiodothyronine，t3)为酪氨酸含碘衍生物。血浆中99％以上的t3都和血浆蛋白可逆结合，主要与甲状腺素结合球蛋白(thyroxine bindingglobulin，tbg)结合，亦有部分和清蛋白、前清蛋白结合。仅有占血浆0.1％-0.3％的t3是游离的，只有游离t3才能进入靶细胞发挥作用。ft3可以通过细胞膜与受体结合发挥生理效应，因此它是甲状腺激素发生生理效应的真正活性部分，能较确切地反映甲状腺的功能状态及其他对人体机能的影响，所以ft3的水平比t3更能真正反映甲状腺的功能状态。
2、目前检测样品中ft3多采用包被或标记t3类似物的方法。标记t3类似物的方法中，要求类似物与所测激素具有充分的化学相似性，即类似物要具有与t3抗体结合的活性，并且结合能力应与t3分子相同或相近，但却没有与tbg(甲状腺素结合球蛋白)及thbp等结合蛋白的结合活性，或者虽然有结合活性，但结合能力远远低于与t3抗体结合的能力。此外包被t3类似物的方法中，为提高包被效率，因小分子抗原因结构和空间位阻的因素，在进行磁珠包被之前是通常先连接上牛血清白蛋白(bsa)或鸡卵清白蛋白(ova)，制作成抗原和大分子的结合物，此过程比较繁琐，成本较高，且批间差不好控制。
3、因此，在测定游离t3的过程中，结合态的t3对测定存在干扰。样品中t3的结合部分与游离部分处于一种动态平衡状态，而且结合部分的t3浓度远大于游离部分的浓度，与蛋白结合的t3浓度为ft3浓度的3000-5000倍。测定时，抗体结合游离t3就会对这种平衡造成微扰，体系要重新建立平衡，即结合的t3要解离一部分变成游离的，这样的结果是增加了游离激素的总量。因此本领域技术人员在检测过程中需要使结合t3对测定的干扰减少到最低水平，用以提高试剂盒准确度。
技术实现思路
1、本申请旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本申请的目的在于提出游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，使用t3类似物直接包被，不需要制作t3抗原衍生物，制备工艺更简单，成本更低；使用抑制剂或变性剂，降低与甲状腺球蛋白结合的三碘甲状腺原氨酸对试剂盒检测结果的影响，准确度更高。
2、根据本申请的第一个方面提出了游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光检测试剂盒，所述试剂盒包括：试剂mp、试剂ae以及试剂r2；所述试剂mp为含有t3类似物包被的固相载体混悬液；所述试剂ae为含有吖啶酯标记的t3抗体缓冲液；所述试剂r2为含有抑制剂或变性剂的缓冲液。
3、在一些实施例中，含有t3类似物包被的固相载体为羧基磁珠。
4、在一些实施例中，所述t3类似物为3,5-二碘-l-酪氨酸，d-3,5-二碘酪氨酸，2-碘-l-酪氨酸或2-碘-d-酪氨酸中的一种。
5、在一些实施例中，还包括用于稀释所述试剂mp的第一稀释液和用于稀释所述试剂ae的第二稀释液。
6、在一些实施例中，所述第一稀释液包括50mm ph为7的tris-nacl、浓度为3％的bsa、浓度为1％的蔗糖、浓度为0.1％的proclintm 300以及浓度为0.1％的氨基比林；其中所述羧基磁珠的使用浓度为0.1-0.5mg/ml。
7、在一些实施例中，所述第二稀释液包括50mm ph为6.5的柠檬酸盐缓冲液、浓度为1％的bsa、浓度为0.1％的proclintm 300以及浓度为0.1％的氨基比林；吖啶酯标记物的稀释比例为1000-50000：1。
8、在一些实施例中，所述抑制剂为维甲酸，全反式维甲酸，4-羟苯基维甲酸中的至少一种，所述的变性剂为γ-干扰素。
9、在一些实施例中，所述抑制剂的浓度为0.1-1mg/ml；所述变性剂的浓度为0.1-1mg/ml。
10、根据本申请的第二个方面提出了游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，制备上述任一实施例中所述的试剂盒，包括：
11、试剂mp的制备：包括将固相载体依次洗涤、活化，再洗涤得到处理后的固相载体；将t3类似物预处理后加入到处理后的所述固相载体中室温包被3小时；用封闭液将包被过的所述固相载体封闭至少4次，每次至少10分钟；
12、试剂ae的制备：取t3抗体并稀释至终浓度为0.1mg/ml后加入吖啶酯以标记比例抗体：吖啶酯为10：1，震荡并避光反应30分钟；终止反应后将反应液纯化即可。
13、在一些实施例中，t3类似物预处理方法为：取t3类似物溶解于二甲基亚砜或二甲基亚酰胺中，并加入二(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯，室温反应30分钟。
14、在一些实施例中，所述固相载体的活化方法为：将浓度为10mg/ml的edc、10mg/ml的nhs溶液先后加入清洗后的固相载体中，室温下震荡混匀30分钟。
15、在一些实施例中，所述反应液纯化方法为：将所述反应液经过葡聚糖凝胶g-25柱纯化。
16、本申请提出了游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法，具有以下优点：
17、本申请采用磁微粒直接包被t3类似物的方式，不需要制备t3抗原衍生物，制备工艺更简单，成本更低，稳定性更好；在试剂盒中加入抑制剂或变性剂，抑制剂会抑制甲状腺球蛋白的活性，防止甲状腺球蛋白发生分解产生三碘甲状腺原氨酸，变性剂会使甲状腺球蛋白变性失活，降低与甲状腺球蛋白结合的三碘甲状腺原氨酸对试剂盒检测结果的影响，准确度更高。
18、本申请附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本申请的实践了解到。
1.游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：试剂mp、试剂ae以及试剂r2；所述试剂mp为含有t3类似物包被的固相载体混悬液；所述试剂ae为含有吖啶酯标记的t3抗体缓冲液；所述试剂r2为含有抑制剂或变性剂的缓冲液。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，含有t3类似物包被的固相载体为羧基磁珠。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述t3类似物为3,5-二碘-l-酪氨酸，d-3,5-二碘酪氨酸，2-碘-l-酪氨酸或2-碘-d-酪氨酸中的一种。
4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于稀释所述试剂mp的第一稀释液和用于稀释所述试剂ae的第二稀释液。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述第一稀释液包括50mm ph为7的tris-nacl、浓度为3%的bsa、浓度为1%的蔗糖、浓度为0.1%的proclin™ 300以及浓度为0.1%的氨基比林；其中所述羧基磁珠的使用浓度为0.1-0.5mg/ml。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述第二稀释液包括50mm ph为6.5的柠檬酸盐缓冲液、浓度为1%的bsa、浓度为0.1%的proclin™ 300以及浓度为0.1%的氨基比林；吖啶酯标记物的稀释比例为1000-50000:1。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述抑制剂为维甲酸，全反式维甲酸，4-羟苯基维甲酸中的至少一种，所述的变性剂为γ-干扰素；所述抑制剂的浓度为0.1-1mg/ml；所述变性剂的浓度为0.1-1mg/ml。
8.游离三碘甲状腺原氨酸磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，其特征在于，制备权利要求1-7中任一所述的试剂盒，包括：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，t3类似物预处理方法为：取t3类似物溶解于二甲基亚砜或二甲基亚酰胺中，并加入二（磺基琥珀酰亚胺）辛二酸酯，室温反应30分钟。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述固相载体的活化方法为：将浓度为10mg/ml的edc、10mg/ml的nhs溶液先后加入清洗后的固相载体中，室温下震荡混匀30分钟；所述反应液纯化方法为：将所述反应液经过葡聚糖凝胶g-25柱纯化。
