本发明涉及生物，具体涉及含有干细胞外泌体的抗衰组合物及其制备方法和在化妆品中的应用。
背景技术：
1、衰老，指生物发育成熟后，在正常状况下机体随着年龄增加，出现机能减退、内环境稳定能力下降、结构组分逐渐退行性改变并趋向死亡的不可逆自然现象。如何科学抗衰老，延缓衰老相关疾病的发生发展成为许多人关心的热点。
2、外泌体是指包含了复杂rna和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。外泌体中含有丰富的物质，如细胞因子、生长因子、脂类、mrnas及调控型mirnas，主要参与细胞与细胞间的交流通讯及改变组织的微环境，在调节靶细胞通讯、免疫反应、细胞再生和分化等方面起着不可低估的作用。天然抗氧化剂能减少细胞内生物大分子(如dna、蛋白质、脂质)的氧化攻击，从而保护细胞的结构和功能完整性。肽类是人体重要生理调节物，可全面调节人体生理功能，激发细胞与胶原蛋白新生，有效抗击衰老。因此，外泌体、天然抗氧化剂、多肽等常常作为抗衰老的成分。但是，上述成分稳定性较差，降低了其在抗衰老方面的生物利用度，导致其抗衰老效果不佳。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种含有干细胞外泌体的抗衰组合物及其制备方法和在化妆品中的应用，本发明将外泌体、棕榈酰四肽-7和虾青素相结合，在抗衰老方面具有协同的效果，并且通过本发明的制备方法可增强活性成分的稳定性，提高生物利用度，提升了组合物的抗衰老效果。
2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
3、本发明提供了一种含有干细胞外泌体抗衰组合物的制备方法，包括：将棕榈酰四肽-7和虾青素配置成溶液后，与表面活性剂混合，得到混合溶液；将干细胞外泌体与所述混合溶液混合孵育后，与保护剂混合搅拌，用无菌滤膜过滤，得到所述抗衰组合物。
4、优选的，所述干细胞外泌体为牛脐带间充质干细胞外泌体，所述表面活性剂为吐温80或泊洛沙姆101；所述保护剂为海藻糖或壳聚糖。
5、优选的，所述牛脐带间充质干细胞外泌体的制备方法，包括：在低氧条件下培养牛脐带间充质干细胞，收集上清液，通过差速超速离心方法分离，得到干细胞外泌体。
6、更优选的，所述培养的条件为35-40℃、25-35rpm、3％-8％co2、3％-7％o2。
7、优选的，所述差速离心包括：将上清液依次在200-500g条件下，离心8-6min；在1800-2200g条件下，离心25-35min；在11000-13000g条件下，离心25-35min；过滤后，将滤液在110000-130000g条件下，离心3-5h，弃上清。
8、优选的，所述孵育的温度为35-40℃，转速为75-85rpm，时间为10-14h。
9、优选的，所述混合溶液中棕榈酰四肽-7的浓度为2-4mg/ml，所述虾青素的浓度为2-4mg/ml；所述干细胞外泌体的浓度为450-550μg/ml；所述混合溶液和干细胞外泌体的体积比为1-3:1-3。
10、优选的，所述无菌滤膜的孔径为0.2-0.45μm。
11、本发明还提供了上述制备方法得到的含有干细胞外泌体的抗衰组合物。
12、本发明还提供了上述的抗衰组合物在制备抗衰老化妆品中的应用。
13、相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：
14、本发明提供了一种含有干细胞外泌体的抗衰组合物，包括：干细胞外泌体、棕榈酰四肽-7、虾青素、表面活性剂和保护剂。本发明通过孵育过程将干细胞外泌体对棕榈酰四肽-7和虾青素进行包裹，再将保护剂对包裹棕榈酰四肽-7和虾青素的干细胞外泌体进行包裹，增强了棕榈酰四肽-7、虾青素和干细胞外泌体的稳定性和生物利用度。本发明制备方法有效防止了干细胞外泌体中活性成分泄露，提高了棕榈酰四肽-7和虾青素的包载率和载药率，充分发挥了干细胞外泌体、棕榈酰四肽-7、虾青素三者的优势，干细胞外泌体具有易于透过细胞膜的特点，将棕榈酰四肽-7和虾青素包裹后，有利于棕榈酰四肽-7和虾青素进入细胞发挥作用，在抗衰老方面起到了协同的效果。
15、实验结果表明，本发明添加的表面活性剂和保护剂能显著提高棕榈酰四肽-7和虾青素的荷载率；本发明抗衰组合物能显著降低黑色素瘤细胞活力和酪氨酸酶的活性，并使黑色素含量下降；本发明抗衰组合物能显著提高d-半乳糖诱导的大鼠衰老模型中羟脯氨酸和透明质酸的含量，并提高血浆中sod和gsh-px的活力，并抑制mda的升高，具有优良的抗衰老效果。
1.一种含有干细胞外泌体抗衰组合物的制备方法，其特征在于，包括：将棕榈酰四肽-7和虾青素配置成溶液后，与表面活性剂混合，得到混合溶液；将干细胞外泌体与所述混合溶液混合孵育后，与保护剂混合搅拌，用无菌滤膜过滤，得到所述抗衰组合物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述干细胞外泌体为牛脐带间充质干细胞外泌体，所述表面活性剂为吐温80或泊洛沙姆101；所述保护剂为海藻糖或壳聚糖。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述牛脐带间充质干细胞外泌体的制备方法，包括：在低氧条件下培养牛脐带间充质干细胞，收集上清液，通过差速超速离心方法分离，得到干细胞外泌体。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述培养的条件为35-40℃、25-35rpm、3％-8％co2、3％-7％o2。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述差速离心包括：将上清液依次在200-500g条件下，离心8-6min；在1800-2200g条件下，离心25-35min；在11000-13000g条件下，离心25-35min；过滤后，将滤液在110000-130000g条件下，离心3-5h，弃上清。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述孵育的温度为35-40℃，转速为75-85rpm，时间为10-14h。
7.根据权利要1所述的制备方法，其特征在于，所述混合溶液中棕榈酰四肽-7的浓度为2-4mg/ml，所述虾青素的浓度为2-4mg/ml；所述干细胞外泌体的浓度为450-550μg/ml；所述混合溶液和干细胞外泌体的体积比为1-3:1-3。
8.根据权利要1所述的制备方法，其特征在于，所述无菌滤膜的孔径为0.2-0.45μm。
9.权利要求1-8任意一项所述制备方法得到的含有干细胞外泌体的抗衰组合物。
10.权利要求9所述的抗衰组合物在制备抗衰老化妆品中的应用。
