本发明涉及单细胞测序，特别是涉及一种单细胞测序仪器验证模拟试剂盒及其使用方法。
背景技术：
1、高通量单细胞测序技术在当今生物医学研究中占据重要位置。但无论是基于哪种技术的单细胞测序技术，都需要试剂盒和仪器的配套使用。然而，它的市场推广和广泛应用对设备的性能和稳定性提出了更高要求。现有的仪器生产过程，除了中间过程检测等步骤，对仪器本身性能的检测外，通常需要使用真实试剂，完成完整的实验流程，进行反复测试，以验证仪器与试剂的配合上的各项性能。而这不仅耗费大量资源，而且增加了验证成本和时间。此外，在生产前期，对设备的验证过程高昂的成本也阻碍了许多小型设备制造商的发展，因此，寻找一种能够模拟真实实验环境且具有高效性和经济性的模拟试剂盒就显得尤为重要。
技术实现思路
1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种单细胞测序仪器验证模拟试剂盒及其使用方法，用于解决现有单细胞测序仪器验证采用真实试剂盒耗费大量资源，加大验证成本和验证时间的问题。
2、为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种单细胞测序仪器验证模拟试剂盒，包括模拟微球、模拟细胞相、模拟反转录试剂和模拟液滴生成油，所述模拟微球不含有捕获寡聚核苷酸（以下简称oligo），所述模拟反转录试剂中不含有活性酶，所述模拟细胞相中不含有细胞。
3、现有技术中，真实的单细胞测序仪器验证试剂盒中含有特殊修饰的捕获寡聚核苷酸、活性酶，为了测试数据的准确度，必须保证上述组分的结构稳定和活性，上述物质一般需要在-80或-20℃下储存，对储存环境要求较高；同时为了保证细胞活性，试剂盒需要在4℃冰上化冻使用。本申请提出的单细胞测序仪器验证模拟试剂盒，模拟微球不含有捕获寡聚核苷酸，模拟反转录试剂中不含有活性酶，另外，模拟细胞相中不含有细胞，因此可以实现室温下储存和使用。
4、oligo即寡核苷酸链，分子实验室常用的pcr引物、ngs捕获探针、qpcr探针和fish探针等都是寡核苷酸。除了引物探针以外，还可作为核酸药物用于遗传疾病、肿瘤、病毒感染和感觉器官等疾病的治疗或预防。作为优选，所述模拟微球为不含有捕获寡聚核苷酸的水凝胶微球。
5、作为优选，所述水凝胶微球的粒径通常在几微米到几百微米范围内，粒径均一，如5μm~800mm。
6、作为优选，所述模拟细胞相由以下质量百分含量的组分组成：75~85%的磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline，以下简称pbs），10~20%的密度梯度培养基（optiprep，以下简称opt）和2~5%的聚乙二醇。
7、作为优选，所述模拟反转录试剂包括模拟反转录引物、模拟反转录缓冲液和模拟反转录酶混合液。
8、作为优选，所述模拟反转录引物为浓度为10~15 mm的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐（ tris-hcl）和浓度为0.1~0.2 mm的 edta的混合物。
9、作为优选，所述模拟反转录缓冲液包括以下组分：75~100mm ph为8. 3的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐（tris-hcl），150~200mm kcl，5~7mm mgcl2，20~25mm dtt，0.1~0.25vol %非离子表面活性剂和2~5mmdntp mix溶液。其中，0.1~0.25 vol %非离子表面活性剂指的是非离子表面活性剂在模拟反转录缓冲液中的体积分数为0.1~0.25 vol %。
10、更优选地，所述dntp mix溶液是datp，dctp， dgtp 和dttp等摩尔核酸混合液，每一种核酸溶液的终浓度为25 mm。
11、更优选地，所述模拟反转录酶混合液包括以下组分：10~15mm edta；30~40mmnacl，15~20mm ph为7.5的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐tris-hcl，5 ~10mm ph为8.0的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐tris-hcl，0.003~0.05 vol % 非离子表面活性剂， 3~5mm dtt，30~55 vol % 甘油，10~15mm kcl，20~30 vol %聚乙二醇。作为优选，所述聚乙二醇优选为peg600。
12、更优选地，所述非离子表面活性剂为ca630。
13、本发明通过添加peg600、甘油增稠剂和调节液体成分，实现与真实试剂相近的密度；通过添加peg600、甘油黏稠剂，使试剂在使用过程中表现出与真实试剂近似的粘度；通过添加非离子表面活性剂ca630这个关键成分保证在测序过程中与真实试剂相似的化学反应特性。
14、作为优选，所述模拟液滴生成油为氟化表面活性剂，具体可采用hfe7500氟化油。
15、以氟化液hfe-7500作为基底油，和矿物油相比，具有低粘度、与pdms相容性好、低液滴间迁移、良好的气体溶解性、长期生物相容性等优点。此外，氟化表面活性剂对于油水界面的稳定有良好效果，使用本产品制备的液滴可稳定存放数周。
16、本申请还提供给了一种单细胞测序仪器验证模拟试剂盒用于验证单细胞测序仪器的用途。
17、本申请还提供了一种单细胞测序仪器验证模拟试剂盒的使用方法，配套高通量单细胞仪器使用，包括以下步骤：将上述单细胞测序仪器验证模拟试剂盒的各组分加入到高通量单细胞仪器的芯片中，运行所述高通量单细胞仪器，对运行结果进行质检。
18、如上所述，本发明的单细胞测序仪器验证模拟试剂盒及其使用方法，具有以下有益效果：
19、（1）提供了一种用于高通量单细胞测序仪器生产验证的模拟试剂盒，该试剂盒能够在物理和化学性质上高度仿真真实试剂，确保在验证过程中达到与实际使用环境相符的测试效果，从而降低验证成本并提高验证效率；
20、（2）提供了一种可以室温储存的模拟试剂盒，即区别于真实实验试剂常常需要低温保存、不易运输的特质，本试剂盒的常温保存和运输大大降低了成本，也是一种客户可以用于练手的试剂盒；
21、（3）本试剂盒的使用操作简单，相较于真实试剂盒中繁复的试剂组分，模拟试剂盒通过试剂性能选择、测试后，将可以合并的试剂放置于同一试剂管中；缩短了验证时间，提高了验证效率，使得生物技能薄弱的相关人员经过简单培训后，也能熟练使用本试剂盒。
1.一种单细胞测序仪器验证模拟试剂盒，其特征在于，包括模拟微球、模拟细胞相、模拟反转录试剂和模拟液滴生成油，所述模拟微球不含有捕获寡聚核苷酸，所述模拟反转录试剂中不含有活性酶，所述模拟细胞相中不含有细胞。
2.根据权利要求1所述的单细胞测序仪器验证模拟试剂盒，其特征在于：所述模拟微球为不含有捕获寡聚核苷酸的水凝胶微球。
3.根据权利要求1所述的单细胞测序仪器验证模拟试剂盒，其特征在于：所述模拟细胞相由以下质量百分含量的组分组成：75~85%的磷酸盐缓冲盐水，10~20%的密度梯度培养基和2~5%的聚乙二醇。
4.根据权利要求1所述的单细胞测序仪器验证模拟试剂盒，其特征在于：所述模拟反转录试剂包括模拟反转录引物、模拟反转录缓冲液和模拟反转录酶混合液。
5.根据权利要求4所述的单细胞测序仪器验证模拟试剂盒，其特征在于：所述模拟反转录引物为浓度为10~15 mm的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐和浓度为0.1~0.2 mm的edta的混合物。
6.根据权利要求4所述的单细胞测序仪器验证模拟试剂盒，其特征在于：模拟反转录缓冲液包括以下组分：75~100mm ph为8.3的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐，150~200mm kcl，5~7mm mgcl2，20~25mm dtt，0.1~0.25vol%非离子表面活性剂和2~5mm dntp mix溶液。
7.根据权利要求4所述的单细胞测序仪器验证模拟试剂盒，其特征在于：所述模拟反转录酶混合液包括以下组分：10~15mm edta；30~40mm nacl，15~20mm ph为7.5的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐，5~10mm ph为8.0的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐，0.003~0.05vol% 非离子表面活性剂，3~5mm dtt，30~55vol%甘油，10~15mm kcl，20~30vol%聚乙二醇。
8.根据权利要求1所述的单细胞测序仪器验证模拟试剂盒，其特征在于：所述模拟液滴生成油为氟化表面活性剂。
9.一种如权利要求1~8任意一项所述的单细胞测序仪器验证模拟试剂盒用于验证单细胞测序仪器的用途。
10.一种如权利要求1~8任意一项所述的单细胞测序仪器验证模拟试剂盒的使用方法，其特征在于：配套高通量单细胞仪器使用，包括以下步骤：将单细胞测序仪器验证模拟试剂盒的各组分加入到高通量单细胞仪器的芯片中，运行所述高通量单细胞仪器，对运行结果进行质检。
