本发明涉及细胞培养，尤其涉及一种神经干细胞体外诱导方法。
背景技术：
1、脐带间充质干细胞(uc-mscs)是存在于脐带华通胶组织中的一种多能成体干细胞，具有自我更新和多向分化能力，还具有重要的免疫调节功能和旁分泌效应。uc-mscs被广泛用于治疗各种神经系统疾病。大量数据显示，uc-mscs能跨胚层分化为神经元和胶质细胞。
2、中国专利cn101831401a公开了一种体外诱导间充质干细胞分化为神经干细胞的方法，在添加了bfgf、成纤维细胞生长因子fgf8、shh和白血病抑制因子lif的dmem/df-12培养体系中预诱导间充质干细胞；在添加了bfgf、fgf8和shh的无血清neurobasal medium培养体系中将预诱导的细胞定向分化为神经干细胞。该发明诱导分化率高且易于向神经元分化，能够减少胶质疤痕的形成，更利于移植应用。
3、中国专利cn103031275a公开了一种脐带间充质干细胞(uc-mscs)分化为神经干细胞的诱导方法，所述诱导方法包括如下步骤：uc-mscs的分离、原代培养，uc-mscs的传代培养与扩增，uc-mscs体外诱导转化为神经干细胞，神经干细胞的分化培养以及免疫荧光法检测。该发明的诱导方法应用全反式维甲酸联合碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)、表皮生长因子(egf)诱导脐带间充质干细胞分化为神经干细胞，经分裂增殖多次传代后仍然保持较强的活力。反式维甲酸联合细胞因子诱导uc-mscs转化为神经干细胞，实现了间充质细胞跨胚层分化为非间充质细胞的能力，使其有可能成为今后临床应用更为理想的种子细胞。
4、然而，现有技术中存在神经干细胞存活率低及分化效率较低的问题。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种神经干细胞体外诱导方法，能够有效提升神经干细胞的诱导成活率和分化效率。
2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
3、本发明提供了一种神经干细胞体外诱导方法，包括以下步骤：
4、s1、将人脐带间充质干细胞接种至预诱导培养基，进行预诱导培养；
5、s2、将s1所得细胞转入定向诱导培养基，进行定向诱导培养；
6、s3、将s2所得细胞转入传代培养基，传代培养得到神经干细胞；
7、所述定向诱导培养基和所述传代培养基中含有胰岛素。
8、优选的，所述胰岛素在所述定向诱导培养基中的终浓度为0.005～0.02mg/ml。
9、优选的，所述胰岛素在所述传代培养基中的终浓度为0.005～0.02mg/ml。
10、优选的，所述预诱导培养的时间为5～10天。
11、优选的，所述预诱导培养基中包含以下终浓度的组分：
12、30～80ng/ml bfgf、80～120ng/ml egf、400～600ng/ml shh和5～15ng/ml lif。
13、优选的，所述定向诱导培养的时间为15～30天。
14、优选的，步骤s2中，所述定向诱导培养还包括向所述定向诱导培养基中补加胰岛素；
15、所述定向诱导培养中胰岛素的补加方案为0.3～0.8mg/次/d。
16、优选的，步骤s3中，所述传代培养还包括向所述传代培养基中补加胰岛素；
17、所述传代培养中胰岛素的补加方案为1.5～2.5mg/次/d。
18、优选的，所述定向诱导培养基中包含以下终浓度的组分：1～3％ n2/b27添加剂、30～80ng/ml bfgf、80～120ng/ml egf和400～600ng/ml shh。
19、优选的，所述传代培养基中包含以下终浓度的组分：1～3％ n2/b27添加剂、30～80ng/ml bfgf和80～120ng/ml egf。
20、优选的，s1中所述培养的条件为：
21、培养温度：35～39℃、co2浓度为3～8％；
22、和/或，s2中所述培养的条件为：
23、培养温度：35～39℃、co2浓度为3～8％；
24、和/或，s3中所述培养的条件为：
25、培养温度：35～39℃、co2浓度为3～8％。
26、本发明的有益效果：
27、本发明在神经干细胞的诱导培养过程中将胰岛素作为培养基成分，结合特定的诱导方案，能够成功使uc-mscs被有效诱导形成神经干细胞球样结构，在神经干细胞诱导过程中加入胰岛素后，uc-mscs聚集成细胞团块数量明显增多，并且通过本发明得到的次级神经球形成情况良好，通过本发明得到的uc-mscs来源神经球具有优异的自我更新能力和分化能力。
1.一种神经干细胞体外诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的神经干细胞体外诱导方法，其特征在于，所述胰岛素在所述定向诱导培养基中的终浓度为0.005～0.02mg/ml。
3.根据权利要求1所述的神经干细胞体外诱导方法，其特征在于，所述胰岛素在所述传代培养基中的终浓度为0.005～0.02mg/ml。
4.根据权利要求1所述的神经干细胞体外诱导方法，其特征在于，所述预诱导培养的时间为5～10天。
5.根据权利要求1所述的神经干细胞体外诱导方法，其特征在于，所述预诱导培养基中包含以下终浓度的组分：
6.根据权利要求1所述的神经干细胞体外诱导方法，其特征在于，所述定向诱导培养的时间为15～30天；
7.根据权利要求1所述的神经干细胞体外诱导方法，其特征在于，步骤s3中，所述传代培养还包括向所述传代培养基中补加胰岛素；
8.根据权利要求1所述的神经干细胞体外诱导方法，其特征在于，所述定向诱导培养基中包含以下终浓度的组分：1～3％n2/b27添加剂、30～80ng/ml bfgf、80～120ng/ml egf和400～600ng/ml shh。
9.根据权利要求1所述的神经干细胞体外诱导方法，其特征在于，所述传代培养基中包含以下终浓度的组分：1～3％n2/b27添加剂、30～80ng/ml bfgf和80～120ng/ml egf。
10.根据权利要求1～9任一项所述的神经干细胞体外诱导方法，其特征在于，s1中所述培养的条件为：
