本发明涉及细胞培养，尤其涉及一种胰岛β细胞的体外诱导方法。
背景技术：
1、糖尿病是影响人类健康的主要疾病之一，胰岛β细胞功能下降所导致的胰岛素分泌不足、糖代谢案乱是糖尿病的重要原因，在研究发病机理的同时，研究胰岛细胞的功能状态是其中的重要部分。目前诸多试验证明，胰岛β细胞替代疗法—胰岛β细胞移植是治愈糖尿病的有效方法。但是由于糖尿病患者数量巨大，细胞来源问题有待解决。干细胞作为一类具有多向分化潜能的细胞，可成为胰岛β细胞替代物的理想资源。
2、中国专利cn113583938a公开了一种体外诱导干细胞分化的胰岛细胞形成胰岛样结构的方法，包括以下步骤：原料组织分离培养得到间充质干细胞；所得间充质干细胞传代培养；对所得传代间充质干细胞进行诱导分化，分化为胰岛样细胞，该发明采用特定的诱导培养基(含有β细胞素、egf、尼克酰胺、人碱性成纤维细胞生长因子)及前处理、诱导培养步骤，能够快速高效体外诱导干细胞分化的胰岛细胞形成胰岛样结构。
3、但是现有技术中的胰岛β细胞诱导方案的诱导率、产品细胞质量有待进一步提升。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种胰岛β细胞的体外诱导方法，能够提升胰岛β细胞的诱导率和产品细胞质量。
2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
3、本发明提供了一种胰岛β细胞的体外诱导方法，包括以下步骤：
4、s1、将人脐带间充质干细胞接种至初期诱导培养基，进行第一阶段诱导培养；
5、s2、将s1所得细胞转入中期诱导培养基，进行第二阶段诱导培养；
6、s3、将s2所得细胞转入后期诱导培养基，进行第三阶段诱导培养，得到胰岛β细胞；
7、所述初期诱导培养基中含有2-巯基乙醇水溶液。
8、优选的，所述初期诱导培养基中，2-巯基乙醇水溶液的体积百分浓度为0.5～2％。
9、优选的，所述2-巯基乙醇水溶液的初始体积百分浓度为0.02％～0.04％。
10、优选的，所述后期诱导培养基中含有艾塞那肽。
11、优选的，所述后期诱导培养基中，艾塞那肽的终浓度为30～80nmol/l。
12、优选的，所述后期诱导培养基中还包含以下终浓度的组分：
13、10～20mmol/l尼克酰胺、5～15μg/l bfgf和5～7％生长因子。
14、优选的，所述中期诱导培养基中包含以下终浓度的组分：
15、80～120μg/lβ-神经生长因子、3～5nmol/l activina、20～30μg/l表皮生长因子、1～3％ b27补充剂和5～7％生长因子。
16、优选的，所述第一阶段诱导培养的时间为1～4天；
17、所述第二阶段诱导培养的时间为5～10天；
18、所述第三阶段诱导培养的时间为5～10天。
19、优选的，s1中，所述人脐带间充质干细胞的接种密度为5×104～5×105个/孔；
20、和/或，所述人脐带间充质干细胞为传代培养第3代的人脐带间充质干细胞。
21、优选的，所述初期诱导培养基采用无血清培养基作为基础培养基；
22、所述中期诱导培养基采用无血清培养基作为基础培养基；
23、所述后期诱导培养基采用无血清培养基作为基础培养基。
24、本发明的有益效果：
25、本发明采用特定的三步诱导方案，能够利用人脐带间充质干细胞成功诱导得到胰岛β细胞，并且促进所获得的胰岛β细胞的增殖和存活情况，在提升诱导率的同时进一步优化产品细胞质量。
1.一种胰岛β细胞的体外诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的胰岛β细胞的体外诱导方法，其特征在于，所述初期诱导培养基中，2-巯基乙醇水溶液的体积百分浓度为0.5～2％。
3.根据权利要求2所述的胰岛β细胞的体外诱导方法，其特征在于，所述2-巯基乙醇水溶液的初始体积百分浓度为0.02％～0.04％。
4.根据权利要求1所述的胰岛β细胞的体外诱导方法，其特征在于，所述后期诱导培养基中含有艾塞那肽。
5.根据权利要求4所述的胰岛β细胞的体外诱导方法，其特征在于，所述后期诱导培养基中，艾塞那肽的终浓度为30～80nmol/l。
6.根据权利要求4所述的胰岛β细胞的体外诱导方法，其特征在于，所述后期诱导培养基中还包含以下终浓度的组分：
7.根据权利要求1所述的胰岛β细胞的体外诱导方法，其特征在于，所述中期诱导培养基中包含以下终浓度的组分：
8.根据权利要求1所述的胰岛β细胞的体外诱导方法，其特征在于，所述第一阶段诱导培养的时间为1～4天；
9.根据权利要求1所述的胰岛β细胞的体外诱导方法，其特征在于，s1中，所述人脐带间充质干细胞的接种密度为5×104～5×105个/孔；
10.根据权利要求1～9任一项所述的胰岛β细胞的体外诱导方法，其特征在于，所述初期诱导培养基采用无血清培养基作为基础培养基；
