本发明涉及蓝莓培育，特别涉及一种蓝莓叶片离体再生体系的构建方法。
背景技术：
1、蓝莓的营养和经济价值较高；蓝莓富含维生素、矿物质、花青素及其他抗氧化物质，具有提高人体免疫力、软化血管、抗癌强心、明目护肝功效，被联合国粮食及农业组织列为“人类五大健康食品之一”；由于营养价值高、口感独特、酸甜适宜，蓝莓深受消费者喜爱，市场需求大，具有较好经济发展前景。
2、我国蓝莓产业发展迅猛，育种工作亟待加强。近些年国内蓝莓种植面积逐年增加；2020年我国蓝莓总种植面积已达到6.64万公顷，总产量约34.72万吨，鲜果产量23.47万吨，超过美国成为全球最大的蓝莓生产国；我国蓝莓商业化栽培始于2000年，现有蓝莓栽培品种主要来自国外，缺乏自主研发品种；培育具有我国特色优质蓝莓新品种，是发展蓝莓产业和参与国际市场竞争的迫切需要。
3、影响蓝莓组织培养的因素复杂，主要分为内在因素和外在因素；内在因素主要是基因型和取材部位等，外在因素主要是培养基类型、植物生长调节剂的选用和外界环境等；基础培养基种类繁多，不同组织培养过程适宜的种类和浓度有较大差异，因此不同物种、基因型和用途的组织培养均需探索最佳培养条件。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种蓝莓叶片离体再生体系的构建方法，具有愈伤诱导率高、出芽率高、生根率高的技术效果。
2、本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
3、一种蓝莓叶片离体再生体系的构建方法，包括以下步骤：
4、(1)取蓝莓生长健壮且一致的无菌组培苗嫩叶，横切成两段接种于生芽培养基中，置于组织培养箱培养，培养温度(25±1)℃，黑暗培养10天，之后转移到光照条件下，培养20天陆续生芽；
5、(2)步骤(1)得到的不定芽继续光照条件下培养40天后，将其从叶片愈伤上切下，并将其茎段下端伤口处在300mg/l iba溶液中浸蘸5s，再接种到生根培养基中，置于组织培养箱培养，培养温度(25±1)℃，光照条件下培养60天陆续生根；
6、(3)将步骤(2)得到的再生苗，移栽到人工气候箱培养，培养温度(25±1)℃，光照条件下培养两个月，然后筛选生长状况良好的蓝莓苗移栽至室温条件下培养一周炼苗，之后移栽至室外栽培。
7、作为本发明的进一步设置，在步骤(1)中，所述生芽培养基为wpm+2.0mg/l zt+0.05mg/l iba+30g/l蔗糖+7g/l琼脂粉，ph为5.2-5.4。
8、作为本发明的进一步设置，在步骤(2)中，所述生根培养基为1/2wpm+1.5mg/l iba+0.01mg/l naa+0.5g/l活性炭+25g/l蔗糖+7g/l琼脂粉。
9、作为本发明的进一步设置，在步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)中，所述光照条件为光照强度12000lx，光照时间16h/d。
10、作为本发明的进一步设置，在步骤(1)中，所述蓝莓的品种为奥尼尔。
11、本发明的有益效果是：
12、1.本发明采用蓝莓叶片接种于生芽培养基中，先黑暗培养10天诱导愈伤组织，然后再光照20天诱导再生不定芽，相比于直接诱导再生不定芽，通过暗培诱导愈伤组织再诱导再生不定芽能够明显提高生芽率，通过对叶片愈伤诱导率和生芽率进行统计分析，愈伤诱导率为95.38％，生芽率为86.67％；同时通过本发明方法得到的不定芽极少叶片褐化，淡绿色愈伤，量多且状态良好，叶片卷曲拱起，愈伤及叶片表面有大量丛芽，长势快，芽呈现翠绿色。
13、2.本发明蓝莓再生不定芽的生根率高，培养第60d生根率达到61.54％。
14、3.本发明将不定芽的茎段下端伤口处浸蘸在高浓度的iba溶液中，能够明显提高不定芽的生根率。
15、4.本发明所采用的蓝莓品种为奥尼尔；不同品种蓝莓的基因型存在差异，蓝莓不同品种叶片离体再生差异大，基因型是影响蓝莓组织培养的主要因素之一，本发明通过大量的探索试验选择的蓝莓品种为奥尼尔，相比于现有的其他品种，具有更高的愈伤诱导率、出芽率以及生根率。
1.一种蓝莓叶片离体再生体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.据权利要求1所述的一种蓝莓叶片离体再生体系的构建方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述生芽培养基为wpm+2.0mg/l zt+0.05mg/l iba+30g/l蔗糖+7g/l琼脂粉，ph为5.2-5.4。
3.据权利要求1所述的一种蓝莓叶片离体再生体系的构建方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述生根培养基为1/2wpm+1.5mg/liba+0.01mg/l naa+0.5g/l活性炭+25g/l蔗糖+7g/l琼脂粉。
4.据权利要求1所述的一种蓝莓叶片离体再生体系的构建方法，其特征在于：在步骤(1)、步骤(2)和步骤(3)中，所述光照条件为光照强度12000lx，光照时间16h/d。
5.据权利要求1所述的一种蓝莓叶片离体再生体系的构建方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述蓝莓的品种为奥尼尔。
