本发明涉及血液制品，具体为一种高纯度犬血白蛋白的制备方法。
背景技术：
1、随着宠物犬进入千家万户，宠物犬的保健问题引起广泛的关注。犬血白蛋白的主要生理功能为调节渗透压和在新陈代谢中充当重要的物质运输载体，其适应症非常广泛，常用作血溶扩充剂代替输血，可提高血浆胶体渗透压，增加血容量，用于治疗因失血、创伤及烧伤等引起的休克、脑水肿及大脑损伤所致的颅内压增高，对防治低蛋白血症以及肝硬化或肾病引起的水肿或腹水有较好的疗效。目前由犬血浆制备犬血白蛋白的方法主要为基于cohn‑oncley法或kistler‑nitschmann法为主的低温乙醇工艺。
2、公开号为cn1648134a的中国专利公开了一种制备犬血白蛋白的低温乙醇工艺，所述工艺步骤包括：血浆的合并与融化、经过四次离心对上清液进行处理去除杂蛋白后得到沉淀的白蛋白、超滤和巴氏灭活后分装得到犬血白蛋白。现今多数血液制品生产厂家均按照此方法制备犬血白蛋白，然而，上述方法分离步骤多、分离周期长、工艺复杂且全程要求低温环境，而制品纯度却不高。以中国药典规定的方法对国内市售的犬血白蛋白产品进行检测，纯度在90％左右，多聚体含量≥6％；但是上述现有技术方案中，所制备的犬血白蛋白纯度较低，从而会对制品的稳定性和临床应用的安全性造成不良影响；为此，本发明提供了以解决上述问题一种高纯度犬血白蛋白的制备方法。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种高纯度犬血白蛋白的制备方法，解决了上述背景技术中提到的问题。
2、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种高纯度犬血白蛋白的制备方法，具体制备方法为：
3、s1、以健康犬血清或血浆为原料，进行离心，收取上清液；
4、s2、采用阴离子交换层析柱对上清液进行层析分离后，利用与s/d试剂接触的s/d方法，对上清液进行病毒灭活处理；
5、s3、对灭活后的上清液进行阳离子交换层析；
6、s4、再使用10～50kda的超滤膜或中空纤维超滤后换凝胶层析；
7、s5、层析后的上清液通过dv20纳米膜除去病毒，超滤浓缩换液至犬血白蛋白浓度为10.0±0.2g/dl，即得高纯度犬血白蛋白。
8、所述s1中，离心温度为2～8℃，离心转速为8000～12000r/min，离心时间为20～40min。
9、优选的，所述s2中，层析分离的方法为：
10、（1）将阴离子交换层析用生理盐水平衡，直至流出液的ph和离子强度与上清液相同；
11、（2）将上清液用缓冲液稀释后上样；
12、（3）上样结束后用缓冲液对阴离子交换层析柱进行冲洗；
13、（4）冲洗完成后用缓冲液洗脱层析柱，收集洗脱液。
14、优选的，所述（3）中，冲洗流速为0.5～1ml/min。
15、优选的，所述s2中，病毒灭活在25～40℃的温度下进行，并在4～6h内完成。
16、优选的，所述s3中，阳离子交换层析的方法具体包括：将灭活后的洗脱液泵入平衡后的阳离子交换层析柱，然后采用洗脱缓冲液进行洗脱，并收集洗脱液。
17、优选的，所述洗脱液的流速为1～3ml/min。
18、优选的，所述s4中，凝胶层析采用葡聚糖凝胶g-25层析柱。
19、优选的，所述s5中，超滤浓缩换液为采用ph8.6±0.1磷酸盐缓冲溶液进行超滤换液。
20、有益效果
21、本发明提供了一种高纯度犬血白蛋白的制备方法。与现有技术相比具备以下有益效果：
22、（1）、该高纯度犬血白蛋白的制备方法，通过采用犬血浆离心分离后的上清液为原料进行层析处理，与传统的低温乙醇沉淀工艺比较，减少了对后续组分进行低温乙醇沉淀、深层过滤和沉淀溶解等分离步骤，缩短了工艺时间，也减少了的犬血白蛋白损耗，提高了犬血白蛋白的活性、收率。
23、（2）、该高纯度犬血白蛋白的制备方法，通过阴离子交换层析、阳离子交换层析、超滤浓缩以及超滤换夜浓缩等，可有效去除制品中的多种大分子及小分子杂质蛋白，提高了制品纯度，经该方法处理得到的犬血白蛋白纯度高至少为99.9％以上，极大地提高了应用的安全性。
1.一种高纯度犬血白蛋白的制备方法，其特征在于，具体制备方法为：
2.根据权利要求1所述的一种高纯度犬血白蛋白的制备方法，其特征在于：所述s2中，层析分离的方法为：
3.根据权利要求2所述的一种高纯度犬血白蛋白的制备方法，其特征在于：所述（3）中，冲洗流速为0.5～1ml/min。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度犬血白蛋白的制备方法，其特征在于：所述s2中，病毒灭活在25～40℃的温度下进行，并在4～6h内完成。
5.根据权利要求1所述的一种高纯度犬血白蛋白的制备方法，其特征在于：所述s3中，阳离子交换层析的方法具体包括：将灭活后的洗脱液泵入平衡后的阳离子交换层析柱，然后采用洗脱缓冲液进行洗脱，并收集洗脱液。
6.根据权利要求5所述的一种高纯度犬血白蛋白的制备方法，其特征在于：所述洗脱液的流速为1～3ml/min。
7.根据权利要求1所述的一种高纯度犬血白蛋白的制备方法，其特征在于：所述s4中，凝胶层析采用葡聚糖凝胶g-25层析柱。
8.根据权利要求1所述的一种高纯度犬血白蛋白的制备方法，其特征在于：所述s5中，超滤浓缩换液为采用ph8.6±0.1磷酸盐缓冲溶液进行超滤换液。
