与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记及应用
技术领域
1.本发明涉及分子遗传育种技术领域，特别涉及一种与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记及应用。
背景技术：2.不结球白菜(brassica campestris ssp.chinensis makino)属于十字花科芸薹属白菜种的一个亚种，一年生或二年生草本，染色体组aa，染色体数2n＝20。原产于中国，由于其适应性强，生长周期短，营养丰富等特点，深受消费者喜爱，在世界各地广泛栽培。
3.不结球白菜主要以营养器官(叶)或生殖器官(薹)为产品，所以抽薹早晚对生物产量、食用价值和商品性都会产生巨大影响，为了保证不结球白菜生产的经济效益，不结球白菜抽薹时间非常关键，而在不结球白菜的相关研究中关于开花抽薹调控的部分却不多。
4.公开号为cn113755623a的专利文献公开了一组不结球白菜早抽薹的分子标记引物及其应用，属于分子生物学技术领域，该文献以不结球白菜dna为模板，通过聚合酶链式反应扩增该片段，根据目的条带的有无，可筛选出不结球白菜早抽薹品种或材料；其提供的分子标记引物，可以快速检测不结球白菜早抽薹的品种和材料，极大的节约时间和资源，大大提高选择效率，从而加快育种进程。但是，依然存在准确性不够、可靠性不足和对不结球白菜开花时间性状的早期鉴定及筛选不够理想的问题。
技术实现要素：5.本发明为了解决现有不结球白菜开花早晚选择性育种过程中所存在的上述技术问题，提供了一种与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记及应用，它具有对不结球白菜开花时间性状的早期鉴定及筛选的准确性和可靠性均较好的特点。
6.本发明的第一种技术方案：与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记，所述indel分子标记基于不结球白菜7号染色体brft基因启动子区域，所述brft基因启动子区域的部分核苷酸序列如seq id no：1所示。本发明通过对不结球白菜7号染色体brft基因启动子区域中的部分的核苷酸序列进行indel分子标记，也是基于不结球白菜开花早晚qtl位点的indel标记，indel标记完全基于该qtl位点，与不结球白菜开花早晚基因紧密连锁，可用于不结球白菜开花早晚性状育种的早期分子标记辅助选择，其设计巧妙，检测简便快捷，成本低，不受环境影响，适于大规模推广应用；将本发明中的标记用于不结球白菜开花早晚的分子标记辅助选择，可大幅提高选择的准确性和可靠性，大大缩短育种年限，从而更好的加速育种进程；本发明提供了与不结球白菜开花早晚相关的主效qtl位点紧密连锁的分子标记，可用于不结球白菜开花早晚性状育种的早期分子标记辅助选择，可以大大提高育种效率；本发明中与不结球白菜开花早晚主效qtl位点紧密连锁的indel分子标记，经试验检测，连锁性和可靠性均较高，这对于提高分子标记辅助选择的准确性和效率具有重要意义。
7.本发明的第二种技术方案：用于获得与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的特异性引物对。本发明根据定位的不结球白菜开花早晚性状主效qtl位点内brft，
开发特异性强，稳定性高的引物，用于得出indel分子标记位点的多态性表达不结球白菜开花早晚差异，预测不结球白菜开花早晚差异，为不结球白菜的开花早晚预先选择提供了可靠的分子标记来源。
8.作为优选，所述引物对的核苷酸序列为，
9.正向引物，f-gccgggtacttgacccgtgc，如seq id no：2所示；
10.反向引物，r-cgagtcaattcaccccgcgc；如seq id no：3所示。
11.本发明的第三种技术方案：与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记在实现不结球白菜开花时间性状的早期鉴定和筛选中的应用。本发明在定位的不结球白菜开花早晚主效的qtl位点内brft，开发了与性状紧密连锁的分子标记并验证了标记的可靠性，通过检测该分子标记就可以预测不结球白菜的开花早晚，为实现不结球白菜开花早晚性状的早期鉴定和筛选提供了分子标记辅助选择技术。
12.作为优选，包括以下步骤，
13.(s11)选取晚开花的不结球白菜品种a和早开花的不结球白菜品种b作为两个亲本，利用两个亲本的dna，对brft基因包含上游启动子区域进行扩增、测序和拼接；
14.(s12)对步骤(s11)中所获得的两个亲本的brft基因及其启动子区域进行序列比对分析，使用引物设计软件，针对启动子区域差异，设计与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的引物；
15.(s13)对步骤(s12)中与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的引物，利用亲本dna进行pcr扩增，根据目标扩增片段在亲本中存在的差异，获得与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记。本发明标记的筛选方法操作简便快捷，对检测设备和引物模板质量要求不高，具有试验试剂用量少，速度快，成本低，适合大批次、高通量和自动化的优点，非常适合现代农业分子育种的实现；本发明先对brft基因包含上游启动子区域进行扩增、测序和拼接，通过观察同源基因上游的启动子区域发现存在新的变异，再经过比对分析发现启动子区域中的差异，设计与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的引物，再对引物进行pcr扩增，根据目标扩增片段在亲本中存在的差异，获得与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记，在定位的不结球白菜的qtl位点内brft，开发了与开花早晚性状紧密连锁的分子标记并验证了标记的可靠性，通过检测该分子标记就可以预测不结球白菜开花时间，为实现不结球白菜开花时间性状的早期鉴定和筛选提供了分子标记辅助选择技术。
16.作为优选，所述brft基因的获得包括以下步骤，
17.(s04)分别提取极端早开花f2代单株、极端晚开花f2代单株和两个不结球白菜亲本的dna；
18.(s05)分别测定步骤(s04)中极端早开花f2代单株dna和极端晚开花f2代单株dna的浓度值；
19.(s06)根据步骤(s05)中测得的dna浓度值进行dna等量混池后，分别构建早开花e池和晚开花l池；
20.(s07)分别对步骤(s06)中e池和l池中以及两个亲本的dna进行高深度重测序，利用青菜参考基因组，分别得出snp-index(极端性状e)值和snp-index(极端性状l)值；
21.(s08)根据公式
△
(snp-index)＝snp-index(极端性状l)-snp-index(极端性状
e)，计算得出
△
(snp-index)值；
22.(s09)选取99％置信水平作为筛选阈值，根据
△
(snp-index)值，得出与不结球白菜开花早晚相关的主效qtl位点位于不结球白菜第7号染色体的21.1mb-25.25mb区域内；
23.(s10)在与不结球白菜开花早晚相关的主效qtl位点内，利用拟南芥开花相关基因at1g65480比对查找，同时结合
△
(snp-index)数值，划定qtl位点峰值对应的峰值区域，在峰值区域内得出拟南芥开花相关基因at1g65480的同源基因brft。本发明通过提取极端早开花f2代单株、极端晚开花f2代单株和两个不结球白菜亲本的dna，并测定dna的浓度值，构建早开花e池和晚开花l池，通过高深度重测序得出snp-index(极端性状e)值和snp-index(极端性状l)值，经过计算出的
△
(snp-index)值，并结合筛选阈值，得出与不结球白菜开花早晚相关的主效qtl位点位于不结球白菜第7号染色体的21.1mb-25.25mb区域，再进一步利用同源比对法和
△
(snp-index)值峰值区域对应的候选qtl位点区域22.65mb-23.55mb得出准确的brft基因，准确性较好；通过与不结球白菜开花早晚目标性状或基因紧密连锁的indel分子标记，通过pcr扩增技术，利用indel分子标记设计的特殊引物序列，将目的片段扩增，并与已知片段的极端早开花f2代单株dna和极端晚开花f2代单株dna进行对比，确认不结球白菜开花早晚的目标性状或基因是否存在和相似，从而提前判断不结球白菜作物开花早晚的表型，在已知不结球白菜作物开花早晚表型的基础上，可大大减少育种工作量，节省育种时间，提高育种效率。
24.作为优选，所述极端早开花f2代单株和极端晚开花f2代单株的获得包括以下步骤，
25.(s01)选取晚开花的不结球白菜品种a和早开花的不结球白菜品种b杂交，得不结球白菜f1代；
26.(s02)将步骤(s01)中的不结球白菜f1代自交得不结球白菜f2代，并统计不结球白菜f2代的单株开花时间；
27.(s03)根据步骤(s02)中不结球白菜f2代的单株开花时间，选取获得极端早开花f2代单株和极端晚开花f2代单株。
28.作为优选，还包括步骤，
29.(s14)利用indel分子标记引物分别将极端早开花f2代单株dna、极端晚开花f2代单株dna进行扩增，并将扩增产物置于琼脂糖凝胶上进行电泳，并对电泳结果进行比对。本发明中位点位于不结球白菜7号染色体上，利用引物设计软件，将该序列差异转化为indel标记，通过利用pcr扩增和琼脂糖凝胶电泳检测试验，实现标记的多态性检验，从而实现对不结球白菜开花时间性状的分子标记辅助筛选。极端早开花f2代单株扩增出244bp产物，极端晚开花f2代单株无产物扩增出。
30.作为优选，所述pcr扩增体系为，正向引物1μl，反向引物1μl，不结球白菜亲本dna 50μg，rapid taq master mix 12μl，ddh2o补至25μl。反应体系中的各物质，与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的引物扩增提供了良好的反应环境，保证整个扩增过程的顺利完成。
31.作为优选，所述pcr扩增的程序为，95℃预变性3min；95℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸30s，38个循环；72℃延伸10min；保存温度4℃。针对步与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的引物专门设计，具有更好的扩增效果。
32.作为优选，控制不结球白菜开花早晚的基因为brft；所述brft基因为
brac07g031540基因，所述基因brac07g031540为控制拟南芥开花早晚的at1g65480的同源基因。
33.作为优选，所述步骤(s07)中对e池和l池中dna的测序深度分别为74.54
×
和69.76
×
。该深度测序得出的数值更准确。
34.作为优选，所述步骤(s12)中对不结球白菜f1代亲本dna的测序深度分别为28.71
×
和29.5
×
。该深度测序得出的数值更准确。
35.作为优选，所述引物设计软件为primer 5。
36.作为优选，所述琼脂糖凝胶为1.0％的琼脂糖凝胶。
37.本发明具有如下有益效果：
38.(1)通过对不结球白菜7号染色体brft基因启动子区域中的部分的核苷酸序列设计开发indel分子标记，也是基于不结球白菜开花早晚qtl位点内brft基因的indel标记，indel标记完全基于该qtl位点内brft，与不结球白菜开花早晚基因紧密连锁，可用于不结球白菜开花早晚性状育种的早期分子标记辅助选择，其设计巧妙，检测简便快捷，成本低，不受环境影响，适于大规模推广应用；
39.(2)将本发明中的标记用于不结球白菜开花早晚的分子标记辅助选择，可大幅提高选择的准确性和可靠性，大大缩短育种年限，从而更好的加速育种进程；
40.(3)提供了与不结球白菜开花早晚相关的主效qtl位点内brft紧密连锁的分子标记，可用于不结球白菜开花早晚性状育种的早期分子标记辅助选择，可以大大提高育种效率；
41.(4)与不结球白菜开花早晚主效qtl位点内brft紧密连锁的indel分子标记，经试验检测，连锁性和可靠性均较高，这对于提高分子标记辅助选择的准确性和效率具有重要意义。
附图说明
42.图1是本发明中极端早开花f2代单株dna、极端晚开花f2代单株dna和与不结球白菜开花早晚紧密连锁的带indel分子标记的dna，置于琼脂糖凝胶上进行电泳后的结果比对图；
43.图2是本发明中brft基因在亲本wym-97和cx-49上的序列差异图；
44.图3是本发明中与不结球白菜开花早晚相关的主效qtl位点定位图。
具体实施方式
45.下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
46.与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记，所述indel分子标记基于不结球白菜7号染色体brft基因启动子区域，所述brft基因启动子区域的部分核苷酸序列如seq id no：1所示。控制不结球白菜开花早晚的基因为brft；所述brft基因为brac07g031540基因，所述基因brac07g031540为控制拟南芥开花早晚的at1g65480的同源基因。
47.用于获得与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的特异性引物对。
48.所述引物对的核苷酸序列为，
49.正向引物，f-gccgggtacttgacccgtgc，如seq id no：2所示；
50.反向引物，r-cgagtcaattcaccccgcgc；如seq id no：3所示。
51.与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记在实现不结球白菜开花时间性状的早期鉴定和筛选中的应用。
52.与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记在实现不结球白菜开花时间性状的早期鉴定和筛选中的应用，包括以下步骤，
53.(s01)选取晚开花的不结球白菜品种a和早开花的不结球白菜品种b杂交，得不结球白菜f1代；
54.(s02)将步骤(s01)中的不结球白菜f1代自交得不结球白菜f2代，并统计不结球白菜f2代的单株开花时间；
55.(s03)根据步骤(s02)中不结球白菜f2代的单株开花时间，选取获得极端早开花f2代单株和极端晚开花f2代单株；
56.(s04)分别提取极端早开花f2代单株、极端晚开花f2代单株和两个不结球白菜亲本的dna；
57.(s05)分别测定步骤(s04)中极端早开花f2代单株dna和极端晚开花f2代单株dna的浓度值；
58.(s06)根据步骤(s05)中测得的dna浓度值进行dna等量混池后，分别构建早开花e池和晚开花l池；
59.(s07)分别对步骤(s06)中e池和l池中以及两个亲本的dna进行高深度重测序，利用青菜参考基因组，分别得出snp-index(极端性状e)值和snp-index(极端性状l)值；
60.(s08)根据公式
△
(snp-index)＝snp-index(极端性状l)-snp-index(极端性状e)，计算得出
△
(snp-index)值；
61.(s09)选取99％置信水平作为筛选阈值，根据
△
(snp-index)值，得出与不结球白菜开花早晚相关的主效qtl位点位于不结球白菜第7号染色体的21.1mb-25.25mb区域内；
62.(s10)在与不结球白菜开花早晚相关的主效qtl位点内，利用拟南芥开花相关基因比对查找与开花早晚相关的同源基因，同时结合
△
(snp-index)数值，划定qtl位点峰值区域为22.65mb-23.55mb，在此峰值区域内仅有拟南芥开花相关基因at1g65480的同源基因brft；所述brft基因为brac07g031540基因；
63.(s11)选取晚开花的不结球白菜品种a和早开花的不结球白菜品种b作为两个亲本，利用两个亲本的dna，对brft基因包含上游启动子区域进行扩增、测序和拼接；
64.(s12)对步骤(s11)中所获得的两个亲本的brft基因及其启动子区域进行序列比对分析，发现两个亲本(青菜和菜心)有两处大片段序列差异，其一位于启动子区域，菜心比青菜多出近1.5kb个碱基，其二位于青菜第二个内含子区域，有未知的大片段插入序列，使用引物设计软件，针对启动子区域差异，设计与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的引物；
65.(s13)对步骤(s12)中与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的引物，利用亲本dna进行pcr扩增，根据目标扩增片段在亲本中存在的差异，获得与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记；所述pcr扩增体系为，正向引物1μl，反向引物1μl，不结球白菜亲本dna50μg，rapid taq master mix12μl，ddh2o补至25μl；所述pcr扩增的程序为，
95℃预变性3min；95℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸30s，38个循环；72℃延伸10min；保存温度4℃；
66.(s14)利用indel分子标记引物分别将极端早开花f2代单株dna、极端晚开花f2代单株dna进行扩增，并将扩增产物置于琼脂糖凝胶上进行电泳，并对电泳结果进行比对。极端早开花f2代单株扩增出244bp产物，极端晚开花f2代单株无产物扩增出。
67.实施例1：
68.与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记在实现不结球白菜开花时间性状的早期鉴定和筛选中的应用，包括以下步骤，
69.(s01)选取晚抽薹开花的不结球白菜品种wym-97青菜和早开花的不结球白菜品种cx-49菜心杂交，得不结球白菜f1代；
70.(s02)将步骤(s01)中的不结球白菜f1代自交得不结球白菜f2代共350株，并统计不结球白菜f2代的单株开花时间；
71.(s03)根据步骤(s02)中不结球白菜f2代的单株开花时间，选取前40株极端早开花f2代单株和40株极端晚开花f2代单株；
72.(s04)利用改良的ctab法分别提取极端早开花f2代单株、极端晚开花f2代单株和两个不结球白菜亲本的dna；
73.(s05)分别测定步骤(s04)中极端早开花f2代单株dna和极端晚开花f2代单株dna的浓度值；
74.(s06)根据步骤(s05)中测得的dna浓度值进行dna等量混池后，分别构建早开花e池和晚开花l池；
75.(s07)如图3所示，分别对步骤(s06)中e池和l池中以及两个亲本的dna进行高深度重测序，利用青菜参考基因组，分别得出snp-index(极端性状e)值和snp-index(极端性状l)值；对e池和l池中dna的测序深度分别为74.54
×
和69.76
×
；对两个亲本的测序深度分别为28.71
×
和29.5
×
；
76.(s08)根据公式
△
(snp-index)＝snp-index(极端性状l)-snp-index(极端性状e)，计算得出
△
(snp-index)值；
77.(s09)进行1000次置换检验，选取99％置信水平作为筛选阈值，根据
△
(snp-index)值，得出与不结球白菜开花早晚相关的主效qtl位点ft7.1位于不结球白菜第7号染色体的21.1mb-25.25mb区域内；
78.(s10)在与不结球白菜开花早晚相关的主效qtl位点内，利用拟南芥开花相关基因比对查找与开花早晚相关的同源基因，同时结合
△
(snp-index)数值，划定qtl位点峰值区域为22.65mb-23.55mb，在此峰值区域内仅有拟南芥开花相关基因at1g65480的同源基因brft；所述brft基因为brac07g031540基因；
79.(s11)选取晚开花的不结球白菜品种a和早开花的不结球白菜品种b作为两个亲本，利用两个亲本的dna，对brft基因包含上游启动子区域进行扩增、测序和拼接；发现brft基因启动子区域中存在新的变异
80.(s12)对步骤(s11)中所获得的两个亲本的brft基因及其启动子区域进行序列比对分析，使用引物设计软件primer 5，针对启动子区域差异，设计与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的引物；发现两个亲本(青菜和菜心)有两处大片段序列差异，其一
位于启动子区域，菜心比青菜多出近1.5kb个碱基，其二位于青菜第二个内含子区域，有未知的大片段插入序列；如图2所示，可以看出在两个亲本启动子区域有一段序列差异，cx-49比wym-97多出近1577bp；同时在该基因第二个内含子区域wym-97比cx-49多出一段未知长度的序列差异；
81.(s13)对步骤(s12)中与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的引物，利用亲本dna进行pcr扩增，根据目标扩增片段在亲本中存在的差异，获得与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记；所述pcr扩增体系为，正向引物1μl，反向引物1μl，不结球白菜亲本dna50μg，rapid taq master mix12μl，ddh2o补至25μl；所述pcr扩增的程序为，95℃预变性3min；95℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸30s，38个循环；72℃延伸10min；保存温度4℃；
82.(s14)利用indel分子标记引物分别将极端早开花f2代单株dna、极端晚开花f2代单株dna进行扩增，并将扩增产物置于1.0％的琼脂糖凝胶上进行电泳，并对电泳结果进行比对；如图1所示，极端早开花f2代单株扩增出244bp产物，极端晚开花f2代单株无产物扩增出。
技术特征：1.与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记，其特征是：所述indel分子标记基于不结球白菜7号染色体brft基因启动子区域，所述brft基因启动子区域的部分核苷酸序列如seq id no：1所示。2.用于获得权利要求1所述的与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的特异性引物对。3.根据权利要求2所述的与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的特异性引物对，其特征是：所述引物对的核苷酸序列为，正向引物，f-gccgggtacttgacccgtgc，如seq id no：2所示；反向引物，r-cgagtcaattcaccccgcgc；如seq id no：3所示。4.与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记在实现不结球白菜开花时间性状的早期鉴定和筛选中的应用。5.根据权利要求4所述的与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记在实现不结球白菜开花时间性状的早期鉴定和筛选中的应用，其特征是：包括以下步骤，(s11)选取晚开花的不结球白菜品种a和早开花的不结球白菜品种b作为两个亲本，利用两个亲本的dna，对brft基因包含上游启动子区域进行扩增、测序和拼接；(s12)对步骤(s11)中所获得的两个亲本的brft基因及其启动子区域进行序列比对分析，使用引物设计软件，针对启动子区域差异，设计与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的引物；(s13)对步骤(s12)中与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记的引物，利用亲本dna进行pcr扩增，根据目标扩增片段在亲本中存在的差异，获得与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记。6.根据权利要求5所述的与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记在实现不结球白菜开花时间性状的早期鉴定和筛选中的应用，其特征是：所述brft基因的获得包括以下步骤，(s04)分别提取极端早开花f2代单株、极端晚开花f2代单株和两个不结球白菜亲本的dna；(s05)分别测定步骤(s04)中极端早开花f2代单株dna和极端晚开花f2代单株dna的浓度值；(s06)根据步骤(s05)中测得的dna浓度值进行dna等量混池后，分别构建早开花e池和晚开花l池；(s07)分别对步骤(s06)中e池和l池以及两个亲本的dna进行高深度重测序，利用青菜参考基因组，分别得出snp-index(极端性状e)值和snp-index(极端性状l)值；(s08)根据公式
△
(snp-index)＝snp-index(极端性状l)-snp-index(极端性状e)，计算得出
△
(snp-index)值；(s09)选取99％置信水平作为筛选阈值，根据
△
(snp-index)值，得出与不结球白菜开花早晚相关的主效qtl位点位于不结球白菜第7号染色体的21.1mb-25.25mb区域内；(s10)在与不结球白菜开花早晚相关的主效qtl位点内，利用拟南芥开花相关基因at1g65480比对查找，同时结合
△
(snp-index)数值，划定qtl位点峰值对应的峰值区域，在峰值区域内得出拟南芥开花相关基因at1g65480的同源基因brft。
7.根据权利要求6所述的与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记在实现不结球白菜开花时间性状的早期鉴定和筛选中的应用，其特征是：所述极端早开花f2代单株和极端晚开花f2代单株的获得包括以下步骤，(s01)选取晚开花的不结球白菜品种a和早开花的不结球白菜品种b杂交，得不结球白菜f1代；(s02)将步骤(s01)中的不结球白菜f1代自交得不结球白菜f2代，并统计不结球白菜f2代的单株开花时间；(s03)根据步骤(s02)中不结球白菜f2代的单株开花时间，选取获得极端早开花f2代单株和极端晚开花f2代单株。8.根据权利要求6所述的与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记在实现不结球白菜开花时间性状的早期鉴定和筛选中的应用，其特征是：还包括步骤，(s14)利用indel分子标记引物分别将极端早开花f2代单株dna、极端晚开花f2代单株dna进行扩增，并将扩增产物置于琼脂糖凝胶上进行电泳，并对电泳结果进行比对。9.根据权利要求5所述的与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记在实现不结球白菜开花时间性状的早期鉴定和筛选中的应用，其特征是：所述pcr扩增体系为，正向引物1μl，反向引物1μl，不结球白菜亲本dna50μg，rapid taq master mix12μl，ddh2o补至25μl。10.根据权利要求5所述的与不结球白菜开花早晚紧密连锁的indel分子标记在实现不结球白菜开花时间性状的早期鉴定和筛选中的应用，其特征是：所述pcr扩增的程序为，95℃预变性3min；95℃变性15s，55℃退火15s，72℃延伸30s，38个循环；72℃延伸10min；保存温度4℃。
技术总结本发明涉及分子遗传育种技术领域，具体公开了一种与不结球白菜开花早晚紧密连锁的Indel分子标记及应用，所述Indel分子标记基于不结球白菜7号染色体BrFT基因启动子区域，所述BrFT基因启动子区域的部分核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明具有对不结球白菜开花时间性状的早期鉴定及筛选的准确性和可靠性均较好的特点。较好的特点。较好的特点。
技术研发人员：魏庆镇 王五宏 包崇来 胡天华 胡海娇 汪精磊 严亚琴
受保护的技术使用者：浙江省农业科学院
技术研发日：2022.06.27
技术公布日：2022/11/1
