抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs
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4bl-7sl易位系及选育方法、分子标记和用途
技术领域
1.本发明属于分子生物学领域，特别涉及抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs
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4bl-7sl易位系及其选育方法、分子标记和用途。
背景技术：2.小麦赤霉病(fusarium head blight)是由禾谷镰刀菌(fusarium graminearum)引起的真菌病害，造成大面积减产和品质降低。受赤霉病菌(禾谷镰刀菌)感染的籽粒会积累don等真菌毒素，严重威胁食品安全和人体健康(buerstmayr等，2009)。培育和推广抗赤霉病品种对于小麦绿色生产和抗逆稳产具有重要意义。
3.小麦赤霉病抗性类型多样，抗性遗传机制复杂。发病与抗病机制的复杂性成为抗病育种面临的主要难题。赤霉病抗性类型主要分为type i(抗侵染)、type ii(抗扩展)、 type iii(抗毒素积累)、type iv(籽粒抗性)和type v(耐病性或耐产量损失)五种类型，涵盖从病原菌侵染、细胞防御到器官生理代谢、植株整体响应等多个层面(马鸿翔等，2019)。迄今，共定位了约432个赤霉病抗性位点，定位于小麦所有染色体上，绝大多数位点的效应较低，效应高的主效抗病基因较少(ma等，2020)。目前，仅命名了fhb1～fhb7共7个抗赤霉病主效基因或位点，但其单一抗性水平不高(li 等，2019；su等，2019；wang等，2020)。fhb1是目前公认效应最大的抗赤霉病 qtl，其贡献率介于15％-30％，是国际上小麦赤霉病抗性改良的主要抗源(李韬等， 2016)。中国选育出了扬麦、宁麦、镇麦、淮麦等系列中抗(或高抗)品种。在这些品种中，部分携带fhb1，部分携带非fhb1抗性位点，且因生态适应性问题，仅在南方麦区应用(jiang等，2019；胡文静等，2020；zhang等，2021；zhu等，2021)。抗源相对单一，抗病遗传基础狭窄，已成为小麦抗赤霉病育种面临的一个瓶颈障碍(张爱民等， 2018)。迫切需要挖掘、研究新抗病基因，推进其育种利用，为抗赤霉病育种提供理论、材料和技术支撑。
4.小麦近缘物种是小麦遗传改良的重要基因资源宝库，富含抗病、抗逆、抗虫、大穗多粒、优质等优异基因。赤霉病抗性鉴定结果表明，鹅观草属(roegneria)、赖草属 (leymus)、披碱草属(elymus)、偃麦草属(thinopyrum)、山羊草属(aegilops)、黑麦属(secale)、新麦草属(psathyrostachys)、大麦属(hordeum)、冰草属(agropyron)、仲彬草属(kengyilia)和猬草属(hystrix)等近缘物种携有丰富的抗赤霉病基因(肖进等，2021)。例如，在披碱草属的披碱草3st染色体上鉴定到了一个抗赤霉病基因(gong 等，2019)。在已命名的7个主效抗赤霉病基因或位点中，3个来自于野生近缘物种，如来自大赖草7lr#1染色体短臂的fhb3、鹅观草1rk#1染色体短臂的fhb6和长穗偃麦草的7e染色体长臂fhb7。其中，fhb7兼备稳定的抗性和广谱的解毒功能，已成功应用于小麦抗赤霉病育种(cainong等，2015；guo等，2015；qi等，2008；wang等， 2020)。因此，从野生近缘物种挖掘新的抗赤霉病基因，创制携有外源抗病基因的优异种质是丰富现有小麦抗病品种遗传多样性的重要途径。
5.纤毛鹅观草(roegneria ciliaris(trin)nevski，2n＝28，基因组ssyy)是鹅观草
属四倍体多年生物种，在中国主要分布于东北、华北和西北各地，具有耐寒、耐旱、耐高温高湿、多花多粒性以及抗病等优良性状。翁益群等(1989)利用离体穗单花滴柱法对小麦野生近缘物种6个属11个物种进行赤霉病的抗性鉴定，发现纤毛鹅观草对赤霉病抗性能力最强且显著高于苏麦3号。1983年，muramatsu等以纤毛鹅观草作母本，普通小麦inayama komugi作父本杂交获得杂种f1，经染色体加倍育成了普通小麦-纤毛鹅观草双二倍体。南京农业大学细胞遗传研究所于1989年引进了该双二倍体，利用染色体工程的手段，以普通小麦中国春为亲本与双二倍体杂交和连续回交后自交，将纤毛鹅观草有益基因导入普通小麦，先后选育鉴定了多个普通小麦-纤毛鹅观草异附加系新种质 (jiang等，1993；王秀娥等，1997；wang等，2001；kong等，2018)。因此，纤毛鹅观草已成为改良普通小麦遗传基础、提高赤霉病抗性的重要野生近缘物种之一。
6.诱导、创制小麦-近缘物种易位系，是突破小麦与近缘物种之间的染色体重组障碍、转移利用野生近缘物种优异基因的有效途径，也是外源基因育种利用的必备前提。电离辐射诱导染色体结构变异不受小麦野生近缘物种与小麦之间亲缘关系远近制约(zhang 等，2019；sun等，2020)，是一个高效诱导易位的手段。目前，通过辐射已经创建了涉及小麦近缘种的黑麦属、山羊属、簇毛麦属、偃麦草属等多个物种、不同染色体的易位系(bie等，2007；chen等，2008；chen等，2013；dai等，2020)。但是目前却鲜见关于纤毛鹅观草易位系的报道。
7.it(intron targeting)分子标记是基于est发展起来的新型plug分子标记(ishikawa 等，2007)。相比est标记，it标记具有更高的多态性、扩增条带清晰、分辨率高而且在外源物种中具有很好的转移性(poczai等，2008；li等，2013)。wang等根据簇毛麦4vs与普通小麦中国春4al、4bs、4ds以及粗山羊草的4ds的内含子，开发了 359个it标记，其中232个标记可以在小麦-簇毛麦t4vs
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4dl易位系上进行特异性扩增，多态率为64.62％(wang等，2017)；zhang等比较簇毛麦序列和小麦基因组序列，开发了841个定位到簇毛麦的1v-7v染色体的it标记，多态率为51.79％(zhang等， 2017)，为提高簇毛麦外源染色质的鉴定效率提供了新手段。基于簇毛麦和普通小麦d 亚基因组设计的it标记，还被用于作为中间偃麦草染色体和大麦染色体特异的分子标记(li等，2021；yu等，2019)。基于簇毛麦和普通小麦d亚基因组设计的it标记，筛选出纤毛鹅观草7s染色体的特异分子标记，对于纤毛鹅观草7s染色体结构变异体的准确鉴定和目的基因的挖掘具有重要意义。
技术实现要素：8.发明目的：本发明的目的是提供一种抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs
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4bl-7sl易位系及其选育方法、分子标记和用途。
9.技术方案：所述的抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs
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4bl-7sl易位系的选育方法，包括如下步骤：
10.(1)用60co-γ辐射普通小麦-纤毛鹅观草二体异附加系da7s正在开花的穗子，并给普通小麦品种alondra’s授粉，收获m1代种子；
11.(2)通过荧光原位杂交检测所得到的m1代种子，鉴定出含有纤毛鹅观草7s外源片段的种子；
12.(3)种植鉴定出的含有纤毛鹅观草7s外源片段的种子，在扬花期用单花滴注法鉴
定m1代植株的赤霉病抗性，选出抗病株；
13.(4)将抗赤霉病的单株与普通小麦品种alondra’s回交1代后再进行自交，在bc1f4后代中选育得到纯合的赤霉病小麦-纤毛鹅观草抗易位系。
14.选育方法获得的抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs
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4bl-7sl易位系，其保藏号为： cctcc no：p202216，分类命名：小麦种naurc001。保藏日期：20220525；保藏单位：中国典型培养物保藏中心；保藏地址：中国武汉武汉大学。
15.其中，作为亲本的普通小麦-纤毛鹅观草二体异附加系da7s为南京农业大学细胞遗传研究所创制并提供，普通小麦品种alondra’s是通过常规途径即可获得的植物材料，可以从种质库引进。
16.优选地，所述用单花滴注法鉴定m1代植株的赤霉病抗性的操作如下：在扬花期(4 月上旬左右开始)，将赤霉菌孢子f0609菌株悬浮液采用单花滴注法接种靠近穗中部正在开花的小穗，使植株接受赤霉菌悬液的感染。
17.优选地，所述禾谷镰刀菌悬液的最适浓度为5000个/ml，摇匀后使用。所述禾谷镰刀菌悬液的滴注量为每个所述小穗上滴注10μl。
18.优选地，在滴注完成后，采用网室弥雾对接受赤霉菌悬液感染的每个所述小穗持续喷水保湿3天。
19.优选地，在接种后21天进行赤霉病的病情调查并拍照，记录感病小穗率或病小穗数，病小穗率(pss)＝(感染小穗数/总小穗数)
×
100％。
20.作为本发明的另一个方面，抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs
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4bl-7sl易位系中与赤霉病抗性基因紧密连锁的分子标记2个，分别是cinau1589和cinau1602，其中 cinau1589引物设计时参考的基因序列如seqid no.1所示的核酸分子：(设计标记所用的基因序列)；cinau1602引物设计时参考的基因序列如seqid no.2所示的核酸分子： (设计标记所用的基因序列)。
21.作为本发明的再一个方面，提供一种检测前述与赤霉病抗性基因紧密连锁的分子标记的引物对，
22.cinau1589是如下的引物对：由序列如seqidno3(agtacatgctcaaggtgcct) 和seqidno.4(cactttgcactgtttctcatgt)所示分子组成的引物对用于检测序列如 seqidno.1所示的核酸分子；
23.cinau1602是如下的引物对：由序列如seqidno5(ggaggaacaagagctcagca) 和seqidno.6(tttagcatttccaccgtgtatg)所示分子组成的引物对。
24.seq id no.1：对应的基因序列
25.26.27.28.[0029][0030]
seq id no.2：对应的基因序列
[0031]
[0032]
[0033]
[0034]
[0035]
[0036]
[0037]
[0038]
[0039]
[0040][0041]
作为本发明的另一方面，该引物的用途，如鉴定小麦-纤毛鹅观草结构变异体中是否含有7sl染色体的用途；
[0042]
作为本发明的又一方面，基于上述引物的pcr方法以及该方法用于鉴定7sl染色体的用途。
[0043]
作为本发明的又一方面，抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs
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4bl-7sl易位系在小麦抗病育种中的用途。
[0044]
有益效果：本发明与现有技术相比，具有如下优势：
[0045]
本发明选育得到的小麦-纤毛鹅观草易位系4bs
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4bl-7sl可用于小麦抗赤霉病育种；分子标记的引物可用于鉴定小麦-纤毛鹅观草结构变异体中是否含有7sl染色体，提高抗病育种效率。
附图说明
[0046]
图1小麦-纤毛鹅观草易位系t4bs
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4bl-7sl的分子标记鉴定，编码1-7依次为1：中国春；2：日本小麦inayama komugi；3：纤毛鹅观草；4：inayama komugi-纤毛鹅观草双二倍体；5：inayama komugi-纤毛鹅观草二体异附加系da7s；6：alondra’s；7： t4bs
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4bl-7sl；箭头指示纤毛鹅观草染色体7sl扩增的条带；
[0047]
图2小麦-纤毛鹅观草易位系t4bs
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4bl-7sl的抗赤霉病鉴定，左图：感赤霉病的轮回亲本alondra’s，右图：抗赤霉病的小麦-纤毛鹅观草易位系t4bs
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4bl-7sl；
[0048]
图3小麦-纤毛鹅观草易位系t4bs
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4bl-7sl的细胞遗传学鉴定，其中，a：小麦
‑ꢀ
纤毛鹅观草易位系t4bs
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4bl-7sl染色体制片dapi染色；b：小麦-纤毛鹅观草易位系 t4bs
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4bl-7sl根尖有丝分裂染色体中期gish图，纤毛鹅观草总基因组dna用 fluoresceint-12-dutp标记，呈现绿色信号；c：小麦v纤毛鹅观草易位系t4bs
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4bl-7sl 根尖有丝分裂染色体中期fish图，寡核苷酸探针(pas1-1、4、6)和psc119.2-1分别在5
′‑
末端用tamra(6-carboxytetramethylrhodamine)修饰，呈现红色信号，d：b和c 整合的图片本图通过细胞学和分子标记鉴定小麦-纤毛鹅观草易位系t4bs
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4bl-7sl的染色体详细组成。
具体实施方式
[0049]
实验材料：
[0050]
普通小麦(triticum aestivum)品种alondra’s和苏麦3号等均由南京农业大学细胞遗传研究所引进和提供；纤毛鹅观草(roegneria ciliaris，引种号w614249)引自westernregional plant introduction station，usa；普通小麦日本小麦品种(inayama komugi，ik) 和inayama komugi-纤毛鹅观草双二倍体(inayama komugi-r.ciliaris amphiploid，引种号ta3427)引自美国堪萨斯州立大学小麦遗传资源中心(ksu wgrc，usa)；一整套 inayama komugi-纤毛鹅观草二体异附加系da1s
c-da7sc和da1s-da7s由南京农业大学细胞遗传研究所创制。
[0051]
实施例1小麦-纤毛鹅观草抗赤霉病易位系植株的获得
[0052]
选取普通小麦-纤毛鹅观草da7s即将开花的穗子即穗子中部的小花花药呈淡绿色或微黄色，从茎基部剪下，放入盛有水的水桶中，用
60
co-γ射线照射处理穗子，剂量率为90rad/min，辐射的总剂量为1,200rad。收集辐射处理过的新鲜花粉授予已去雄的普通小麦品种alondra’s，套袋挂牌标记，得到m1代种子。利用gish技术检测m1代材料中涉及纤毛鹅观草7s染色体的结构变异体，鉴定出含有纤毛鹅观草7s染色体外源片段的种子。
[0053]
种植鉴定出的含有纤毛鹅观草7s染色体外源片段的种子，即得到7s染色体不同片段大小的小麦-纤毛鹅观草易位系植株。在扬花期，选取各植株靠近穗中部正在开花的小穗，将禾谷镰刀菌悬液滴注到小穗的基部，使植株接受赤霉菌悬液的感染，其中禾谷镰刀菌悬液的浓度为5000个/ml，禾谷镰刀菌悬液的滴注量为每个小穗上滴注10μl。在接菌完成后，连续3天，利用网室迷雾装置持续喷水保湿。在接菌21天后，检测植株的赤霉病抗性，选出抗病株。
[0054]
本实施例一共完成检测小麦-纤毛鹅观草易位系待测植株样本10份，结果显示，在 10份样本中，高抗赤霉病的小麦-纤毛鹅观草易位系有2份，高感赤霉病的小麦-纤毛鹅观草易位系有8份。
[0055]
将高抗赤霉病的小麦-纤毛鹅观草易位系植株与普通小麦品种alondra’s回交1代后再进行自交，得到纯合的抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草易位系。
[0056]
实施例2分子标记的获得
[0057]
利用南京农业大学细胞遗传研究所前期开发的第7部分同源群的152个it标记在纤毛鹅观草、inayama komugi-纤毛鹅观草双二倍体、小麦-纤毛鹅观草da7s中进行pcr 扩增，筛选纤毛鹅观草7s特异分子标记。最终筛选到纤毛鹅观草7s特异分子标记59 个。
[0058]
利用涉及纤毛鹅观草7s染色体不同片段大小的易位系(通过实施例1中方法获得) 对59个分子标记进行初步定位，结合这些易位系的赤霉病抗性，最终鉴定得到2个在抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草易位系中与抗赤霉病抗性紧密连锁的分子标记cinau1589和 cinau1602，它们的序列分别如seqidno.1和seqidno.2所示。
[0059]
实施例3待测植株中分子标记cinau1589和cinau1602的检测
[0060]
检测分子标记cinau1589的引物为cinau1589 primer f和cinau1589 primer r，它们的序列分别如seq id no.3和seq id no.4所示；cinau1602的引物为cinau1602 primer f和cinau1602 primer r，它们的序列分别如seq id no.5和seq id no.6所示。
[0061]
检测的过程如下：
[0062]
提取小麦-纤毛鹅观草易位系待测植株的基因组dna，以所提取的基因组dna为模板，分别以cinau1589 primer f和cinau1589 primer r以及cinau1602 primer f和 cinau1602 primer r为引物对其进行pcr扩增，反应结束后，电泳检测pcr反应产物，分别能扩增出相应的725bp和240bp dna条带的，即为含有纤毛鹅观草7s染色体赤霉病抗性位点的遗传资源，其中，所使用的pcr反应体系如下表1所示：
[0063]
表1实施例3的pcr反应体系
[0064][0065]
涡旋混匀，离心后加一滴石蜡油，防止在pcr过程中水分蒸发。
[0066]
pcr的反应程序如下表2所示：
[0067]
表2实施例3的pcr扩增程序
[0068][0069][0070]
pcr程序结束后，将扩增产物置于4℃冰箱进行保存。
[0071]
pcr扩增产物的检测如下：在pcr扩增产物中加入2.0μl loading buffer，离心，取 1.5-2μl pcr扩增产物加入8％聚丙烯酰胺凝胶中(39∶1)进行电泳检测。电泳缓冲液 1
×
tbe，电泳电压200v，电泳时间50min左右。电泳结束后，参照依据银染法对pcr 扩增产物进行检测。银染方法：用0.1％agno3溶液染10-15min，用ddh2o冲洗30sec，在用2％naoh和1％甲醛混合溶液染5-10min后，用自来水冲洗2-3次，拍照。
[0072]
电泳检测的结果如图1所示：图1中，各泳道从左到右依次是marker、中国春、inayama komugi、纤毛鹅观草、inayama komugi-纤毛鹅观草双二倍体、小麦-纤毛鹅观草da7s、抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草易位系4bs
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4bl-7sl。从图1(上)可以看出，纤毛鹅观草、inayama komugi-纤毛鹅观草双二倍体、小麦-纤毛鹅观草da7s、抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草易位系4bs
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4bl-7sl这四份材料中能扩增出对应于725bp位置的dna条带，而在中国春、inayama komugi和alondra’s中则扩增不出相应条带；从图1(下)可以看出，纤毛鹅观草、inayama komugi-纤毛鹅观草双二倍体、小麦-纤毛鹅观草da7s、抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草易位系4bs
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4bl-7sl这四份材料中能扩增出对应于240bp位置的dna条带，而在中国春、inayama komugi和alondra’s中则扩增不出相应条带。上述各株系的赤霉病抗性鉴定结果如图2所示，图2中，左图是不含有小麦-纤毛鹅观草4bs
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4bl-7sl易位系的材料，感病轮回亲本alondra’s，右图是含有小麦-纤毛鹅观草4bs
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4bl-7sl易位系的材料。从图2可以看出，含有小麦-纤毛鹅观草4bs
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4bl-7sl 易位系的材料对赤霉病抗性表现高抗，不含有小麦-纤毛鹅观草4bs
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4bl-7sl易位系的材料alondra’s对赤霉病表现高感，这与图1的检测结果一致。
[0073]
实施例4：纯合的抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草易位系4bs
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4bl-7sl的细胞学检测染色体中期同步化处理
[0074]
(1)小麦种子萌发：将种子放置于垫有两层滤纸的培养皿中，加ddh2o至种子刚好浸没，之后将培养皿转移到25℃恒温箱中，恒温放置18-24h，至种子露白后将培养皿中多余的水倒掉，仅保持滤纸湿润状态，之后将培养皿转移至4℃冰箱，放置24h后，将培养皿再转
al.， 2017)由南京擎科生物科技有限公司合成，直接在序列5
’‑
末端进行fam(carboxyfluorescein，羟基荧光素)或tamra(carboxytetramethylrhodamine，羧基四甲基罗丹明)修饰。
[0088]
荧光原位杂交：
[0089]
荧光原位杂交过程中，杂交液的配制如表4：
[0090]
表4实施例4的荧光原位杂交杂交液配制
[0091][0092]
将杂交液按上述配方依次加入200μl离心管，反复涡旋、离心1-2次，混匀，在 105℃条件下变性13min，之后立即放入冰水中，防止单链复性。制片变性：制片在 0.15mol/l的naoh的70％酒精溶液中变性5min；之后，依次在70％、70％和100％的两个梯度的酒精中脱水，各5min；气干备用。杂交：每张制片滴加15μl杂交液，盖上 20mm
×
20mm盖玻片，37℃杂交至少6h。洗片：将杂交完成的制片取出，轻轻甩去盖玻片，42℃水浴条件下，用ddh2o洗10min，气干。染色及镜检：镜检之前先用染色，即每张制片上滴加7μl含dapi(4
′
，6-diamidino-2-phenylindole，4
′
，6-二脒基-2-苯基吲哚)的h1200(vecta)防荧光淬灭剂，盖上干净的24mm
×
24mm盖玻片，用滤纸吸去多余的胶。染色后，将制片放在olympus bx51型荧光显微镜下进行观察，并用 olympus dp72型ccd(cooled color digital，彩色数字相机)相机拍摄图像(图3)。
[0093]
从图3可以看出，该易位系的体细胞染色体数目是2n＝42(图3a)；参考普通小麦中国春的标准核型，可以看出该易位系是纤毛鹅观草的7s染色体长臂的一部分易位到了小麦4b染色体，易位染色体组成是t4bs
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4bl-7sl(图3b-d)。
技术特征：1.一种抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs.4bl-7sl易位系的选育方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)用60co-γ辐射普通小麦-纤毛鹅观草二体异附加系da7s正在开花的穗子，并给普通小麦品种alondra’s授粉，收获m1代种子；(2)通过荧光原位杂交检测所得到的m1代种子，鉴定出含有纤毛鹅观草7s外源片段的种子；(3)种植鉴定出的含有纤毛鹅观草7s外源片段的种子，在扬花期用禾谷镰刀菌悬液滴注小穗基部，使植株接受赤霉菌悬液的感染，后检测m1代植株的赤霉病抗性，选出抗病株；(4)将抗赤霉病的单株与普通小麦品种alondra’s回交1代后再进行自交，在bc1f4后代中选育得到纯合的抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs.4bl-7sl易位系。2.权利要求1的选育方法获得的抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs.4bl-7sl易位系，其保藏号为：cctcc no：p202216，分类命名：小麦种naurc001。3.权利要求2的选育方法获得的抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs.4bl-7sl易位系在小麦抗病育种中的用途。4.抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs.4bl-7sl易位系中与赤霉病抗性紧密连锁的分子标记，其特征在于：为cinau1589和cinau1602，基因序列分别如seq id no.1和seq id no.2所示。5.根据权利要求4所述的抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs.4bl-7sl易位系中与抗赤霉病抗性紧密连锁的分子标记，其特征在于：引物分别为：cinau1589的引物为cinau1589 primer f和cinau1589 primer r，序列分别如seq id no.3和seq id no.4所示；cinau1602的引物为cinau1602 primer f和cinau1602 primer r，序列分别如seq id no.5和seq id no.6所示。6.权利要求5所述的抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs
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4bl-7sl易位系中与赤霉病抗性紧密连锁的分子标记的引物在鉴定小麦-纤毛鹅观草结构变异体中是否含有7sl染色体中的用途。7.权利要求4或5所述的抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs.4bl-7sl易位系中与赤霉病抗性紧密连锁的分子标记的检测方法，其特征在于：提取小麦-纤毛鹅观草易位系待测植株的基因组dna，以所提取的基因组dna为模板，分别以cinau1589 primer f和cinau1589 primer r以及cinau1602 primer f和cinau1602 primer r为引物对其进行pcr扩增，反应结束，电泳检测pcr反应产物，分别扩增出相应的725bp和240bp dna条带，即可。8.根据权利要求7所述的抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4bs.4bl-7sl易位系中与赤霉病抗性紧密连锁的分子标记的检测方法，其特征在于：pcr反应体系为：模板dna 1.0μl；2
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taq mix 5.0μl；primer(f)0.2μl；primer(r)0.2μl；ddh2o 3.6μl；总体系10.0μl。
技术总结本发明公开了抗赤霉病小麦-纤毛鹅观草4BS.4BL-7SL易位系及其选育方法、分子标记和用途。本发明选育得到的小麦-纤毛鹅观草易位系4BS.4BL-7SL可用于小麦抗赤霉病育种；分子标记的引物可用于鉴定小麦-纤毛鹅观草结构变异体中是否含有7SL染色体，提高抗病育种效率。提高抗病育种效率。提高抗病育种效率。
技术研发人员：王秀娥 宋融融 肖进 袁春霞 王彤 孙丽 王宗宽 王海燕
受保护的技术使用者：南京农业大学
技术研发日：2022.06.28
技术公布日：2022/11/1
