BCMA定向性细胞免疫疗法组合物和方法与流程

bcma定向性细胞免疫疗法组合物和方法
1.相关案
2.本技术要求2020年1月13日提交的美国临时专利申请号62/960,285的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
技术领域
3.本文提供的方法和组合物的一些实施方案涉及采用靶向b细胞成熟抗原(bcma)的嵌合抗原受体的细胞疗法。在若干实施方案中，本文提供的方法和组合物涉及采用针对非bcma靶标(诸如cd19)的嵌合抗原受体的细胞疗法。一些实施方案涉及由nk和/或t细胞表达的此类构建体中的一种或多种的组合。


背景技术：

4.随着对各种癌症以及癌性细胞具有哪些特征可以用于特异性区分所述细胞与健康细胞的进一步了解，正在开发利用癌性细胞的独特特征的治疗剂。采用工程化免疫细胞的免疫疗法是治疗癌症的一种方案。
5.通过引用并入ascii文本文件中的材料
6.本技术通过引用并入了含在与本技术同时提交的以下ascii文本文件中的序列表：文件名：nkt057wo_st25.txt；创建于2021年1月4日，大小为548kb。


技术实现要素：

7.免疫疗法代表在疾病治疗中的新的技术进步，其中免疫细胞经工程化改造以表达某些靶向和/或效应分子，这些分子特异性地鉴定患病或受损细胞并对其作出反应。与所有细胞均受到影响的更传统的方法(诸如化学疗法)相反，这表示有希望的进展，至少部分地是由于具有特异性地靶向患病或受损细胞的潜能所致，并且期望的结果是有足够的健康细胞存活以允许患者生存。一种免疫疗法方案是在免疫细胞中重组表达嵌合抗原受体，以实现对感兴趣的畸变细胞的靶向识别和破坏。
8.在某些癌症中，患者对免疫疗法的响应最初是稳健的和积极的，但是是短寿命的。此类概况(profile)通过本文提供的细胞免疫疗法组合物的若干实施方案来解决。例如，在若干实施方案中，自然杀伤(nk)细胞经工程化改造以表达一种或多种嵌合抗原受体(car)。由于工程化nk细胞表现出的增强的细胞毒性，连同nk细胞表现出的快速免疫应答，若干实施方案允许增强的初始抗癌作用，这可以显著减少甚至消除肿瘤负荷。在若干实施方案中，此类工程化nk细胞特别重要，至少部分是由于与t细胞相比其免疫原性潜能降低，因为侵袭性癌症可能不允许有足够的时间生成自体t细胞疗法。
9.在若干实施方案中，本文提供的nk细胞经工程化改造以表达抗bcma car。在若干实施方案中，此类表达抗bcma car的nk细胞与表达针对非bcma靶标(诸如slamf7、cd38、cd138、cd19或gprc5d)的car的工程化nk细胞结合给予。在若干实施方案中，此类表达抗bcma car的nk细胞与表达针对非bcma靶标(诸如slamf7、cd38、cd138、cd19或gprc5d)的car
的工程化t细胞结合给予。在若干实施方案中，此类表达抗bcma car的nk细胞与表达抗cd19 car的工程化nk细胞结合给予。在若干实施方案中，此类表达抗bcma car的nk细胞与表达抗cd19 car的工程化t细胞结合给予。
10.在若干实施方案中，提供了用于癌症免疫疗法的工程化细胞群体，其包含表达bcma定向性嵌合抗原受体(car)的自然杀伤(nk)细胞群体，该car包括细胞外抗bcma结合部分，包含细胞内信号传导域，该细胞内信号传导域包含ox40亚域和cd3ζ亚域。在若干实施方案中，细胞还被配置为表达膜结合的白细胞介素-15(mbil15)。在若干实施方案中，ox40亚域由与seq id no:5具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的核酸编码。在若干实施方案中，cd3ζ亚域由与seq id no:7具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的核酸编码。在若干实施方案中，car进一步包含铰链和/或跨膜域。在若干实施方案中，ox40亚域包含与seq id no:6的氨基酸序列具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的序列，并且cd3ζ亚域包含与seq id no:8的氨基酸序列具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的序列。在若干实施方案中，铰链域包含cd8a铰链域并且包含与seq id no:2的氨基酸序列具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的序列。在若干实施方案中，mbil15包含与seq id no:307的氨基酸序列具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的序列。
11.在若干实施方案中，抗bcma结合部分包含选自以下的一个或多个cdr：seq id no:208、seq id no:209、seq id no:210、seq id no:211、seq id no:212、seq id no:213、seq id no:214、seq id no:215、seq id no:216、seq id no:217、seq id no:218、seq id no:219、seq id no:220、seq id no:221、seq id no:222、seq id no:223、seq id no:224、seq id no:261、seq id no:261、seq id no:263、seq id no:264、seq id no:265、seq id no:266、seq id no:267、seq id no:268、seq id no:269、seq id no:270、seq id no:271、seq id no:272、seq id no:273、seq id no:274、seq id no:275、seq id no:276、seq id no:277、seq id no:278、seq id no:279、seq id no:280、seq id no:281、seq id no:282、seq id no:283、seq id no:284、seq id no:285、seq id no:286、seq id no:287、seq id no:288、seq id no:289、seq id no:290、seq id no:291、seq id no:292、seq id no:293和seq id no:294，或与前述的一项或多项具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％序列同一性的序列。在若干实施方案中，抗bcma结合部分包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:225、seq id no:226、seq id no:227、seq id no:228、seq id no:229、seq id no:230、seq id no:231、seq id no:232、seq id no:233、seq id no:234、seq id no:235、seq id no:236、seq id no:237、seq id no:238、seq id no:239、seq id no:240、seq id no:241、seq id no:242、seq id no:243、seq id no:244、seq id no:245、seq id no:246、seq id no:247、seq id no:248、seq id no:249、seq id no:250、seq id no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259、seq id no:260、seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304，或与前述的一项或多项具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％的序列同一性的序列。
12.在一些实施方案中，car进一步包含结合额外的bcma表位的额外细胞外部分。在若干实施方案中，工程化细胞群体进一步包含表达结合额外的bcma表位的car的额外nk细胞。在若干实施方案中，工程化细胞群体进一步包含表达结合额外的bcma表位的car的t细胞。在若干实施方案中，car进一步包含结合非bcma癌症标志物的额外细胞外部分。在若干实施方案中，工程化细胞群体进一步包含表达结合非bcma癌症标志物的car的额外nk细胞。在若干实施方案中，工程化细胞群体进一步包含表达结合非bcma癌症标志物的car的t细胞。取决于实施方案，非bcma癌症标志物包含cd138、slamf7、cd38、gprc5d或cd19(或本文所公开其他标志物)中的一种或多种。在若干实施方案中，非bcma癌症标志物是cd19，并且结合所述cd19的car包含由与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200中的一项或多项具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的多核苷酸编码的抗cd19结合域。本文提供了治疗癌症的方法，例如通过向患有癌症的受试者施用本文所公开工程化细胞群体。还提供了本文所公开工程化细胞群体用于治疗癌症和/或在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在若干实施方案中，癌症是b细胞恶性肿瘤。
13.在若干实施方案中，提供了组合免疫疗法组合物，其包含：(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，该bcma定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗bcma结合部分、细胞内信号传导域，其中细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达针对选自cd138、slamf7、cd38、gprc5d或cd19的非bcma癌症标志物的嵌合抗原受体，该非bcma定向性嵌合抗原受体包含：细胞外部分，其用于结合cd138、slamf7、cd38、gprc5d或cd19中的一个或多个；细胞内信号传导域，其中细胞内信号传导域包含ox40亚域和cd3ζ亚域，和(iii)工程化t细胞，其表达针对选自cd138、slamf7、cd38、gprc5d或cd19的非bcma癌症标志物的嵌合抗原受体，该非bcma定向性嵌合抗原受体包含：细胞外部分，其用于结合cd138、slamf7、cd38、gprc5d或cd19中的一个或多个；细胞内信号传导域，其中细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd28亚域、4-1bb亚域和cd3ζ亚域中的一种或多种。
14.在若干实施方案中，提供了组合免疫疗法组合物，其包含(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，该bcma定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗bcma结合部分、细胞内信号传导域，并且其中细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达针对非bcma癌症标志物的嵌合抗原受体，该非bcma定向性嵌合抗原受体包含用于结合非bcma癌症标志物的细胞外部分、细胞内信号传导域，并且其中细胞内信号传导域包含ox40亚域和cd3ζ亚域，和(iii)工程化t细胞，其表达针对非bcma癌症标志物的嵌合抗原受体，该非bcma定向性嵌合抗原受体包含用于结合非bcma癌症标志物的细胞外部分、细胞内信号传导域，并且其中细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd28亚域和4-1bb亚域以及cd3ζ亚域中的一种或多种。
15.在若干实施方案中，提供了组合免疫疗法组合物，其包含：(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达第一bcma定向性嵌合抗原受体，该bcma定向性嵌合抗原受体包含针对第一bcma表位的细胞外抗bcma结合部分、细胞内信号传导域，其中细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达第二bcma定向性嵌合抗原受体，该bcma定向性嵌合抗原受体包含针对第二bcma表位的细胞外抗bcma结合部分、细胞内信号传导域，其中细胞内信号传导域包含ox40亚域和cd3ζ亚域，和
(iii)工程化t细胞，其表达第二bcma定向性嵌合抗原受体，该bcma定向性嵌合抗原受体包含针对第二bcma表位的细胞外抗bcma结合部分、细胞内信号传导域，其中细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd28亚域、4-1bb亚域和cd3ζ亚域中的一种或多种。
16.在若干实施方案中，本文提供了用于癌症免疫疗法的工程化免疫细胞，其包含表达双特异性bcma定向性嵌合抗原受体的工程化免疫细胞，该bcma定向性嵌合抗原受体包含：细胞外抗bcma结合部分，其包含配置为与bcma的第一表位结合的第一区域和配置为与第二bcma表位结合的第二区域；细胞内信号传导域，其中细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd28亚域、4-1bb亚域和cd3ζ亚域中的一种或多种。在若干实施方案中，免疫细胞是nk细胞。在若干实施方案中，免疫细胞是t细胞。
17.在若干实施方案中，本文提供了生成工程化免疫细胞群体的方法，其包括向免疫细胞群体递送包含编码bcma定向性嵌合抗原受体的多核苷酸的载体，该嵌合抗原受体包含细胞外抗bcma结合部分和细胞内信号传导域，其中该细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域。在若干实施方案中，ox40亚域由与seq id no:5具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的核酸编码。在若干实施方案中，cd3ζ亚域由与seq id no:7具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的核酸编码。在若干实施方案中，ox40亚域包含与seq id no:6的氨基酸序列具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的序列。在若干实施方案中，cd3ζ亚域包含与seq id no:8的氨基酸序列具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的序列。在若干实施方案中，多核苷酸也编码mbil15。在若干实施方案中，抗bcma结合部分进一步包含结合额外的bcma表位的额外细胞外抗bcma结合部分。在若干实施方案中，该方法进一步包括向免疫细胞群体递送包含编码针对非bcma癌症标志物的嵌合抗原受体的多核苷酸的额外载体，该非bcma定向性嵌合抗原受体包含用于结合非bcma癌症标志物的细胞外部分和细胞内信号传导域。在若干实施方案中，非bcma癌症标志物包含cd138、slamf7、cd38、gprc5d或cd19中的一种或多种。
18.在若干实施方案中，提供了组合免疫疗法组合物，其包含：(i)工程化的自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，该bcma定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗bcma结合部分、细胞内信号传导域，其中细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，该cd19定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗cd19结合部分、细胞内信号传导域，和(iii)工程化t细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，该cd19定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗cd19结合部分和细胞内信号传导域。在若干实施方案中，工程化nk细胞和/或工程化t细胞经进一步工程化改造以表达膜结合的白细胞介素15。
19.在若干实施方案中，car包含包括cd8a铰链域的铰链域。在若干实施方案中，cd8a铰链域包含与seq id no:2的氨基酸序列具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的序列。在若干实施方案中，car进一步包含铰链和/或跨膜域。在若干实施方案中，nk和/或t细胞经工程化改造为也表达mbil15。在若干实施方案中，nk细胞而非t细胞经工程化改造以表达mbil15。权利要求28至30中任一项所述的方法，其中所述mbil15包含seq id no:12的白细胞介素15氨基酸序列。在若干实施方案中，mbil15包含与seq id no:307具有至少约85％、至少约90％、至少约95％，或至少约98％序列同一性的序列。
20.在若干实施方案中，抗bcma结合部分包含选自以下的一个或多个cdr：seq id no:208、seq id no:209、seq id no:210、seq id no:211、seq id no:212、seq id no:213、seq id no:214、seq id no:215、seq id no:216、seq id no:217、seq id no:218、seq id no:219、seq id no:220、seq id no:221、seq id no:222、seq id no:223、seq id no:224、seq id no:261、seq id no:261、seq id no:263、seq id no:264、seq id no:265、seq id no:266、seq id no:267、seq id no:268、seq id no:269、seq id no:270、seq id no:271、seq id no:272、seq id no:273、seq id no:274、seq id no:275、seq id no:276、seq id no:277、seq id no:278、seq id no:279、seq id no:280、seq id no:281、seq id no:282、seq id no:283、seq id no:284、seq id no:285、seq id no:286、seq id no:287、seq id no:288、seq id no:289、seq id no:290、seq id no:291、seq id no:292、seq id no:293和seq id no:294，或与前述的一项或多项具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、或至少约98％序列同一性的序列。
21.在若干实施方案中，抗bcma结合部分包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:225、seq id no:226、seq id no:227、seq id no:228、seq id no:229、seq id no:230、seq id no:231、seq id no:232、seq id no:233、seq id no:234、seq id no:235、seq id no:236、seq id no:237、seq id no:238、seq id no:239、seq id no:240、seq id no:241、seq id no:242、seq id no:243、seq id no:244、seq id no:245、seq id no:246、seq id no:247、seq id no:248、seq id no:249、seq id no:250、seq id no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259、seq id no:260、seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304，或与前述的一种或多种具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的序列。
22.在若干实施方案中，(ii)和/或(iii)的car的抗cd19结合域由选自下组的多核苷酸编码：与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少95％同一性的多核苷酸，或与前述的一种或多种具有至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约98％序列同一性的序列。
23.在若干实施方案中，提供了包含编码bcma定向性嵌合抗原受体的多核苷酸的载体，该嵌合抗原受体包含细胞外抗bcma结合部分和细胞内信号传导域。在若干实施方案中，细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd28亚域和4-1bb亚域以及cd3ζ亚域中的一种或多种。
24.本文提供了治疗受试者中的癌症的方法，包括向患有癌症的受试者施用本公开的组合免疫疗法组合物。在若干实施方案中，组合包括(i)和(ii)。在若干实施方案中，组合包括(i)和(iii)。取决于实施方案，组合疗法的各部分可以被递送相同次数或不同次数。例如在若干实施方案中，(i)和(ii)的施用各进行3次。在若干实施方案中，例如(i)和(iii)的施用对于(i)进行3次，对于(iii)进行2次。本文提供了所公开的组合免疫疗法组合物用于治疗癌症以及在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在若干实施方案中，本文提供的治疗和用途用于治疗或预防多发性骨髓瘤。
25.在若干实施方案中，提供了表达bcma定向性嵌合抗原受体的工程化自然杀伤(nk)细胞，该嵌合抗原受体包含细胞外抗bcma结合部分、细胞内信号传导域，其中细胞内信号传
导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，其中细胞还表达膜结合的白细胞介素15(mbil15)。
26.在若干实施方案中，ox40亚域由与seq id no:5具有至少85％序列同一性的核酸编码，或与由seq id no:5编码的亚域功能等同。在若干实施方案中，cd3ζ亚域由与seq id no:7具有至少85％序列同一性的核酸编码，或与由seq id no:7编码的亚域功能等同。在若干实施方案中，ox40亚域包含seq id no:6的氨基酸序列(或与由seq id no:6编码的蛋白质具有功能等同性)并且cd3ζ亚域包含seq id no:8的氨基酸序列(或与由seq id no:8编码的蛋白质具有功能等同性)。
27.在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含铰链和/或跨膜域。在若干实施方案中，铰链域包含cd8a铰链域。在若干实施方案中，cd8a铰链域包含seq id no:2的氨基酸序列。在若干实施方案中，mbil15包含与seq id no:12的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的il15。
28.本文还提供了组合免疫疗法组合物，其包含(i)工程化的自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性的嵌合抗原受体以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，(iii)工程化t细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体。在若干实施方案中，cd19 car的抗cd19结合域由选自下组的多核苷酸编码：与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少85％、至少90％或至少95％同一性的多核苷酸。
29.在若干实施方案中，bmca定向car包含细胞外抗bcma结合部分、铰链和/或跨膜域、包含ox40亚域的细胞内信号传导域和cd3ζ亚域。在若干实施方案中，nk细胞还表达膜结合的il15。在若干实施方案中，cd19定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗cd19结合部分、铰链和/或跨膜域，以及包含ox40亚域、cd3ζ亚域的细胞内信号传导域。在若干实施方案中，bcma定向性car进一步包含抗cd19结合域。
30.在若干实施方案中，提供了组合免疫疗法组合物，其包含(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体的细胞，该cd19定向性嵌合抗原受体包含由选自下组的多核苷酸编码的细胞外抗cd19结合部分：与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少85％、至少90％或至少95％同一性的多核苷酸，和(iii)工程化t细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，该cd19定向性嵌合抗原受体包含由选自下组的多核苷酸编码的细胞外抗cd19结合部分：与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少85％、至少90％或至少95％同一性的多核苷酸。
31.在若干实施方案中，抗bcma部分包含选自以下的一个或多个cdr：seq id no:208、seq id no:209、seq id no:210、seq id no:211、seq id no:212、seq id no:213、seq id no:214、seq id no:215、seq id no:216、seq id no:217、seq id no:218、seq id no:219、seq id no:220、seq id no:221、seq id no:222、seq id no:223、seq id no:224、seq id no:261、seq id no:261、seq id no:263、seq id no:264、seq id no:265、seq id no:266、seq id no:267、seq id no:268、seq id no:269、seq id no:270、seq id no:271、seq id no:272、seq id no:273、seq id no:274、seq id no:275、seq id no:276、seq id no:277、seq id no:278、seq id no:279、seq id no:280、seq id no:281、seq id no:282、seq id no:283、seq id no:284、seq id no:285、seq id no:286、seq id no:287、seq id no:288、
seq id no:289、seq id no:290、seq id no:291、seq id no:292、seq id no:293和seq id no:294。
32.在若干实施方案中，抗bcma部分包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:225、seq id no:226、seq id no:227、seq id no:228、seq id no:229、seq id no:230、seq id no:231、seq id no:232、seq id no:233、seq id no:234、seq id no:235、seq id no:236、seq id no:237、seq id no:238、seq id no:239、seq id no:240、seq id no:241、seq id no:242、seq id no:243、seq id no:244、seq id no:245、seq id no:246、seq id no:247、seq id no:248、seq id no:249、seq id no:250、seq id no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259、seq id no:260、seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304(或与前述任一项具有至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的序列)。
33.在若干实施方案中，还提供了治疗受试者中的癌症的方法，包括向患有癌症的受试者施用表达如本文所公开的针对bcma的嵌合抗原受体的工程化nk细胞。在若干实施方案中，该方法进一步包括向受试者施用表达抗cd19嵌合抗原受体的工程化nk细胞和/或向受试者施用表达抗cd19嵌合抗原受体的工程化t细胞。在若干实施方案中，工程化nk细胞和/或工程化t细胞经进一步工程改造以表达膜结合的白细胞介素15。
34.在若干实施方案中，组合使用靶向bcma的nk细胞和靶向cd19的nk和/或t细胞。在若干实施方案中，组合治疗组合物的组分是共同施用的，而在一些实施方案中，组分是分开施用的。
35.本文还提供了表达如本文所公开的抗bcma car的工程化nk细胞用于治疗癌症的用途。在若干实施方案中，提供了表达如本文所公开的抗bcma car的工程化nk细胞在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在若干实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。
36.在若干实施方案中，本文提供了表达cd19定向性嵌合抗原受体的免疫细胞以及免疫细胞群体，该嵌合抗原受体包含细胞外抗cd19结合部分、铰链和/或跨膜域，以及细胞内信号传导域。本文还提供了编码cd19定向性嵌合抗原受体的多核苷酸(以及用于使用其转染细胞的载体)，该嵌合抗原受体包含细胞外抗cd19结合部分、铰链和/或跨膜域，以及细胞内信号传导域。
37.在若干实施方案中，提供了编码人源化cd19定向性嵌合抗原受体的多核苷酸，该嵌合抗原受体包含人源化抗cd19结合部分、共刺激域和信号传导域。在若干实施方案中，共刺激域包含ox40。在若干实施方案中，人源化抗cd19结合部分包含人源化scfv，其中重链和轻链中的一条或多条已被人源化。在若干实施方案中，重链和/或轻链上的cdr中的一个或多个已被人源化。例如，在若干实施方案中，提供了编码人源化cd19定向性嵌合抗原受体的多核苷酸，该嵌合抗原受体包含：细胞外抗cd19结合部分，其中该抗cd19结合部分包含重链可变(vh)域和轻链可变(vl)域，该vh域包含选自seq id no:120、seq id no:121、seq id no:122和seq id no:123的vh域并且该vl域包含选自seq id no:117、seq id no:118和seq id no:119的vl域；铰链和/或跨膜域；细胞内信号传导域。
38.在若干实施方案中，提供了编码人源化嵌合抗原受体(car)的多核苷酸，其中该car包含：单链抗体或单链抗体片段，其包含人源化抗cd19结合域；跨膜域；初级细胞内信号
no:197、seq id no:199或seq id no:201的人源化嵌合抗原受体。
45.在若干实施方案中，提供了编码人源化cd19定向性嵌合抗原受体的多核苷酸，该嵌合抗原受体包含：细胞外抗cd19结合部分，其中该抗cd19结合部分包含人源化scfv序列，该序列包含seq id no:123的可变重(vh)域；铰链和/或跨膜域；以及细胞内信号传导域。在若干实施方案中，多核苷酸编码seq id no:179、seq id no:181、seq id no:183、seq id no:203、seq id no:205或seq id no:207的人源化嵌合抗原受体。
46.在若干实施方案中，所提供的多核苷酸还编码膜结合的白细胞介素-15(mbil15)。
47.在若干实施方案中，细胞内信号传导域包含ox40亚域。然而，在若干实施方案中，细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd28亚域、icos亚域、cd28-41bb亚域、cd27亚域、cd44亚域或其组合中的一种或多种。
48.在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含铰链和跨膜域，其中该铰链是cd8α铰链，其中该跨膜域是cd8α或nkg2d跨膜域。在若干实施方案中，细胞内信号传导域包含cd3ζ域。
49.在若干实施方案中，多核苷酸不编码seq id no:112、113或114。在若干实施方案中，多核苷酸不编码seq id no:116。在若干实施方案中，多核苷酸不编码dap10或dap12。
50.在若干实施方案中，提供了工程化nk细胞、工程化t细胞和/或nk细胞和t细胞的混合群体，它们表达本文提供的人源化cd19定向性嵌合抗原受体中的一种或多种。
51.还提供了用于治疗受试者中的癌症的方法，其包括向患有癌症的受试者施用如本文所公开的表达嵌合抗原受体的工程化nk和/或t细胞。还提供了本文提供的多核苷酸用于治疗癌症的用途以及本文提供的多核苷酸在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
52.在若干实施方案中，本文还提供了编码cd19定向性嵌合抗原受体的多核苷酸，该嵌合抗原受体包含：细胞外抗cd19结合部分，其中该抗cd19结合部分包含scfv；跨膜域；以及细胞内信号传导域，其中该细胞内信号传导域包含cd28共刺激域和cd3ζ信号传导域。
53.在若干实施方案中，本文还提供了编码cd19定向性嵌合抗原受体的多核苷酸，该嵌合抗原受体包含：细胞外抗cd19结合部分，其中该抗cd19结合部分包含scfv；铰链，其中该铰链是cd8α铰链；跨膜域；以及细胞内信号传导域，其中该细胞内信号传导域包含cd3ζitam。
54.在若干实施方案中，本文还提供了编码cd19定向性嵌合抗原受体的多核苷酸，该嵌合抗原受体包含：细胞外抗cd19结合部分，其中该抗cd19结合部分包含scfv的可变重链或scfv的可变轻链；铰链，其中该铰链是cd8α铰链；跨膜域，其中该跨膜域包含cd8α跨膜域；以及细胞内信号传导域，其中该细胞内信号传导域包含cd3ζitam。
55.在若干实施方案中，跨膜域包含cd8α跨膜域。在若干实施方案中，跨膜域包含nkg2d跨膜域。在若干实施方案中，跨膜域包含cd28跨膜域。
56.在若干实施方案中，细胞内信号传导域包含或进一步包含cd28信号传导域。在若干实施方案中，细胞内信号传导域包含或进一步包含4-1bb信号传导域。在若干实施方案中，细胞内信号传导域包含或进一步包含ox40域。在若干实施方案中，细胞内信号传导域包含或进一步包含4-1bb信号传导域。在若干实施方案中，细胞内信号传导域包含或进一步包含选自icos、cd70、cd161、cd40l、cd44及其组合的域。
57.在若干实施方案中，多核苷酸还编码截短的表皮生长因子受体(egfrt)。在若干实施方案中，egfrt在细胞中表达为可溶性因子。在若干实施方案中，egfrt以膜结合的形式表
no.55的序列或与seq no.55的序列至少约95％同源的序列。在若干实施方案中，hc cdr1包含seq id no.56的序列或与seq no.56的序列至少约95％同源的序列。在若干实施方案中，hc cdr2包含seq id no.57的序列或与seq no.57的序列至少约95％同源的序列。在若干实施方案中，hc cdr3包含seq id no.58的序列或与seq no.58的序列至少约95％同源的序列。
61.在若干实施方案中，嵌合抗原受体的细胞内信号传导域包含ox40亚域。在若干实施方案中，细胞内信号传导域进一步包含cd3ζ亚域。在若干实施方案中，ox40亚域包含seq id no:16的氨基酸序列(或与seq id no.16的序列至少约95％同源的序列)，并且cd3ζ亚域包含seq id no:8的氨基酸序列(或与seq id no:8的序列至少约95％同源的序列)。
62.在若干实施方案中，铰链域包含cd8a铰链域。在若干实施方案中，cd8a铰链域包含seq id no:2的氨基酸序列或与seq id no:2的序列至少约95％同源的序列。
63.在若干实施方案中，免疫细胞还表达膜结合的白细胞介素-15(mbil15)。在若干实施方案中，mbil15包含seq id no:12的氨基酸序列或与seq id no:12的序列至少约95％同源的序列。
64.在若干实施方案中，其中嵌合抗原受体进一步包含nkg2d受体的细胞外域。在若干实施方案中，免疫细胞表达第二嵌合抗原受体，其包含nkg2d受体的细胞外域、跨膜域、细胞毒性信号传导复合物和任选地mbil15。在若干实施方案中，nkg2d受体的细胞外域包含nkg2d的功能片段，其包含seq id no:26的氨基酸序列或与seq id no:26的序列至少约95％同源的序列。在各种实施方案中，工程化改造以表达本文所公开嵌合抗原受体和/或嵌合抗原受体的免疫细胞是nk细胞。在一些实施方案中，使用t细胞。在若干实施方案中，使用nk细胞和t细胞(和/或其他免疫细胞)的组合。
65.在若干实施方案中，本文提供了治疗受试者中的癌症的方法，其包括向患有癌症的受试者施用如本文所公开的靶向cd19的工程化免疫细胞。本文还提供了如本文所公开的靶向cd19的免疫细胞用于治疗癌症的用途。同样地，本文提供了如本文所公开的靶向cd19的免疫细胞在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在若干实施方案中，所治疗的癌症是急性淋巴细胞性白血病。
66.本文所述的方法和组合物的一些实施方案涉及免疫细胞。在一些实施方案中，免疫细胞表达cd19定向性嵌合抗原受体，其包含细胞外抗cd19部分、铰链和/或跨膜域和/或细胞内信号传导域。在一些实施方案中，免疫细胞是自然杀伤(nk)细胞。在一些实施方案中，免疫细胞是t细胞。
67.在一些实施方案中，铰链域包含cd8a铰链域。在一些实施方案中，铰链域包含ig4 sh域。
68.在一些实施方案中，跨膜域包含cd8a跨膜域。在一些实施方案中，跨膜域包含cd28跨膜域。在一些实施方案中，跨膜域包含cd3跨膜域。
69.在一些实施方案中，信号传导域包含ox40信号传导域。在一些实施方案中，信号传导域包含4-1bb信号传导域。在一些实施方案中，信号传导域包含cd28信号传导域。在一些实施方案中，信号传导域包含nkp80信号传导域。在一些实施方案中，信号传导域包含cd16 ic信号传导域。在一些实施方案中，信号传导域包含cd3ζ或cd3ζitam信号传导域。在一些实施方案中，信号传导域包含mbil-15信号传导域。在一些实施方案中，信号传导域包含2a切
割域。在一些实施方案中，通过2a切割域将mil-15信号传导域与cd19定向性嵌合抗原受体的其余或另一部分分开。
70.一些实施方案涉及包含将如本文所述的免疫细胞施用于有需要的受试者的方法。在一些实施方案中，受试者患有癌症。在一些实施方案中，施用可以治疗、抑制或预防癌症的进展。
附图说明
71.图1a包括对cd19定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
72.图1b包括对cd19定向性嵌合抗原受体的其他非限制性实例的描绘。
73.图2也包括对cd19定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
74.图3a也包括对cd19定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
75.图3b也包括对cd19定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
76.图3c也包括对cd19定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
77.图3d也包括对包含人源化cd19结合域的cd19定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
78.图3e也包括对包含人源化cd19结合域的cd19定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
79.图3f也包括对包含人源化cd19结合域的cd19定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
80.图3g也包括对cd19定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘，该嵌合抗原受体包含无标签序列的人源化cd19结合域。
81.图3h也包括对cd19定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘，该嵌合抗原受体包含无标签序列的人源化cd19结合域。
82.图3i也包括对cd19定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘，该嵌合抗原受体包含无标签序列的人源化cd19结合域。
83.图4a包括对bcma定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
84.图4b包括对bcma定向性嵌合抗原受体的其他非限制性实例的描绘。
85.图5a也包括对bcma定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
86.图5b也包括对bcma定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
87.图5c也包括对bcma定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
88.图5d也包括对bcma定向性嵌合抗原受体的非限制性实例的描绘。
89.发明详述
90.本文提供的方法和组合物的一些实施方案涉及bcma定向性嵌合抗原受体(car)。本文提供的方法和组合物的一些实施方案涉及cd19定向性嵌合抗原受体。在一些实施方案中，受体在细胞上表达，如本文所述的。本文提供的方法和组合物的一些实施方案涉及bmca和cd19定向性嵌合抗原受体的组合。一些实施方案包括在免疫疗法中使用组合物或细胞的方法。一些实施方案涉及使用在自然杀伤(nk)细胞上表达的抗bcma car。一些实施方案涉及与表达抗cd19 car的额外nk细胞和/或表达抗cd19 car的t细胞组合使用的此类nk细胞。
91.术语“抗癌作用”是指可以通过多种手段表现出来的生物学作用，包括但不限于肿
瘤体积减少、癌细胞数目减少、转移数目减少、预期寿命增加、癌细胞增殖减少、癌细胞存活减少，或与癌性病况相关联的各种生理症状的改善。“抗癌作用”还可以通过car首先预防癌症发生的能力表现出来。
92.细胞类型
93.本文提供的方法和组合物的一些实施方案涉及细胞，诸如免疫细胞。例如，免疫细胞可以经工程化改造以包括嵌合抗原受体(诸如bcma定向性car和/或cd19定向car)，或经工程化改造以包括编码如本文所述的所述car的核酸。
94.传统的抗癌疗法依赖于手术方案、放射疗法、化学疗法或这些方法的组合。随着研究的进行，对某些癌症的机制中的一些有了更深入的了解，从而利用这些知识来开发癌症靶向疗法。靶向疗法是一种癌症治疗，其采用靶向癌细胞或支持癌细胞生长的细胞(如血管细胞)中发现的特异性基因或蛋白质的某些药物，以减少或阻止癌细胞生长。最近，基因工程已经使得利用免疫系统的某些方面来对抗癌症的方案得到发展。在一些情况下，患者自身的免疫细胞经修饰以特异性地根除该患者的癌症类型。可以使用各种类型的免疫细胞，诸如t细胞和/或自然杀伤细胞(nk细胞)，如下文更详细地描述的。
95.为了促进癌症免疫疗法，本文提供了编码嵌合抗原受体(car)的多核苷酸、多肽和载体，该car包含靶结合部分(例如，由癌细胞表达的配体的细胞外结合剂，诸如bcma定向性嵌合抗原受体和/或cd19定向性嵌合抗原受体)和细胞毒性信号传导复合物。例如，一些实施方案包括编码cd19定向性嵌合抗原受体的多核苷酸、多肽或载体，以促进将免疫细胞靶向至癌症并对癌细胞发挥细胞毒性作用。一些实施方案包括编码bcma定向性嵌合抗原受体的多核苷酸、多肽或载体，以促进将免疫细胞靶向至癌症并对癌细胞发挥细胞毒作用。在若干实施例中，提供了此类car的组合。还提供了表达此类car的工程化免疫细胞(例如，t细胞和/或nk细胞)。在若干实施方案中，本文还提供了编码包含细胞外域的构建体的多核苷酸、多肽和载体，该细胞外域包含两个或更多个亚域，例如，第一靶向cd19的亚域和第二亚域，该第一靶向cd19的亚域包含如本文所公开的cd19结合部分，并且该第二亚域包含bcma靶向亚域和细胞毒性信号传导复合物。还提供了表达此类双特异性构建体的工程化免疫细胞(例如，t细胞和/或nk细胞)。本文还提供了治疗癌症的方法以及此类细胞用于癌症免疫疗法的其他用途。
96.用于免疫疗法的工程化细胞
97.在若干实施方案中，免疫系统的细胞经工程化改造以具有增强的针对靶细胞(诸如肿瘤细胞)的细胞毒性作用。例如，免疫系统的细胞可以经工程化改造以包括如本文所述的bcma定向性和/或cd19定向性嵌合抗原受体。在若干实施方案中，使用白细胞或白血球，因为其天然功能是保护身体对抗异常细胞的生长和感染性疾病。多种类型的白细胞在人免疫系统中起着特定作用，因此是本文公开的细胞工程化改造的优选起点。白细胞包括粒细胞和无粒细胞(分别在细胞质中存在或不存在颗粒)。粒细胞包括嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和肥大细胞。无粒细胞包括淋巴细胞和单核细胞。细胞(诸如本文随后出现或以其他方式描述的那些细胞)可以经工程化改造以包括嵌合抗原受体诸如bcma定向性嵌合抗原受体、cd19定向性嵌合抗原受体、其组合，或编码此类嵌合抗原受体的核酸和/或经工程化改造以共表达膜结合的白细胞介素15(mbil15)共刺激域。
98.用于免疫疗法的单核细胞
99.单核细胞是白细胞的亚型。单核细胞可以分化成巨噬细胞和髓样谱系树突细胞。单核细胞与适应性免疫系统相关联，并且提供吞噬作用、抗原呈递和细胞因子产生的主要功能。吞噬作用是摄取细胞物质或整个细胞，然后消化和破坏被吞没的细胞物质的过程。在若干实施方案中，单核细胞与如本文所公开的一种或多种额外的工程化细胞结合使用。本文所述的方法和组合物的一些实施方案涉及包括bcma定向性嵌合抗原受体或编码该bcma定向性嵌合抗原受体的核酸的单核细胞。本文所述的方法和组合物的一些实施方案涉及包括cd19定向性嵌合抗原受体或编码该cd19定向性嵌合抗原受体的核酸的单核细胞。本文公开的方法和组合物的若干实施方案涉及经工程化改造以表达bcma定向性嵌合抗原受体和/或cd19定向性嵌合抗原受体和膜结合的白细胞介素15(mbil15)共刺激域的单核细胞。
100.用于免疫疗法的淋巴细胞
101.淋巴细胞是白细胞的另一主要亚型，包括t细胞(细胞介导的细胞毒性适应性免疫)、自然杀伤细胞(细胞介导的细胞毒性先天免疫)和b细胞(体液、抗体驱动的适应性免疫)。虽然根据本文公开的若干实施方案对b细胞进行工程化改造，但若干实施方案还涉及工程化t细胞或工程化nk细胞(在一些实施方案中使用t细胞和nk细胞的混合物)。本文所述的方法和组合物的一些实施方案涉及包括bcma定向性嵌合抗原受体或编码bcma定向性嵌合抗原受体的核酸的淋巴细胞。本文所述的方法和组合物的一些实施方案涉及包括cd19定向性嵌合抗原受体或编码cd19定向性嵌合抗原受体的核酸的淋巴细胞。本文公开的方法和组合物的若干实施方案涉及经工程化改造以表达bcma定向性嵌合抗原受体和/或cd19定向性嵌合抗原受体和膜结合的白细胞介素15(mbil15)共刺激域的淋巴细胞。
102.用于免疫疗法的t细胞
103.基于细胞表面上t细胞受体的存在，t细胞可与其他淋巴细胞亚型(例如，b细胞或nk细胞)区分开来。可以将t细胞划分为各种不同的亚型，包括效应t细胞、辅助t细胞、细胞毒性t细胞、记忆t细胞、调节性t细胞、自然杀伤t细胞、粘膜相关不变t细胞和γδt细胞。在一些实施方案中，对t细胞的特定亚型进行工程化改造。在一些实施方案中，对t细胞的混合库进行工程化改造。在一些实施方案中，对于要工程化改造表达本文公开的细胞毒性受体复合物的t细胞类型没有特定选择。在若干实施方案中，使用特定技术(诸如使用细胞因子刺激)来增强具有特定标志物谱的t细胞的扩增/收集。例如，在若干实施方案中，通过使用作为刺激分子的cd3和/或cd28来实现某些人t细胞(例如，cd4+t细胞、cd8+t细胞)的活化。在若干实施方案中，提供了治疗或预防癌症或感染性疾病的方法，其包括施用治疗有效量的如本文所述的表达细胞毒性受体复合物和/或归巢部分的t细胞。在若干实施方案中，工程化t细胞是自体细胞，而在一些实施方案中，t细胞是同种异体细胞。本文所述的方法和组合物的一些实施方案涉及包括bcma定向性嵌合抗原受体或编码bcma定向性嵌合抗原受体的核酸的t细胞。本文所述的方法和组合物的一些实施方案涉及包括cd19定向性嵌合抗原受体或编码cd19定向性嵌合抗原受体的核酸的t细胞。本文公开的方法和组合物的若干实施方案涉及经工程化改造以表达bmca定向性嵌合抗原受体和/或cd19定向性嵌合抗原受体和膜结合的白细胞介素15(mbil15)共刺激域的t细胞。
104.用于免疫疗法的nk细胞
105.在若干实施方案中，提供了治疗或预防癌症或感染性疾病的方法，其包括施用治疗有效量的如本文所述的表达受体复合物和/或归巢部分的自然杀伤(nk)细胞。在若干实
施方案中，工程化nk细胞毒性细胞是自体细胞，而在一些实施方案中，nk细胞是同种异体细胞。在若干实施方案中，nk细胞是优选的，因为nk细胞的天然细胞毒性潜力相对较高。在若干实施方案中，出乎意料地有利的是，本文公开的工程化细胞可以进一步上调nk细胞的细胞毒性活性，从而导致甚至更有效的针对靶细胞(例如，肿瘤或其他患病细胞)的活性。在若干实施方案中，nk细胞的高度急性细胞毒性(其通过本文公开的工程化改造方法进一步增强)被充分利用以提供特别有效的细胞疗法组合物。本文所述的方法和组合物的一些实施方案涉及包括bcma定向性嵌合抗原受体或编码bcma定向性嵌合抗原受体的核酸的nk。本文所述的方法和组合物的一些实施方案涉及包括cd19定向性嵌合抗原受体或编码cd19定向性嵌合抗原受体的核酸的nk。本文公开的方法和组合物的若干实施方案涉及经工程改造以表达bcma定向性嵌合抗原受体和/或cd19定向性嵌合抗原受体和膜结合的白细胞介素15(mbil15)共刺激域的nk细胞。
106.用于癌症免疫疗法的造血干细胞
107.在一些实施方案中，造血干细胞(hsc)用于本文公开的免疫疗法方法。在若干实施方案中，细胞经工程改造以表达表达归巢部分和/或细胞毒性受体复合物。在若干实施方案中，使用hsc以利用其移植能力来进行长期血细胞产生(这可能导致靶向抗癌效应细胞的持续来源)，例如以防止癌症缓解。在若干实施方案中，这种持续进行的产生有助于抵消其他细胞类型例如由于肿瘤微环境而引起的无反应性或耗竭。在若干实施方案中，使用同种异体hsc，而在一些实施方案中，使用自体hsc。在若干实施方案中，hsc与一种或多种额外的本文公开的工程化细胞类型组合使用。本文所述的方法和组合物的一些实施方案涉及包括bcma定向性嵌合抗原受体或编码bcma定向性嵌合抗原受体的核酸的干细胞，诸如造血干细胞。本文所述的方法和组合物的一些实施方案涉及包括cd19定向性嵌合抗原受体或编码cd19定向性嵌合抗原受体的核酸的干细胞，诸如造血干细胞。本文公开的方法和组合物的若干实施方案涉及经工程改造以表达bcma定向性嵌合抗原受体和/或cd19定向性嵌合抗原受体和膜结合的白细胞介素15(mbil15)共刺激域的干细胞，诸如造血干细胞。
108.细胞外域(肿瘤结合剂)
109.本文描述的组合物和方法的一些实施方案涉及包括细胞外域的嵌合抗原受体，诸如bcma定向性嵌合抗原受体和/或cd19定向性嵌合抗原受体。在一些实施方案中，细胞外域包含如本文所述的肿瘤结合域(也被称为抗原结合蛋白或抗原结合域)。在一些实施方案中，抗原结合域衍生自或包含抗体、抗体片段、scfv、fv、fab、(fab’)2、单域抗体(sdab)、vh或vl域、骆驼科动物vhh域或非免疫球蛋白支架，诸如darpin、亲和体、affilin、adnectin、affitin、repebody、fynomer、α体、avimer、atrimer、centyrin、pronectin、anticalin、kunitz域、犰狳重复蛋白、自身抗原、受体或配体。在一些实施方案中，肿瘤结合域含有多于一个抗原结合域。在实施方案中，抗原结合域直接或经由任选的接头可操作地连接至tcr域的nh2端(例如，tcr-α、tcr-β1、tcr-β2、前tcr-α、前tcr-α-del48、tcr-γ或tcr-δ的恒定链)。
110.抗原结合蛋白
111.在若干实施方案中，提供了抗原结合蛋白。如本文所用，术语“抗原结合蛋白”应被给予其普通含义，并且还应指包含与抗原结合的抗原结合片段和任选地支架或构架部分的蛋白质，该支架或构架部分允许抗原结合片段采用促进抗原结合蛋白与抗原的结合的构
象。在一些实施方案中，抗原是癌抗原(例如，bcma、cd19等)或其片段。在一些实施方案中，抗原结合片段包含来自与抗原结合的抗体的至少一个cdr。在一些实施方案中，抗原结合片段包含来自与抗原结合的抗体的重链或来自与抗原结合的抗体的轻链的所有三个cdr。在又一些实施方案中，抗原结合片段包含来自与抗原结合的抗体的所有六个cdr(三个来自重链并且三个来自轻链)。在若干实施方案中，抗原结合片段包含来自与抗原结合的抗体的一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr，并且在若干实施方案中，cdr可以是重链和/或轻链cdr的任何组合。在一些实施方案中，抗原结合片段是抗体片段。
112.抗原结合蛋白的非限制性实例包括抗体、抗体片段(例如，抗体的抗原结合片段)、抗体衍生物和抗体类似物。进一步的具体实例包括但不限于单链可变片段(scfv)、纳米抗体(例如，骆驼科动物重链抗体的vh域；vhh片段)、fab片段、fab’片段、f(ab’)2片段、fv片段、fd片段和互补决定区(cdr)片段。这些分子可以衍生自任何哺乳动物来源，诸如人、小鼠、大鼠、兔或猪、狗或骆驼科动物。抗体片段可以与完整的(例如，天然的)抗体竞争靶抗原的结合，并且片段可以通过对完整抗体的修饰(例如，酶促或化学切割)来产生或使用重组dna技术或肽合成来从头合成。抗原结合蛋白可以包含例如具有移植cdr或cdr衍生物的替代性蛋白支架或人工支架。此类支架包括但不限于包含引入以例如稳定抗原结合蛋白的三维结构的突变的抗体衍生支架，以及包含例如生物相容性聚合物的全合成支架。此外，可以使用肽抗体模拟物(“pam”)，以及基于利用纤连蛋白组分作为支架的抗体模拟物的支架。
113.在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含并入至单条多肽链中或并入至多条多肽链中的一个或多个抗体片段。举例来说，抗原结合蛋白可以包括但不限于双体抗体(diabody)；胞内抗体(intrabody)；域抗体(单个vl或vh域或者通过肽接头接合的两个或更多个vh域)；大抗体(maxibody)(融合至fc区的2个scfv)；三抗体(triabody)；四抗体(tetrabody)；微抗体(minibody)(融合至ch3域的scfv)；肽抗体(peptibody)(附接至fc区的一个或多个肽)；线性抗体(一对串联的fd区段(vh-ch1-vh-ch1)，其与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区)；小型模块化免疫药物；以及免疫球蛋白融合蛋白(例如，igg-scfv、igg-fab、2scfv-igg、4scfv-igg、vh-igg、igg-vh和fab-scfv-fc)。
114.在一些实施方案中，抗原结合蛋白具有免疫球蛋白的结构。如本文所用，术语“免疫球蛋白”应被给予其普通含义，并且还应指四聚体分子，其中每个四聚体包含两对相同的多肽链，每对具有一条“轻”链(约25kda)和一条“重”链(约50-70kda)。每条链的氨基端部分包括主要负责抗原识别的约100至110个或更多个氨基酸的可变区。每条链的羧基端部分定义主要负责效应子功能的恒定区。
115.在轻链和重链中，可变区(v)和恒定区(c)通过约12个或更多个氨基酸的“j”区接合，其中重链还包括约10个或更多个氨基酸的“d”区。每个轻/重链对的可变区形成抗体结合位点，使得完整的免疫球蛋白具有两个结合位点。
116.免疫球蛋白链表现出相同的通过三个高变区(也被称为互补决定区或cdr)接合的相对保守的构架区(fr)的一般结构。从n端至c端，轻链和重链均包含域fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3和fr4。
117.将人轻链分类为κ轻链和λ轻链。抗体“轻链”是指以其天然存在的构象存在于抗体分子中的两种类型多肽链中较小的一种。kappa(k)轻链和lambda(λ)轻链是指两种主要的抗体轻链同种型。轻链可以包括从氨基端至羧基端包含单个免疫球蛋白轻链可变区(vl)和
单个免疫球蛋白轻链恒定域(cl)的多肽。
118.将重链分类为mu(μ)、delta(δ)、gamma(γ)、α(α)和epsilon(ε)，并且将抗体的同种型分别定义为igm、igd、igg、iga和ige。抗体“重链”是指以其天然存在的构象存在于抗体分子中的两种类型多肽链中较大的一种，其通常决定抗体所属的类别。重链可以包括从氨基端至羧基端包含以下的多肽：单个免疫球蛋白重链可变区(vh)、免疫球蛋白重链恒定域1(ch1)、免疫球蛋白铰链区、免疫球蛋白重链恒定域2(ch2)、免疫球蛋白重链恒定域3(ch3)和任选的免疫球蛋白重链恒定域4(ch4)。
119.将igg类进一步划分为亚类，即igg1、igg2、igg3和igg4。将iga类进一步划分为亚类，即iga1和iga2。igm具有包括但不限于igm1和igm2的亚类。igg、iga和igd抗体中的重链具有三个域(ch1、ch2和ch3)，然而igm和ige抗体中的重链具有四个域(ch1、ch2、ch3和ch4)。免疫球蛋白重链恒定域可以来自任何免疫球蛋白同种型，包括亚型。抗体链经由cl域和ch1域之间(例如，轻链和重链之间)以及抗体重链铰链区之间的多肽间二硫键连接在一起。
120.在一些实施方案中，抗原结合蛋白是抗体。如本文所用，术语“抗体”是指衍生自与抗原特异性结合的免疫球蛋白分子的蛋白质或多肽序列。抗体可以是单克隆的或多克隆的、多链或单链的，或完整的免疫球蛋白，并且可以衍生自天然来源或衍生自重组来源。抗体可以是免疫球蛋白分子的四聚体。抗体可以是“人源化的”、“嵌合的”或非人的。抗体可以包括任何同种型的完整免疫球蛋白，并且包括例如嵌合抗体、人源化抗体、人抗体和双特异性抗体。完整抗体通常包含至少两条全长重链和两条全长轻链。抗体序列可以仅衍生自单一物种，或者可以是“嵌合的”，也就是说，抗体的不同部分可以衍生自两个不同的物种，如下文进一步描述的。除非另有指示，否则术语“抗体”还包括包含两条基本上全长的重链和两条基本上全长的轻链的抗体，条件是该抗体保留与由两条全长轻链和重链构成的抗体相同或相似的结合和/或功能。例如，在重链和/或轻链的n端和/或c端具有1、2、3、4或5个氨基酸残基取代、插入或缺失的抗体包括在定义中，条件是该抗体保留与包含两条全长重链和两条全长轻链的抗体相同或相似的结合和/或功能。抗体的实例包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体和合成抗体。在一些实施方案中，提供了单克隆抗体和多克隆抗体。如本文所用，术语“多克隆抗体”应被给予其普通含义，并且还应指通常在组成和结合特异性方面广泛变化的抗体的群体。如本文所用，术语“单克隆抗体”(“mab”)应被给予其普通含义，并且还应指具有相同序列的抗体的群体中的一个或多个。单克隆抗体在抗原上的特定表位处与抗原结合。
121.在一些实施方案中，抗原结合蛋白是抗体的片段或抗原结合片段。术语“抗体片段”是指抗体的至少一个部分，其保留与抗原的表位特异性相互作用(例如，通过结合、位阻、稳定/去稳定、空间分布)的能力。抗体片段的实例包括但不限于fab、fab’、f(ab’)2、fv片段、scfv抗体片段、二硫化物连接的fv(sdfv)、由vh和chi域组成的fd片段、线性抗体、单域抗体(诸如sdab(vl或vh))、骆驼科动物vhh域、由抗体片段(诸如包含通过铰链区处的二硫桥连接的两个fab片段的二价片段)形成的多特异性抗体，以及抗体的分离的cdr或其他表位结合片段。还可以将抗原结合片段并入至单域抗体、大抗体、微抗体、纳米抗体、胞内抗体、双体抗体、三抗体、四抗体、v-nar和双scfv中(参见，例如，hollinger and hudson,nature biotechnology 23:1126-1136,2005)。还可以将抗原结合片段移植至基于多肽诸
如纤连蛋白iii型(fn3)的支架中(参见美国专利号6,703,199，其描述了纤连蛋白多肽微型体)。抗体片段可以包括fab、fab’、f(ab’)2和/或fv片段，其包含足以赋予与癌抗原(例如，cd19)的特异性抗原结合的免疫球蛋白的至少一个cdr。抗体片段可以通过重组dna技术或通过完整抗体的酶促或化学切割来产生。
122.在一些实施方案中，提供了fab片段。fab片段是具有vl、vh、cl和ch1域的单价片段；f(ab’)2片段是具有通过铰链区处的二硫桥连接的两个fab片段的二价片段；fd片段具有vh和ch1域；fv片段具有抗体单臂的vl和vh域；并且dab片段具有vh域、vl域、或者vh或vl域的抗原结合片段。在一些实施方案中，可以将这些抗体片段并入至单域抗体、单链抗体、大抗体、微抗体、胞内抗体、双体抗体、三抗体、四抗体、v-nar和双scfv中。在一些实施方案中，抗体包含如本文所述的至少一个cdr。
123.在若干实施方案中，本文还提供了单链可变片段。如本文所用，术语“单链可变片段”(“scfv”)应被给予其普通含义，并且还应指其中vl区和vh区经由接头(例如，氨基酸残基的合成序列)接合以形成连续的蛋白质链的融合蛋白，其中接头足够长以允许蛋白质链自身向后折叠并形成单价抗原结合位点。为了清楚起见，除非另外如此指示，否则“单链可变片段”不是如本文所定义的抗体或抗体片段。双体抗体是包含两条多肽链的二价抗体，其中每条多肽链包含经由接头接合的vh域和vl域，将该接头配置为减少或不允许同一链上的两个域之间的配对，从而允许每个域与另一条多肽链上的互补域配对。根据若干实施方案，如果双体抗体的两条多肽链相同，则由它们的配对产生的双体抗体将具有两个相同的抗原结合位点。具有不同序列的多肽链可以用于制备具有两个不同抗原结合位点的双体抗体。类似地，三抗体和四抗体是分别包含三条和四条多肽链并分别形成三个和四个抗原结合位点的抗体，这些结合位点可以相同或不同。
124.在若干实施方案中，抗原结合蛋白包含一个或多个cdr。如本文所用，术语“cdr”应被给予其普通含义，并且还应指抗体可变区序列内的互补决定区(也被称为“最小识别单元”或“高变区”)。cdr允许抗原结合蛋白与感兴趣的特定抗原特异性结合。有三个重链可变区cdr(cdrh1、cdrh2和cdrh3)和三个轻链可变区cdr(cdrl1、cdrl2和cdrl3)。两条链中的每一条中的cdr通常通过构架区对齐，以形成与靶蛋白上的特定表位或域特异性结合的结构。从n端至c端，天然存在的轻链可变区和重链可变区二者通常遵循这些元件的以下顺序：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3和fr4。已经设计了编号系统以用于为占据这些域中的每一个中的位置的氨基酸分配编号。在kabat sequences of proteins of immunological interest(1987and 1991,nih,bethesda,md)或chothia&lesk,1987,j.mol.biol.196:901-917；chothia et al.,1989,nature 342:878-883中对这种编号系统进行定义。可以使用这种系统来鉴定给定抗体的互补决定区(cdr)和构架区(fr)。用于免疫球蛋白链中的氨基酸的其他编号系统包括(国际免疫遗传学信息系统(the international immunogenetics information system；lefranc et al,dev.comp.immunol.29:185-203；2005)和aho(honegger和pluckthun，j.mol.biol.309(3):657-670；2001)。可以将一个或多个cdr共价地或非共价地并入至分子中以使其成为抗原结合蛋白。在若干实施方案中，本文提供的抗原结合蛋白包含选自seq id no:104和seq id no:106的重链可变区。在若干实施方案中，本文提供的抗原结合蛋白包含选自seq id no:105和seq id no:107的轻链可变区。
125.在若干实施方案中，例如出于改善表达、功能或减少宿主对抗原结合蛋白的潜在免疫应答的目的，抗原结合蛋白已从其原始序列中进行修饰。在若干实施方案中，抗原结合蛋白靶向cd19并且包含选自seq id no:117、seq id no:118和seq id no:119的轻链可变区。在若干实施方案中，抗原结合蛋白靶向cd19并且包含选自seq id no:120、seq id no:121、seq id no:122和seq id no:123的重链可变区。取决于实施方案，可以使用重链区和轻链区的任何组合(例如，在组装scfv中)。在若干实施方案中，抗原结合蛋白靶向cd19并且包含选自seq id no:124、seq id no:125、seq id no:126、seq id no:127、seq id no:128、seq id no:129、seq id no:130、seq id no:131、seq id no:132、seq id no:133、seq id no:134、seq id no:134、seq id no:136、seq id no:137、seq id no:138、seq id no:139、seq id no:140、seq id no:141、seq id no:142、seq id no:143和seq id no:144的一个或多个cdr。
126.在另外的实施方案中，cdr选自seq id no:108、seq id no:109、seq id no:110、seq id no:111、seq id no:112、seq id no:113、seq id no:114和seq id no:115以及任何组合。在一个实施方案中，组装cdr以生成针对cd19并包含seq id no:116的car。
127.在若干实施方案中，抗原结合蛋白靶向cd19并且包含具有seq id no:88的序列的重链。在若干实施方案中，重链与seq id no:89、seq id no:90和/或seq id no:91的轻链中的一条偶联(例如，作为scfv)。在若干实施方案中，抗原结合蛋白包含选自seq id no:92、seq id no:93、seq id no:94、seq id no:95、seq id no:96、seq id no:97、seq id no:98、seq id no:99和seq id no:100的一个或多个cdr。
128.在若干实施方案中，抗原结合蛋白靶向cd19并且包含fmc63抗体的轻链区，其具有seq id no:150的序列。在若干实施方案中，抗原结合蛋白包含fmc63抗体的轻链区，其具有seq id no:148的序列。在若干实施方案中，在重链与轻链之间使用接头，并且在一些实施方案中，接头包含seq id no:149的序列。在若干实施方案中，此类重链和轻链与cd28共刺激域诸如seq id no:153的cd28共刺激域结合使用。通常使用间隔物来分隔car的组成部分。例如，在若干实施方案中，使用包含seq id no:151的序列的间隔物。在若干实施方案中，使用具有seq id no:152的序列的跨膜域。在若干实施方案中，car包含与seq id no:147共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的核酸序列。
129.在一些实施方案中，提供了抗原结合蛋白，其包含与seq id no:33中所列的vh域氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变域。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含与seq id no:33中所列的vh域氨基酸序列具有至少95％同一性的重链可变域。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含与seq id no:33中所列出的vh域氨基酸序列具有至少96、97、98或99％同一性的重链可变域。在若干实施方案中，重链可变域可以具有seq id no:33中所列的vh域氨基酸序列中的一个或多个额外的突变(例如，出于人源化的目的)，但保留与癌抗原(例如，cd19)的特异性结合。在若干实施方案中，重链可变域可以具有seq id no:33中所列的vh域氨基酸序列中的一个或多个额外的突变，但具有改善的与癌抗原(例如，cd19)的特异性结合。
130.在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含与seq id no:32中所列的vl域氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变域。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含与seq id no:
32中所列的vl域氨基酸序列具有至少95％同一性的轻链可变域。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含与seq id no:32中所列的vl域氨基酸序列具有至少96、97、98或99％同一性的轻链可变域。在若干实施方案中，轻链可变域可以具有seq id no:32中所列的vl域氨基酸序列中的一个或多个额外的突变(例如，出于人源化的目的)，但保留与癌抗原(例如，cd19)的特异性结合。在若干实施方案中，轻链可变域可以具有seq id no:32中所列的vl域氨基酸序列中的一个或多个额外的突变，但具有改善的与癌抗原(例如，cd19)的特异性结合。
131.在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含重链可变域和轻链可变域，该重链可变域与seq id no:33中所列的vh域氨基酸序列具有至少90％的同一性，并且该轻链可变域与seq id no:32中所列的vl域氨基酸序列具有至少90％的同一性。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含重链可变域和轻链可变域，该重链可变域与seq id no:33中所列的vh域氨基酸序列具有至少95％的同一性，并且该轻链可变域与seq id no:32中所列的vl域氨基酸序列具有至少95％的同一性。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含重链可变域和轻链可变域，该重链可变域与seq id no:33中所列的vh域氨基酸序列具有至少96、97、98或99％的同一性，并且该轻链可变域与seq id no:32中所列的vl域氨基酸序列具有至少96、97、98或99％的同一性。
132.在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含重链可变域和轻链可变域，该重链可变域具有seq id no:33中所列的vh域氨基酸序列，并且该轻链可变域具有seq id no:32中所列的vl域氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变域包含与seq id no:32的轻链可变域序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，轻链可变域包含与根据seq id no:33的重链可变域序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
133.在一些实施方案中，轻链可变域包含由核苷酸序列编码的氨基酸序列，该核苷酸序列与多核苷酸序列seq id no:32至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。在一些实施方案中，轻链可变域包含由多核苷酸编码的氨基酸序列，该多核苷酸在中等严格条件下与编码根据seq id no:32中的序列的轻链可变域的多核苷酸的互补物杂交。在一些实施方案中，轻链可变域包含由多核苷酸编码的氨基酸序列，该多核苷酸在严格条件下与编码根据seq id no:32中的序列的轻链可变域的多核苷酸的互补物杂交。
134.在一些实施方案中，重链可变域包含与根据seq id no:33的序列的重链可变域序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变域包含由多核苷酸编码的氨基酸序列，该多核苷酸在中等严格条件下与编码根据seq id no:33的序列的重链可变域的多核苷酸的互补物杂交。在一些实施方案中，重链可变域包含由多核苷酸编码的氨基酸序列，该多核苷酸在严格条件下与编码根据seq id no:33的序列的重链可变域的多核苷酸的互补物杂交。
135.在若干实施方案中，提供了额外的抗cd19结合构建体。例如，在若干实施方案中，提供了靶向cd19的scfv，其中该scfv包含重链可变区，该重链可变区包含seq id no.35的
序列。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含与seq id no:35中所列的hcv域氨基酸序列具有至少95％同一性的重链可变域。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含与seq id no:35中所列的hcv域氨基酸序列具有至少96、97、98或99％同一性的重链可变域。在若干实施方案中，重链可变域可以具有seq id no:35中所列的hcv域氨基酸序列中的一个或多个额外的突变(例如，出于人源化的目的)，但保留与癌抗原(例如，cd19)的特异性结合。在若干实施方案中，重链可变域可以具有seq id no:35中所列的hcv域氨基酸序列中的一个或多个额外的突变，但具有改善的与癌抗原(例如，cd19)的特异性结合。
136.另外，在若干实施方案中，靶向cd19的scfv包含轻链可变区，该轻链可变区包含seq id no.36的序列。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含与seq id no:36中所列的lcv域氨基酸序列具有至少95％同一性的轻链可变域。在一些实施方案中，抗原结合蛋白包含与seq id no:36中所列的lcv域氨基酸序列具有至少96、97、98或99％同一性的轻链可变域。在若干实施方案中，轻链可变域可以具有seq id no:36中所列的lcv域氨基酸序列中的一个或多个额外的突变(例如，出于人源化的目的)，但保留与癌抗原(例如，cd19)的特异性结合。在若干实施方案中，轻链可变域可以具有seq id no:36中所列的lcv域氨基酸序列中的一个或多个额外的突变，但具有改善的与癌抗原(例如，cd19)的特异性结合。
137.在若干实施方案中，还提供了包含轻链cdr的抗cd19结合部分，该轻链cdr包含第一、第二和第三互补决定区(分别为lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3)。在若干实施方案中，抗cd19结合部分进一步包含重链cdr，该重链cdr包含第一、第二和第三互补决定区(分别为hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3)。在若干实施方案中，lc cdr1包含seq id no.37的序列。
138.在若干实施方案中，lc cdr1包含与seq no.37的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。在若干实施方案中，lc cdr2包含seq id no.38的序列。在若干实施方案中，lc cdr2包含与seq no.38的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。在若干实施方案中，lc cdr3包含seq id no.39的序列。在若干实施方案中，lc cdr3包含与seq no.39的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。在若干实施方案中，hc cdr1包含seq id no.40的序列。在若干实施方案中，hc cdr1包含与seq no.40的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。在若干实施方案中，hc cdr2包含seq id no.41、42或43的序列。在若干实施方案中，hc cdr2包含与seq no.41、42或43的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。在若干实施方案中，hc cdr3包含seq id no.44的序列。在若干实施方案中，hc cdr3包含与seq no.44的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。
139.在若干实施方案中，还提供了包含轻链可变区(vl)和重链可变区(hl)的抗cd19结合部分，该vl区包含第一、第二和第三互补决定区(分别为vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3)，并且该vh区包含第一、第二和第三互补决定区(分别为vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3)。在若干实施方案中，vl区包含seq id no.45、46、47或48的序列。在若干实施方案中，vl区包含与seq no.45、46、47或48的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。在若干实施方案中，vh区包含seq id no.49、50、51或52的序列。在若干实施方案中，vh区包含与seq no.49、50、51或52的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。
140.在若干实施方案中，还提供了包含轻链cdr的抗cd19结合部分，该轻链cdr包含第一、第二和第三互补决定区(分别为lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3)。在若干实施方案中，抗cd19结合部分进一步包含重链cdr，该重链cdr包含第一、第二和第三互补决定区(分别为hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3)。在若干实施方案中，lc cdr1包含seq id no.53的序列。在若干实施方案中，lc cdr1包含与seq no.53的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。在若干实施方案中，lc cdr2包含seq id no.54的序列。在若干实施方案中，lc cdr2包含与seq no.54的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。在若干实施方案中，lc cdr3包含seq id no.55的序列。在若干实施方案中，lc cdr3包含与seq no.55的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。在若干实施方案中，hc cdr1包含seq id no.56的序列。在若干实施方案中，hc cdr1包含与seq no.56的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。在若干实施方案中，hc cdr2包含seq id no.57的序列。在若干实施方案中，hc cdr2包含与seq no.57的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。在若干实施方案中，hc cdr3包含seq id no.58的序列。在若干实施方案中，hc cdr3包含与seq no.58的序列具有至少约85％、约90％、约95％或约98％同源性的氨基酸序列。
141.本领域已知额外的抗cd19结合部分，诸如在例如美国专利号8,399,645、美国专利公开号2018/0153977、美国专利公开号2014/0271635、美国专利公开号2018/0251514和美国专利公开号2018/0312588中公开的那些，其每一篇的全部内容均通过引用并入本文。
142.在若干实施方案中，抗原结合蛋白靶向bcma。在若干实施方案中，抗原结合蛋白包含选自以下的一个或多个cdr：seq id no:208、seq id no:209、seq id no:210、seq id no:211、seq id no:212、seq id no:213、seq id no:214、seq id no:215、seq id no:216、seq id no:217、seq id no:218、seq id no:219、seq id no:220、seq id no:221、seq id no:222、seq id no:223、seq id no:224、seq id no:261、seq id no:261、seq id no:263、seq id no:264、seq id no:265、seq id no:266、seq id no:267、seq id no:268、seq id no:269、seq id no:270、seq id no:271、seq id no:272、seq id no:273、seq id no:274、seq id no:275、seq id no:276、seq id no:277、seq id no:278、seq id no:279、seq id no:280、seq id no:281、seq id no:282、seq id no:283、seq id no:284、seq id no:285、seq id no:286、seq id no:287、seq id no:288、seq id no:289、seq id no:290、seq id no:291、seq id no:292、seq id no:293和seq id no:294。在若干实施方案中，bmca定向结合域包含与以下的一个或多个共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的一个或多个cdr：seq id no:208、seq id no:209、seq id no:210、seq id no:211、seq id no:212、seq id no:213、seq id no:214、seq id no:215、seq id no:216、seq id no:217、seq id no:218、seq id no:219、seq id no:220、seq id no:221、seq id no:222、seq id no:223、seq id no:224、seq id no:261、seq id no:261、seq id no:263、seq id no:264、seq id no:265、seq id no:266、seq id no:267、seq id no:268、seq id no:269、seq id no:270、seq id no:271、seq id no:272、seq id no:273、seq id no:274、seq id no:275、seq id no:276、seq id no:277、seq id no:278、seq id no:279、seq id no:280、seq id no:281、seq id no:282、seq id no:283、seq id no:284、seq id no:285、seq id no:286、seq id no:
287、seq id no:288、seq id no:289、seq id no:290、seq id no:291、seq id no:292、seq id no:293和seq id no:294。
143.在若干实施方案中，抗原结合蛋白靶向bcma并且包含结合域，该结合域包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:225、seq id no:226、seq id no:227、seq id no:228、seq id no:229、seq id no:230、seq id no:231、seq id no:232、seq id no:233、seq id no:234、seq id no:235、seq id no:236、seq id no:237、seq id no:238、seq id no:239、seq id no:240、seq id no:241、seq id no:242、seq id no:243、seq id no:244、seq id no:245、seq id no:246、seq id no:247、seq id no:248、seq id no:249、seq id no:250、seq id no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259和seq id no:260。在若干实施方案中，bmca定向结合域包含与以下的一个或多个共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列：seq id no:225、seq id no:226、seq id no:227、seq id no:228、seq id no:229、seq id no:230、seq id no:231、seq id no:232、seq id no:233、seq id no:234、seq id no:235、seq id no:236、seq id no:237、seq id no:238、seq id no:239、seq id no:240、seq id no:241、seq id no:242、seq id no:243、seq id no:244、seq id no:245、seq id no:246、seq id no:247、seq id no:248、seq id no:249、seq id no:250、seq id no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259或seq id no:260。
144.在若干实施方案中，抗原结合蛋白靶向bcma并且包含结合域，该结合域包含选自seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304的氨基酸序列。在若干实施方案中，bmca定向结合域包含与seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304中的一个或多个共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
145.在若干实施方案中，抗原结合蛋白，诸如靶向bcma的抗原结合蛋白与一个或多个刺激域结合使用，例如，以生成嵌合抗原受体。例如，在若干实施方案中，使用cd28共刺激域，诸如seq id no:153的共刺激域。通常使用间隔物来分隔car的组成部分。在若干实施方案中，car包含ox40共刺激域，诸如所编码或包含seq id no:5或seq id no:6的那些。在若干实施方案中，car包含与seq id no:5或seq id no:6共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的核酸序列。在若干实施方案中，car包含cd3ζ刺激域，诸如所编码或包含seq id no:7或seq id no:8的那些。在若干实施方案中，car包含与seq id no:7或seq id no:8共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的核酸序列。在若干实施方案中，car包含与seq id no:305共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的核酸序列。
146.在一些实施方案中，本文提供的抗原结合蛋白包含作为较大多肽链的部分的一个或多个cdr。在一些实施方案中，抗原结合蛋白将一个或多个cdr共价连接至另一多肽链。在一些实施方案中，抗原结合蛋白非共价地合并有该一个或多个cdr。在一些实施方案中，抗原结合蛋白可以包含本文描述的并入至生物相容性构架结构中的cdr中的至少一种。在一些实施方案中，生物相容性构架结构包含足以形成构象稳定的结构支持物或构架或支架的多肽或其部分，其能够将与抗原(例如，cdr、可变区等)结合的氨基酸序列中的一个或多个展示在局部表面区域中。此类结构可以是天然存在的多肽或多肽“折叠”(结构基序)，或者可以具有相对于天然存在的多肽或折叠的一个或多个修饰，诸如氨基酸的添加、缺失和/或取代。取决于实施方案，支架可以衍生自多个不同物种(或多于一个物种)，诸如人、非人灵长类动物或其他哺乳动物、其他脊椎动物、无脊椎动物、植物、细菌或病毒的多肽。
147.取决于实施方案，生物相容性构架结构基于除免疫球蛋白域之外的蛋白质支架或骨架。在一些此类实施方案中，那些构架结构基于纤连蛋白、锚蛋白、脂质运载蛋白、新制癌菌素(neocarzinostatin)、细胞色素b、cp1锌指、pst1、卷曲螺旋、laci-d1、z域和/或淀粉酶抑肽域。
148.在一些实施方案中，还提供了具有多于一个结合位点的抗原结合蛋白。在若干实施方案中，结合位点彼此相同，而在一些实施方案中，结合位点彼此不同。例如，抗体通常具有两个相同的结合位点，而“双特异性”或“双功能”抗体具有两个不同的结合位点。双特异性抗原结合蛋白或抗体的两个结合位点将与两个不同的表位结合，这些表位可以位于相同或不同的蛋白质靶标上。在若干实施方案中，这是特别有利的，因为双特异性嵌合抗原受体可以赋予工程化细胞靶向多个肿瘤标志物的能力。例如，cd19和额外的肿瘤标志物，诸如bcma、cd38、cs1、fcrl5、gpr5cd、cd229、nkg2d或者本文公开的或本领域中被理解为肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原的任何其他标志物。参见图5a“cd19/bcma-1a”和“cd19/bcma-1b”的非限制性示意图示例。
149.本领域已知额外的抗bcma结合部分，诸如在例如美国专利号10,174,095、欧洲专利号ep 3230321、美国专利公开号2018/0118842、美国专利公开号2019/0153061和pct专利公开号wo 2019/149269中公开的那些，其每一篇的全部内容均通过引用并入本文。
150.如本文所用，术语“嵌合抗体”应被给予其普通含义，并且还应指含有来自一种抗体的一个或多个区域和来自一种或多种其他抗体的一个或多个区域的抗体。在一些实施方案中，cdr中的一个或多个衍生自抗癌抗原(例如，bcma和/或cd19)抗体。在若干实施方案中，所有cdr均衍生自抗癌抗原抗体(诸如抗bcma或抗cd19抗体)。在一些实施方案中，将来自多于一种抗癌抗原抗体的cdr在嵌合抗体中进行混合和匹配。举例来说，嵌合抗体可以包含来自第一抗癌抗原抗体的轻链的cdr1、来自第二抗癌抗原抗体的轻链的cdr2和cdr3、以及来自第三抗癌抗原抗体的重链的cdr。进一步地，本文公开的抗原结合蛋白的构架区可以衍生自相同的抗癌抗原(例如，bcma或cd19)抗体中的一种、衍生自一种或多种不同的抗体(诸如人抗体)或衍生自人源化抗体。在嵌合抗体的一个实例中，重链和/或轻链的一部分与来自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体相同、与其同源或衍生自其，而链的其余部分与来自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的一个或多个抗体相同、与其同源或衍生自其。本文还提供了表现出期望生物活性的此类抗体的片段。
151.结合肿瘤配体的自然杀伤组域
152.在若干实施方案中，工程化免疫细胞(诸如nk细胞)因其识别和破坏肿瘤细胞的能力而被利用。例如，工程化nk细胞可以包括bcma定向性和/或cd19定向性嵌合抗原受体或编码此类嵌合抗原受体的核酸。nk细胞在细胞表面上表达抑制性受体和活化性受体二者。抑制性受体结合在健康细胞表面上表达的自身分子(从而防止针对“自身”细胞的免疫应答)，而活化性受体结合在异常细胞(诸如肿瘤细胞)上表达的配体。当抑制性受体活化与活化性受体活化之间的平衡有利于活化性受体时，nk细胞活化发生，并且靶(例如，肿瘤)细胞被裂解。
153.自然杀伤组2成员d(nkg2d)是识别在细胞上表达的多种配体的nk细胞活化性受体。各种nkg2d配体的表面表达在健康细胞中通常较低，但在例如恶性转化时上调。由nkg2d识别的配体的非限制性实例包括但不限于mica、micb、ulbp1、ulbp2、ulbp3、ulbp4、ulbp5和ulbp6，以及在靶细胞上表达的控制nk细胞的细胞溶解或细胞毒性功能的其他分子。在若干实施方案中，t细胞经工程化改造以表达细胞外域以与一种或多种肿瘤配体结合并活化t细胞。例如，在若干实施方案中，t细胞经工程化改造以将nkg2d受体表达为结合剂/活化部分。在若干实施方案中，如本文所公开的工程化细胞经工程化改造以表达nkg2家族的另一成员，例如，nkg2a、nkg2c和/或nkg2e。在一些实施方案中，对此类受体的组合进行工程化改造。此外，在若干实施方案中，表达了其他受体，诸如杀伤细胞免疫球蛋白样受体(kir)。
154.在若干实施方案中，细胞经工程化改造以将包含全长nkg2d的细胞毒性受体复合物表达为细胞外组分，以识别肿瘤细胞(例如，肝细胞)表面上的配体。在一个实施方案中，全长nkg2d具有seq id no:27的核酸序列。在若干实施方案中，全长nkg2d或其功能片段是人nkg2d。
155.在若干实施方案中，细胞经工程化改造以将包含nkg2d的功能片段的细胞毒性受体复合物表达为细胞外组分，以识别肿瘤细胞其他患病细胞表面上的配体。在一个实施方案中，nkg2d的功能片段具有seq id no:25的核酸序列。在若干实施方案中，nkg2d的片段与全长野生型nkg2d至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％同源。在若干实施方案中，该片段可以具有来自seq id no:25的一个或多个额外的突变，但保留或在一些实施方案中具有增强的配体结合功能。在若干实施方案中，nkg2d的功能片段包含seq id no:26的氨基酸序列。在若干实施方案中，nkg2d片段以二聚体、三聚体或其他多联体形式提供，此类实施方案提供增强的配体结合活性。在若干实施方案中，对编码nkg2d片段的序列任选地进行完全或部分密码子优化。在一个实施方案中，编码密码子优化的nkg2d片段的序列包含seq id no:28的序列。有利地，根据若干实施方案，功能片段缺乏其天然跨膜域或细胞内域，但保留其结合nkg2d的配体以及在配体结合时转导活化信号的能力。此种片段的进一步优点是，表达dap10以将nkg2d定位至细胞膜是不需要的。因此，在若干实施方案中，由本文公开的多肽编码的细胞毒性受体复合物不包含dap10。在若干实施方案中，免疫细胞(诸如nk或t细胞)经工程化改造以表达靶向cd19和ngg2d配体的一种或多种嵌合抗原受体。在若干实施方案中，此类细胞还共表达mbil15。
156.在若干实施方案中，细胞毒性受体复合物被配置为二聚化。取决于实施方案，二聚化可以包括同二聚体或异二聚体。在若干实施方案中，二聚化导致细胞毒性受体复合物(以及因此表达受体的nk细胞)对配体的识别改善，从而导致不利毒性作用的减少(或缺乏)。在若干实施方案中，细胞毒性受体复合物采用内部二聚体或者一种或多种组成亚基的重复。
例如，在若干实施方案中，细胞毒性受体复合物可以任选地包含偶联至第二nkg2d细胞外域的第一nkg2d细胞外域以及跨膜/信号传导区(或单独的跨膜区连同单独的信号传导区)。
157.在若干实施方案中，各种域/亚域由接头分开，诸如使用gs3接头(seq id no:15和16，分别为核苷酸和蛋白质)(或gsn接头)。根据本文公开的各种实施方案使用的其他接头包括但不限于由seq id no:17、19、21或23编码的那些。这提供了沿着多核苷酸分开受体复合物的各个组成部分的潜力，从而可以增强受体复合物的表达、稳定性和/或功能性。
158.细胞毒性信号传导复合物
159.本文所述的组合物和方法的一些实施方案涉及包括细胞毒性信号传导复合物的嵌合抗原受体，诸如bcma定向性或cd19定向性嵌合抗原受体。如本文所公开的，根据若干实施方案，所提供的细胞毒性受体复合物包含一个或多个跨膜和/或细胞内域，其在细胞外域与靶细胞表面上的配体结合时启动细胞毒性信号传导级联。本文公开的某些实施方案涉及嵌合抗原受体构建体，其中肿瘤靶向域(例如，bmca和/或cd19定向域)偶联至细胞毒性信号传导复合物。
160.在若干实施方案中，细胞毒性信号传导复合物包含至少一个跨膜域、至少一个共刺激域和/或至少一个信号传导域。在一些实施方案中，多于一个组成部分构成给定域，例如，共刺激域可以包含两个亚域。此外，在一些实施方案中，域可以提供多种功能，例如，跨膜域还可以用来提供信号传导功能。
161.跨膜域
162.本文描述的组合物和方法的一些实施方案涉及包括跨膜域的嵌合抗原受体，诸如bmca定向性嵌合抗原受体和/或cd19定向性嵌合抗原受体。一些实施方案包括来自nkg2d或另一跨膜蛋白的跨膜域。在其中采用跨膜域的若干实施方案中，所采用的跨膜蛋白部分保留其正常跨膜域的至少部分。
163.然而，在若干实施方案中，跨膜域包含cd8的至少部分，该cd8是通常在t细胞和nk细胞二者上表达的跨膜糖蛋白。在若干实施方案中，跨膜域包含cd8α。在若干实施方案中，跨膜域被称为“铰链”。在若干实施方案中，cd8α的“铰链”具有seq id no:1的核酸序列。在若干实施方案中，cd8α铰链被截短或修饰，并且与具有seq id no:1的序列的cd8α至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。在若干实施方案中，cd8α的“铰链”包含seq id no:2的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd8α可以被截短或修饰，使得其与seq id no:2的序列至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。
164.在若干实施方案中，跨膜域包含cd8α跨膜区。在若干实施方案中，cd8α跨膜域具有seq id no:3的核酸序列。在若干实施方案中，cd8α铰链被截短或修饰，并且与具有seq id no:3的序列的cd8α至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。在若干实施方案中，cd8α跨膜域包含seq id no:4的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd8α铰链被截短或修饰，并且与具有seq id no:4的序列的cd8α至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。
165.合在一起，在若干实施方案中，cd8铰链/跨膜复合物由seq id no:13的核酸序列编码。在若干实施方案中，该cd8铰链/跨膜复合物被截短或修饰，并且与具有seq id no:13的序列的cd8铰链/跨膜复合物至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少
95％同源。在若干实施方案中，cd8铰链/跨膜复合物包含seq id no:14的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd8铰链/跨膜复合物铰链被截短或修饰，并且与具有seq id no:14的序列的cd8铰链/跨膜复合物至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。
166.在一些实施方案中，跨膜域包含cd28跨膜域或其片段。在若干实施方案中，cd28跨膜域包含seq id no:30的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd28跨膜域复合物铰链被截短或修饰，并且与具有seq id no:30的序列的cd28跨膜域至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。
167.共刺激域
168.本文所述的组合物和方法的一些实施方案涉及包括共刺激域的嵌合抗原受体，诸如bmca定向性嵌合抗原受体和/或cd19定向性嵌合抗原受体)。在若干实施方案中，除了各种跨膜域和信号传导域(以及组合跨膜/信号传导域)，还可以提供额外的共活化分子。例如，这些可以是某些例如进一步增强免疫细胞的活性的分子。在一些实施方案中，可以使用细胞因子。例如，使用某些白细胞介素，诸如作为非限制性实例的il-2和/或il-15。在一些实施方案中，用于疗法的免疫细胞经工程化改造以将此类分子表达为分泌形式。在额外的实施方案中，此类共刺激域经工程化改造为膜结合的，充当自分泌刺激分子(或甚至充当针对所递送的相邻细胞的旁分泌刺激物)。在若干实施方案中，nk细胞经工程化改造以表达白细胞介素15(il15)，任选地膜结合的白细胞介素15(mbil15)。在此类实施方案中，nk上的mbil15表达通过增强nk细胞的增殖和/或寿命来增强工程化nk细胞的细胞毒性作用。在若干实施方案中，il15具有seq id no:11的核酸序列并且由也编码跨膜蛋白的多核苷酸编码。在若干实施方案中，il15可以被截短或修饰，使得其与seq id no:11的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％的序列同一性。在若干实施方案中，il15包含功能性偶联至跨膜域的氨基酸序列的seq id no:12的氨基酸序列。在若干实施方案中，il15被截短或修饰，并且与具有seq id no:12的序列的il15具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％的序列同一性。在若干实施方案中，mbil15具有seq id no：306的核酸序列。在若干实施方案中，mbil15可以被截短或修饰，使得其与seq id no:306的序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％的序列同一性。在若干实施方案中，mbil15包含seq id no:307的氨基酸序列。在若干实施方案中，mbil15被截短或修饰并且与具有seq id no:307的序列的mbil15具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％的同源性。
169.在一些实施方案中，嵌合抗原受体或工程化细胞毒性受体复合物由多核苷酸编码，该多核苷酸包括一个或多个胞质蛋白酶切割位点，例如t2a切割位点、p2a切割位点、e2a切割位点和/或f2a切割位点。此类位点被胞质蛋白酶识别并切割，这可能导致由多核苷酸编码的受体的各个组成部分的分离(和分开表达)。结果，取决于实施方案，可以在单个载体中或通过多个载体，将肿瘤定向性嵌合抗原受体或工程化细胞毒性受体复合物的各个构成部分递送至nk细胞或t细胞。因此，如图中示意性所示，构建体可以由单个多核苷酸编码，但也包括切割位点，使得构建体的下游元件由细胞表达为单独的蛋白质(如在一些实施方案中使用il-15的情况一样)。在若干实施方案中，使用t2a切割位点。在若干实施方案中，t2a切割位点具有seq id no:9的核酸序列。在若干实施方案中，t2a切割位点可以被截短或修
饰，使得其与seq id no:9的序列至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。在若干实施方案中，t2a切割位点包含seq id no:10的氨基酸序列。在若干实施方案中，t2a切割位点被截短或修饰，并且与具有seq id no:10的序列的t2a切割位点至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。
170.信号传导域
171.本文描述的组合物和方法的一些实施方案涉及包括信号传导域的嵌合抗原受体，诸如bmca定向性嵌合抗原受体和/或cd19定向性嵌合抗原受体。例如，根据本文公开的若干实施方案工程化改造的免疫细胞可以包含cd3 t细胞受体复合物(或其片段)的至少一个亚基。在若干实施方案中，信号传导域包含cd3ζ亚基。在若干实施方案中，cd3ζ由seq id no:7的核酸序列编码。在若干实施方案中，cd3ζ可以被截短或修饰，使得其与具有seq id no:7的序列的cd3ζ至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。在若干实施方案中，cd3ζ域包含seq id no:8的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd3ζ域被截短或修饰，并且与具有seq id no:8的序列的cd3ζ域至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。
172.在若干实施方案中，通过使用其活动协同作用的多个信号传导域来实现出乎意料增强的信号传导。例如，在若干实施方案中，信号传导域进一步包含ox40域。在若干实施方案中，ox40域是细胞内信号传导域。在若干实施方案中，ox40细胞内信号传导域具有seq id no:5的核酸序列。在若干实施方案中，ox40细胞内信号传导域可以被截短或修饰，使得其与具有seq id no:5的序列的ox40至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。在若干实施方案中，ox40细胞内信号传导域包含seq id no:16的氨基酸序列。在若干实施方案中，ox40细胞内信号传导域被截短或修饰，并且与具有seq id no:6的序列的ox40细胞内信号传导域至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。在若干实施方案中，ox40用作构建体中唯一的跨膜/信号传导域，然而，在若干实施方案中，ox40可以与一个或多个其他域一起使用。例如，在一些实施方案中，使用ox40和cd3ζ的组合。作为进一步的实例，在一些实施方案中，使用cd28、ox40、4-1bb和/或cd3ζ的组合。
173.在若干实施方案中，信号传导域包含4-1bb域。在若干实施方案中，4-1bb域是细胞内信号传导域。在若干实施方案中，4-1bb细胞内信号传导域包含seq id no:29的氨基酸序列。在若干实施方案中，4-1bb细胞内信号传导域被截短或修饰，并且与具有seq id no:29的序列的4-1bb细胞内信号传导域至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。在若干实施方案中，4-1bb用作构建体中唯一的跨膜/信号传导域，然而，在若干实施方案中，4-1bb可以与一个或多个其他域一起使用。例如，在一些实施方案中，使用4-1bb和cd3ζ的组合。作为进一步的实例，在一些实施方案中，使用cd28、ox40、4-1bb和/或cd3ζ的组合。
174.在若干实施方案中，信号传导域包含cd28域。在若干实施方案中，cd28域是细胞内信号传导域。在若干实施方案中，cd28细胞内信号传导域包含seq id no:31的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd28细胞内信号传导域被截短或修饰，并且与具有seq id no:31的序列的cd28细胞内信号传导域至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％同源。在若干实施方案中，cd28用作构建体中唯一的跨膜/信号传导域，然而，在若干实施方案中，cd28可以与一个或多个其他域一起使用。例如，在一些实施方案中，使用cd28和cd3ζ
的组合。作为进一步的实例，在一些实施方案中，使用cd28、ox40、4-1bb和/或cd3ζ的组合。
175.细胞毒性受体复合物构建体
176.本文所述的组合物和方法的一些实施方案涉及包含细胞毒性受体复合物或细胞毒性受体复合物构建体的嵌合抗原受体，诸如bmca定向性嵌合抗原受体和/或cd19定向性嵌合抗原受体。与上述一致，本文提供了多种细胞毒性受体复合物(也被称为细胞毒性受体)。这些复合物在免疫细胞诸如t细胞和/或nk细胞中的表达允许靶向和破坏特定的靶细胞，诸如癌性细胞。下文更详细地讨论此类细胞毒性受体复合物的非限制性实例。
177.嵌合抗原受体细胞毒性受体复合物构建体
178.在若干实施方案中，本文提供了多种具有嵌合抗原受体的一般结构的细胞毒性受体复合物(也被称为细胞毒性受体)。图1a、1b、2和3a-3i示意性地描绘了包含抗cd19部分的构建体的非限制性示意图，该抗cd19部分与在癌细胞表面上表达的肿瘤抗原或肿瘤相关抗原结合并活化表达嵌合抗原受体的工程化细胞。如这些图所示，嵌合抗原受体的若干实施方案包括抗cd19部分、cd8a铰链域、ig4 sh域(或铰链)、cd8a跨膜域、cd28跨膜域、ox40域、4-1bb域、cd28域、cd3ζitam域或亚域、cd3ζ域、nkp80域、cd16ic域、2a切割位点和膜结合的il-15域(然而如上所述，在若干实施方案中，使用可溶性il-15)。在若干实施方案中，结合和活化功能经工程化改造以由单独的域执行。若干实施方案涉及具有多于一个抗cd19部分或其他结合剂/活化部分的复合物。在一些实施方案中，结合剂/活化部分靶向除cd19之外的其他标志物，诸如本文描述的癌症靶标。在若干实施方案中，嵌合抗原受体构建体的一般结构包括铰链和/或跨膜域。在一些实施方案中，这些可以由单域来实现，或在若干实施方案中，可以使用多个亚域。受体复合物进一步包含信号传导域，其在归巢部分与靶细胞结合之后转导信号，最终导致对靶细胞的细胞毒性作用。在若干实施方案中，复合物进一步包含共刺激域，其在若干实施方案中协同地操作以增强信号传导域的功能。这些复合物在免疫细胞(诸如t细胞和/或nk细胞)中的表达允许靶向和破坏特定的靶细胞，诸如表达cd19的癌性细胞。一些此类受体复合物包含细胞外域，该细胞外域包含抗cd19部分或cd19结合部分，其结合靶细胞表面上的cd19并且活化工程化细胞。cd3ζitam亚域可以协同地充当信号传导域。il-15域(例如，mbil-15域)可以充当共刺激域。il-15域(例如，mbil-15域)可以使表达其的免疫细胞(例如，nk或t细胞)对靶肿瘤细胞特别有效。应当理解，根据若干实施方案，il-15域(诸如mbil-15域)可以被编码在单独的构建体上。另外，组分中的每一个均可以被编码在一个或多个单独的构建体中。在一些实施方案中，细胞毒性受体或cd19定向受体包含与seq id no:34的序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％或由上述百分比中的任何两个定义的范围相同的氨基酸序列。
179.在一个实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链-cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图1a，cd19-1a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多
个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
180.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链-cd8tm/ox40/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图1a，cd19-1b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
181.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/ig4sh-cd8tm/4-1bb/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图1a，cd19-2a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、ig4 sh域、cd8a跨膜域、4-1bb域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
182.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/ig4sh-cd8tm/4-1bb/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图1a，cd19-2b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、ig4 sh域、cd8a跨膜域、4-1bb域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
183.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链-cd28tm/cd28/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图1a，cd19-3a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd28跨膜域、cd28域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少
约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
184.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链-cd28tm/cd28/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图1a，cd19-3b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd28跨膜域、cd28域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
185.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/ig4sh-cd28tm/cd28/cd3ζ嵌合抗原受体复合物的(参见图1a，cd19-4a)多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、ig4 sh域、cd28跨膜域、cd28域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
186.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/ig4sh-cd28tm/cd28/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图1a，cd19-4b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、ig4 sh域、cd28跨膜域、cd28域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
187.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/ig4sh-cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图1b，cd19-5a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、ig4 sh域、cd8a跨膜域、ox40域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
188.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/ig4sh-cd8tm/ox40/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图1b，cd19-5b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、ig4 sh域、cd8a跨膜域、ox40域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
189.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链-cd3tm/cd28/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图1b，cd19-6a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd3跨膜域(例如，γ、δ和/或ε)、cd28域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
190.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链-cd3tm/cd28/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图1b，cd19-6b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd3α跨膜域(例如，γ、δ和/或ε)、cd28域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
191.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链-cd28tm/cd28/4-1bb/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图1b，cd19-7a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd28跨膜域、cd28域、4-1bb域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等
效性的序列。
192.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链-cd28tm/cd28/4-1bb/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图1b，cd19-7b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd28跨膜域、cd28域、4-1bb域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
193.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8α铰链/cd8αtm/4-1bb/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图2，cd19-8a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、4-1bb域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
194.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8α铰链/cd8αtm/4-1bb/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图2，cd19-8b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、4-1bb域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
195.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8α铰链/cd3tm/4-1bb/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图2，cd19-39_5a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd3跨膜域、4-1bb域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
196.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8α铰链/cd3tm/4-1bb/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图2，cd19-39_5b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、4-1bb域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
197.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8α铰链/cd3tm/4-1bb/nkp80嵌合抗原受体复合物(参见图2，cd19-39_6a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd3跨膜域、4-1bb域和nkp80域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
198.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8α铰链/cd3tm/4-1bb/nkp80/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图2，cd19-39_6b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、4-1bb域、nkp80域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
199.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8α铰链/cd3 tm/cd16细胞内域/4-1bb嵌合抗原受体复合物(参见图2，cd19-39_10a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd3跨膜域、cd16细胞内域和4-1bb域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
200.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8α铰链/cd3tm/cd16/4-1bb/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图2，cd19-39_10b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd16细胞内域、4-1bb域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
201.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/nkg2d细胞外域/cd8铰链-cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图2，cd19/nkg2d-1a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、nkg2d细胞外域(全长或片段)、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
202.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/nkg2d ec域/cd8铰链-cd8tm/ox40/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图2，cd19/nkg2d-1b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、nkg2d细胞外域(全长或片段)、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
203.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/4-1bb/cd3ζ/mbil15嵌合抗原受体复合物(参见图3a，nk19)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、4-1bb域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:85的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:85共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:86的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:86共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若
干实施方案中示意性地描绘和使用，提供了缺乏mbil15域的nk19构建体(图3a，nk19 opt.)。
204.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3a，nk19-1a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3a，nk19-1b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:59的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:59共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:60的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:60共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
205.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd28tm/cd28/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3a，nk19-2a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd28跨膜域、cd28信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3a，nk19-2b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd28跨膜域、cd28信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:61的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:61共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:62的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:62共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
206.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/icos/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3a，nk19-3a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、可诱导共刺激分子(icos)信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3a，nk19-3b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、可诱导共刺激分子(icos)信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:63的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:63共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:64的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:64共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
207.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/cd28/4-1bb/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3a，nk19-4a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd28信号传导域、4-1bb信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3a，nk19-4b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd28信号传导域、4-1bb信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:65的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:65共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:66的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:66共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
208.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/nkg2dtm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3b，nk19-5a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、nkg2d跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3b，nk19-5b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、nkg2d跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:67的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:67共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:68的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:68共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
209.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/cd40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3b，nk19-6a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv可变重链、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3b，nk19-6b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv可变重链、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:69的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:69共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:70的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:70共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，
cd19scfv不包含flag标签。
210.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/ox40/cd3ζ/2a/egfrt嵌合抗原受体复合物(参见图3b，nk19-7a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和表皮生长因子受体(egfrt)的截短型式或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3b，nk19-7b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点、表皮生长因子受体(egfrt)的截短型式、额外的2a切割位点以及mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:71的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:71共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:72的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:72共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
211.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/cd40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3b，nk19-8a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv可变轻链、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3b，nk19-7b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv可变轻链、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:73的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:73共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:74的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:74共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
212.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/cd40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3b，nk19-8a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv可变轻链、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3b，nk19-7b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv可变轻链、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:73的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:73共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:74的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:74共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％
或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
213.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/cd27/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3c，nk19-9a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd27信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3c，nk19-9b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd27信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:75的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:75共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:76的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:76共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
214.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/cd70/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3c，nk19-10a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd70信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3c，nk19-10b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd70信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:77的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:77共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:78的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:78共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
215.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/cd161/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3c，nk19-11a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd161信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3c，nk19-11b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd161信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:79的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:79共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:80的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:80共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列
同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
216.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/cd40l/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3c，nk19-12a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40l信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3c，nk19-12b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40l信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:81的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:81共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:82的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:82共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
217.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/cd44/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3c，nk19-13a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3c，nk19-13b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:83的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:83共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:84的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:84共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
218.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/cd44/ox40/cd27/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3c，nk19-14a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44共刺激域、ox40共刺激域、cd27共刺激域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3c，nk19-14b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44共刺激域、ox40共刺激域、cd27共刺激域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至
少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，cd19 scfv不包含flag标签。
219.在若干实施方案中，提供了编码flag标签人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3d，nk19h-1a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第一人源化重链(l1/h1)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3d，nk19h-1b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含如本文所述的flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第一人源化重链(l1/h1)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:160的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:160共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:161的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:161共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
220.在若干实施方案中，提供了编码flag标签人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3d，nk19h-2a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第一人源化重链(l2/h1)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3d，nk19h-2b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含如本文所述的flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第一人源化重链(l2/h1)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:162的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:162共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:163的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:162共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
221.在若干实施方案中，提供了编码flag标签人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3d，nk19h-3a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第一人源化重链(l3/h1)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3d，nk19h-3b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含如本文所述的flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第一人源化重链(l3/h1)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:164的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸
序列包含与seq id no:164共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:165的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:165共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
222.在若干实施方案中，提供了编码flag标签人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3d，nk19h-4a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第二人源化重链(l1/h2)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3d，nk19h-4b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含如本文所述的flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第二人源化重链(l1/h2)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:166的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:166共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:167的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:167共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
223.在若干实施方案中，提供了编码flag标签人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3e，nk19h-5a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第二人源化重链(l2/h2)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3e，nk19h-5b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含如本文所述的flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第二人源化重链(l2/h2)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:168的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:168共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:169的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:169共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
224.在若干实施方案中，提供了编码flag标签人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3e，nk19h-6a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第二人源化重链(l3/h2)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3e，nk19h-6b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含如本文所述的flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜
scfv或由其构成，并且包含flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第三人源化重链(l3/h3)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3e，nkh19-9b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含如本文所述的flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第三人源化重链(l3/h3)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:176的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:176共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:177的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:177共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
228.在若干实施方案中，提供了编码flag标签人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3e，nkh19-10a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第四人源化重链(l1/h4)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3e，nk19h-10b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含如本文所述的flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第四人源化重链(l1/h4)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:178的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:178共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:179的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:179共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
229.在若干实施方案中，提供了编码flag标签人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3f，nk19h-11a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第四人源化重链(l2/h4)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3f，nk19h-11b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含如本文所述的flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第四人源化重链(l2/h4)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:180的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:180共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:181的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19
嵌合抗原受体包含与seq id no:181共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
230.在若干实施方案中，提供了编码flag标签人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3f，nk19h-12a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第四人源化重链(l3/h4)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3f，nk19h-12b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含抗cd19 scfv或由其构成，并且包含如本文所述的flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第四人源化重链(l3/h4)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:182的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:182共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:183的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:183共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
231.在若干实施方案中，提供了编码嵌合抗原受体的多核苷酸，该嵌合抗原受体包含flag标签人源化抗cd19部分和多个共刺激域。例如，示意性架构是抗cd19部分/跨膜域/共刺激域1/共刺激域2/共刺激域3/信号传导域。取决于实施方案，共刺激域按顺序变化。例如，在若干实施方案中，共刺激域(“csd”)可以如下定位：csd1/csd2、csd2/csd1、csd1/csd2/csd3、csd1/csd2/csd3、csd3/csd2/csd1等。在若干实施方案中，提供了编码flag标签人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/cd44/ox40/cd27/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3f，nk19h-13a)的多核苷酸。该多核苷酸包含已经人源化的抗cd19 scfv或由其构成，并且包含flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44共刺激域、ox40共刺激域、cd27共刺激域和cd3ζ域。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3f，nk19h-13b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含已经人源化的抗cd19 scfv或由其构成，并且包含如本文所述的flag标签、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44共刺激域、ox40共刺激域、cd27共刺激域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域。
232.在若干实施方案中，提供了编码人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3g，nk19h-nf-1a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第一人源化重链(l1/h1)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3g，nk19h-nf-1b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第一人源化重链(l1/h1)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:184的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:184共享至少约
90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:185的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:185共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
233.在若干实施方案中，提供了编码人源化抗抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3g，nk19h—nf-2a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第一人源化重链(l2/h1)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3g，nk19h-nf-2b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第一人源化重链(l2/h1)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:186的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:186共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:187的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:187共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
234.在若干实施方案中，提供了编码人源化抗抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3g，nk19h-nf-3a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第一人源化重链(l3/h1)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3g，nk19h-nf-3b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第一人源化重链(l3/h1)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:188的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:188共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:189的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:189共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
235.在若干实施方案中，提供了编码人源化抗抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3g，nk19h-nf-4a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第二人源化重链(l1/h2)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3g，nk19h-nf-4b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域
或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第二人源化重链(l1/h2)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:190的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:190共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:191的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:191共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
236.在若干实施方案中，提供了编码人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3h，nk19h-nf-5a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第二人源化重链(l2/h2)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3h，nk19h-nf-5b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第二人源化重链(l2/h2)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:192的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:192共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:193的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:193共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
237.在若干实施方案中，提供了编码人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3h，nk19h-nf-6a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第二人源化重链(l3/h2)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3h，nk19h-nf-6b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第二人源化重链(l3/h2)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:194的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:194共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:195的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:195共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
238.在若干实施方案中，提供了编码人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3g，nk19h-nf-7a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化
并包含第一人源化轻链和第三人源化重链(l1/h3)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3h，nk19h-nf-7b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第三人源化重链(l1/h3)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:196的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:196共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:197的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:197共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
239.在若干实施方案中，提供了编码人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3h，nk19h-nf-8a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第三人源化重链(l2/h3)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3h，nkh19-nf-8b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv可变轻链、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成，该抗cd19 scfv可变轻链已经人源化并包含第二人源化轻链和第三人源化重链(l2/h3)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:198的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:198共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:199的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:199共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
240.在若干实施方案中，提供了编码人源化抗抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3h，nk19h-nf-9a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第三人源化重链(l3/h3)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3h，nkh19-nf-9b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第三人源化重链(l3/h3)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:200的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:200共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:201的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:201共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
241.在若干实施方案中，提供了编码人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3h，nkh19-nf-10a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第四人源化重链(l1/h4)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3h，nk19h-nf-10b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第一人源化轻链和第四人源化重链(l1/h4)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:202的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:202共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:203的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:203共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
242.在若干实施方案中，提供了编码人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3i，nk19h-nf-11a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第四人源化重链(l2/h4)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3i，nk19h-nf-11b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第二人源化轻链和第四人源化重链(l2/h4)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:204的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:204共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:205的氨基酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:205共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
243.在若干实施方案中，提供了编码人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3i，nk19h-12a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第四人源化重链(l3/h4)。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3i，nk19h-nf-12b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19 scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域或由其构成，该抗cd19 scfv已经人源化并包含第三人源化轻链和第四人源化重链(l3/h4)。在若干实施方案中，这种受体复合物由具有seq id no:206的序列的核酸分子编码。在若干实施方案中，编码nk19嵌合抗原受体的核酸序列包含与seq id no:206共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。在若干实施方案中，嵌合抗原受体包含seq id no:207的氨基
酸序列。在若干实施方案中，nk19嵌合抗原受体包含与seq id no:207共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的氨基酸序列。
244.在若干实施方案中，提供了编码嵌合抗原受体的多核苷酸，该嵌合抗原受体包含人源化cd19部分/cd8铰链/cd8tm/cd44/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3i，nk19h-13a)。该多核苷酸包含已经人源化的抗cd19 scfv或由其构成，并且包含cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44共刺激域和cd3ζ域。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3i，nk19h-nf-13b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含已经人源化的抗cd19 scfv或由其构成，并且包含cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44共刺激域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域，如本文所述的。
245.在若干实施方案中，提供了编码嵌合抗原受体的多核苷酸，该嵌合抗原受体包含flag标签人源化抗cd19部分和多个共刺激域。例如，示意性架构是抗cd19部分/跨膜域/共刺激域1/共刺激域2/共刺激域3/信号传导域。取决于实施方案，共刺激域按顺序变化。例如，在若干实施方案中，共刺激域(“csd”)可以如下定位：csd1/csd2、csd2/csd1、csd1/csd2/csd3、csd1/csd2/csd3、csd3/csd2/csd1等。在若干实施方案中，提供了编码人源化抗cd19部分/cd8铰链/cd8atm/cd44/ox40/cd27/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图3i，nk19h-nf-14a)的多核苷酸。该多核苷酸包含已经人源化的抗cd19 scfv或由其构成，并且包含cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44共刺激域、ox40共刺激域、cd27共刺激域和cd3ζ域。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图3i，nk19h-nf-14b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含已经人源化的抗cd19 scfv或由其构成，并且包含cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44共刺激域、ox40共刺激域、cd27共刺激域、cd3ζ域、2a切割位点和mbil-15域，如本文所述的。
246.图4a-4b和5a-5d示意性地描绘了包含抗bcma部分的构建体的非限制性示意图，该抗bcma部分与在癌细胞表面上表达的bcma(或其片段或表位)结合，导致活化表达嵌合抗原受体的工程化细胞。如这些图所示，嵌合抗原受体的若干实施方案包括抗bmca部分、cd8a铰链域、ig4sh域(或铰链)、cd8a跨膜域、cd28跨膜域、ox40域、4-1bb域、cd28域、cd3ζitam域或子域、cd3ζ域、nkp80域、cd16ic域、2a切割位点和膜结合il-15域(然而如上所述，在若干实施方案中，使用可溶性il-15)。在若干实施方案中，结合和活化功能经工程化改造以由单独的域执行。若干实施方案涉及具有多于一个抗bmca部分或其他结合剂/活化部分的复合物。在一些实施方案中，结合剂/活化部分靶向除bmca之外的其他标志物，诸如本文描述的癌症靶标。在若干实施方案中，嵌合抗原受体构建体的一般结构包括铰链和/或跨膜域。在一些实施方案中，这些可以由单域来实现，或在若干实施方案中，可以使用多个亚域。受体复合物进一步包含信号传导域，其在归巢部分与靶细胞结合之后转导信号，最终导致对靶细胞的细胞毒性作用。在若干实施方案中，复合物进一步包含共刺激域，其在若干实施方案中协同地操作以增强信号传导域的功能。这些复合物在免疫细胞(诸如t细胞和/或nk细胞)中的表达允许靶向和破坏特定的靶细胞，诸如表达bcma的癌性细胞。一些此类受体复合物包含细胞外域，该细胞外域包含抗bcma部分或bcma结合部分，其结合靶细胞表面上的bcma并且活化工程化细胞。cd3ζitam亚域可以协同地充当信号传导域。il-15域(例如，mbil-15域)可以充当共刺激域。il-15域(例如，mbil-15域)可以使表达其的免疫细胞(例如，nk或t细胞)
对靶肿瘤细胞特别有效。应当理解，根据若干实施方案，il-15域(诸如mbil-15域)可以被编码在单独的构建体上。另外，组分中的每一个均可以被编码在一个或多个单独的构建体中。在一些实施方案中，细胞毒性受体或抗bcma定向性受体包含与seq id no:225、seq id no:226、seq id no:227、seq id no:228、seq id no:229、seq id no:230、seq id no:231、seq id no:232、seq id no:233、seq id no:234、seq id no:235、seq id no:236、seq id no:237、seq id no:238、seq id no:239、seq id no:240、seq id no:241、seq id no:242、seq id no:243、seq id no:244、seq id no:245、seq id no:246、seq id no:247、seq id no:248、seq id no:249、seq id no:250、seq id no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259seq id no:260、seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304中的一项或多项的序列至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％或由上述百分比中的任何两个定义的范围相同的氨基酸序列。
247.在一个实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链-cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图4a，bcma-4a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
248.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链-cd8tm/ox40/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图4a，bcma-1b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
249.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/ig4sh-cd8tm/4-1bb/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图4a，bcma-2a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、ig4 sh域、cd8a跨膜域、4-1bb域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。
在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
250.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/ig4sh-cd8tm/4-1bb/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图4a，bcma-2b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、ig4 sh域、cd8a跨膜域、4-1bb域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
251.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链-cd28tm/cd28/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图4a，bcma-3a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd28跨膜域、cd28域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
252.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链-cd28tm/cd28/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图4a，bcma-3b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd28跨膜域、cd28域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
253.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/ig4sh-cd28tm/cd28/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图4a，bcma-4a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、ig4 sh域、cd28跨膜域、cd28域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多
个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
254.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/ig4sh-cd28tm/cd28/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图4a，bcma-4b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、ig4 sh域、cd28跨膜域、cd28域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
255.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/ig4sh-cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图4b，bcma-5a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、ig4 sh域、cd8a跨膜域、ox40域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
256.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/ig4sh-cd8tm/ox40/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图5b，bcma-5b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、ig4 sh域、cd8a跨膜域、ox40域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
257.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链-cd3αtm/cd28/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图4b，bcma-6a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd3α跨膜域、cd28域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少
约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
258.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链-cd3αtm/cd28/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图4b，bcma-6b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd3α跨膜域、cd28域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
259.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链-cd28tm/cd28/4-1bb/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图4b，bcma-7a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd28跨膜域、cd28域、4-1bb域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
260.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链-cd28tm/cd28/4-1bb/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图4b，bcma-7b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd28跨膜域、cd28域、4-1bb域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
261.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8α铰链/cd8αtm/4-1bb/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5a，bcma-8a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、4-1bb域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至
少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
262.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8α铰链/cd8αtm/4-1bb/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图5b，bcma-8b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、4-1bb域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
263.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8α铰链/cd3 tm/4-1bb/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5a，bcma-9a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd3跨膜域、4-1bb域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
264.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8α铰链/cd3 tm/4-1bb/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图5a，bcma-9b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、4-1bb域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
265.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8α铰链/cd3 tm/4-1bb/nkp80嵌合抗原受体复合物(参见图5a，bcma-10a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd3跨膜域、4-1bb域和nkp80域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
266.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8α铰链/cd3 tm/4-1bb/nkp80/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图5a，bcma-10b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、4-1bb域、nkp80域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
267.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8α铰链/cd3 tm/cd16细胞内域/4-1bb嵌合抗原受体复合物(参见图5a，bcma-11a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd3跨膜域、cd16细胞内域和4-1bb域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
268.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8α铰链/cd3 tm/cd16/4-1bb/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图5a，bcma-11b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd16细胞内域、4-1bb域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。
269.在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
270.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/抗bcma部分/cd8铰链-cd8tm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5a，cd19/bcma-1a)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、抗bcma部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功
能等效性的序列。
271.在若干实施方案中，提供了编码抗cd19部分/抗bcma部分/cd8铰链-cd8tm/ox40/cd3ζ/2a/mil-15嵌合抗原受体复合物(参见图5a，cd19/bcma
ꢀ‑
1b)的多核苷酸。该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19部分、抗bcma部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
272.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链/nkg2dtm/ox40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5b，bcma-12a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗bcma部分、cd8a铰链、nkg2d跨膜域、ox40信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图5b，bcma012b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、nkg2d跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
273.在若干实施方案中，提供了编码抗bmca部分/cd8铰链/cd8atm/cd40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5b，bcma-13a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗bcma scfv可变重链、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图5b，bcma-13b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗cd19bcma scfv可变重链、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
274.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链/cd8atm/ox40/cd3ζ/2a/egfrt嵌合抗原受体复合物(参见图5b，bcma-14a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗bcma部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和表皮生长因子受体(egfrt)的截短型式或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参
见图5b，bcma-14b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma部分、cd8a铰链、cd8a跨膜域、ox40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点、表皮生长因子受体(egfrt)的截短型式、额外的2a切割位点以及mbil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
275.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链/cd8atm/cd40/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5b，bcma-15a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗bcma scfv可变轻链cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图5b，bcma-15b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗bcma scfv可变轻链cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
276.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链/cd8atm/cd27/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5c，bcma-16a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd27信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图5c，bcma-16b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd27信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
277.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链/cd8atm/cd70/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见5c，bcma-17a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd70信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图5c，bcma-17b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd70信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列
的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
278.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链/cd8atm/cd161/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5c，bcma-18a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd161信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图5c，bcma-18b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd161信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
279.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链/cd8atm/cd40l/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5c，bcma-19a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40l信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图5c，bcma-19b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd40l信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
280.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链/cd8atm/cd44/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5c，bcma-20a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图5c，bcma-20b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨
基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
281.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链/cd8atm/cd44/ox40/cd27/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5c，bcma-21a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44共刺激域、ox40共刺激域、cd27共刺激域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图5c，bcma-21b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd44共刺激域、ox40共刺激域、cd27共刺激域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
282.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链/cd8atm/icos/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5d，bcma-22a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、诱导型共刺激物(icos)信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图5d，bcma-22b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、诱导型共刺激物(icos)信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
283.在若干实施方案中，提供了编码抗bcma部分/cd8铰链/cd8atm/cd28/4-1bb/cd3ζ嵌合抗原受体复合物(参见图5d，bcma-23a)的多核苷酸。该多核苷酸包含抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd28信号传导域、4-1bb信号传导域和cd3ζ域或由其构成。在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含mbil15(参见图5d，bcma-23b)。在此类实施方案中，该多核苷酸包含如本文所述的抗bmca scfv、cd8a铰链、cd8a跨膜域、cd28信号传导域、4-1bb信号传导域、cd3ζ域、2a切割位点和mil-15域或由其构成。在若干实施方案中，这种受体复合物由包含从本文公开的序列的组合获得的序列的核酸分子编码，或包含从本文公开的序列的组合获得的氨基酸序列。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含根据如本文所述的一个或多个seq id no的序列，诸如作为成分部分的实例包括在本文中的那些。在若干实施方案中，该编码核酸序列或该氨基酸序列包含与从如本文所述的组合一个或多个seq id no产生的序列共享至少约90％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至
少约97％、至少约98％或至少约99％序列同一性、同源性和/或功能等效性的序列。
284.应当理解，对于本文描述的任何受体构建体，由于例如克隆(例如，用于创建限制性位点)的容易性或效率，因此当组合序列时，可能会导致所公开序列的某些序列可变性、延伸和/或截短。
285.治疗方法以及施用和给药
286.一些实施方案涉及用包含嵌合抗原受体诸如bmca定向或cd19定向性嵌合抗原受体的细胞或免疫细胞来治疗、改善、抑制或预防癌症的方法。在一些实施方案中，该方法包括治疗或预防癌症。在一些实施方案中，该方法包括施用治疗有效量的表达如本文所述的bmca定向和/或cd19定向性嵌合抗原受体的免疫细胞。本文描述了可以如此治疗的癌症类型的实例。
287.在若干实施方案中，nk细胞经工程化改造以表达如本文提供的抗bcma car。在若干实施方案中，此类抗bmca nk细胞与经工程化改造以表达如本文提供的抗cd19 car的nk细胞结合施用。在若干实施方案中，抗bmca nk细胞与经工程化改造以表达如本文提供的抗cd19 car的t细胞结合施用。
288.在某些实施方案中，用本文所述的基因工程细胞治疗受试者实现以下效果中的一种、两种、三种、四种或更多种，这些效果包括例如：(i)减少或改善疾病或与其相关联的症状的严重性；(ii)减少与疾病相关联的症状的持续时间；(iii)防止疾病或与其相关联的症状的进展；(iv)疾病或与其相关联的症状的消退；(v)防止与疾病相关联的症状的发展或发作；(vi)防止与疾病相关联的症状的复发；(vii)减少受试者的住院治疗；(viii)减少住院治疗时长；(ix)增加患有疾病的受试者的存活；(x)减少与疾病相关联的症状的数目；(xi)增强、改善、补充、互补或增大另一疗法的防治性或治疗性效果。这些比较中的每一个均相对于例如针对疾病的不同疗法，其包括针对疾病的基于细胞的免疫疗法，该免疫疗法使用不表达本文公开的构建体的细胞。
289.可以通过多种途径施用，包括但不限于静脉内、动脉内、皮下、肌内、肝内、腹膜内和/或局部递送至受影响组织。对于给定的受试者，基于其体重、疾病类型和状态以及期望的治疗攻击性，可以容易地确定免疫细胞诸如nk和/或t细胞的剂量，但范围取决于实施方案，从每kg约105个细胞至每kg约10
12
个细胞(例如，10
5-107、10
7-10
10
、10
10-10
12
和其中的重叠范围)。在一个实施方案中，使用剂量递增方案。在若干实施方案中，施用一定范围的免疫细胞诸如nk和/或t细胞，例如在约1x106个细胞/kg至约1x108个细胞/kg之间。取决于实施方案，可以治疗各种类型的癌症。在若干实施方案中，治疗肝细胞癌。本文提供的额外实施方案包括治疗或预防癌症的以下非限制性实例，其包括但不限于急性淋巴细胞性白血病(all)、急性髓系白血病(aml)、肾上腺皮质癌、卡波西(kaposi)肉瘤、淋巴瘤、胃肠癌、阑尾癌、中枢神经系统癌、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑肿瘤(包括但不限于星形细胞瘤、脊髓肿瘤、脑干胶质瘤、胶质母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜母细胞瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、髓上皮瘤)、乳腺癌、支气管肿瘤、伯基特淋巴瘤、宫颈癌、结肠癌、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性髓细胞性白血病(cml)、慢性骨髓增殖性疾病、导管癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、肾细胞癌、白血病、口腔癌、鼻咽癌、肝癌、肺癌(包括但不限于非小细胞肺癌(nsclc)和小细胞肺癌)、胰腺癌、肠癌、淋巴瘤、黑色素瘤、眼癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、垂体癌、子宫癌和阴道癌。
290.在一些实施方案中，本文还提供了核酸和氨基酸序列，其与seq id no.1-307(或seq id no:1-307中的两个或更多个的组合)的相应核酸或氨基酸序列相比，具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％(以及其中的范围)的序列同一性，并且与相应的seq id no.1-307(或seq id no:1-307中的两个或更多个的组合)相比，还表现出包括但不限于以下的功能中的一个或多个：(i)增强的增殖；(ii)增强的活化；(iii)增强的针对呈递配体的细胞的细胞毒性活性，该配体与含有由核酸和氨基酸序列编码的受体的nk细胞和/或t细胞结合；(iv)增强的对肿瘤或感染位点的归巢；(v)减少的脱靶细胞毒性作用；(vi)增强的免疫刺激性细胞因子和趋化因子(包括但不限于ifng、tnfa、il-22、ccl3、ccl4和ccl5)的分泌；(vii)增强的刺激进一步先天性和适应性免疫应答的能力；以及(viii)其组合。
291.另外，在若干实施方案中，提供了对应于本文公开的任何核酸的氨基酸序列，同时考虑了核酸密码的简并性。此外，与本文明确公开的序列不同但具有功能类似性或等效性的那些序列(无论是核酸还是氨基酸)也被考虑在本公开的范围内。前述包括突变体、截短、取代或其他类型的修饰。
292.在若干实施方案中，编码所公开的细胞毒性受体复合物(包括但不限于bcma定向性和/或cd19定向性嵌合抗原受体)的多核苷酸是mrna。在一些实施方案中，多核苷酸是dna。在一些实施方案中，多核苷酸可操作地连接至用于表达细胞毒性受体复合物的至少一个调控元件。
293.根据若干实施方案，另外提供了包含编码本文提供的任何多核苷酸的多核苷酸的载体，其中该多核苷酸任选地可操作地连接至用于表达细胞毒性受体复合物的至少一个调控元件。在若干实施方案中，载体是逆转录病毒。
294.本文进一步提供了包含如本文所公开的多核苷酸、载体或细胞毒性受体复合物的工程化免疫细胞(诸如nk和/或t细胞)。本文进一步提供了包含工程化免疫细胞(诸如nk细胞和/或工程化t细胞)的混合物的组合物，每个群体包含如本文所公开的多核苷酸、载体或细胞毒性受体复合物。
295.在若干实施方案中，本文提供了工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，该嵌合抗原受体包含细胞外抗bcma结合部分、铰链和/或跨膜域、细胞内信号传导域，其中细胞内信号传导域包含ox40亚域和cd3ζ亚域，其中ox40亚域由与seq id no:5具有至少85％序列同一性的核酸编码，其中cd3ζ亚域由与seq id no:7具有至少85％序列同一性的核酸编码，并且其中该细胞还表达膜结合的白细胞介素15(mbil15)。在若干实施方案中，ox40亚域包含seq id no:6的氨基酸序列并且cd3ζ亚域包含seq id no:8的氨基酸序列。在若干实施方案中，铰链域包含cd8a铰链域。在若干实施方案中，cd8a铰链域包含seq id no:2的氨基酸序列。在若干实施方案中，mbil15包含seq id no:12的氨基酸序列。
296.在若干实施方案中，嵌合抗原受体进一步包含抗cd19结合域。在若干实施方案中，抗cd19结合域由选自与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少95％同一性的多核苷酸的多核苷酸编码。在若干实施方案中，抗bcma部分包含选自以下的一个或多个cdr：seq id no:208、seq id no:209、seq id no:210、seq id no:211、seq id no:212、seq id no:213、seq id no:214、seq id no:215、seq id no:216、seq id no:217、seq id no:218、seq id no:219、seq id no:220、seq id no:221、seq id no:
222、seq id no:223、seq id no:224、seq id no:261、seq id no:261、seq id no:263、seq id no:264、seq id no:265、seq id no:266、seq id no:267、seq id no:268、seq id no:269、seq id no:270、seq id no:271、seq id no:272、seq id no:273、seq id no:274、seq id no:275、seq id no:276、seq id no:277、seq id no:278、seq id no:279、seq id no:280、seq id no:281、seq id no:282、seq id no:283、seq id no:284、seq id no:285、seq id no:286、seq id no:287、seq id no:288、seq id no:289、seq id no:290、seq id no:291、seq id no:292、seq id no:293和seq id no:294。在若干实施方案中，抗bcma部分包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:225、seq id no:226、seq id no:227、seq id no:228、seq id no:229、seq id no:230、seq id no:231、seq id no:232、seq id no:233、seq id no:234、seq id no:235、seq id no:236、seq id no:237、seq id no:238、seq id no:239、seq id no:240、seq id no:241、seq id no:242、seq id no:243、seq id no:244、seq id no:245、seq id no:246、seq id no:247、seq id no:248、seq id no:249、seq id no:250、seq id no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259、seq id no:260、seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304。
297.本文还提供了治疗受试者中的癌症的方法，其包括向患有癌症的受试者施用根据本文公开的实施方案的工程化nk细胞。在若干实施方案中，该方法进一步包括向受试者施用表达抗cd19嵌合抗原受体的工程化nk细胞。在若干实施方案中，该方法进一步包括向受试者施用表达抗cd19嵌合抗原受体的工程化t细胞。
298.还提供了本文公开的工程化nk细胞用于治疗癌症和/或用于制备用于治疗癌症的药物的用途。在若干实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。
299.在若干实施方案中，本文还提供了联合免疫治疗组合物，其包含：(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，该bcma定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗bcma结合部分、铰链和/或跨膜域、细胞内信号传导域，其中该细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，并且其中该细胞还表达膜结合的白细胞介素-15(mbil15)；以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，该cd19定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗cd19结合部分、铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，其中该细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，并且其中该细胞还表达膜结合的白细胞介素-15(mbil15)；(iii)工程化t细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，该cd19定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗cd19结合部分、铰链和/或跨膜域、细胞内信号转导域，其中该细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，并且其中该细胞还表达膜结合的白细胞介素15(mbil15)。在若干实施方案中，抗bcma部分包含选自以下一个或多个cdr：seq id no:208,seq id no:209,seq id no:210,seq id no:211,seq id no:212,seq id no:213,seq id no:214,seq id no:215,seq id no:216,seq id no:217,seq id no:218,seq id no:219,seq id no:220,seq id no:221,seq id no:222,seq id no:223,seq id no:224,seq id no:261,seq id no:261,seq id no:263,seq id no:264,seq id no:265,seq id no:266,seq id no:267,seq id no:268,seq id no:269,seq id no:270,seq id no:271,seq id no:272,seq id no:273,seq id no:274,seq id no:275,seq id no:276,seq id no:
id no:237,seq id no:238,seq id no:239,seq id no:240,seq id no:241,seq id no:242,seq id no:243,seq id no:244,seq id no:245,seq id no:246,seq id no:247,seq id no:248,seq id no:249,seq id no:250,seq id no:251,seq id no:252,seq id no:253,seq id no:254,seq id no:255,seq id no:256,seq id no:257,seq id no:258,seq id no:259,seq id no:260,seq id no:295,seq id no:296,seq id no:297,seq id no:298,seq id no:299,seq id no:300,seq id no:301,seq id no:302,seq id no:303和seq id no:304。
302.在若干实施方案中，还提供了治疗受试者中的癌症的方法，其包括向患有癌症的受试者施用本文公开的联合免疫疗法组合物。在若干实施方案中，该组合包括(i)和(ii)。在若干实施方案中，该组合包括(i)和(iii)。
303.本文还提供了本文公开的联合免疫疗法组合物用于治疗癌症和/或用于制备用于治疗癌症的药物的用途。在若干实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。
304.在若干实施方案中，提供了联合免疫疗法治疗方案，其包括：(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，该bcma定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗bcma结合部分、铰链和/或跨膜域和细胞内信号传导域，其中该细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，并且其中该细胞还表达膜结合的白细胞介素15(mbil15)；以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，该cd19定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗cd19结合部分、铰链和/或跨膜域、细胞内信号传导域，其中该细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，并且其中该细胞还表达膜结合的白细胞介素-15(mbil15)；(iii)工程化t细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，该cd19定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗cd19结合部分、铰链和/或跨膜域、细胞内信号转导域，其中该细胞内信号传导域包括ox40亚域、cd3ζ亚域，并且其中该细胞还表达膜结合的白细胞介素15(mbil15)。
305.在若干实施方案中，抗bcma部分包含选自以下的一个或多个cdr：seq id no:208,seq id no:209,seq id no:210,seq id no:211,seq id no:212,seq id no:213,seq id no:214,seq id no:215,seq id no:216,seq id no:217,seq id no:218,seq id no:219,seq id no:220,seq id no:221,seq id no:222,seq id no:223,seq id no:224,seq id no:261,seq id no:261,seq id no:263,seq id no:264,seq id no:265,seq id no:266,seq id no:267,seq id no:268,seq id no:269,seq id no:270,seq id no:271,seq id no:272,seq id no:273,seq id no:274,seq id no:275,seq id no:276,seq id no:277,seq id no:278,seq id no:279,seq id no:280,seq id no:281,seq id no:282,seq id no:283,seq id no:284,seq id no:285,seq id no:286,seq id no:287,seq id no:288,seq id no:289,seq id no:290,seq id no:291,seq id no:292,seq id no:293和seq id no:294。在若干实施方案中，抗bcma部分包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:225,seq id no:226,seq id no:227,seq id no:228,seq id no:229,seq id no:230,seq id no:231,seq id no:232,seq id no:233,seq id no:234,seq id no:235,seq id no:236,seq id no:237,seq id no:238,seq id no:239,seq id no:240,seq id no:241,seq id no:242,seq id no:243,seq id no:244,seq id no:245,seq id no:246,seq id no:247,seq id no:248,seq id no:249,seq id no:250,seq id no:251,seq id no:252,seq id no:
253,seq id no:254,seq id no:255,seq id no:256,seq id no:257,seq id no:258,seq id no:259,seq id no:260,seq id no:295,seq id no:296,seq id no:297,seq id no:298,seq id no:299,seq id no:300,seq id no:301,seq id no:302,seq id no:303和seq id no:304。
306.在若干实施方案中，(ii)和/或(iii)的抗cd19结合域由选自与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少95％同一性的多核苷酸的多核苷酸编码。
307.在若干实施方案中，提供了联合免疫疗法治疗方案，其包括：(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，该bcma定向性嵌合抗原受体包含细胞外抗bcma结合部分、铰链和/或跨膜域、细胞内信号传导域，其中该细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域；以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，该cd19定向性嵌合抗原受体包含由选自与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少95％同一性的多核苷酸的多核苷酸编码的细胞外抗cd19结合部分、铰链和/或跨膜域、细胞内信号传导域；(iii)工程化t细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，该cd19定向性嵌合抗原受体包含由选自与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少95％同一性的多核苷酸的多核苷酸编码的细胞外抗cd19结合部分、铰链和/或跨膜域，以及细胞内信号传导域。在若干实施方案中，工程化nk细胞和/或工程化t细胞经进一步工程改造以表达膜结合的白细胞介素15。在若干实施方案中，抗bcma部分包含选自以下的一个或多个cdr：seq id no:208,seq id no:209,seq id no:210,seq id no:211,seq id no:212,seq id no:213,seq id no:214,seq id no:215,seq id no:216,seq id no:217,seq id no:218,seq id no:219,seq id no:220,seq id no:221,seq id no:222,seq id no:223,seq id no:224,seq id no:261,seq id no:261,seq id no:263,seq id no:264,seq id no:265,seq id no:266,seq id no:267,seq id no:268,seq id no:269,seq id no:270,seq id no:271,seq id no:272,seq id no:273,seq id no:274,seq id no:275,seq id no:276,seq id no:277,seq id no:278,seq id no:279,seq id no:280,seq id no:281,seq id no:282,seq id no:283,seq id no:284,seq id no:285,seq id no:286,seq id no:287,seq id no:288,seq id no:289,seq id no:290,seq id no:291,seq id no:292,seq id no:293和seq id no:294。在若干实施方案中，抗bcma部分包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:225,seq id no:226,seq id no:227,seq id no:228,seq id no:229,seq id no:230,seq id no:231,seq id no:232,seq id no:233,seq id no:234,seq id no:235,seq id no:236,seq id no:237,seq id no:238,seq id no:239,seq id no:240,seq id no:241,seq id no:242,seq id no:243,seq id no:244,seq id no:245,seq id no:246,seq id no:247,seq id no:248,seq id no:249,seq id no:250,seq id no:251,seq id no:252,seq id no:253,seq id no:254,seq id no:255,seq id no:256,seq id no:257,seq id no:258,seq id no:259,seq id no:260,seq id no:295,seq id no:296,seq id no:297,seq id no:298,seq id no:299,seq id no:300,seq id no:301,seq id no:302,seq id no:303和seq id no:304。
308.在若干实施方案中，提供了治疗受试者中的癌症的方法，其包括向患有癌症的受
试者施用如上公开的联合免疫疗法治疗方案。在若干实施方案中，该组合包括(i)和(ii)。在若干实施方案中，(i)和(ii)是共同施用的。在若干实施方案中，(i)和(ii)分开施用。在若干实施方案中，该组合包括(i)和(iii)。在若干实施方案中，(i)和(iii)是共同施用的。在若干实施方案中，(i)和(iii)分开施用。本文还提供了上文公开的联合免疫疗法治疗方案用于治疗癌症和/或在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在若干实施方案中，癌症是多发性骨髓瘤。
309.对于给定的受试者，基于其体重、疾病类型和状态以及期望的治疗攻击性，可以容易地确定免疫细胞诸如nk细胞或t细胞的剂量，但范围取决于实施方案，从每kg约105个细胞至每kg约10
12
个细胞(例如，10
5-107、10
7-10
10
、10
10-10
12
和其中的重叠范围)。在一个实施方案中，使用剂量递增方案。在若干实施方案中，施用一定范围的nk细胞，例如在约1x106个细胞/kg至约1x108个细胞/kg之间。取决于实施方案，可以治疗各种类型的癌症或感染性疾病。
310.癌症类型
311.本文所述的组合物和方法的一些实施方案涉及将包含嵌合抗原受体，诸如bmca定向和/或cd19定向性嵌合抗原受体的免疫细胞施用于患有癌症的受试者。本文提供的各种实施方案包括治疗或预防癌症的以下非限制性实例。癌症的实例包括但不限于多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞性白血病(all)、急性髓系白血病(aml)、肾上腺皮质癌、卡波西肉瘤、淋巴瘤、胃肠癌、阑尾癌、中枢神经系统癌、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑肿瘤(包括但不限于星形细胞瘤、脊髓肿瘤、脑干胶质瘤、颅咽管瘤、室管膜母细胞瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、髓上皮瘤)、乳腺癌、支气管肿瘤、伯基特淋巴瘤、宫颈癌、结肠癌、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性髓细胞性白血病(cml)、慢性骨髓增殖性疾病、导管癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、肾细胞癌、白血病、口腔癌、鼻咽癌、肝癌、肺癌(包括但不限于非小细胞肺癌(nsclc)和小细胞肺癌)、胰腺癌、肠癌、淋巴瘤、黑色素瘤、眼癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、垂体癌、子宫癌和阴道癌。
312.癌症靶标
313.本文描述的组合物和方法的一些实施方案涉及包含靶向癌抗原的嵌合抗原受体的免疫细胞。靶抗原的非限制性实例包括：bcma、cd19、cd38、cd138(也称为联合蛋白聚糖(syndecan)1)、g蛋白偶联受体、c类5组成员d(gprc5d)、slamf7、cd229(slamf3)、cd123、cd5、cd22；cd30；cd171；cs1(也被称为cd2子集1、crac、slamf7、cd319和19a24)；c型凝集素样分子-1(cll-1或clecl1)；cd33；表皮生长因子受体变异体iii(egfrviii)；神经节苷脂g2(gd2)；神经节苷脂gd3(aneu5ac(2-8)aneu5ac(2-3)bdgalp(l-4)bdglcp(l-l)cer)；tn抗原((tn ag)或(galnaca-ser/thr))；前列腺特异性膜抗原(psma)；受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ror1)；fms样酪氨酸激酶3(flt3)；肿瘤相关糖蛋白72(tag72)；cd38；cd44v6；在急性白血病或淋巴瘤上表达但在造血祖细胞上不表达的糖基化cd43表位、在非造血系统癌症上表达的糖基化cd43表位、癌胚抗原(cea)；上皮细胞粘附分子(epcam)；b7h3(cd276)；kit(cd117)；白细胞介素-13受体亚基α-2(il-13ra2或cd213a2)；间皮素；白细胞介素11受体α(il-11ra)；前列腺干细胞抗原(psca)；蛋白酶丝氨酸21(testisin或prss21)；血管内皮生长因子受体2(vegfr2)；lewis(y)抗原；cd24；血小板源性生长因子受体β(pdgfr-β)；阶段特异性胚胎抗原-4(ssea-4)；cd20；叶酸受体α(fra或fr1)；叶酸受体β(frb)；受体酪氨酸蛋白
激酶erbb2(her2/neu)；粘蛋白1，细胞表面相关(muc1)；表皮生长因子受体(egfr)；神经细胞粘附分子(ncam)；前列腺酶(prostase)；前列腺酸性磷酸酶(pap)；延长因子2突变(elf2m)；ephrin b2；成纤维细胞活化蛋白α(fap)；胰岛素样生长因子1受体(igf-i受体)、碳酸酐酶ix(caix)；蛋白酶体(prosome,macropain)亚基，beta型，9(lmp2)；糖蛋白100(gp100)；由断裂点簇集区(bcr)和abelson鼠白血病病毒致癌基因同源物1(abl)(bcr-abl)组成的癌基因融合蛋白；酪氨酸酶；肝配蛋白a型受体2(epha2)；唾液酸化lewis粘附分子(sle)；神经节苷脂gm3(aneu5ac(2-3)bdclalp(l-4)bdglcp(l-l)cer)；转谷氨酰胺酶5(tgs5)；高分子量黑色素瘤相关抗原(hmwmaa)；o-乙酰基-gd2神经节苷脂(oacgd2)；肿瘤内皮标志物1(tem1/cd248)；肿瘤内皮标志物7相关(tem7r)；密封蛋白6(cldn6)；甲状腺刺激激素受体(thyroid stimulating hormone receptor，tshr)；g蛋白偶联受体c类5组，成员d(gprc5d)；x染色体开放阅读框61(cxorf61)；cd97；cd179a；间变性淋巴瘤激酶(alk)；聚唾液酸；胎盘特异性1(plac1)；globoh糖神经酰胺(globoh glycoceramide，globoh)的多聚己糖部分；乳腺分化抗原(ny-br-1)；尿溶蛋白(uroplakin)2(upk2)；甲型肝炎病毒细胞受体1(havcr1)；肾上腺素受体β3(adrb3)；泛连接蛋白3(panx3)；g蛋白偶联受体20(gpr20)；淋巴细胞抗原6复合物，基因座k 9(ly6k)；嗅觉受体51e2(or51e2)；tcrγ替代阅读框架蛋白(tarp)；wilms肿瘤蛋白(wt1)；癌症/睾丸抗原1(ny-es0-1)；癌症/睾丸抗原2(lage-la)；黑色素瘤相关抗原1(mage-a1)；ets易位变异基因6，位于染色体12p上(etv6-aml)；精子蛋白17(spa17)；x抗原家族，成员1a(xage1)；血管生成素结合细胞表面受体2(tie 2)；黑色素瘤癌症睾丸抗原1(mad-ct-1)；黑色素瘤癌症睾丸抗原2(mad-ct-2)；fos相关抗原1；肿瘤蛋白p53(p53)；p53突变体；前列腺素(prostein)；存活素；端粒酶；前列腺癌肿瘤抗原-1(pct a-1或半乳糖凝集素8)、由t细胞识别的黑色素瘤抗原1(melana或marti)；大鼠肉瘤(ras)突变体；人端粒酶；逆转录酶(htert)；肉瘤易位断裂点；黑色素瘤凋亡抑制剂(ml-iap)；erg(跨膜蛋白酶，丝氨酸2(tmprss2)ets融合基因)；n-乙酰基葡萄糖氨基转移酶v(na17)；配对盒蛋白pax-3(pax3)；雄激素受体；细胞周期蛋白b1；v-myc禽骨髓细胞瘤病毒致癌基因成神经细胞瘤源性同源物(mycn)；ras同源物家族成员c(rhoc)；酪氨酸酶相关蛋白2(trp-2)；细胞色素p450 ib 1(cypib 1)；ccctc-结合因子(锌指蛋白)样(boris或印迹位点调节物兄弟)、由t细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(sart3)；配对盒蛋白pax-5(pax5)；前顶体素结合蛋白sp32(oy-tes1)；淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(lck)；激酶锚定蛋白4(akap-4)；滑膜肉瘤，x断裂点2(ssx2)；高级糖基化终产物受体(rage-1)；肾普遍存在物(ubiquitous)1(ru1)；肾普遍存在物2(ru2)；豆荚蛋白(legumain)；人乳头瘤病毒e6(hpv e6)；人乳头瘤病毒e7(hpv e7)；肠道羧基酯酶；热休克蛋白70-2突变(mut hsp70-2)；cd79a；cd79b；cd72；白细胞相关免疫球蛋白样受体1(lair1)；iga受体的fc片段(fcar或cd89)；白细胞免疫球蛋白样受体亚家族a成员2(lilra2)；cd300分子样家族成员f(cd300lf)；c型凝集素域家族12成员a(clec12a)；骨髓基质细胞抗原2(bst2)；含有egf样模块的粘蛋白样激素受体样2(emr2)；淋巴细胞抗原75(ly75)；磷脂酰肌醇聚糖-3(gpc3)；fc受体样5(fcrl5)；以及免疫球蛋白λ样多肽1(iglll)、mpl、生物素、c-myc表位标签、cd34、lamp1 trop2、gfrα4、cdh17、cdh6、nybr1、cdh19、cd200r、slea(ca19.9；唾液酸化lewis抗原)；岩藻糖基-gml、ptk7、gpnmb、cdh1-cd324、dll3、cd276/b7h3、ill 1ra、il13ra2、cd179b-iglll、tcrγ-δ、nkg2d、cd32(fcgr2a)、tnag、timl-/hvcr1、csf2ra(gm-csfr-α)、tgfβr2、lews ag、tcr-β1链、tcr-β
2链、tcr-γ链、tcr-δ链、fitc、促黄体激素受体(lhr)、卵泡刺激素受体(fshr)、促性腺激素受体(cghr或gr)、ccr4、gd3、slamf6、slamf4、hiv1包膜糖蛋白、htlv1-tax、cmv pp65、ebv-ebna3c、kshv k8.1、kshv-gh、甲型流感血凝素(ha)、gad、pdl1、鸟苷酸环化酶c(gcc)、针对桥粒芯蛋白3(dsg3)的自身抗体、针对桥粒芯蛋白1(dsgl)的自身抗体、hla、hla-a、hla-a2、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dm、hla-doa、hla-dob、hla-dq、hla-dr、hla-g、ige、cd99、ras g12v、组织因子1(tf1)、afp、gprc5d、密封蛋白18.2(cld18a2或cldn18a.2))、p-糖蛋白、steap1、livl、粘连蛋白-4、cripto、gpa33、bst1/cd157、低电导率氯离子通道以及由tnt抗体识别的抗原。
实施例
314.本文公开的材料和方法是根据本文公开的某些实施方案待采用的非限制性示例。
315.实施例1——nk细胞中的抗bcma car表达
316.根据若干实施方案，nk细胞从外周血单个核细胞分离出来，并且通过使用饲养细胞系进行扩增。在若干实施方案中，饲养细胞经工程化改造以表达某些刺激分子(例如白细胞介素、cd3、4-1bbl等)，以促进免疫细胞扩增和活化。工程化饲养细胞公开在例如美国专利号7,435,596或8,026,097和国际专利申请pct/sg2018/050138中，其每一篇的全部内容通过引用其整体并入本文。
317.从pbmc中分离出来的nk细胞与表达膜结合的il15和4-1bbl的k562细胞进行共培养，其中培养基补充有il2。在大约第7天用编码抗bcma定向性嵌合抗原受体构建体的载体进行病毒转导。将各种抗bcma car构建体转导到不同的nk细胞群体中。可以使用一种或多种跨膜域、一种或多种铰链域、一种或多种共刺激域和一种或多种信号传导域的任何组合。在若干实施方案中，抗bcma car包含ox40域和cd3ζ信号传导域。在若干实施方案中，病毒载体还编码白细胞介素15，任选地连同抗bcma car由nk细胞表达为膜结合形式。在总培养时间的第14天或更多天，对所得工程化nk细胞进行评价。
318.通过检测car构建体来评估抗bcma car构建体的表达，例如通过评估测试群体中表达整合到car中的标签序列的nk细胞的百分比(例如，flag标签，尽管本文公开的实施方案还提供了无标签car构建体)。据信，至少约75％或更多的nk细胞将以稳定的方式表达car(例如，培养至少2-3周或更长时间)。
319.这是先知性实施例。
320.实施例2——t细胞中的抗bcma car表达
321.根据若干实施方案，t细胞从外周血单核细胞中分离出来，并通过使用市售的t细胞扩增产品(例如，与抗cd3和抗cd28抗体偶联的珠)进行扩增。
322.将在大约第7天用编码抗bcma定向性嵌合抗原受体构建体的各种载体对t细胞进行病毒转导。将各种抗bcma car构建体转导到不同的t细胞群体中。可以使用一种或多种跨膜域、一种或多种铰链域、一种或多种共刺激域和一种或多种信号传导域的任何组合。在若干实施方案中，抗bcma car包含ox40域和cd3ζ信号传导域。在若干实施方案中，病毒载体还编码白细胞介素15，任选地以膜结合形式连同抗bcma car由t细胞表达。在14天或更多天的总培养时间处评估所得工程化t细胞。
323.通过检测car构建体来评估抗bcma car构建体的表达，例如通过评估测试群体中
表达整合到car中的标签序列(例如，flag标签；尽管本文公开的实施方案还提供了无标签的car构建体)的t细胞的百分比。据信，至少约75％或更多的t细胞将以稳定的方式表达car(例如，持续至少2-3周或更长时间)。
324.这是先知性实施例。
325.实施例3——表达细胞毒性抗bcma car的nk和t细胞的体外评估
326.将表达各种抗bcma car的nk细胞和/或t细胞与表达bcma的肿瘤细胞以及作为对照的表达很少bcma或不表达bcma的细胞(和未转导的nk和/或t细胞)共培养。将肿瘤细胞任选地用荧光检测标签(例如，gfp)加标签用于通过流式细胞术进行检测/定量。将评估各种效应物:靶标的比率，例如8:1、4:1、2:1、1:1、1:2、1:4和/或1:8。共培养后，将收集培养基并测定各种细胞毒性或促炎细胞因子的水平。量化肿瘤细胞存活。
327.据信，与通过与表达降低的bcma水平的肿瘤细胞一起培养的非转导的nk和/或t细胞以及表达bcma-car的nk和/或t细胞的那些效应物的释放相比，表达抗bcma car并与表达bcma的肿瘤细胞共培养的nk和/或t细胞导致细胞毒性效应分子(例如颗粒酶b、穿孔素和/或干扰素γ)的更高释放。
328.据信，表达抗bcma car并与表达bcma的肿瘤细胞共培养的nk和/或t细胞以取决于给定实验的e:t比的方式表现出针对肿瘤细胞的细胞毒性作用。据信，工程化nk和/或t细胞将表现出本质上持久的抗肿瘤细胞作用(例如，能够在用抗bcma car转导后表现出至少2-3周的细胞毒性)。
329.这是先知性实施例。
330.实施例4——表达细胞毒性抗bcma car的nk和t细胞的体内评估
331.nk和t细胞从pbmc中分离出来并进行扩增，如上所述。nk细胞和t细胞经工程化改造以通过nk或t细胞的病毒转导来表达抗bcma car。病毒转导在分离后大约7天进行。将各种抗bcma car构建体转导到不同的nk细胞和t细胞群体中。可以使用一种或多种跨膜域、一种或多种铰链域、一种或多种共刺激域和一种或多种信号传导域的任何组合。在若干实施方案中，抗bcma car包含ox40域和cd3ζ信号传导域。在若干实施方案中，病毒载体还编码白细胞介素15，任选地以膜结合形式连同抗bcma car由nk细胞表达。在14天或更长的总培养时间处评估所得工程化nk和工程化t细胞。
332.免疫缺陷的nsg小鼠将在第0天静脉内注射适当剂量(例如，1x105个细胞)的bcma阳性肿瘤细胞并表达发光标志物。在第1天，小鼠接受pbs对照注射、未转导的nk和/或t细胞，以及表达本文公开的各种抗bcma car之一的nk和/或t细胞。将在各个时间点，诸如第0天、第8天、第11天、第16天、第20天、第28天、第32天和第40天收集生物发光成像数据。在各个时间点，诸如第5天、第15天和第20天、第25天、第30天、第35天和第40天收集血液样品。
333.使用流式细胞术分析血液样品的肿瘤细胞的存在和数量，以检测bcma或另一种鉴定的细胞表面蛋白。对生物发光图像审查时间点间的信号强度。预计pbs对照组和未转导的nk和/或t细胞的生物发光信号随时间增加。预期注射表达抗bcma car的nk细胞导致肿瘤细胞生长的进展减少。预期注射表达抗bcma car的t细胞导致肿瘤细胞生长的进展减少。预期注射表达抗bcma car的nk细胞和表达抗bcma car的t细胞的组合产生显著或甚至协同的肿瘤细胞生长进展的减少。在其中靶向额外的bcma表位(例如，通过由nk和/或t细胞表达的双特异性car或第二car)的实施方案中，预计进一步增强的细胞毒性。
334.预计接受表达抗bcma car(或多个car)的nk细胞和/或t细胞的小鼠表现出相比于对照组提高的存活率。
335.这是先知性实施例。
336.实施例5——表达其他癌症靶标与表达抗bcma car的nk和/或t细胞的组合
337.nk和t细胞从pbmc中分离并进行扩增，如上所述。nk细胞和t细胞经工程化改造以通过nk或t细胞的病毒转导来表达抗bcma car。病毒转导在分离后大约7天进行。将各种抗bcma car构建体转导到不同的nk细胞和t细胞群体中。可以使用一种或多种跨膜域、一种或多种铰链域、一种或多种共刺激域和一种或多种信号传导域的任何组合。在若干实施方案中，抗bcma car将包含ox40域和cd3ζ信号传导域。在若干实施方案中，病毒载体还将编码白细胞介素15，任选地以膜结合形式连同抗bcma car由nk细胞表达。
338.nk细胞和/或t细胞经工程化改造以表达针对额外的(例如非bcma)肿瘤标志物的car。额外的肿瘤标志物是cd19、cd38、cd138、slam-f7或gprc5d中的一种或多种。在若干实施方案中，单个car经工程化改造以靶向bcma和cd19、cd38、cd138、slam-f7或gprc5d中的一种或多种。与靶向bcma的car一样，可以使用本文公开的一种或多种跨膜域、一种或多种铰链域、一种或多种共刺激域和一种或多种信号传导域的任何组合。在若干实施方案中，针对非bcma标志物的car将包含ox40域和cd3ζ信号传导域。在若干实施方案中，用于用非bcma car转导nk和/或t细胞的病毒载体还将编码白细胞介素15，任选地以膜结合形式连同非bcma car(或双特异性car)由nk细胞表达。将在14天或更长的总培养时间处评估所得工程化nk和工程化t细胞。
339.免疫缺陷的nsg小鼠将在第0天静脉内注射bmca阳性、对一种或多种非bcma肿瘤标志物(例如cd19、cd38、cd138、slam-f7或gprc5d)呈阳性的肿瘤细胞(以适当的剂量，诸如1x105个细胞)并表达发光标志物。在第1天，小鼠接受pbs对照注射、未转导的nk和/或t细胞，以及表达本文公开的各种抗bcma car之一、表达本文公开的各种非bcma car之一，或双特异性bcma/非bcma car的nk和/或t细胞。在各个时间点，诸如第0天、第8天、第11天、第16天、第20天、第28天、第32天和第40天收集生物发光成像数据。将在各个时间点，诸如第5天、第15天和第20天、第25天、第30天、第35天和第40天收集血液样品。
340.使用流式细胞术分析血液样品的肿瘤细胞的存在和数量，以检测bcma和非bcma细胞表面蛋白。对生物发光图像审查时间点间的信号强度。预计pbs对照组和未转导的nk和/或t细胞的生物发光信号将随时间增加。预期注射表达抗bcma car和针对非bcma靶标的car的nk细胞、t细胞和/或nk细胞与t细胞的组合导致肿瘤细胞生长的进展减少。这种减少产生肿瘤生长减少，其大于表达抗bcma或非bmca car的细胞单独产生所实现的肿瘤生长减少。在若干实施方案中，无论是在nk细胞、t细胞上还是在组合的nk细胞和t细胞两者上表达，在靶向bcma和非bcma靶标的双特异性car的情况下，肿瘤细胞生长类似减少。
341.接受表达抗bcma car和非bcma靶向car(或单个双特异性car)的nk细胞和/或t细胞的小鼠也表现出相对于对照组以及相对于用仅表达一种car(bcma或非bcma定向性)的细胞处理的组改善的存活率。
342.这是先知性实施例。
343.考虑了可以对上文公开实施方案的特定特征和方面做出各种组合或子组合，并且这些组合或子组合仍然落在本发明的一个或多个内。进一步地，本文中与实施方案有关的
任何特定特性、方面、方法、性质、特征、质量、属性、原理等的公开内容可以用于本文中所列出的所有其他实施方案。因此，应当理解，所公开的实施方案的各种特征和方面可以彼此组合或替代，以便形成所公开的发明的不同模式。因此，意图是本文中公开的本发明范围不应被上述具体公开的实施方案限制。此外，尽管本发明易受各种修改和替代形式的影响，但其具体实例已在附图中示出并在本文中详细描述。然而，应当理解，本发明不限于所公开的具体形式或方法，相反，本发明将覆盖落在所描述的各种实施方案和所附权利要求的精神和范围内的所有修改、等同物和替代物。本文公开的任何方法不需要按所叙述的顺序进行。本文公开的方法包括从业人员所采取的某些行动；但是，它们也可以包括任何第三方对这些行动的指导，无论是明示的还是暗示的。另外，当按照马库什(markush)组来描述本公开的特性或方面时，本领域技术人员将认识到，还由此按照马库什组成员的任何个体成员或亚组来描述本公开。
344.本文公开的范围还涵盖任何和所有重叠、子范围及其组合。如“至多”、“至少”、“大于”、“小于”、“之间”等语言包括所叙述的数字。前面为术语诸如“约”或“大约”的数字包括所叙述的数字。例如，“约90％”包括“90％”。在一些实施方案中，至少95％序列同一性或同源性包括相对于参考序列的96％、97％、98％、99％和100％序列同一性或同源性。另外，当序列被公开为“包含”核苷酸或氨基酸序列时，除非另有指示，否则此种引用还应包括该序列“包含”所叙述的序列、“由”其“组成”或“基本上由”其“组成”。
345.在若干实施方案中，提供了对应于本文公开的任何核酸的氨基酸序列，同时考虑了核酸密码的简并性。此外，与本文明确公开的序列不同但具有功能类似性或等效性的那些序列(无论是核酸还是氨基酸)也被考虑在本公开的范围内。前述包括突变体、截短、替换或其他类型的修饰。
346.本文使用的任何标题或副标题用于组织目的，并且不应用于限制本文公开的实施方案的范围。

技术特征：
1.用于癌症免疫疗法的工程化细胞群体，所述工程化细胞群体包含：自然杀伤(nk)细胞群体，所述自然杀伤细胞表达bcma定向性嵌合抗原受体(car)，所述car包含：细胞外抗bcma结合部分，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，其中所述ox40亚域由与seq id no:5具有至少85％序列同一性的核酸编码，其中所述cd3ζ亚域由与seq id no:7具有至少85％序列同一性的核酸编码，并且其中所述nk细胞还表达膜结合的白细胞介素15(mbil15)。2.权利要求1所述的工程化细胞群体，其中所述ox40亚域包含seq id no:6的氨基酸序列并且所述cd3ζ亚域包含seq id no:8的氨基酸序列，其中所述铰链域包含cd8a铰链域并且其中所述cd8a铰链域包含seq id no:2的氨基酸序列。3.权利要求1所述的工程化细胞群体，其中所述mbil15包含seq id no:12的氨基酸序列。4.权利要求1所述的工程化细胞群体，其中所述抗bcma结合部分包含选自以下的一个或多个cdr：seq id no:208、seq id no:209、seq id no:210、seq id no:211、seq id no:212、seq id no:213、seq id no:214、seq id no:215、seq id no:216、seq id no:217、seq id no:218、seq id no:219、seq id no:220、seq id no:221、seq id no:222、seq id no:223、seq id no:224、seq id no:261、seq id no:261、seq id no:263、seq id no:264、seq id no:265、seq id no:266、seq id no:267、seq id no:268、seq id no:269、seq id no:270、seq id no:271、seq id no:272、seq id no:273、seq id no:274、seq id no:275、seq id no:276、seq id no:277、seq id no:278、seq id no:279、seq id no:280、seq id no:281、seq id no:282、seq id no:283、seq id no:284、seq id no:285、seq id no:286、seq id no:287、seq id no:288、seq id no:289、seq id no:290、seq id no:291、seq id no:292、seq id no:293和seq id no:294。5.权利要求1所述的工程化细胞群体，其中所述抗bcma结合部分包含选自以下各项的氨基酸序列：seq id no:225、seq id no:226、seq id no:227、seq id no:228、seq id no:229、seq id no:230、seq id no:231、seq id no:232、seq id no:233、seq id no:234、seq id no:235、seq id no:236、seq id no:237、seq id no:238、seq id no:239、seq id no:240、seq id no:241、seq id no:242、seq id no:243、seq id no:244、seq id no:245、seq id no:246、seq id no:247、seq id no:248、seq id no:249、seq id no:250、seq id no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259、seq id no:260、seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304。6.权利要求1所述的工程化细胞群体，其中所述car进一步包含结合额外的bcma表位的额外细胞外部分。7.权利要求1所述的工程化细胞群体，其进一步包含表达结合额外的bcma表位的car的
额外nk细胞。8.权利要求1所述的工程化细胞群体，其进一步包含表达结合额外的bcma表位的car的t细胞。9.权利要求1所述的工程化细胞群体，其中所述嵌合抗原受体进一步包含结合非bcma癌症标志物的额外细胞外部分。10.权利要求1所述的工程化细胞群体，其进一步包含表达结合非bcma癌症标志物的car的额外nk细胞。11.权利要求1所述的工程化细胞群体，其进一步包含表达结合非bcma癌症标志物的car的t细胞。12.根据权利要求9至11中任一项所述的工程化细胞群体，其中所述非bcma癌症标志物包括cd138、slamf7、cd38、gprc5d或cd19中的一种或多种。13.权利要求12所述的工程化细胞群体，其中所述非bcma癌症标志物是cd19，并且结合所述cd19的car包含由与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200中的一项或多项具有至少95％序列同一性的多核苷酸编码的抗cd19结合域。14.治疗受试者中的癌症的方法，其包括向患有癌症的受试者施用权利要求1至13中任一项所述的工程化细胞群体。15.权利要求1至13中任一项所述的工程化细胞群体用于治疗癌症的用途。16.权利要求1至13中任一项所述的工程化细胞群体在制备用于治疗癌症的药物中的用途。17.权利要求14所述的方法或权利要求15或16中任一项所述的用途，其中所述癌症是b细胞恶性肿瘤。18.组合免疫疗法组合物，其包含：(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，所述bcma定向性嵌合抗原受体包含：细胞外抗bcma结合部分，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，并且其中所述nk细胞还表达膜结合的白细胞介素15(mbil15)；以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达针对选自cd138、slamf7、cd38、gprc5d或cd19的非bcma癌症标志物的嵌合抗原受体，所述非bcma定向性嵌合抗原受体包含：细胞外部分，其用于结合cd138、slamf7、cd38、gprc5d或cd19中的一个或多个，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域和cd3ζ亚域，并且其中所述细胞还表达膜结合的白细胞介素15(mbil15)；和(iii)工程化t细胞，其表达针对选自cd138、slamf7、cd38、gprc5d或cd19的非bcma癌症标志物的嵌合抗原受体，所述非bcma定向性嵌合抗原受体包含：
细胞外部分，其用于结合cd138、slamf7、cd38、gprc5d或cd19中的一个或多个，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd28亚域、4-1bb亚域和cd3ζ亚域中的一种或多种，并且其中所述细胞还表达膜结合的白细胞介素15(mbil15)。19.权利要求18所述的组合免疫疗法组合物，其中所述抗bcma结合部分包含选自以下各项的一个或多个cdr：seq id no:208、seq id no:209、seq id no:210、seq id no:211、seq id no:212、seq id no:213、seq id no:214、seq id no:215、seq id no:216、seq id no:217、seq id no:218、seq id no:219、seq id no:220、seq id no:221、seq id no:222、seq id no:223、seq id no:224、seq id no:261、seq id no:261、seq id no:263、seq id no:264、seq id no:265、seq id no:266、seq id no:267、seq id no:268、seq id no:269、seq id no:270、seq id no:271、seq id no:272、seq id no:273、seq id no:274、seq id no:275、seq id no:276、seq id no:277、seq id no:278、seq id no:279、seq id no:280、seq id no:281、seq id no:282、seq id no:283、seq id no:284、seq id no:285、seq id no:286、seq id no:287、seq id no:288、seq id no:289、seq id no:290、seq id no:291、seq id no:292、seq id no:293和seq id no:294。20.权利要求18或19所述的组合免疫疗法组合物，其中所述抗bcma结合部分包含选自以下各项的氨基酸序列：seq id no:225、seq id no:226、seq id no:227、seq id no:228、seq id no:229、seq id no:230、seq id no:231、seq id no:232、seq id no:233、seq id no:234、seq id no:235、seq id no:236、seq id no:237、seq id no:238、seq id no:239、seq id no:240、seq id no:241、seq id no:242、seq id no:243、seq id no:244、seq id no:245、seq id no:246、seq id no:247、seq id no:248、seq id no:249、seq id no:250、seq id no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259、seq id no:260、seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304。21.权利要求18-20中任一项所述的组合免疫疗法组合物，其中(ii)和/或(iii)的所述抗cd19结合域由选自下组的多核苷酸编码：与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少95％同一性的多核苷酸。22.组合免疫疗法组合物，其包含：(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，所述bcma定向性嵌合抗原受体包含：细胞外抗bcma结合部分，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，并且其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域；以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达针对非bcma癌症标志物的嵌合抗原受体，所述
非bcma定向性嵌合抗原受体包含：细胞外部分，其用于结合非bcma癌症标志物，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，并且其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域和cd3ζ亚域，和(iii)工程化t细胞，其表达针对非bcma癌症标志物的嵌合抗原受体，所述非bcma定向性嵌合抗原受体包含：细胞外部分，其用于结合非bcma癌症标志物，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，并且其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd28亚域、4-1bb亚域和cd3ζ亚域中的一种或多种。23.组合免疫疗法组合物，其包含：(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达第一bcma定向性嵌合抗原受体，所述bcma定向性嵌合抗原受体包含：针对第一bcma表位的细胞外抗bcma结合部分，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，和其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域；以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达第二bcma定向性嵌合抗原受体，所述第二bcma定向性嵌合抗原受体包含：针对第二bcma表位的细胞外抗bcma结合部分，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，并且其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域和cd3ζ亚域，和(iii)工程化t细胞，其表达第二bcma定向性嵌合抗原受体，所述bcma定向性嵌合抗原受体包含：针对第二bcma表位的细胞外抗bcma结合部分，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，并且其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd28亚域、和4-1bb亚域和cd3ζ亚域中的一种或多种。24.权利要求22或23所述的组合免疫疗法组合物，其中所述工程化nk细胞和/或工程化t细胞中的每一个还表达膜结合的白细胞介素-15(mbil15)。25.用于癌症免疫疗法的工程化免疫细胞，所述工程化免疫细胞包含：工程化免疫细胞，其表达双特异性bcma定向性嵌合抗原受体，所述bcma定向性嵌合抗原受体包含：细胞外抗bcma结合部分，其包含配置为与bcma的第一表位结合的第一区域和配置为与
第二bcma表位结合的第二区域，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，并且其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd28亚域、和4-1bb亚域和cd3ζ亚域中的一种或多种。26.权利要求25所述的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞是nk细胞。27.权利要求25所述的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞是t细胞。28.生成工程化免疫细胞群体的方法，其包括：向免疫细胞群体递送包含编码bcma定向性嵌合抗原受体的多核苷酸的载体，所述嵌合抗原受体包含：细胞外抗bcma结合部分，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域，其中所述ox40亚域由与seq id no:5具有至少85％序列同一性的核酸编码，其中所述cd3ζ亚域由与seq id no:7具有至少85％序列同一性的核酸编码，并且其中所述多核苷酸还编码膜结合的白细胞介素15(mbil15)。29.权利要求28所述的方法，其中所述ox40亚域包含seq id no:6的氨基酸序列并且所述cd3ζ亚域包含seq id no:8的氨基酸序列。30.权利要求28或29所述的方法，其中所述铰链域包含cd8a铰链域并且其中所述cd8a铰链域包含seq id no:2的氨基酸序列。31.权利要求28至30中任一项所述的方法，其中所述mbil15包含seq id no:12的白细胞介素15氨基酸序列。32.根据权利要求28至31中任一项所述的方法，其中所述抗bcma结合部分包含选自以下各项的一个或多个cdr：seq id no:208、seq id no:209、seq id no:210、seq id no:211、seq id no:212、seq id no:213、seq id no:214、seq id no:215、seq id no:216、seq id no:217、seq id no:218、seq id no:219、seq id no:220、seq id no:221、seq id no:222、seq id no:223、seq id no:224、seq id no:261、seq id no:261、seq id no:263、seq id no:264、seq id no:265、seq id no:266、seq id no:267、seq id no:268、seq id no:269、seq id no:270、seq id no:271、seq id no:272、seq id no:273、seq id no:274、seq id no:275、seq id no:276、seq id no:277、seq id no:278、seq id no:279、seq id no:280、seq id no:281、seq id no:282、seq id no:283、seq id no:284、seq id no:285、seq id no:286、seq id no:287、seq id no:288、seq id no:289、seq id no:290、seq id no:291、seq id no:292、seq id no:293和seq id no:294。33.权利要求28至32中任一项所述的方法，其中所述抗bcma结合部分包含选自以下各项的氨基酸序列：seq id no:225、seq id no:226、seq id no:227、seq id no:228、seq id no:229、seq id no:230、seq id no:231、seq id no:232、seq id no:233、seq id no:234、seq id no:235、seq id no:236、seq id no:237、seq id no:238、seq id no:239、seq id no:240、seq id no:241、seq id no:242、seq id no:243、seq id no:244、seq id no:245、
seq id no:246、seq id no:247、seq id no:248、seq id no:249、seq id no:250、seq id no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259、seq id no:260、seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304。34.权利要求28至33中任一项所述的方法，其中所述抗bcma结合部分进一步包含结合额外的bcma表位的额外细胞外抗bcma结合部分。35.权利要求28至34中任一项所述的方法，其进一步包括向所述免疫细胞群体递送包含编码针对非bcma癌症标志物的嵌合抗原受体的多核苷酸的额外载体，所述非bcma定向性嵌合抗原受体包含：用于结合非bcma癌症标志物的细胞外部分，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域。36.权利要求35所述的方法，其中所述非bcma癌症标志物包括cd138、slamf7、cd38、gprc5d或cd19中的一种或多种。37.权利要求28至36中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞包括nk细胞、t细胞或其组合。38.载体，其包含编码bcma定向性嵌合抗原受体的多核苷酸，所述嵌合抗原受体包含：细胞外抗bcma结合部分，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd28亚域和4-1bb亚域和cd3ζ亚域中的一种或多种，其中所述ox40亚域由与seq id no:5具有至少85％序列同一性的核酸编码。39.组合免疫疗法组合物，其包含：(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，所述bcma定向性嵌合抗原受体包含：细胞外抗bcma结合部分，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域，其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域；以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，所述cd19定向性嵌合抗原受体包含：细胞外抗cd19结合部分，其由选自下组的多核苷酸编码：与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少95％同一性的多核苷酸，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域；和(iii)工程化t细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，所述cd19定向性嵌合抗原受体
包含：细胞外抗cd19结合部分，其由选自下组的多核苷酸编码：与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少95％同一性的多核苷酸，铰链和/或跨膜域，细胞内信号传导域。40.权利要求39所述的组合免疫疗法组合物，其中所述工程化nk细胞和/或工程化t细胞经进一步工程化改造以表达膜结合的白细胞介素15。41.权利要求39或40所述的组合免疫疗法组合物，其中所述抗bcma部分包含选自以下各项的一个或多个cdr：seq id no:208、seq id no:209、seq id no:210、seq id no:211、seq id no:212、seq id no:213、seq id no:214、seq id no:215、seq id no:216、seq id no:217、seq id no:218、seq id no:219、seq id no:220、seq id no:221、seq id no:222、seq id no:223、seq id no:224、seq id no:261、seq id no:261、seq id no:263、seq id no:264、seq id no:265、seq id no:266、seq id no:267、seq id no:268、seq id no:269、seq id no:270、seq id no:271、seq id no:272、seq id no:273、seq id no:274、seq id no:275、seq id no:276、seq id no:277、seq id no:278、seq id no:279、seq id no:280、seq id no:281、seq id no:282、seq id no:283、seq id no:284、seq id no:285、seq id no:286、seq id no:287、seq id no:288、seq id no:289、seq id no:290、seq id no:291、seq id no:292、seq id no:293和seq id no:294。42.权利要求39或40所述的组合免疫疗法组合物，其中所述抗bcma部分包含选自以下各项的氨基酸序列：seq id no:225、seq id no:226、seq id no:227、seq id no:228、seq id no:229、seq id no:230、seq id no:231、seq id no:232、seq id no:233、seq id no:234、seq id no:235、seq id no:236、seq id no:237、seq id no:238、seq id no:239、seq id no:240、seq id no:241、seq id no:242、seq id no:243、seq id no:244、seq id no:245、seq id no:246、seq id no:247、seq id no:248、seq id no:249、seq id no:250、seq id no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259、seq id no:260、seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304。43.治疗受试者中的癌症的方法，其包括向患有癌症的受试者施用权利要求39至42中任一项所述的组合免疫疗法组合物。44.权利要求43所述的方法，其中所述组合包括(i)和(ii)。45.权利要求43所述的方法，其中所述组合包括(i)和(iii)。46.权利要求39至45中任一项所述的组合免疫疗法组合物用于治疗癌症的用途。47.权利要求39至45中任一项所述的组合免疫疗法组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。48.权利要求39至45中任一项所述的方法或权利要求46或47中任一项所述的用途，其中所述癌症是多发性骨髓瘤。49.组合免疫疗法治疗方案，其包括：(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，所述bcma定向性嵌合
no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259、seq id no:260、seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304。52.权利要求49至51中任一项所述的组合免疫疗法治疗方案，其中(ii)和/或(iii)的所述抗cd19结合域由选自下组的多核苷酸编码：与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少95％同一性的多核苷酸。53.组合免疫疗法治疗方案，其包括：(i)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达bcma定向性嵌合抗原受体，所述bcma定向性嵌合抗原受体包含：细胞外抗bcma结合部分，铰链和/或跨膜域，和细胞内信号传导域，其中所述细胞内信号传导域包含ox40亚域、cd3ζ亚域；以及以下中的一项或多项：(ii)工程化自然杀伤(nk)细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，所述cd19定向性嵌合抗原受体包含：细胞外抗cd19结合部分，其由选自下组的多核苷酸编码：与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少95％同一性的多核苷酸，铰链和/或跨膜域，和细胞内信号传导域；和(iii)工程化t细胞，其表达cd19定向性嵌合抗原受体，所述cd19定向性嵌合抗原受体包含：细胞外抗cd19结合部分，其由选自下组的多核苷酸编码：与seq id no:184、seq id no:186、seq id no:192或seq id no:200具有至少95％同一性的多核苷酸，铰链和/或跨膜域，和细胞内信号传导域。54.权利要求53所述的组合免疫疗法治疗方案，其中所述工程化nk细胞和/或所述工程化t细胞经进一步工程化改造以表达膜结合的白细胞介素15。55.权利要求53或54所述的组合免疫疗法治疗方案，其中所述抗bcma部分包含选自以下各项的一个或多个cdr：seq id no:208、seq id no:209、seq id no:210、seq id no:211、seq id no:212、seq id no:213、seq id no:214、seq id no:215、seq id no:216、seq id no:217、seq id no:218、seq id no:219、seq id no:220、seq id no:221、seq id no:222、seq id no:223、seq id no:224、seq id no:261、seq id no:261、seq id no:263、seq id no:264、seq id no:265、seq id no:266、seq id no:267、seq id no:268、seq id no:269、seq id no:270、seq id no:271、seq id no:272、seq id no:273、seq id no:274、seq id no:275、seq id no:276、seq id no:277、seq id no:278、seq id no:279、seq id no:280、seq id no:281、seq id no:282、seq id no:283、seq id no:284、seq id no:285、seq id no:286、seq id no:287、seq id no:288、seq id no:289、seq id no:290、seq id no:
291、seq id no:292、seq id no:293和seq id no:294。56.权利要求53或54所述的组合免疫疗法治疗方案，其中所述抗bcma部分包含选自以下各项的氨基酸序列：seq id no:225、seq id no:226、seq id no:227、seq id no:228、seq id no:229、seq id no:230、seq id no:231、seq id no:232、seq id no:233、seq id no:234、seq id no:235、seq id no:236、seq id no:237、seq id no:238、seq id no:239、seq id no:240、seq id no:241、seq id no:242、seq id no:243、seq id no:244、seq id no:245、seq id no:246、seq id no:247、seq id no:248、seq id no:249、seq id no:250、seq id no:251、seq id no:252、seq id no:253、seq id no:254、seq id no:255、seq id no:256、seq id no:257、seq id no:258、seq id no:259、seq id no:260、seq id no:295、seq id no:296、seq id no:297、seq id no:298、seq id no:299、seq id no:300、seq id no:301、seq id no:302、seq id no:303和seq id no:304。57.治疗受试者中的癌症的方法，其包括向患有癌症的受试者施用权利要求53至56中任一项所述的组合免疫疗法治疗方案。58.权利要求57所述的方法，其中所述组合包括(i)和(ii)，其中(i)和(ii)共同施用或其中(i)和(ii)分开施用。59.权利要求58所述的方法，其中所述组合包括(i)和(iii)，其中(i)和(iii)共同施用，或其中(i)和(iii)分开施用。60.权利要求53至59中任一项所述的组合免疫疗法治疗方案用于治疗癌症的用途。61.权利要求53至59中任一项所述的组合免疫疗法治疗方案在制备用于治疗癌症的药物中的用途。62.权利要求53至59中任一项所述的方法或权利要求60或61中任一项所述的用途，其中所述癌症是多发性骨髓瘤。

技术总结
在若干实施方案中，本文提供了基于免疫细胞的组合物，其包含BCMA定向性嵌合抗原受体(CAR)。在若干实施方案中，基于免疫细胞的组合物还靶向额外的肿瘤标志物和/或额外的BCMA表位。在若干实施方案中，BCMA定向性CAR在自然杀伤细胞中表达。在若干实施方案中，表达BCMA-CAR的NK细胞的组合与例如针对额外的癌症标志物和/或额外的BCMA表位的表达CAR的NK细胞和/或表达CAR的T细胞结合施用。本文还提供了在免疫疗法中嵌合抗原受体的方法和用途。疫疗法中嵌合抗原受体的方法和用途。疫疗法中嵌合抗原受体的方法和用途。


技术研发人员：K.L.拉詹加姆 J.B.特雷格 L.G.布伦 C.郭 A.L.L.拉泽蒂克
受保护的技术使用者：恩卡尔塔公司
技术研发日：2021.01.11
技术公布日：2022/11/1