1.本发明涉及水产养殖技术领域，具体为一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法。
背景技术：2.淡水虾蟹养殖是我国水产养殖业的重点板块，其包括的品种较多，主要品种是河蟹(中华绒螯蟹)、罗氏沼虾、南美白对虾、青虾等。淡水虾蟹是我国名优水产品的重要组成部分之一，它的养殖起始于七十年代,随着养殖面积的不但扩大,养殖容量的不断增加,由于一味追求经济利益，忽视可持续发展的重要性，造成殖密度过大，种质资源质量降低等问题，从而使得养殖水体水质恶化，及水产动物的抵抗力下降，并为病原菌的入侵提供了机会，尤其是入侵虾蟹的肠道，因此出现了肠道疾病频繁发生的现象。而养殖过程产生的养殖污水也会进一步对周围水体造成二次污染，同时抗生素和杀虫剂的滥用也导致了化学污染，这些都通过影响虾蟹的肠道健康从而致病。至今每年因病害所造成的经济损失就达几百亿元。对于上述现象，水产养殖从业人员通常的做法的大量用药，以治疗疾病为最终目的，并没有综合考虑健康养殖、食品安全以及环境友好等因素。因此通常不正确诊断疾病，难以科学用药，难以对症对方用药，选药没有明确的指证，多种药物同时使用，不考虑药物疗效等多种因素，不够充分考虑各种因素可能对药物造成的干扰等，用药的浓度、用药次数和用药的间隔时间等都不够合理。这些做法干扰了虾蟹体内代谢的规律，不但没能从根本上解决养殖的病害问题，还损害了虾蟹的肠道健康，影响了养殖效益乃至食品安全。
3.针对于虾蟹肠道健康问题，益生菌、益生元、合生元是很好解决方案。益生菌在肠道中增殖，并发挥积极健康影响的微生物。对虾蟹肠道有益的益生菌种类有嗜酸乳杆菌、保加利亚乳杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌等。它们能在宿主消化道定植并发挥相应的生理作用，如增加机体中抗体滴度、增强巨噬细胞活性、提高杀伤性t细胞的数量，以及增加干扰素水平、增强机体免疫功能。益生元是指一类可作为底物被肠道正常菌群利用，能选择性刺激结肠内一种或几种细菌生长或增加活性，对宿主健康有益的寡糖或多糖，如低聚果糖、低聚半乳糖、异麦芽低聚糖大豆低聚糖等。合生元是指益生菌和益生元的混合制品，或再加入其他有利于肠道健康的物质。其既可发挥益生菌的生理性细菌活性，又可选择性地增加该菌的数量，使益生菌作用更显著持久。但目前国内外关于合生元的研究还较少，其作用还待进一步的研究。
技术实现要素：4.本发明的目的在于针对现有技术的不足之处，提供一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法，以解决背景技术中所提出的问题。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：包括如下步骤：
6.步骤一：首先完成筛选凝结芽孢杆菌以及乳杆菌；
7.步骤二：完成对菌株的活化处理；
8.步骤三：将菌株定值在基质上；
9.步骤四：菌株对基质进行发酵处理；
10.步骤五：发酵过程中产生gpx、sod、nadp过氧化物酶、活性多肽、活性多糖、有机酸、短链脂肪酸以及菌体的组成成分如肽聚糖、壁磷壁酸、脂磷壁酸等活性物质；
11.步骤六：复配乳果糖蒙脱石物质；
12.步骤七：产物经动物试验评价，从而促进动物免疫和抗病力。
13.作为本发明的优选技术方案，所述凝结芽孢杆菌由大自然分离及市场进行选择，菌株满足如下条件：所述凝结孢杆菌菌株在100℃高温下处理 5min存活率达98％以上；所述凝结孢杆菌菌株经中强酸液体处理2小时存活率为96％以上；所述凝结孢杆菌菌株扩繁时30min内要完成一代繁殖且在4小时内完成增殖300倍以上；所述凝结孢杆菌菌株自然条件下存放2 年而活菌数量无显著变化。
14.作为本发明的优选技术方案，所述乳杆菌由大自然分离及市场进行选择，菌株满足如下调节：所述乳杆菌菌株在ph3.0条件下生长,所述乳杆菌菌株对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的均有明显抑菌作用,所述乳杆菌菌株发酵2h后迅速产生大量有机酸且发酵12h后ph趋于稳定，达到3.7 以下。
15.作为本发明的优选技术方案，所述凝结芽孢杆菌发酵基质及条件为：所述麦麸为底物基质，所述麦麸粗蛋白含量为13％以上，在底物中添加 0.8％至1.5％的碳源(葡萄糖、乳糖、蔗糖、和甘油)和氮源(铵盐、氯化铵、硝酸钠、蛋白胨)，以及盐类物质(kh2p04-1.0％，nah2p04-0.85％， k2hp04-1.5％，na2hp04-1.2％；mns04-0.1％)；湿度为55％至70％；ph值为6.5-7.0。
16.作为本发明的优选技术方案，所述乳杆菌发酵基质及条件为：所述大豆粉为底物基质，所述大豆粉粗蛋白含量为30％以上，在底物中添加2％的营养培养基(配方为：蛋白胨12.0g、牛肉粉5.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖25.0g、tween-80.1ml、磷酸氢二钾2.0g、醋酸钠4.5g、柠檬酸三铵2.0g、七水硫酸镁0.2g以及四水硫酸锰0.05g)。
17.作为本发明的优选技术方案，所述蒙脱石采用天然钠基蒙脱石，其离子交换量为100meq/100g至200meq/100g范围内，乳果糖纯度为99.0％以上。
18.与现有技术相比，本发明提供了一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法，具备以下有益效果：
19.该一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法，通过筛选凝结芽孢杆菌、乳杆菌并使其活化、定植、繁殖并对基质进行发酵，以获得使其产生丰富的gpx、sod、nadp过氧化物酶、活性多肽、活性多糖、有机酸、短链脂肪酸以及菌体的组成成分肽聚糖、壁磷壁酸、脂磷壁酸等活性物质，再配合寡糖蒙脱石复配而成，本发明将“彻底扑灭肠道病原微生物”的传统思路转变为“创造条件优化肠道健康环境，通过竞争抑制有害微生物，改善肠道结构和功能”的新技术思路。具体做法是利用蒙脱石的吸附性能，将微生物吸附集结；利用乳果糖的益生元功能，给肠道有益微生物提供养分，使得有害微生物失去竞争优势；利用凝结芽孢杆菌、乳杆菌增加肠道有益菌书；利用凝结芽孢杆菌、乳杆菌发酵产物给肠道细胞提供养分，优化肠道的结构，改善肠道的功能。
20.该一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法具备如下特点：
21.1、系统地为虾蟹动物建造一个肠道优化方案，而不是简单的杀菌致病；
22.2、该制备技术的所得产物是绿色的肠道健康保健剂，不具有毒副作用，具有替代
抗生素作用；
23.3、该制备工艺的所得物流散性佳，适合饲料生产和其他用途。
附图说明
24.图1为本发明120mg/kg试验示意图；
25.图2为本发明250mg/kg试验示意图；
26.图3为本发明500mg/kg试验示意图；
27.图4为本发明1000mg/kg试验示意图；
28.图5为本发明试验示意图；
具体实施方式
29.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
30.实施例一：本产品按不同剂量添加到南美白对虾饲料中，使用后发现 250g/t剂量综合效果最佳，能够通过优化肠道菌群，调控肠道结构与功能，提高肠道消化酶活性，蛋白酶活性提高了26.09％，脂肪酶活性提高了30.95％，淀粉酶活性提高了20.51％，最终提高肠道消化吸收能力。
31.其试验评价如下：
[0032][0033][0034]
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：包括如下步骤：
[0035]
步骤一：首先完成筛选凝结芽孢杆菌以及乳杆菌；
[0036]
步骤二：完成对菌株的活化处理；
[0037]
步骤三：将菌株定值在基质上；
[0038]
步骤四：菌株对基质进行发酵处理；
[0039]
步骤五：发酵过程中产生gpx、sod、nadp过氧化物酶、活性多肽、活性多糖、有机酸、短链脂肪酸以及菌体的组成成分如肽聚糖、壁磷壁酸、脂磷壁酸等活性物质；
[0040]
步骤六：复配乳果糖蒙脱石物质；
[0041]
步骤七：产物经动物试验评价，从而促进动物免疫和抗病力。
[0042]
具体地：凝结芽孢杆菌由大自然分离及市场进行选择，菌株满足如下条件：凝结孢杆菌菌株在100℃高温下处理5min存活率达98％以上；凝结孢杆菌菌株经中强酸液体处理2小时存活率为96％以上；凝结孢杆菌菌株扩繁时30min内要完成一代繁殖且在4小时内完成增殖300倍以上；凝结孢杆菌菌株自然条件下存放2年而活菌数量无显著变化；乳杆菌由大自然分离及市场进行选择，菌株满足如下调节：乳杆菌菌株在ph3.0条件下生长,乳杆菌菌株对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的均有明显抑菌作用,乳杆菌菌株发酵2h后迅速产生大量有机酸且发酵12h后ph趋于稳定，达到 3.7以下；凝结芽孢杆菌发酵基质及条件为：麦麸为底物基质，麦麸粗蛋白含量为13％以上，在底物中添加0.8％至1.5％的碳源(葡萄糖、乳糖、蔗糖、和甘油)和氮源(铵盐、氯化铵、硝酸钠、蛋白胨)，以及盐类物质 (kh2p04-1.0％，nah2p04-0.85％，k2hp04-1.5％，na2hp04-1.2％；mns04
‑ꢀ
0.1％)；湿度为55％至70％；ph值为6.5-7.0；乳杆菌发酵基质及条件为：大豆粉为底物基质，大豆粉粗蛋白含量为30％以上，在底物中添加2％的营养培养基(配方为：蛋白胨12.0g、牛肉粉5.0g、酵母提取物 5.0g、葡萄糖25.0g、tween-80.1ml、磷酸氢二钾2.0g、醋酸钠4.5g、柠檬酸三铵2.0g、七水硫酸镁0.2g以及四水硫酸锰0.05g)；蒙脱石采用天然钠基蒙脱石，其离子交换量为100meq/100g至200meq/100g范围内，乳果糖纯度为99.0％以上。
[0043]
实施例二：嗜水气单胞菌病是水产动物最常见的细菌性疾病之一，水产养殖动物遭受该细菌侵袭后会出现大量死亡现象。使用本产品后的罗氏沼虾进行嗜水气单胞菌攻毒实验，24小时内罗氏沼虾死亡率显著低于未使用虾。攻毒5天后，使用本产品250g/t的罗氏沼虾累计死亡率比对照组降低低了30％左右。
[0044]
其试验评价如图1-5
[0045]
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：包括如下步骤：
[0046]
步骤一：首先完成筛选凝结芽孢杆菌以及乳杆菌；
[0047]
步骤二：完成对菌株的活化处理；
[0048]
步骤三：将菌株定值在基质上；
[0049]
步骤四：菌株对基质进行发酵处理；
[0050]
步骤五：发酵过程中产生gpx、sod、nadp过氧化物酶、活性多肽、活性多糖、有机酸、短链脂肪酸以及菌体的组成成分如肽聚糖、壁磷壁酸、脂磷壁酸等活性物质；
[0051]
步骤六：复配乳果糖蒙脱石物质；
[0052]
步骤七：产物经动物试验评价，从而促进动物免疫和抗病力。
[0053]
具体地：凝结芽孢杆菌由大自然分离及市场进行选择，菌株满足如下条件：凝结孢杆菌菌株在100℃高温下处理5min存活率达98％以上；凝结孢杆菌菌株经中强酸液体处理2小时存活率为96％以上；凝结孢杆菌菌株扩繁时30min内要完成一代繁殖且在4小时内完成增殖300倍以上；凝结孢杆菌菌株自然条件下存放2年而活菌数量无显著变化；乳杆菌由大自然分离及市场进行选择，菌株满足如下调节：乳杆菌菌株在ph3.0条件下生长,乳杆菌菌株对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的均有明显抑菌作用,乳杆菌菌株发酵2h后迅速产生大量有机酸且发酵12h后ph趋于稳定，达到 3.7以下；凝结芽孢杆菌发酵基质及条件为：麦麸为底物基质，麦麸粗蛋白含量为13％以上，在底物中添加0.8％至1.5％的碳源(葡萄糖、乳
糖、蔗糖、和甘油)和氮源(铵盐、氯化铵、硝酸钠、蛋白胨)，以及盐类物质 (kh2p04-1.0％，nah2p04-0.85％，k2hp04-1.5％，na2hp04-1.2％；mns04
‑ꢀ
0.1％)；湿度为55％至70％；ph值为6.5-7.0；乳杆菌发酵基质及条件为：大豆粉为底物基质，大豆粉粗蛋白含量为30％以上，在底物中添加2％的营养培养基(配方为：蛋白胨12.0g、牛肉粉5.0g、酵母提取物 5.0g、葡萄糖25.0g、tween-80.1ml、磷酸氢二钾2.0g、醋酸钠4.5g、柠檬酸三铵2.0g、七水硫酸镁0.2g以及四水硫酸锰0.05g)；蒙脱石采用天然钠基蒙脱石，其离子交换量为100meq/100g至200meq/100g范围内，乳果糖纯度为99.0％以上。
[0054]
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
技术特征：1.一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一：首先完成筛选凝结芽孢杆菌以及乳杆菌；步骤二：完成对菌株的活化处理；步骤三：将菌株定值在基质上；步骤四：菌株对基质进行发酵处理；步骤五：发酵过程中产生gpx、sod、nadp过氧化物酶、活性多肽、活性多糖、有机酸、短链脂肪酸以及菌体的组成成分如肽聚糖、壁磷壁酸、脂磷壁酸等活性物质；步骤六：复配乳果糖蒙脱石物质；步骤七：产物经动物试验评价，从而促进动物免疫和抗病力。2.根据权利要求1所述的一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法，其特征在于：步骤一中：所述凝结芽孢杆菌由大自然分离及市场进行选择，菌株满足如下条件：所述凝结孢杆菌菌株在100℃高温下处理5min存活率达98％以上；所述凝结孢杆菌菌株经中强酸液体处理2小时存活率为96％以上；所述凝结孢杆菌菌株扩繁时30min内要完成一代繁殖且在4小时内完成增殖300倍以上；所述凝结孢杆菌菌株自然条件下存放2年而活菌数量无显著变化。3.根据权利要求1所述的一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法，其特征在于：步骤二中：所述乳杆菌由大自然分离及市场进行选择，菌株满足如下调节：所述乳杆菌菌株在ph3.0条件下生长,所述乳杆菌菌株对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的均有明显抑菌作用,所述乳杆菌菌株发酵2h后迅速产生大量有机酸且发酵12h后ph趋于稳定，达到3.7以下。4.根据权利要求1所述的一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法，其特征在于：步骤三中，所述凝结芽孢杆菌发酵基质及条件为：所述麦麸为底物基质，所述麦麸粗蛋白含量为13％以上，在底物中添加0.8％至1.5％的碳源(葡萄糖、乳糖、蔗糖、和甘油)和氮源(铵盐、氯化铵、硝酸钠、蛋白胨)，以及盐类物质(kh2p04-1.0％，nah2p04-0.85％，k2hp04-1.5％，na2hp04-1.2％；mns04-0.1％)；湿度为55％至70％；ph值为6.5-7.0。5.根据权利要求1所述的一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法，其特征在于：步骤三中，所述乳杆菌发酵基质及条件为：所述大豆粉为底物基质，所述大豆粉粗蛋白含量为30％以上，在底物中添加2％的营养培养基(配方为：蛋白胨12.0g、牛肉粉5.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖25.0g、tween-80.1ml、磷酸氢二钾2.0g、醋酸钠4.5g、柠檬酸三铵2.0g、七水硫酸镁0.2g以及四水硫酸锰0.05g)。6.根据权利要求1所述的一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法，其特征在于：所述蒙脱石采用天然钠基蒙脱石，其离子交换量为100meq/100g至200meq/100g范围内，乳果糖纯度为99.0％以上。
技术总结本发明公开了一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法，包括如下步骤：首先完成筛选凝结芽孢杆菌以及乳杆菌；完成对菌株的活化处理；将菌株定值在基质上；菌株对基质进行发酵处理；发酵过程中产生GPX、SOD、NADP过氧化物酶、活性多肽、活性多糖、有机酸、短链脂肪酸以及菌体的组成成分如肽聚糖、壁磷壁酸、脂磷壁酸等活性物质；复配乳果糖蒙脱石物质；产物经动物试验评价，从而促进动物免疫和抗病力；该一种虾蟹肠道健康用合生元的制备方法，获得使其产生丰富的GPX、SOD、NADP过氧化物酶、活性多肽、活性多糖、有机酸、短链脂肪酸以及菌体的组成成分肽聚糖、壁磷壁酸、脂磷壁酸等活性物质。脂磷壁酸等活性物质。
技术研发人员：苏永腾
受保护的技术使用者：江苏溢荟生物技术有限公司
技术研发日：2022.04.29
技术公布日：2022/11/1
