1.本发明涉及植物提取领域，尤其是涉及一种积雪草提取物的制备方法及应用。
背景技术：2.积雪草天然提取产物，可用于动脉粥样硬化、抗高血压、抗高血脂，抗溃疡、抗抑郁药、抗菌以及抗氧化等症，此外还可用于治疗皮肤病和皮肤损伤，尤其是在抑制疤痕形成、促进伤口愈合及抑制黑色素生成等方面，在食品、保健品、医药及化妆品领域均有较好的应用前景。
3.对于皮肤损伤的修复，除了表皮层外，多种皮肤损伤和皮肤疾病常发生于真皮层。因此，用于治疗皮肤疾病的药物必须能透过表皮，需要有一定的渗透率和积累量。尽管对于积雪草提取物中的积雪草苷、羟基积雪草苷对皮肤疾病和损伤表现了出色的治疗作用，但因其结构中含有多个羟基和3个糖基，使其具有较大的分子量，并表现出较强的极性，无法穿透肤表皮的脂质膜和角质层，并达到需要治疗的真皮部位，从而限制其有效发挥治疗作用。
4.相关技术对于上述问题的研究和解决方案较少，而且效果也并不是很理想，因此，还有改善的空间。
技术实现要素：5.为了提高积雪草提取物的在皮肤深层的吸收作用，本技术提供一种积雪草提取物的制备方法及应用。
6.第一方面，本技术提供一种积雪草提取物的制备方法，包括以下步骤：
7.步骤1)，将积雪草粉碎后加入原料10倍以上的提取液浸提不小于0.5h，微滤膜过滤，滤液即初提取物；
8.所述提取液是由水、低级醇和多元醇型非离子表面活性剂组成。
9.步骤2)，将初提取物和三硬脂酸甘油酯在50-60℃的温度下预热5-10min，之后在转速80-120r/min的速度下搅拌20min以上，最后调节ph至中性，灭菌，获得积雪草提取物。
10.通过采用上述技术方案，通过采用特定比例的水、低级醇和多元醇型非离子表面活性剂组合作为提取液，有利于提高积雪草中的积雪草苷、羟基积雪草苷、脂溶性成分等多种活性成分的溶解度，积雪草中原本的脂溶性成分和三硬脂酸甘油酯在山梨坦单硬脂酸酯、失水山梨糖醇脂肪酸酯的作用下形成油包水的结构，形成类似一种脂质泡的结构。该脂质泡包裹着积雪草苷、羟基积雪草苷等有效成分，脂质泡的泡体能起到较好的渗透作用，促进积雪草的功效成分渗透至皮肤内层及皮肤细胞中，促进功效成分起效，达到皮肤深层次的修复作用，使得积雪草提取物更好地应用在皮肤修复药物中。
11.将粉碎后的积雪草原料颗粒过1.2-3mm的筛网再进行浸提，增大积雪草原料与提取液的接触面积，有利于破坏植物的细胞壁等结构，使得有效成分更易被提取出来，同时积雪草不易因颗粒太小给后续的过滤除杂操作带来困难。
12.优选的，所述步骤1)中的浸提温度为70-90℃。
13.优选的，灭菌采用高温瞬时灭菌法，灭菌温度100℃-130℃，时间10-15s。
14.通过上述灭菌方法，有利于更好地除去积雪草提取物中的微生物的同时有利于更好地缩短灭菌时间，使得积雪草提取物的生产效率提高。
15.上述提取方法中仅仅加入了水、低级醇、多元醇型非离子表面活性剂作为提取液，对皮肤刺激性小，使积雪草提取物更适于应用于皮肤修复药物中。另外，上述提取方法只需在浸提完成后经过滤、灭菌即可得到积雪草提取物，不用久置静置沉淀，有利于极大地缩短积雪草提取物的制备时间，使得生产效率提高，有利于降低积雪草提取物的生产成本，有利于积雪草提取物的工业化生产。
16.优选的，所述三硬脂酸甘油酯的使用量为所述初提取物的2-5％。
17.优选的，所述提取液中水、低级醇和多元醇型非离子表面活性剂的质量比为1：(0.3-0.9)：(0.05-0.2)。
18.通过采用水、低级醇和多元醇型非离子表面活性剂以特定比例组合作为提取液，能够较好地将积雪草中的淀粉、树脂、蛋白质等大分子杂质提取出来，以提高初提取物的纯度。此外，有利于更好地提高积雪草提取物的稳定性，使得提取所得的积雪草提取物经长时间放置后也不容易产生沉淀，更适于积雪草提取物应用于皮肤深层修复药物中。
19.优选的，所述低级醇为乙醇、失水山梨醇和1，2戊二醇以10：(1-2.5)：(0.4-0.8)的质量比组成。
20.优选的，所述多元醇型非离子表面活性剂是由山梨坦单硬脂酸酯和失水山梨糖醇脂肪酸酯的混合物。
21.优先的，所述山梨坦单硬脂酸酯的使用重量是失水山梨糖醇脂肪酸酯的1.5-3倍。
22.优选的，所述微滤膜的孔径0.3-0.7μm。
23.通过微滤膜除杂，有利于更好地定向去除提取液中的淀粉、蛋白质等大分子杂质，同时使得积雪草中的小分子活性成分极大程度地被保留下来，有利于更好地提高积雪草有效成分的提取率。
24.第二方面，本技术提供一种积雪草提取物的应用，采用如下的技术方案：重量百分比计，上述积雪草提取物在药品中的添加量为1-8％。
25.通过控制积雪草提取物在药品的添加量，能与皮肤表面相容稳定，其优良渗透性能促进药品中的功效成分渗透至皮肤细胞中，进而稳定起效。
26.优选的，所述药品为膏药、凝胶或者贴片。
27.本技术制得的积雪草提取物应用在膏药、凝胶或者贴片具有稳定性，使其应用的药品质量稳定，不易受环境影响储存质量，且在使用时，有利于在皮肤深层的吸收作用能促进积雪草提取物渗透至皮肤真皮层及皮肤细胞中，促进功效成分起效，应用广泛。
28.综上所述，本技术具有以下有益效果：
29.1、采用特定比例的水、低级醇和多元醇型非离子表面活性剂组合作为提取液，有利于提高积雪草中的多种活性成分的溶解度，积雪草中原本的脂溶性成分和三硬脂酸甘油酯在山梨坦单硬脂酸酯、失水山梨糖醇脂肪酸酯的作用下形成油包水的结构，形成类似一种脂质泡的结构。该脂质泡包裹着积雪草苷、羟基积雪草苷等有效成分，脂质泡的泡体能起到较好的渗透作用，促进积雪草的功效成分渗透至皮肤内层及皮肤细胞中，使得积雪草提
取物更好地应用在皮肤修复药物中。
30.2、采用水、低级醇和多元醇型非离子表面活性剂以特定比例组合作为提取液，能够较好地将积雪草中的淀粉、树脂、蛋白质等大分子杂质提取出来，以提高初提取物的纯度。也有利于更好地提高积雪草提取物的稳定性，更适于积雪草提取物应用于皮肤深层修复药物中。
31.3、本技术制得的积雪草提取物应用在膏药、凝胶或者贴片具有稳定性，不易受环境影响储存质量，使用时能促进积雪草提取物渗透至皮肤真皮层及皮肤细胞中，得到深层次的皮肤修复效果。
具体实施方式
32.实施例
33.实施例1
34.本实施例公开一种积雪草提取物的制备方法，包括以下步骤：
35.步骤1)，将积雪草投入粉碎机中粉碎，过2mm的筛网后取200g粉碎料，加入2kg的提取液在70℃下回流浸提0.5h，先用管式离心机进行初步离心过滤，离心转速为6000r/min，再用孔径为0.5μm的微滤膜过滤，滤液即初提取物。
36.步骤2)，取50g初提取物和2.5g三硬脂酸甘油酯加入均质搅拌机中，在50℃的温度下预热10min，之后在转速100r/min的速度下搅拌20min，最后用缓冲磷酸盐溶液调节ph至中性，继续搅拌1min；采用高温瞬时灭菌法，灭菌温度100℃，时间15s，获得积雪草提取物。
37.其中，提取液为1.48kg水、444g低级醇(乙醇39g、失水山梨醇3.9g和1，2戊二醇1.5g)和74.1g多元醇型非离子表面活性剂(失水山梨糖醇脂肪酸酯)。
38.实施例2
39.本实施例公开一种积雪草提取物的制备方法，与实施例1的区别在于：
40.步骤1)中的浸提温度为90℃，步骤2)中将初提取物和三硬脂酸甘油酯预热至60℃。
41.实施例3
42.本实施例公开一种积雪草提取物的制备方法，与实施例2的区别在于：
43.提取液为1.48kg水、444g低级醇(乙醇33.4g、失水山梨醇8.4g和1，2戊二醇2.7g)和74.1g多元醇型非离子表面活性剂(山梨坦单硬脂酸酯)。
44.实施例4
45.本实施例公开一种积雪草提取物的制备方法，与实施例2的区别在于：
46.提取液为1.48kg水、444g低级醇(乙醇33.4g、失水山梨醇8.4g和1，2戊二醇2.7g)和74.1g多元醇型非离子表面活性剂(失水山梨糖醇脂肪酸酯29.6g和山梨坦单硬脂酸酯44.4g)。
47.实施例5
48.本实施例公开一种积雪草提取物的制备方法，与实施例2的区别在于：
49.提取液为1.48kg水、444g低级醇(乙醇33.4g、失水山梨醇8.4g和1，2戊二醇2.7g)和74.1g多元醇型非离子表面活性剂(失水山梨糖醇脂肪酸酯18.5g和山梨坦单硬脂酸酯55.6g)。
50.实施例6
51.本实施例公开一种积雪草提取物的制备方法，包括以下步骤：
52.步骤1)，将积雪草投入粉碎机中粉碎，过1.5mm的筛网后取200g粉碎料，加入2kg的提取液在80℃下回流浸提0.5h，先用管式离心机进行初步离心过滤，离心转速为6000r/min，再用孔径为0.5μm的微滤膜过滤，滤液即初提取物。
53.步骤2)，取50g初提取物和1.0g三硬脂酸甘油酯加入均质搅拌机中，在60℃的温度下预热10min，之后在转速100r/min的速度下搅拌20min，最后用缓冲磷酸盐溶液调节ph至中性，继续搅拌1min；采用高温瞬时灭菌法，灭菌温度120℃，时间10s，获得积雪草提取物。
54.其中，提取液为952.4g水、857.1g低级醇(乙醇39g、失水山梨醇3.9g和1，2戊二醇1.5g)和190.5g多元醇型非离子表面活性剂(失水山梨糖醇脂肪酸酯54.4g和山梨坦单硬脂酸酯136g)。
55.对比例
56.对比例1
57.称取500g粉碎积雪草粉末，以2500ml质量浓度为75％乙醇水溶液浸泡，在50℃条件下超声波提取4次，每次1小时，过滤，将滤液合并减压浓缩得到浸膏20.5g；用200ml水溶解浸膏，用浸膏水溶液等体积的石油醚萃取3次，下相水溶液再用等体积的乙酸乙酯萃取4次，汇集下相水溶液，得到积雪草提取物。
58.对比例2
59.积雪草粉碎，过80目筛，取1kg粉末，将相当于积雪草粉末1％的复合酶(纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶的重量比为0.5:0.3:0.2)喷洒其上，薄膜包裹，堆积在温度35℃的暗室内，发酵24h，发酵后的原料加入8倍的50％的乙醇，置于双频超声提取器中，超声频率分别为40khz、80khz，功率为400w，于60℃提取60min，过滤，浓缩，石油醚-水萃取，取下层清液为积雪草提取物。
60.对比例3
61.与实施例1的区别在于，采用乙醇等量代替失水山梨醇和1，2戊二醇。
62.对比例4
63.与实施例1的区别在于，不使用失水山梨糖醇脂肪酸酯和山梨坦单硬脂酸酯。
64.实验检测
65.1、积雪草提取物中总苷含量和纯度测定。
66.检测标准《2020中国药典》一部《植物油脂和提取物》关于积雪草总苷的测定，数据见表1。
67.表1
68.项目积雪草总苷纯度/％得率/％实施例196.52.17实施例296.32.18实施例396.62.17实施例496.92.16实施例596.82.17实施例697.12.17
对比例1900.66对比例290.51.02对比例390.90.66对比例495.71.37
69.由表1可知，实施例1-6得到的积雪草提取物得率和纯度均高于对比例1-4，说明采用特定比例的水、低级醇和多元醇型非离子表面活性剂组合作为提取液，有利于提高积雪草中的积雪草苷、羟基积雪草苷、脂溶性成分等多种活性成分的溶解度，同时通过微滤膜去除了对于的杂质，使得积雪草提取物的纯度和得率均得到提升。
70.2、积雪草提取物在药膏中的应用效果
71.为了实验效果的准确定，以人体为实验，选30名嘴角轻度溃疡的患者，分10组，每组三人；10组患者分别在嘴角溃疡处薄涂上述实施例1-6以及对比例1-4制得的积雪草提取物5g，将其分别与45g卵磷脂和50g油酸均质30min，获得积雪草药膏样品，每次用量1.0g，涂覆患处2次/天，使用前将患处使用生理盐水清洁干净。分别测试用药前、用药第三天、用药第七天的菌落数量，每组取平均数。
72.取样方法：取嘴角溃疡处的涂刮试皮置于培养皿中，然后将该培养皿置于scan300自动菌落计数器内，检测菌落数。
73.嘴角溃疡患症一般是由于金黄色葡萄球菌和白色念珠菌等细菌引起，而积雪草苷、羟基积雪草苷皮肤药膏能对患处的病菌起到抑菌杀菌作用，故在用药前、用药第三天、用药第七天，检测嘴角患处的细菌量，以检验皮肤药膏的药效作用。
74.测试结果如下表2所示：
75.[0076][0077]
由上表2可知，采用本技术制得的积雪草提取物至外用的皮肤药膏中，菌落数明显下降，积雪草提取物药膏外具有优良的渗透性，涂于患者嘴角溃疡处，能促使功效成分积雪草苷和羟基积雪草苷作用于皮肤细胞中，以起到杀菌消炎作用。
[0078]
实施例1-6中可以看出，采用本技术的积雪草提取物应用至皮肤药膏中，在用药第三天、用药第七天的菌落数明显下降，说明本技术制得的积雪草提取物具有优良的渗透性，能促进皮肤药膏中的积雪草苷、羟基积雪草苷渗透至皮肤细胞中，对细胞中的金黄色葡萄球菌和白色念珠菌等菌落起到抑制、杀灭作用，以达到抑菌杀菌作用。
[0079]
进一步说明采用特定比例的水、低级醇和多元醇型非离子表面活性剂组合作为提取液，有利于提高积雪草中的积雪草苷、羟基积雪草苷、脂溶性成分等多种活性成分的溶解度，积雪草中原本的脂溶性成分和三硬脂酸甘油酯在山梨坦单硬脂酸酯、失水山梨糖醇脂肪酸酯的作用下形成油包水的结构，形成类似一种脂质泡的结构。该脂质泡包裹着积雪草苷、羟基积雪草苷等有效成分，脂质泡的泡体能起到较好的渗透作用，促进积雪草的功效成分渗透至皮肤内层及皮肤细胞中，促进功效成分起效，达到皮肤深层次的修复作用，使得积雪草提取物更好地应用在皮肤修复药物中。
[0080]
对比例1-4所制得的皮肤药膏在外涂至患处使用后，用药第三天、用药第七天后的菌落数量比实施例1要高，原因主要是该积雪草提取物的渗透性比实施例1低，采用对比例1-4的积雪草提取物所制得的皮肤药膏在外涂至患处使用后，用药第三天、用药第七天后的菌落数量比实施例1要高，即抗菌效果比实施例1下降，原因主要是对比例1-4制得的积雪草提取物的渗透吸收性能较低，影响皮肤药膏的功效成分起效性。
[0081]
以上所述实施例仅为本发明优选实施例，用于解释说明本发明而不用于限制本发明的范围。本发明的发明名称已经通过具体的实施例进行了描述。本领域技术人员可以借鉴本发明的内容适当改变原料、工艺条件等环节来实现相应的其它目的，其相关改变都没
有脱离本发明的内容，所有类似的替换和改动对于本领域技术人员来说是显而易见的，都被视为包括在本发明的范围之内。
技术特征：1.一种积雪草提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1），将积雪草粉碎后加入原料10倍以上的提取液浸提不小于0.5h，微滤膜过滤，滤液即初提取物；所述提取液是由水、低级醇和多元醇型非离子表面活性剂组成；步骤2），将初提取物和三硬脂酸甘油酯在50-60℃的温度下预热5-10min，之后在转速80-120r/min的速度下搅拌20min以上，最后调节ph至中性，灭菌，获得积雪草提取物。2.根据权利要求1所述的积雪草提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤1）中的浸提温度为70-90℃。3.根据权利要求1所述的积雪草提取物的制备方法，其特征在于：所述提取液中水、低级醇和多元醇型非离子表面活性剂的质量比为1：（0.3-0.9）：（0.05-0.2）。4.根据权利要求3所述的积雪草提取物的制备方法，其特征在于：所述低级醇为乙醇、失水山梨醇和1，2戊二醇以10：（1-2.5）：（0.4-0.8）的质量比组成。5.根据权利要求1-4任一所述的积雪草提取物的制备方法，其特征在于：所述多元醇型非离子表面活性剂是由山梨坦单硬脂酸酯和失水山梨糖醇脂肪酸酯的混合物。6.根据权利要求5所述的积雪草提取物的制备方法，其特征在于：所述山梨坦单硬脂酸酯的使用重量是失水山梨糖醇脂肪酸酯的1.5-3倍。7.根据权利要求1所述的积雪草提取物的制备方法，其特征在于：所述微滤膜的孔径0.3-0.7μm。8.根据权利要求1所述的积雪草提取物的制备方法，其特征在于：所述灭菌采用高温瞬时灭菌法，灭菌温度100℃-130℃，时间10-15s。9.一种积雪草提取物的应用，其特征在于：重量百分比计，所述积雪草提取物在药品中的添加量为1-8%。10.根据权利要求9所述的积雪草提取物的应用，其特征在于：所述药品为膏药、凝胶或者贴片。
技术总结本发明公开了一种积雪草提取物的制备方法及应用。积雪草提取物的制备方法为：步骤1），将积雪草粉碎后加入原料10倍以上的提取液浸提不小于0.5h，微滤膜过滤，滤液即初提取物。提取液是由水、低级醇和多元醇型非离子表面活性剂组成。步骤2），将初提取物和三硬脂酸甘油酯在50-60℃的温度下预热5-10min，之后在转速80-120r/min的速度下搅拌20min以上，最后调节pH至中性，灭菌，获得积雪草提取物。上述积雪草提取物在药品中的添加量为1-8%。本申请的积雪草提取物在膏药、凝胶或者贴片具有稳定性，使用时，有利于在皮肤深层的吸收作用能促进积雪草提取物渗透至皮肤真皮层及皮肤细胞中。草提取物渗透至皮肤真皮层及皮肤细胞中。
技术研发人员：戴珊媛
受保护的技术使用者：宁波绿之健药业有限公司
技术研发日：2022.07.26
技术公布日：2022/11/1
