1.本发明属于脂质体制备及肿瘤治疗领域，具体涉及一种用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体及其制备方法与应用。
背景技术：2.铁死亡(ferroptosis)是一种铁依赖性的，区别于细胞凋亡、细胞坏死、细胞自噬的新型的细胞程序性死亡方式；在细胞形态学上，生化特征区别于细胞凋亡、坏死、自噬。从机制而言，铁死亡是细胞膜上铁依赖性的高表达的不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，诱导的细胞死亡。近年来，铁死亡引起了癌症研究领域的极大兴趣，因为靶向铁死亡可能为治疗传统疗法难以治愈的癌症提供新的治疗机会；而正在开展的临床前研究在癌症治疗方面具有巨大潜力。
3.铁死亡通过两条主要途径启动：外源性或转运蛋白依赖途径以及内源性或酶调节途径；外源性途径是通过抑制细胞膜转运蛋白，如胱氨酸/谷氨酸转运蛋白(system xc-)或激活铁转运蛋白、转铁蛋白和乳转铁蛋白(lactotransferrin)而启动的；内源性途径是通过阻断细胞内抗氧化酶(如谷胱甘肽过氧化物酶gpx4)激活的。因此铁积累的增加、自由基的产生、脂肪酸供应和脂质过氧化是诱导铁死亡的关键。作为铁死亡的一个主要特征——脂质过氧化物的致命积累，涉及到细胞内铁死亡执行和铁死亡防御系统之间的对抗；当促进铁死亡的细胞活动显著超过铁死亡防御系统提供的抗氧化缓冲能力时，就会发生铁死亡；但如何促进脂质过氧化的积累是目前研究的热点。目前的研究大多基于铁纳米纳米/复合材料通过细胞内的芬顿或类芬顿反应将肿瘤细胞高表达的h2o2转化为高活性的羟基自由基，进而诱导铁死亡；尽管肿瘤细胞体内的h2o2比正常细胞高，但是其也不足以产生过量的活性氧使不饱和脂肪酸(pufa)氧化导致过量的脂质过氧化物(lpo)积累。与其同时，研究发现肿瘤细胞至少已进化出三种防御机制来抑制铁死亡的发生：1、谷胱甘肽过氧化物酶4(gpx4)利用还原性谷胱甘肽(gsh)消除脂质过氧化物并抑制铁死亡；2、铁死亡抑制蛋白1(fsp1)作为一种氧化还原酶，主要在质膜上将辅酶q(coq)还原为coqh2，coqh2作为一种抗氧化剂来消除脂质过氧自由基；3、二氢乳清酸脱氢酶(dhodh)介导的线粒体铁死亡的防御机制。因此，如何合理设计材料特异性诱导肿瘤细胞发生铁死亡并不被铁死亡抵御系统逆转脂质过氧化物的积累是目前亟需解决的问题。
4.目前已有多款被用于临床的药物被证明能够诱导肿瘤细胞发生铁死亡，但是这些小分子药物存在副作用大、无靶向性及溶解性差等不足，严重影响抗肿瘤药物的疗效。
技术实现要素：5.针对现有技术中存在的缺陷或不足，本发明的首要目的在于提供一种用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体的制备方法。
6.本发明的另一目的在于提供通过上述制备方法得到的氧化脂质体。
7.本发明的再一目的在于提供上述制备方法得到氧化脂质体的应用。
8.为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
9.为最大限度地诱导肿瘤细胞发生铁死亡，本发明通过脂质体的改造实现肿瘤细胞脂质过氧化物的过度积累，同时通过包裹低剂量铁死亡诱导剂，以解决目前一线铁死亡诱导剂靶向性差，副作用大等问题，更重要的是，通过递送铁死亡诱导剂最大程度抑制细胞铁死亡防御系统，实现高效及不可逆地诱导铁死亡的。具体的技术方案如下：
10.一种用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体的制备方法，包括如下步骤：
11.s1、将亚油酸和光敏剂分别溶解在有机溶剂中，混合后将整个反应体系通入稳定的氧气并保持稳定搅拌，随后用激光照射，得到亚油酸氢过氧化物；
12.s2、将步骤s1制得的亚油酸氢过氧化物、磷脂及铁死亡诱导剂分散在有机溶剂中，通过薄膜分散法制得脂质体；
13.s3、将步骤s2制得的脂质体通过膜挤出器挤出得到粒径均一的脂质体。
14.进一步地，步骤s1中所述的光敏剂亚为亚甲蓝、卟吩姆钠或光克洛；优选为亚甲蓝。
15.进一步地，步骤s1中所述的溶解亚油酸所用的有机溶剂为氯仿，有机溶剂的用量按亚油酸的浓度为15～25g/l计；优选按20g/l计。
16.进一步地，步骤s1中所述的溶解光敏剂所用的有机溶剂为甲醇，有机溶剂的用量按光敏剂的浓度为80～120g/l计；优选按100g/l计。
17.进一步地，步骤s1中所述的亚油酸的溶液和光敏剂的溶液的配比为体积比450～550:1；优选为体积比500:1。
18.进一步地，步骤s1中所述的激光照射的条件为波长660nm、时间7～9小时；优选为波长660nm、时间8小时。
19.进一步地，步骤s2中所述的磷脂为油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe)、二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、胆固醇(ch)、鞘磷脂(sphingomyelin)、卵磷脂(lecithin)中的任意两种或多种，与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-crgd(dspe-npeg-crgd)或二油酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-crgd(dope-peg-crgd)(重均分子量范围为500-2000)中的任意一种或多种的组合；优选为二油酰基磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、胆固醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-crgd的组合；更优选为二油酰基磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、胆固醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-crgd的组合按如下摩尔比混合所得的组合：20-40：15-30：10-30：10-30：1-5。
20.进一步地，步骤s2中所述的铁死亡诱导剂为索拉非尼、柳氮磺吡啶、他汀类药物或青蒿素；优选为索拉非尼或柳氮磺吡啶。
21.进一步地，步骤s2中所述的亚油酸氢过氧化物、磷脂及铁死亡诱导剂的质量比为0.5-1.5：2.5：2-5。
22.进一步地，步骤s2中所述的薄膜分散法的具体步骤为：先旋转蒸发使有机溶剂挥发，然后于避光条件下真空冷冻干燥，加入无菌pbs，超声分散，即制得脂质体。
23.更进一步地，所述的旋转蒸发和超声分散于37℃下进行。
24.更进一步地，所述的超声分散的条件为在37℃以120w功率超声5min。
25.进一步地，步骤s3中所述的挤出器的膜孔直径为100nm。
26.一种用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体，通过上述制备方法得到。
27.上述用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用。
28.进一步地，所述的肿瘤包括但不限于纤维肉瘤、黑色素瘤、结肠癌等。
29.本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
30.(1)本发明提供的氧化脂质体，crgd肽的加入能够特异性靶向肿瘤细胞，通过膜融合作为摄取方式实现脂质过氧化物的在细胞膜上的过度积累，以诱导肿瘤细胞发生铁死亡；
31.(2)本发明提供的氧化脂质体通过包裹铁死亡诱导药物，不但可以改善小分子物靶向性差、副作用大等不足，同时能够抑制细胞内的铁死亡防御系统，与过度积累的脂质过氧化高效协同肿瘤细胞发生铁死亡；
32.(3)本发明的氧化脂质体能够在极短时间诱导肿瘤细胞发生铁死亡，以抑制肿瘤生长；同时简易的制备方法与稳定性能够实现大规模生产和储存。
附图说明
33.图1为氧化脂质体的透射(tem)图；
34.图2为不同组成的脂质体的粒径数据图；
35.图3为不同组成的脂质体在pbs的稳定性测试数据图；
36.图4为氧化脂质体处理后人纤维肉瘤肿瘤细胞(ht1080)的细胞透射图；
37.图5为不同组成的脂质体对人纤维肉瘤肿瘤(ht1080)细胞的活性影响图；
38.图6为不同组成的脂质体对人纤维肉瘤肿瘤(ht1080)细胞的脂质过氧化水平测试图；
39.图7为不同组成的脂质体对人纤维肉瘤肿瘤(ht1080)细胞的活性氧水平测试图；
40.图8为不同组成的脂质体对人纤维肉瘤肿瘤(ht1080)细胞slc7a11蛋白表达的影响图。
具体实施方式
41.下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
42.为了更好的理解本发明的技术方案，下面结合实施例进一步阐述本发明的内容，但本发明的内容并不仅仅局限于以下实施例。
43.下述实施例中的亚油酸结构式为ch3(ch2)4ch＝chch2ch＝ch(ch2)7cooh，cas号为60-33-3。
44.下述实施例中的亚甲蓝分子式为c
16h18
cln3s，cas号为122965-43-9。
45.若无特殊说明，本技术的试剂原料均可通过市购得到。
46.实施例1
47.(1)亚油酸氢过氧化物的合成
48.将1g亚油酸溶解在50ml氯仿中，然后加入100μl亚甲蓝溶液(100mm在甲醇中)并将整个反应体系通入稳定的氧气并保持稳定搅拌；随后用660nm激光照射8小时；得到的亚油酸氢过氧化物用色谱柱进行纯化。
49.(2)氧化脂质体的合成
50.a.将所用到的磷脂用氯仿配制成浓度为10mg/ml，放置在-20℃冰箱备用；
51.b.以二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)：二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)：二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)：胆固醇(ch)：二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-crgd(dspe-peg-crgd)＝40：30：10：20：3(摩尔比)在圆底烧瓶中充分混合(磷脂总质量为5mg)，并加入100μl的亚油酸氢过氧化物(20mg/ml)以及500μl的铁死亡促进剂柳氮磺吡啶(10mg/ml)，随后在旋转蒸发仪以37℃下旋转蒸发使氯仿挥发；
52.c.将圆底烧瓶避光于真空冷冻干燥机中冷冻干燥12h以除去有机溶剂；
53.d.加入1ml的无菌pbs溶液使脂质体溶解，随后在37℃下超声(功率为120w)5分钟使其分散；
54.e.使用膜挤出器(100nm)制备得到粒径均匀的脂质体，用lls表示。
55.实施例2
56.(1)亚油酸氢过氧化物的合成
57.将1g亚油酸溶解在50ml氯仿中，然后加入100μl亚甲蓝溶液(100mm在甲醇中)并将整个反应体系通入稳定的氧气并保持稳定搅拌；随后用660nm激光照射8小时；得到的亚油酸氢过氧化物用色谱柱进行纯化。
58.(2)氧化脂质体的合成
59.a.将所用到的磷脂用氯仿配制成浓度为10mg/ml，放置在-20℃冰箱备用；
60.b.以二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)：二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)：鞘磷脂：胆固醇(ch)：二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-crgd(dspe-peg-crgd)＝35：35：10：20：1(摩尔比)在圆底烧瓶中充分混合在圆底烧瓶中充分混合(磷脂总质量为10mg)，并加入200μl的亚油酸氢过氧化物(20mg/ml)以及1000μl的铁死亡促进剂柳氮磺吡啶(10mg/ml)，随后在旋转蒸发仪以37℃下旋转蒸发使氯仿挥发；
61.c.将圆底烧瓶避光于真空冷冻干燥机中冷冻干燥12h以除去有机溶剂；
62.d.加入1ml的无菌pbs溶液使脂质体溶解，随后在37℃下超声(功率为120w)5分钟使其分散；
63.e.使用膜挤出器(100nm)制备得到粒径均匀的脂质体。
64.实施例3
65.(1)亚油酸氢过氧化物的合成
66.将1g亚油酸溶解在50ml氯仿中，然后加入100μl亚甲蓝溶液(100mm在甲醇中)并将整个反应体系通入稳定的氧气并保持稳定搅拌；随后用660nm激光照射8小时；得到的亚油酸氢过氧化物用色谱柱进行纯化。
67.(2)氧化脂质体的合成
68.a.将所用到的磷脂用氯仿配制成浓度为10mg/ml，放置在-20℃冰箱备用；
69.b.以二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)：二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)：鞘磷脂：胆固醇(ch)：二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-crgd(dspe-peg-crgd)＝20：40：20：20：5(摩尔比)
在圆底烧瓶中充分混合(磷脂总质量为10mg)，并加入200μl的亚油酸氢过氧化物(20mg/ml)以及2000μl的铁死亡促进剂柳氮磺吡啶(10mg/ml)，随后在旋转蒸发仪以37℃下旋转蒸发使氯仿挥发；
70.c.将圆底烧瓶避光于真空冷冻干燥机中冷冻干燥12h以除去有机溶剂；
71.d.加入1ml的无菌pbs溶液使脂质体溶解，随后在37℃下超声(功率为120w)使其分散；
72.e.使用膜挤出器(100nm)制备得到粒径均匀的脂质体。
73.对比例1
74.(1)亚油酸氢过氧化物的合成
75.将1g亚油酸溶解在50ml氯仿中，然后加入100μl亚甲蓝溶液(100mm在甲醇中)并将整个反应体系通入稳定的氧气并保持稳定搅拌；随后用660nm激光照射8小时；得到的亚油酸氢过氧化物用色谱柱进行纯化。
76.(2)氧化脂质体的合成
77.a.将所用到的磷脂用氯仿配制成浓度为10mg/ml，放置在-20℃冰箱备用；
78.b.以二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)：二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)：二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)：胆固醇(ch)：二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-crgd(dspe-peg-crgd)＝40：30：10：20：3(摩尔比)在圆底烧瓶中充分混合(磷脂总质量为5mg)，并加入500μl的铁死亡促进剂柳氮磺吡啶(10mg/ml)，随后在旋转蒸发仪以37℃下旋转蒸发使氯仿挥发；
79.c.将圆底烧瓶避光于真空冷冻干燥机中冷冻干燥12h以除去有机溶剂；
80.d.加入1ml的无菌pbs溶液使脂质体溶解，随后在37℃下超声(功率为120w)5分钟使其分散；
81.e.使用膜挤出器(100nm)制备得到粒径均匀的脂质体，用ls表示。
82.对比例2
83.(1)亚油酸氢过氧化物的合成
84.将1g亚油酸溶解在50ml氯仿中，然后加入100μl亚甲蓝溶液(100mm在甲醇中)并将整个反应体系通入稳定的氧气并保持稳定搅拌；随后用660nm激光照射8小时；得到的亚油酸氢过氧化物用色谱柱进行纯化。
85.(2)氧化脂质体的合成
86.a.将所用到的磷脂用氯仿配制成浓度为10mg/ml，放置在-20℃冰箱备用；
87.b.以二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)：二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)：鞘磷脂：胆固醇(ch)：二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-crgd(dspe-peg-crgd)＝35：35：10：20：1(摩尔比)在圆底烧瓶中充分混合在圆底烧瓶中充分混合(磷脂总质量为10mg)，并加入200μl的亚油酸氢过氧化物(20mg/ml)，随后在旋转蒸发仪以37℃下旋转蒸发使氯仿挥发；
88.c.将圆底烧瓶避光于真空冷冻干燥机中冷冻干燥12h以除去有机溶剂；
89.d.加入1ml的无菌pbs溶液使脂质体溶解，随后在37℃下超声(功率为120w)5分钟使其分散；
90.e.使用膜挤出器(100nm)制备得到粒径均匀的脂质体，用ll表示。
91.效果实施例
92.使用对比例1和实施例1所制得的脂质体(浓度为5mg/ml)用于相关细胞实验测试。
93.(1)脂质体的形貌表征和稳定性评价
94.通过透射电子显微镜观察脂质体的形貌特征，结果如图1所示；用马尔文粒度仪测试脂质体的粒径已经进行稳定性评价，结果如图2和图3所示。从tem结果中可看出，脂质体呈类球形，而dls结果显示不同组成的脂质体粒径在80-90nm左右，在pbs中显示出较好的稳定性
95.(2)脂质体对细胞形态的影响
96.通过生物电子透射显微镜对氧化脂质体处理后的细胞进行表征。在10cm培养皿中种植ht1080细胞，待其密度至80％时，加入含有柳氮磺吡啶和亚油酸氢过氧化物的脂质体(lls)处理12h，随后用细胞刮刀直接刮下，用pbs润洗两次；随后用2.5％的戊二醛在4℃固定过夜；接着用pbs漂洗3遍，每次15min，接着用1％的锇酸固定2h，用pbs漂洗3遍，每次15min。随后用梯度浓度乙醇(30％、50％、70％、80％、90％、95％)对样品进行脱水处理，每个梯度15min，然后用100％的乙醇处理2次(每次20min)，接着用50/50和75/25(丙酮/乙醇)处理1次，纯丙酮处理2次，时间为20min。随后用树脂渗透包埋，经切片后用柠檬酸铅溶液和醋酸双氧铀50％乙醇饱和溶液染色10min，使用生物电子透射显微镜。结果如图4所示，可见线粒体明显变小，线粒体脊减少甚至消失、膜密度增加等铁死亡典型特征。
97.(3)细胞毒性测试
98.通过mtt试剂盒检测和分析脂质体对ht1080人纤维肉瘤细胞的毒性作用。ht1080细胞悬液接种在96孔细胞培养板中，每孔加入100μl密度为1
×
105个细胞/ml细胞悬液。在含5％二氧化碳、37℃的培养箱培养24h后，按实验分组加入含实施例1、对比例1、对比例2制备的脂质体的mem培养基，使柳氮磺吡啶和亚油酸氢过氧化物的终浓度分别为25μg/ml和10μg/ml，每组设4个复孔。与其同时，单纯的脂质体作为阴性对照，铁死亡诱导剂erastin作为阳性对照。随后将96孔板置于37℃5％co2细胞培养箱中孵育24h后，根据mtt试剂盒说明书操作步骤测定od570波长计算细胞存活率。脂质体对细胞活率影响如图5所示。结果显示含柳氮磺吡啶和亚油酸氢过氧化物的脂质体对ht1080细胞的毒性比单一的含柳氮磺吡啶的脂质体或者含亚油酸氢过氧化物的脂质体要高，且显示出较好的协同效果。
99.(3)脂质体的脂质过氧化性能测试
100.细胞脂质过氧化性能通过c11-bodipy 581/591脂质过氧化荧光探针用流式细胞仪进行表征。ht1080细胞悬液接种在12孔细胞培养板中，每孔加入1ml密度为5
×
105个细胞/ml细胞悬液。在含5％二氧化碳、37℃的培养箱培养24h后，按实验分组加入含柳氮磺吡啶、亚油酸氢过氧化物、亚油酸氢过氧化物和柳氮磺吡啶脂质体的mem培养基，使柳氮磺吡啶和亚油酸氢过氧化物的终浓度分别为25μg/ml和10μg/ml，每组设4个复孔。继续培养12h，按照试剂说明书操作步骤经c11-bodipy 581/591染色后用流式细胞仪对脂质过氧化性能进行分析。结果如图6所示，给予lls处理的细胞与对照组显示出更高脂质过氧化水平。
101.(4)活性氧含量测试
102.细胞活性氧含量通过dcfh-da荧光探针用流式细胞仪进行表征。ht1080细胞悬液接种在12孔细胞培养板中，每孔加入1ml密度为5
×
105个细胞/ml细胞悬液。在含5％二氧化碳、37℃的培养箱培养24h后，按实验分组加入含柳氮磺吡啶、亚油酸氢过氧化物、亚油酸氢过氧化物和柳氮磺吡啶脂质体的mem培养基，使柳氮磺吡啶和亚油酸氢过氧化物的终浓度分别为25μg/ml和10μg/ml，每组设4个复孔。继续培养12h；按照试剂说明书操作步骤经
dcfh-da探针染色后用流式细胞仪对脂质过氧化性能进行分析。结果如图7所示，给予lls处理的细胞与对照组显示出更高细胞内活性氧水平。
103.(5)slc7a11蛋白表达水平检测
104.通过western bolt检测ht1080细胞经不同脂质体处理后slc7a11蛋白的表达水平。ht1080细胞悬液接种在6孔细胞培养板中，每孔加入2ml密度为5
×
105个细胞/ml细胞悬液。在含5％二氧化碳、37℃的培养箱培养24h后，按实验分组加入含柳氮磺吡啶、亚油酸氢过氧化物、亚油酸氢过氧化物和柳氮磺吡啶脂质体的mem培养基，使柳氮磺吡啶和亚油酸氢过氧化物的终浓度分别为25μg/ml和10μg/ml，继续培养12h。按照western blot的操作步骤，依次进行电泳、转膜、封闭、孵育一抗、孵育二抗、显色操作。结果如图8所示，ls、ll和lls组均能降低slc7a11蛋白表达，而lls能够显著降低，表明system xc-被抑制。
105.上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受所述的实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
技术特征：1.一种用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：s1、将亚油酸和光敏剂分别溶解在有机溶剂中，混合后将整个反应体系通入稳定的氧气并保持稳定搅拌，随后用激光照射，得到亚油酸氢过氧化物；s2、将步骤s1制得的亚油酸氢过氧化物、磷脂及铁死亡诱导剂分散在有机溶剂中，通过薄膜分散法制得脂质体；s3、将步骤s2制得的脂质体通过膜挤出器挤出得到粒径均一的脂质体。2.根据权利要求1所述的用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体的制备方法，其特征在于：步骤s1中所述的光敏剂亚为亚甲蓝、卟吩姆钠或光克洛；步骤s2中所述的磷脂为油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇、鞘磷脂、卵磷脂中的任意两种或多种，与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-crgd或二油酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-crgd中的任意一种或多种的组合；步骤s2中所述的铁死亡诱导剂为索拉非尼、柳氮磺吡啶、他汀类药物或青蒿素。3.根据权利要求2所述的用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体的制备方法，其特征在于：步骤s2中所述的磷脂为二油酰基磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、胆固醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-crgd的组合按如下摩尔比混合所得的组合：20-40：15-30：10-30：10-30：1-5。4.根据权利要求1-3任一项所述的用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体的制备方法，其特征在于：步骤s1中所述的溶解亚油酸所用的有机溶剂为氯仿，有机溶剂的用量按亚油酸的浓度为15～25g/l计；步骤s1中所述的溶解光敏剂所用的有机溶剂为甲醇，有机溶剂的用量按光敏剂的浓度为80～120g/l计；步骤s1中所述的亚油酸的溶液和光敏剂的溶液的配比为体积比450～550:1；步骤s2中所述的亚油酸氢过氧化物、磷脂及铁死亡诱导剂的质量比为0.5-1.5：2.5：2-5。5.根据权利要求1-3任一项所述的用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体的制备方法，其特征在于：步骤s1中所述的溶解亚油酸所用的有机溶剂的用量按亚油酸的浓度为20g/l计；步骤s1中所述的溶解光敏剂所用的有机溶剂的用量按光敏剂的浓度为100g/l计；步骤s1中所述的亚油酸的溶液和光敏剂的溶液的配比为体积比500:1。6.根据权利要求1-3任一项所述的用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体的制备方法，其特征在于：步骤s1中所述的激光照射的条件为波长660nm、时间7～9小时；步骤s2中所述的薄膜分散法的具体步骤为：先旋转蒸发使有机溶剂挥发，然后于避光条件下真空冷冻干燥，加入无菌pbs，超声分散，即制得脂质体；
步骤s3中所述的挤出器的膜孔直径为100nm。7.根据权利要求6所述的用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体的制备方法，其特征在于：所述的旋转蒸发和超声分散于37℃下进行；所述的超声分散的条件为在37℃以120w功率超声5min。8.一种用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体，其特征在于：通过权利要求1-7任一项中所述的制备方法得到。9.权利要求8中所述的用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体在制备抗肿瘤药物中的应用。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的肿瘤为纤维肉瘤、黑色素瘤或结肠癌。
技术总结本发明公开了一种用于高效诱导肿瘤细胞发生铁死亡的氧化脂质体及其制备方法与应用，属于脂质体制备及肿瘤治疗领域。本发明的氧化脂质体包括磷脂、亚油酸氢过氧化物、铁死亡诱导剂。该氧化脂质体能够通过递送过亚油酸氢氧化物导致肿瘤细胞细胞膜过量的脂质过氧化物积累；同时包裹的铁死亡诱导物能够抑制铁死亡防御系统逆转细胞发生铁死亡，进而高效、不可逆地特异性诱导肿瘤细胞发生铁死亡抑制肿瘤生长。生长。生长。
技术研发人员：雷琪 朱伟 孔繁晖 何佩莹
受保护的技术使用者：华南理工大学
技术研发日：2022.07.01
技术公布日：2022/11/1
