破坏GAL3和胰岛素受体或整联蛋白的相互作用的抗体及其使用方法与流程

破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白的相互作用的抗体及其使用方法
相关申请的交叉引用
1.本技术要求2019年12月6日提交的美国临时专利申请号62/944,833的优先权的权益，其通过引用以其整体明确地并入本文。序列表的参考
2.本技术与电子格式的序列表一起提交。序列表以题目为seqlistingimmut006wo.txt的文件提供，该文件创建并且最后在2020年12月2日修改，大小为405,344字节。电子序列表中的信息通过引用以其整体并入本文。
技术领域
3.本公开的方面通常涉及阻断或破坏半乳凝素-3(gal3)和胰岛素受体(insr)或整联蛋白(itg)之间相互作用的抗体或其结合片段。本文进一步公开了用于治疗疾病或紊乱，比如(但不限于)糖尿病、炎症性肠综合征、非酒精性脂肪性肝病和非酒精性脂肪性肝炎(可以与insr和/或itg功能障碍相关)的方法和组合物。


背景技术：

4.半乳凝素-3(gal3，gal3)是凝集素或碳水化合物结合蛋白，对β-半乳糖苷具有特异性。在人细胞中，gal3在细胞核、细胞质、细胞表面中以及在细胞外空间中表达并且可以找到。gal3识别并且与各种蛋白质上的β-半乳糖缀合物相互作用。


技术实现要素：

5.本文公开了破坏半乳凝素-3(gal3)和a)胰岛素受体(insr)或b)整联蛋白或a)和b)二者之间相互作用的方法。在一些实施方式中，方法可包括使gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间相互作用与选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段接触。
6.本文还公开了治疗需要其的受试者的糖尿病的方法。在一些实施方式中，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的糖尿病。
7.本文还公开了治疗需要其的受试者的炎症性肠综合征的方法。在一些实施方式中，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和整联蛋白之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的炎症性肠综合征。
8.本文还公开了治疗需要其的受试者的非酒精性脂肪性肝病(nafld)的方法。在一些实施方式中，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的nafld。
9.本文还公开了治疗需要其的受试者的非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法。在一些实施方式中，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体之间相
互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的nash。
10.本文还公开了抗gal3抗体，其包括1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区；和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区，其中v
l-cdr1包括与根据seq id no:100-128的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
l-cdr2包括与根据seq id no:129-144的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
l-cdr3包括与根据seq id no:145-168的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
h-cdr1包括与根据seq id no:27-47的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
h-cdr2包括与根据seq id no:48-69的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，和v
h-cdr3包括与根据seq id no:70-99的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。
11.本文还公开了包括本文公开的任何一种或多种抗gal3抗体或其结合片段的药物组合物。这些药物组合物可用于治疗糖尿病、炎症性肠病、nafld或nash或其任何组合。
12.本文还公开了结合至人gal3并且与本文公开的任何一种抗gal3抗体或结合片段竞争结合人gal3的抗体。在一些实施方式中，结合至人gal3的抗体可与结合至gal3的某些肽的抗gal3抗体或其结合片段竞争。在一些实施方式中，结合至人gal3的抗体可与属于某些bin的抗gal3抗体或其结合片段竞争。在一些实施方式中，结合至人gal3的抗体可与6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、4g2.2g6、13h12.2f8、19b5.2e6、15g7.2a7、23h9.2e4、19d9.2e5、2d10.2b2、4a11.2b5、14h10.2c9、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8和15f10.2d6、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、f847.14h4(847.14h4)、mimt001、imt001(tb001)或imt006(tb006)竞争。
13.本文还公开了用于确认能够破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白之间相互作用的抗体的方法。在一些实施方式中，方法包括(a)使gal3蛋白质与选择性结合至gal3的抗体或其结合片段接触，从而形成gal3-抗体复合物；(b)使gal3-抗体复合物与胰岛素受体或整联蛋白或二者接触；(c)去除未结合的胰岛素受体或整联蛋白或二者；和(d)检测结合至gal3-抗体复合物的胰岛素受体或整联蛋白或二者。在一些实施方式中，当胰岛素受体或整联蛋白或二者在(d)中未检测到时，抗体或其结合片段能够破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者的相互作用。
14.本文还公开了产生抗gal3抗体或其结合片段的方法。在一些实施方式中，方法包括在细胞中表达编码抗gal3抗体或其结合片段的核酸，并且从细胞中分离表达的抗gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，方法可进一步包括浓缩抗gal3抗体或其结合片段至期望的浓度。在一些实施方式中，细胞是哺乳动物细胞、昆虫细胞或细菌细胞。在一些实施方式中，抗gal3抗体或结合片段是本文公开的任何一种抗gal3抗体或其结合片段。
附图说明
15.本公开的各个方面在所附权利要求中特别陈述。通过参考以下陈述其中利用了本
公开的原理的说明性实施方式的详细描述以及附图，将获得对本公开的特征和优点的更好理解，所述附图为：
16.图1证明了通过酶联免疫吸附测定(elisa)在10、3和1μg/ml测量的半乳凝素-3靶向的抗体阻断gal3和胰岛素受体(insr)的结合的能力。条表示平均值+/-标准偏差。
17.图2描绘了通过酶联免疫吸附测定(elisa)测量的有限系列的半乳凝素-3靶向的抗体阻断gal3和胰岛素受体(insr)结合的滴定。条表示平均值+/-标准偏差。
18.图3a描绘了示例性抗gal3抗体的性质的总结。
19.图3b描绘了通过抗体竞争鉴定gal3结合抗体bin。值表示抑制，如通过生物层干扰仪评估的。
20.图4证明了用正常饮食或用60％高脂肪饮食(hfd)喂食8周并且用同种型对照抗体huigg4或用gal3靶向的imt001-4(tb001)给药的小鼠体重增加的减少。左图描绘了平均绝对值，并且右图描绘了每只动物的平均百分比变化+/-标准误差。
21.图5描述了如图4中处理的小鼠的葡萄糖耐量(glucose tolerance)。左图描绘了葡萄糖推注后的血清平均葡萄糖水平；右图描绘了来自如左图所示的数据的平均曲线下面积(auc)+/1标准误差。
22.图6描述了如图4中处理的小鼠的胰岛素抗性。左图描绘了胰岛素推注后的血清平均葡萄糖水平；右图描绘了来自如左图所示的数据的平均曲线上面积(aoc)+/1标准误差。
23.图7描绘了来自如图4中处理的小鼠的福尔马林固定的石蜡包埋的肝切片的苏木精和伊红染色。注意在用对照igg4处理的hfd喂食小鼠中存在脂肪变性的证据，而在用imt001-4(tb001)处理的小鼠中没有脂肪变性的证据。
24.图8描绘了如图4中处理的小鼠中的血清肝酶alt水平。条表示平均值+/-标准误差。
25.图9描绘了通过elisa测量的整联蛋白β-1(itgb1)对gal3的相对结合亲和力的评估。
26.图10描绘了通过elisa测量的在被抗gal3抗体阻断后itgb1和gal3的相对结合亲和力的评估。
27.图11描绘了通过elisa测量的整联蛋白α-3(itga3)对gal3的相对结合亲和力的评估。
28.图12描绘了通过elisa测量的在被抗gal3抗体阻断后itga3和gal3的相对结合亲和力的评估。
29.图13描绘了通过elisa测量的整联蛋白β-3(itgb3)对gal3的相对结合亲和力的评估。
30.图14描绘了通过elisa测量的在被抗gal3抗体阻断后itgb3和gal3的相对结合亲和力的评估。
31.图15描绘了通过elisa测量的整联蛋白α-v(itgav)对gal3的相对结合亲和力的评估。
32.图16描绘了通过elisa测量的抗gal3抗体阻断后itgav和gal3的相对结合亲和力的评估。
33.图17描绘了在用抗gal3抗体或同种型对照处理后jurkat t细胞粘附的相对抑制
的评估。
34.图18描绘了bks-db或c57bl6/j对照小鼠中循环gal3的量。
35.图19描绘了用抗gal3抗体mtb001、pbs阴性对照或索马鲁肽(semaglutide)阳性对照处理的健康c57bl6/j小鼠和db/db小鼠的kaplan-meier曲线。
36.图20描绘了用mtb001或pbs处理的健康c57bl6/j小鼠或db/db小鼠的空腹血糖水平的变化。
37.图21描绘了与未处理的对照相比，用mtb001处理的nod/shiltj小鼠的平均存活率。
38.图22a描绘了与未处理的对照相比，用mtb001处理的nod/shiltj小鼠的空腹血糖水平的变化。
39.图22b描绘了与未处理的对照相比，用mtb001处理的nod/shiltj小鼠和正常对照小鼠的c肽的循环水平。
40.图23描绘了用于定量炎症性肠病(ibd)小鼠模型的炎性细胞因子的rt-qpcr的引物。
41.图24描绘了与正常小鼠相比，用mtb001或pbs处理的dss诱导的ibd小鼠中测量的结肠长度。
42.图25描绘了与正常小鼠相比，用mtb001(10mg/kg和1mg/kg)或pbs处理的dss诱导的ibd小鼠中循环ifn-γ的定量。
43.图26描绘了gal3、胰岛素受体(insr)、整联蛋白β-1(itgb1)、整联蛋白α-3(itga3)、整联蛋白β-3(itgb3)和整联蛋白α-v(itgav)的蛋白质序列。
44.图27描绘了用于产生和分析抗体的gal3的肽序列。
45.图28a描绘了本文公开的抗gal3抗体的示例性可变重链互补决定区(cdr)1。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种hcdr1。
46.图28b描绘了本文公开的抗gal3抗体的示例性可变重链cdr2。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种hcdr2。
47.图28c描绘了本文公开的抗gal3抗体的示例性可变重链cdr3。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种hcdr3。
48.图29a描绘了本文公开的抗gal3抗体的示例性可变轻链cdr1。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种lcdr1。
49.图29b描绘了本文公开的抗gal3抗体的示例性可变轻链cdr2。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种lcdr2。
50.图29c描绘了本文公开的抗gal3抗体的示例性可变轻链cdr3。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种lcdr3。
51.图30描绘了本文公开的抗gal3抗体的示例性重链可变区(vh)序列。在一些实施方
式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种vh序列。
52.图31描绘了本文公开的抗gal3抗体的示例性轻链可变区(vl)序列。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种vl序列。
53.图32描绘本文公开的抗gal3抗体的示例性重链(hc)序列。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种hc序列。
54.图33描绘了本文公开的抗gal3抗体的示例性轻链(lc)序列。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可以包括本文提供的一种或多种lc序列。
55.图34描绘本文公开的抗gal3抗体的可变重链cdr1、cdr2和cdr3的示例性组合。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种重链cdr组合。
56.图35描绘了本文公开的抗gal3抗体的可变轻链cdr1、cdr2和cdr3的示例性组合。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种轻链cdr组合。
57.图36描绘了本文公开的抗gal3抗体的重链和轻链cdr的示例性组合。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种重链和轻链cdr组合。
58.图37描绘了本文公开的抗gal3抗体的重链和轻链可变区的示例性组合。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种重链和轻链可变区组合。
59.图38描绘了本文公开的抗gal3抗体的重链和轻链的示例性组合。在一些实施方式中，本文提供的任何组合物或方法可包括本文提供的一种或多种重链和轻链组合。
60.图39描绘了抗gal3抗体的各种实施方式的vh cdr或vl cdr区的一些实施方式的比对。在一些实施方式中，本文提供的任何方法或组合物可使用本文提供的共有cdr的任何1、2、3、4、5、6或7个。
61.图40描绘了被发现结合至本文公开的示例性抗gal3抗体的肽(根据如本文讨论的图27中描绘的肽命名法)和这些示例性抗体的binning。
62.图41描绘了本文公开的示例性抗gal3抗体的gal3结合的kd(m)值。本公开的详细描述
63.糖尿病是一组代谢疾病，其特征在于很长一段时间的高血糖水平。有三种主要类型的糖尿病：i型糖尿病、ii型糖尿病和妊娠糖尿病。i型糖尿病是由于产生胰岛素的β细胞丢失，胰腺无法产生足够的胰岛素所致。ii型糖尿病特征在于胰岛素抗性，可能是由于多种生活方式、饮食和遗传因素，包括肥胖、饮食不良和压力。当没有既往糖尿病病史的孕妇出现高血糖水平时，会发生妊娠糖尿病。
64.炎症性肠病(ibd)是涵盖小肠和结肠的炎性紊乱的通用医学术语。两种最普遍的ibd是克罗恩氏病和溃疡性结肠炎，它们具有不同的表现和潜在的治疗。虽然ibd的原因尚不清楚，但怀疑它们包括微生物群的活性和饮食。症状与胃肠道器官的异常免疫活动和炎症相关。一些治疗包括免疫抑制剂(例如美沙拉嗪、皮质类固醇)或抗生素来抑制微生物群中的某些细菌，但只有用手术才能持久缓解。对ibd的有效治疗有持久的需求。
65.肝脂肪变性，有时也称为脂肪性肝病，是通常特征在于肝细胞中脂质异常滞留的病症。肝脂肪变性影响着全世界数百万人。例如，已经全球各个国家中评估脂肪性肝病的患
病率(prevalence)在10-24％的范围。脂肪性肝病可能有各种原因。例如，非酒精性脂肪性肝病(nafld)通常是指一系列特征在于肝脂肪变性的肝脂质紊乱，没有已知的继发性原因。nafld可细分为(a)非酒精性脂肪肝(nafl)，定义为在没有肝细胞损伤的组织学证据的情况下存在脂肪变性，和(b)非酒精性脂肪性肝炎(nash)，肝脂肪变性伴有肝细胞损伤和炎症；nash可能伴有或不伴有纤维化发生，但可能进展为纤维化和肝硬化。nafld通常与能量代谢病变，包括肥胖、血脂异常、糖尿病和代谢综合征有关。nafld的患病率很高。一般人群的患病率估计为20％，nash的患病率估计为3-5％。在患有肥胖或糖尿病的患者之中估计有～70％的nafld的患病率，并且在患有血脂异常的患者之中有～50％的nafld的患病率。然而，目前还没有批准用于治疗nafld/nash的药物。
66.半乳凝素-3(gal3)在细胞增殖、粘附、分化、血管生成和细胞凋亡中起重要作用。这种活性至少部分是由于免疫调节性质和对其他免疫调节蛋白、信号传导蛋白和其他细胞表面标志物的结合亲和力。gal3通过不同的n-末端和c-末端结构域发挥功能。n-末端结构域(同种型1：氨基酸1-111)包括串联重复结构域(trd，同种型1：氨基酸36-109)，并且主要负责gal3的寡聚化。c-末端结构域(同种型1：氨基酸112-250)包括碳水化合物识别结合结构域(crd)，其结合至β-半乳糖苷。
67.半乳凝素-3(gal3)在本文中牵涉具有免疫调节活性。这方面的示例是gal3和t-细胞免疫球蛋白和含有粘蛋白结构域-3(tim-3)之间的相互作用，其引起免疫应答比如t细胞活化的抑制，并且可能使癌细胞能够逃避免疫清除。抗gal3抗体和使用方法在wo 2019/023247和wo 2020/160156中进行了探索，其各自通过引用以其整体明确地并入本文。
68.此外，已显示gal3在肥胖人类中升高并且被认为在这些受试者中引起胰岛素抗性和葡萄糖不耐受。已显示gal3直接与胰岛素受体结合并且抑制下游信号传导。因此，gal3可能导致肥胖诱导的胰岛素抗性和慢性组织炎症。
69.在一些实施方式中，本文公开了用抗gal3抗体或其结合片段治疗患有、怀疑患有糖尿病、炎症性肠病、非酒精性脂肪性肝病和/或非酒精性脂肪性肝炎或处于发展为糖尿病、炎症性肠病、非酒精性脂肪性肝病和/或非酒精性脂肪性肝炎风险的受试者的方法。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段破坏gal3和胰岛素受体之间的相互作用。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段破坏gal3和整联蛋白之间的相互作用。另外提供了包括破坏gal3和胰岛素受体和/或gal3和整联蛋白之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段的组合物。
70.在一些实施方式中，本文提供了抗gal3抗体或其结合片段的各种实施方式。在一些实施方式中，各种抗gal3抗体或其结合片段可以阻断gal3和与gal3结合的其他分子之间的相互作用。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列(arrangement)可以用结合gal3的抗原结合分子取代。因此，本公开还设想了每次提及抗体或其结合片段时的抗原结合分子，但为简洁起见，本公开有时简单地称为抗体或其结合片段。
71.在一些实施方式中，本文公开的抗gal3抗体或结合片段破坏gal3和胰岛素受体(insr)之间的相互作用。强烈地破坏(例如至少90％)gal3和insr之间的相互作用的一些示例性抗gal3抗体包括但不限于6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、4g2.2g6、13h12.2f8、19b5.2e6、15g7.2a7、23h9.2e4、19d9.2e5、2d10.2b2、4a11.2b5、14h10.2c9、3b11.2g2和
13a12.2e5。适度地破坏(例如至少75％)gal3和insr之间的相互作用的一些示例性抗体包括但不限于7d8.2d8和15f10.2d6。最小限度地破坏(例如30％或更少)gal3和insr之间的相互作用的一些示例性抗体包括但不限于9h2.2h1、12g5.d7、13g4.2f8和24d12.2h9。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。注意，术语“抗原结合分子”涵盖抗体及其结合片段，并且表示更广泛的选择。
72.在一些实施方式中，本文公开的抗gal3抗体或结合片段破坏gal3和整联蛋白β-1(itgbl)之间的相互作用。强烈地破坏(例如至少90％)gal3和itgb1之间的相互作用的一些示例性抗gal3抗体包括但不限于tb001、tb006和846.1f5。适度地破坏(例如在40％至60％之间)gal3和itgb1之间的相互作用的一些示例性抗gal3抗体包括但不限于3b11、2d10、7d8、13a12、14h10、15f10、20d11、846.2h3、846t.14a2、847.10b9、847.12f12和847.26f5。不破坏gal3和itgb1之间相互作用的一些示例性抗gal3抗体包括但不限于6b3.2d3和847.14h4。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
73.在一些实施方式中，本文公开的抗gal3抗体或结合片段破坏gal3和整联蛋白α-3(itga3)之间的相互作用。强烈地破坏(例如至少90％)gal3和itga3之间的相互作用的一些示例性抗gal3抗体包括但不限于tb001、tb006、2d10、3b11、7d8、13a12、14h10、15f10、19b5、20d11.2c6、20h5、23h9、846.1b2、846.1f5、846.1h5、846.1h12、846.2h3、846t.14a2、846t.14e4、846t.16b5、847.4b10、847.10b9、84712f12和847.26f5。弱地破坏(小于35％)gal3和itga3之间的相互作用的一些示例性抗gal3抗体包括但不限于6b3.2d3、9h2.2h10、12g5.d7、13g4.2f8、847.14h4和847.11b1。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
74.在一些实施方式中，本文公开的抗gal3抗体或结合片段破坏gal3和整联蛋白β-3(itgb3)之间的相互作用。强烈地破坏(例如至少90％)gal3和itgb3之间的相互作用的一些示例性抗gal3抗体包括但不限于tb001、tb006、2d10、3b11.2g2、13a12.2e5、14h10.2c9、19b5、20d11.2c6、20h5.a3、23h9.2e4、846.1b2、846.1f5、846.1h12、846.2h3、846t.14a2、846t.14e4、846t.16b5、847.10b9、847.12f12和847.26f5。。弱地破坏(小于10％)gal3和itgb3之间的相互作用的一些示例性抗gal3抗体包括但不限于6b3.2d3、9h2.2h10、12g5.d7、13g4.2f8、847.11b1和847.14h4。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
75.在一些实施方式中，本文公开的抗gal3抗体或结合片段破坏gal3和整联蛋白α-v(itgav)之间的相互作用。强烈地破坏(例如至少90％)gal3和itgav之间的相互作用的一些示例性抗gal3抗体包括但不限于tb001、tb006、2d10、3b11.2g2、14h10.2c9、19b5、20d11.2c6、20h5.a3、23h9.2e4、846.1b2、846.1f5、846.2h3、846t.14a2、846t.16b5、847.10b9、847.12f12、847.26f5和849.8d10。弱地破坏(小于30％)gal3和itga之间的相互作用的一些示例性抗gal3抗体包括但不限于6b3.2d3、9h2.2h10、12g5.d7、13g4.2f8、847.11b1和847.14h4。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任
何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
76.在一些实施方式中，施用本文公开的任何一种抗gal3抗体或其结合片段可以减少受试者的体重增加、胰岛素抗性、肝脂肪变性或肝功能障碍或其任何组合。
77.在一些实施方式中，破坏gal3和整联蛋白之间的相互作用降低淋巴细胞粘附。在一些实施方式中，施用本文公开的任何一种抗gal3抗体或结合片段减轻受试者的炎症。
78.在一些实施方式中，施用本文公开的任何一种抗gal3抗体或其结合片段可减少空腹血糖水平的变化或恢复c-肽水平或二者，并且可用作i型糖尿病和/或ii型糖尿病的治疗。
79.在一些实施方式中，施用本文公开的任何一种抗gal3抗体或其结合片段可以实现恢复炎症诱导的结肠长度减少或减少循环炎症性细胞因子中的至少一种，如果不是二者的话。定义
80.在以下详细的描述中，参考了构成其一部分的附图。在附图中，除非上下文另有说明，否则相似的符号通常确定相似的组分。在详细描述、附图和权利要求中描述的阐释性实施方式并不意味着是限制性的。在不脱离本文提出的主题的精神或范围的情况下，可以利用其他实施方式，并且可以做出其他改变。将容易理解，本公开的方面，如本文一般描述的和在附图中阐释的，可以以各种不同配置进行排列、代替、组合、分离和设计，所有这些都被本文明确地预期。
81.除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与要求保护的主题所属领域的技术人员通常理解的相同的含义。应当理解，前述一般描述和下述详细描述仅是示例性和解释性的，而不是对要求保护的任何主题的限制。
82.本文使用的章节标题仅用于组织目的，不应被解释为限制所描述的主题。
83.在本技术中，使用的单数包括复数，除非另有明确地陈述。必须注意，如在说明书和所附权利要求中使用的，单数形式“一/一种”(“a”)、“一/一种”(“an”)和“所述”(“the”)包括包括复数指示物，除非上下文另有清楚地说明。在本技术中，除非另有陈述，否则使用的“或”意味着“和/或”。此外，使用的术语“包括/包含/含有”不是限制性的。
[0084]“约”意思是提及质量、水平、值、数量、频率、百分数、尺寸、大小、量、重量或长度的变化30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1％一样多的质量、水平、值、数量、频率、百分数、尺寸、大小、量、重量或长度。
[0085]
在整个本说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包括”、“包含”和“含有”将被理解为暗示包括所陈述的步骤或元素或步骤或元素的组，但不排除任何其他步骤或元素或步骤或元素的组。“由
……
组成”意味着包括并限于跟随短语“由
……
组成”的任何内容。因此，短语“由
……
组成”指示列出的元素是必需的或强制性的，并且可不存在其他元素。“基本上由
……
组成”意味着包括伴随短语列出的任何元素，并且限于不干扰或有助于列出的元素的公开中指定的活性或动作的其他元素。因此，短语“基本上由
……
组成”指示列出的元素是必需的或强制性的，但其他要素是可替选的，并且取决于它们是否实质性影响列出的元素的活性或动作可能存在或不存在。
[0086]
如本文使用的，术语“个体”、“受试者”和“患者”意味着任何哺乳动物。在一些实施方式中，哺乳动物是人。在一些实施方式中，哺乳动物是非人的。这些术语均不要求或仅限
于特征在于卫生保健工作者(例如医生、注册护士、执业护士、医师助理、医护人员或临终关怀工作者)的监督(例如持续或间歇性)的状况。
[0087]
本文互换地使用术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是线性的、环状的或支化的，它可以包括修饰的氨基酸，并且它可以被非氨基酸中断。术语还涵盖已经被修饰的氨基酸聚合物，例如，经硫酸化、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化、碘化、甲基化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋化、硒化(selenoylation)、转移-rna介导的添加氨基酸为蛋白质，比如精氨酸化、泛素化或任何其他操作，比如与标记组分缀合。
[0088]
如本文使用的术语“氨基酸”是指天然和/或非天然或合成氨基酸，包括甘氨酸和d或l光学异构体二者，以及氨基酸类似物和肽模拟物。
[0089]“源自”指定蛋白质的多肽或氨基酸序列是指多肽的来源。优选地，多肽具有与在序列中编码的多肽的氨基酸序列基本上相同的氨基酸序列或其部分，其中该部分由至少10-20个氨基酸、或至少20-30个氨基酸、或至少30-50个氨基酸组成，或可与序列中编码的多肽免疫地鉴定。该术语还包括从指定的核酸序列表达的多肽。
[0090]
如本文使用的，术语“抗体”表示本领域技术人员认为其含有的含义，并且进一步其旨在包括具有适合并且识别表位的特定形状的任何含多肽链的分子结构，其中一种或多种非共价结合相互作用稳定分子结构和表位之间的复合。抗体可以是多克隆抗体，尽管单克隆抗体是优选的，因为它们可以通过细胞培养或重组来复制并且可以被修饰以降低它们的抗原性。
[0091]
除了完整的免疫球蛋白(或其重组对应物)，包括表位结合位点的免疫球蛋白片段或“结合片段”(例如，fab'、f(ab')2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdab)或其他片段)可用作本发明中的抗体部分。这种抗体片段可通过蓖麻蛋白、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或其他蛋白酶裂解从整个免疫球蛋白产生。可以利用重组免疫球蛋白技术设计最小免疫球蛋白。例如，用于本发明的“fv”免疫球蛋白可以通过经肽连接体(例如，聚甘氨酸或不形成α螺旋或β片状基序的另一序列)将可变轻链区连接至可变重链区来产生。纳米抗体或单域抗体还可源自可替选的生物体，比如单峰驼、骆驼、美洲驼、羊驼或鲨鱼。在一些实施方式中，抗体可以是缀合物，例如聚乙二醇化抗体、药物、放射性同位素或毒素缀合物。针对特定表位或表位组合的单克隆抗体将允许靶向和/或消耗表达标志物的细胞群体。可以利用各种技术使用单克隆抗体来筛选表达标志物的细胞群体，并且包括使用抗体包被的磁珠进行磁分离、使用附着在固体基质(即，板)上的抗体“淘选”和流式细胞术(例如美国专利号5,985,660，本文通过参考以其整体明确地并入)。
[0092]
如本领域已知的，术语“fc区”用于定义免疫球蛋白重链的c-末端区。“fc区”可以是天然序列fc区或变体fc区。尽管免疫球蛋白重链fc区的边界可能不同，但人igg重链fc区通常定义为从位置cys226或从pro230处的氨基酸残基延伸至其羧基末端。fc区中残基的编号是如kabat中的eu索引编号。kabat等，sequences of proteins of immunological interest，第5版，public health service，national institutes of health，bethesda,md.，1991。免疫球蛋白的fc区通常包含两个恒定结构域，ch2和ch3。如本领域已知的，fc区可以以二聚体或单体形式存在。
[0093]
如本领域已知的，抗体的“恒定区”是指单独或组合的抗体轻链的恒定区或抗体重
链的恒定区。
[0094]
抗体的“可变区”是指单独或组合的抗体轻链可变区或抗体重链可变区。如本领域已知的，重链和轻链的可变区各自由通过三个也称为高变区的互补决定区(cdr)连接的四个框架区(fr)组成，并且有助于形成抗体的抗原结合位点。如果受试者可变区的变体是期望的，特别是具有cdr区外(即，在框架区中)的氨基酸残基中的置换，可以通过比较受试者可变区与含有与受试者可变区相同规范类别中的cdr1和cdr2序列的其他抗体的可变区来鉴定适当的氨基酸置换，优选保守氨基酸置换(chothia和lesk，j mol biol 196(4):901-917，1987)。
[0095]
在某些实施方式中，通过解析抗体的结构和/或解析抗体-配体复合物的结构来完成cdr的明确描绘和包括抗体结合位点的残基的鉴定。在某些实施方式中，这可以通过本领域技术人员已知的各种技术的任一种，比如x射线晶体学来完成。在某些实施方式中，可以采用各种分析方法来鉴定或模拟(approximate)cdr区。在某些实施方式中，可以采用各种分析方法来鉴定或模拟cdr区。这种方法的示例包括但不限于kabat定义、chothia定义、imgt方法(lefranc等，2003)dev comp immunol.27:55-77)、计算程序比如paratome(kunik等，2012，nucl acids res.w521-4)、abm定义和构象定义。
[0096]
kabat定义是抗体中编号残基的标准，并且通常用于鉴定cdr区。参见，例如，johnson&wu，2000，nucleic acids res.，28:214-8。chothia定义类似于kabat定义，但chothia定义考虑了某些结构环区域的位置。参见，例如，chothia等，1986，j.mol.biol.，196:901-17；chothia等，1989，nature，342:877-83。abm定义使用由模型抗体结构的oxford molecular group产生的一套集成的计算机程序。参见，例如，martin等，1989，proc natl acad sci(usa)，86:9268-9272；“abm.tm.,a computer program for modeling variable regions of antibodies”，oxford,uk；oxford molecular,ltd。abm定义使用知识数据库和ab initio方法的组合建模来自一级序列的抗体的三级结构，比如由samudrala等，1999，“ab initio protein structure prediction using a combined hierarchical approach”，proteins，structure,function and genetics suppl.，3:194-198中描述的那些。接触定义基于可用的复合物晶体结构的分析。参见，例如maccallum等，1996，j.mol.biol.，5:732-45。在另一方法中，本文称为cdr的“构象定义”，cdr的位置可以被鉴定为对抗原结合做出焓贡献的残基。参见，例如，makabe等，2008，journal of biological chemistry，283:1156-1166。还有其他cdr边界定义可能不严格遵循以上方法之一，但仍将与至少一部分kabat cdr重叠，尽管根据特定残基或残基组不会显著影响抗原结合的预测或实验发现，它们可被缩短或延长。如本文使用的，cdr可以指由本领域已知的任何方法，包括方法的组合定义的cdr。本文使用的方法可以利用根据这些方法中的任一种定义的cdr。对于含有多于一个cdr的任何给定的实施方式，cdr可以按照kabat、chothia、extended、imgt、paratome、abm和/或构象定义中的任一种，或任何前述的组合来定义。
[0097]
如本文使用的，关于抗体的术语“竞争”意思是第一抗体或其抗原结合部分，以与第二抗体或其抗原结合部分的足够相似的方式结合表位，使得与在第二抗体不存在的情况下第一抗体的结合相比，在第二抗体存在的情况下第一抗体与其同源表位的结合结果可检测地减少。其中第二抗体与其表位的结合在第一抗体存在的情况下也可检测地减少的替代方案可以但不一定是这种情况。即，第一抗体可以抑制第二抗体与其表位的结合，而第二抗
体不抑制第一抗体与其相应表位的结合。然而，每种抗体可检测地抑制另一抗体与其同源表位或配体的结合的情况，无论是在相同、更大还是更小程度上，抗体被称为彼此“交叉竞争”，用于结合它们各自的表位。本发明涵盖竞争和交叉竞争抗体。无论这种竞争或交叉竞争发生的机制(例如，位阻、构象变化或结合至共同表位或其部分)如何，基于本文提供的教导，技术人员将认识到，涵盖这种竞争和交叉竞争抗体并且可以用于本文公开的方法。
[0098]“优先地结合”或“特异性结合”(本文可互换地使用的)至表位的抗体是本领域理解很好的术语，并且确定这种特异性或优先结合的方法也是本领域熟知的。如果与分子与可选细胞或物质相比，分子与特定细胞或物质反应或缔合更频繁和/或更迅速地，和/或具有更长的持续时间和/或更大的亲和力，则称该分子展现出“特异性结合”或“优先地结合”。如果与抗体结合至其他物质比，抗体结合具有更大亲和力和/或亲合力(avidity)，和/或更容易地，和/或具有更长的持续时间，则抗体“特异性结合”或“优先地结合”至靶。例如，特异或优先结合至cfd表位的抗体是与抗体结合至其他cfd表位或非cfd表位比，具有更大亲和力和/或亲合力，和/或更容易地，和/或具有更长的持续时间结合该表位的抗体。通过阅读该定义还可以理解，例如，特异或优先结合至第一靶的抗体(或部分或表位)可以或不可以特异或优先的合第二靶。因此，“特异结合”或“优先结合”不一定需要(尽管它可以包括)排他结合。通常，但不一定，提及结合意味着优先结合。
[0099]
如本文使用的，术语“抗原结合分子”是指这样的分子，其包括结合至抗原的抗原结合部分，和任选地包括允许抗原结合部分采用促进抗原结合部分结合或为抗原结合分子提供一些另外的性质的构象的支架或框架部分。在一些实施方式中，抗原是gal3。在一些实施方式中，抗原结合部分包括来自结合至抗原的抗体的至少一个cdr。在一些实施方式中，抗原结合部分包括来自结合至抗原的抗体重链或来自结合至抗原的抗体轻链的所有三个cdr。在一些实施方式中，抗原结合部分包括来自结合至抗原的抗体的所有六个cdr(三个来自重链，和三个来自轻链)。在一些实施方式中，抗原结合部分是抗体片段。
[0100]
抗原结合分子的非限制性示例包括抗体、抗体片段(例如，抗体的抗原结合片段)、抗体衍生物和抗体类似物。其他具体示例包括但不限于单链可变片段(scfv)、纳米抗体(例如骆驼重链抗体的vh结构域；vhh片段，参见cortez-retamozo等，cancer research，第64卷:2853-57,2004)、fab片段、fab'片段、f(ab')2片段、fv片段、fd片段和互补决定区(cdr)片段。这些分子可以源自任何哺乳动物来源，比如人、小鼠、大鼠、兔、猪、狗、猫、马、驴、豚鼠、山羊或骆驼。抗体片段可以与完整的抗体竞争结合靶抗原，并且片段可以通过完整的抗体的修饰(例如酶促或化学切割)产生或使用重组dna技术或肽合成从头合成。抗原结合分子可以包括例如具有移植的cdr或cdr衍生物的可替选的蛋白质支架或人工支架。这种支架包括但不限于包括引入以例如稳定抗原结合分子的三维结构的突变的抗体衍生支架，以及包括例如生物相容聚合物的全合成支架。参见，例如，korndorfer等，2003，proteins:structure,function,and bioinformatics，第53卷，出版1:121-129(2003)；roque等，biotechnol.prog.20:639-654(2004)。另外，可以使用肽抗体模拟物(“pam”)，以及基于利用纤连蛋白组分作为支架的抗体模拟物的支架。
[0101]
抗原结合分子还可以包括包含一个或多个抗体片段的蛋白质，所述抗体片段并入至单个多肽链或多个多肽链中。例如，抗原结合分子可以包括但不限于双抗体(参见，例如，ep 404,097；wo 93/11161和hollinger等，proc.natl.acad.sci.usa，第90卷：6444-6448，
1993)；胞内抗体；结构域抗体(单个vl或vh结构域或通过肽连接体连接的两个或多个vh结构域；参见ward等，nature，第341卷：544-546，1989)；大抗体(maxibody)(融合至fc区的2个scfv，参见fredericks等，protein engineering,design&selection，第17卷：95-106，2004和powers等，journal of immunological methods，第251卷：123-135，2001)；三抗(triabody)；四抗tetrabody)；微抗体(融合至ch3结构域的scfv；参见olafsen等，protein eng des sel.，第17卷：315-23，2004)；肽体(peptibody)(一个或多个附着至fc区的肽，参见wo 00/24782)；线性抗体(一对串联的fd片段(vh-ch1-vh-ch1)，它与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区，参见zapata等，protein eng.，第8卷：1057-1062，1995)；小型模块化免疫药物(参见美国专利公开号20030133939)；和免疫球蛋白融合蛋白(例如igg-scfv、igg-fab、2scfv-igg、4scfv-igg、vh-igg、igg-vh和fab-scfv-fc)。
[0102]
在某些实施方式中，抗原结合分子可具有例如免疫球蛋白的结构。“免疫球蛋白”是四聚体分子，每个四聚体包括两对相同的多肽链，每对具有一条“轻”链(约25kda)和一条“重”链(约50-70kda)。每条链的氨基末端部分包括主要负责抗原识别的约100至110个或更多个氨基酸的可变区。每条链的羧基末端部分限定了主要负责效应子功能的恒定区。
[0103]
适用于非人(例如啮齿动物或灵长类动物)抗体的术语“人源化”是杂交免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段，其含有源自非人免疫球蛋白的最少序列。
[0104]
如本文使用的，术语“治疗”(和本领域中很好理解的)意味着用于在受试者的病症中获得有益或期望的结果，包括临床结果的方法。有益的或期望的临床结果可包括但不限于减轻或改善一种或多种症状或病症、减轻疾病的程度、稳定(即，不恶化)疾病状态、预防疾病的传递或传播、延迟或减慢疾病进展、改善或减轻疾病状态、减轻疾病复发和缓解，无论是部分的还是全部的，无论是可检测的还是不可检测的。如本文使用的“治疗”还包括预防性治疗。治疗方法包括向受试者施用治疗有效量的活性剂。施用步骤可由单次施用组成或可包括一系列施用。将组合物以足以治疗受试者的量和持续时间施用至受试者。治疗周期的长度取决于多种因素，比如病症的严重程度、受试者的年龄和遗传特征、活性剂的浓度、治疗中使用的组合物的活性或其组合。还应当理解，用于治疗或预防的试剂的有效剂量可以在特定治疗或预防方案的过程中增加或减少。通过本领域已知的标准诊断测定可以导致剂量的变化并且变得显而易见。在一些情况中，可能需要长期施用。
[0105]
如本文使用的术语“有效量”或“有效剂量”具有依据说明书理解的它们的简单和普通的含义，并且是指导致可观察到的指定效果的所述组合物或化合物的量。可以改变目前公开主题的活性组合物中活性成分的实际剂量水平，以施用有效实现具体受试者和/或应用的指定响应的活性组合物或化合物的量。选择的剂量水平可以基于多种因素而变化，包括但不限于组合物的活性、制剂、施用途径、与其他药物或治疗的组合、正治疗病症的严重程度以及身体状况和正治疗的受试者的既往病史。在一些实施方式中，施用最小剂量，并且在不存在剂量限制性毒性的情况下将剂量逐步增加至最小有效量。本文预期了有效剂量的确定和调整，以及评估何时以及如何进行这种调整。
[0106]
术语“施用”包括口服施用、局部接触、作为栓剂施用、静脉内、腹膜内、肌内、病灶内、鞘内、鼻内或皮下施用，或植入缓释装置，例如微型渗透泵至受试者。通过任何途径，包括肠胃外和经粘膜(例如，颊、舌下、腭、牙龈、鼻、阴道、直肠或经皮)施用。肠胃外施用包括例如，静脉内、肌内、小动脉内、皮内、皮下、腹膜内、心室内和颅内。其他递送方式包括但不
限于使用脂质体制剂、静脉内输注、透皮贴剂等。通过“共同施用”意思是在施用本文所述的第二化合物同时，刚好在其之前或刚好在其之后施用本文所述的第一化合物。
[0107]
如本文使用的，术语“治疗性靶”指在调节其活性后可以提供疾病表型的调节(例如，通过调节表达、生物活性等)的基因或基因产物。如通篇所使用的，“调节”意思是指所指现象的增加或减少(例如，生物活性的调节指生物活性的增加或生物活性的减少)。
[0108]
如本文使用的，术语“标准治疗(standard of care)”、“最佳实践”和“标准疗法”是指被医疗从业者接受为对某些疾病的合适的、适当的、有效的和/或广泛使用的治疗的治疗。某些疾病的标准治疗取决于许多不同的因素，包括治疗的生物效应、体内区域或位置、患者状态(例如年龄、体重、性别、遗传风险、其他残疾、继发性病症)、毒性、代谢、生物累积、治疗指数、剂量和本领域已知的其他因素。确定疾病的标准治疗还取决于在由管理机构比如美国食品和药物管理局、国际协调委员会、加拿大卫生部、欧洲药品管理局、治疗用品管理局、中央药品标准控制机构、国家药品监督管理局、药品和医疗器械管理局、食品药品安全部和世界卫生组织制定标准的临床试验中建立安全性和有效性。疾病的标准治疗可包括但不限于手术、放射、化学疗法、靶向疗法或免疫疗法。
[0109]
术语“％w/w”或“％wt/wt”意味着根据成分或试剂的重量占组合物总重乘以100表达的百分比。
[0110]
除非另有说明，本文公开的互补决定区域(complementarity defining region)遵循imgt定义。在一些实施方式中，本文公开的任何cdr反而可以被kabat、chothia或本领域技术人员接受的其他定义解释。
[0111]
应当理解，具有本文所述抗体名称的抗体可以使用抗体名称的缩写版本来指代，只要与本文所述的另一种抗体没有冲突即可。例如，2d10.2b2可称为2d10。这也可以指抗体的片段(例如，具有相同的1、3或6个cdr)。gal3结合剂
[0112]
本文公开的并且适用于本文公开的任何方法或用途的是抗gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至gal3的n-末端结构域、gal3的n-末端或gal3的串联重复结构域(trd)。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段不结合至gal3的n-末端、gal3的n-末端结构域或gal3的trd。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至gal3的c-末端、gal3的c-末端结构域或gal3的crd。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段不结合至gal3的c-末端、gal3的c-末端结构域或gal3的crd。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0113]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至seq id no:3-26的一个或多个肽。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至由肽1(adnfslhdalsgsgnpnpqg；seq id no:3)、肽4(gaggypgasypgaypgqapp；seq id no:6)、肽6(gaypgqappgaypgapgayp；seq id no:8)、肽7(aypgapgaypgapapgvypg；seq id no:9)或其组合限定的gal3的区域内存在的表位。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0114]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至包括gxypg的基序的gal3的表位，其中x是氨基酸丙氨酸(a)、甘氨酸(g)或缬氨酸(v)。在一些实施方式中，如本文所述
的抗gal3抗体结合至包括由三个氨基酸隔开的两个gxypg基序的gal3的表位，其中x是a、g或v。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0115]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括(1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区。在一些实施方式中，v
l-cdr1包括与根据seq id no:100-128的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
l-cdr2包括与根据seq id no:129-144的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
l-cdr3包括与根据seq id no:145-168的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
h-cdr1包括与根据seq id no:27-47的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
h-cdr2包括与根据seq id no:48-69的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
h-cdr3包括与根据seq id no:70-99的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0116]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其片段具有至少一个hcdr，例如，本文提供的hcdr1、hcdr2或hcdr3。
[0117]
在一些实施方式中，图28a中描绘了示例性v
h-cdr1序列。在一些实施方式中，图28b中描绘了示例性v
h-cdr2序列。在一些实施方式中，图28c中描绘了示例性v
h-cdr3序列。在一些实施方式中，图29a中描绘了示例性v
l-cdr1序列。在一些实施方式中，图29b中描绘了示例性v
l-cdr2序列。在一些实施方式中，图29c中描绘了示例性v
l-cdr3序列。
[0118]
在一些实施方式中，本文公开的任何抗gal3抗体或其结合片段的重链可变区包括与根据seq id no:169-206的任何序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本文公开的任何抗gal3抗体或其结合片段的重链可变区选自由seq id no:169-206组成的组。在一些实施方式中，图30中描绘了示例性vh。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0119]
在一些实施方式中，本文公开的任何抗gal3抗体或其结合片段的轻链可变区包括与根据seq id no:207-245的任何序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本文公开的任何抗gal3抗体或其结合片段的轻链可变区选自由seq id no:207-245组成的组。在一些实施方式中，图31中描绘了示例性v
l
。
[0120]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括：a)seq id no:169内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:207内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；b)seq id no:170内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:208内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
cdr2、v
h-cdr3和seq id no:232内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；aa)seq id no:194内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:233内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ab)seq id no:195内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:234内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ac)seq id no:196内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:235内v
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l-cdr3。在一些实施方式中，图34中描绘了重链可变区cdr的示例性组合。在一些实施方式中，图35中描绘了轻链可变区cdr的示例性组合。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0121]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括：a)seq id no:169的重链可变区和seq id no:207的轻链可变区；b)seq id no:170的重链可变区和seq id no:208的轻链可变区；c)seq id no:171的重链可变区和seq id no:209的轻链可变区；d)seq id no:172的重链可变区和seq id no:210的轻链可变区；e)seq id no:173的重链可变区和seq id no:211的轻链可变区；f)seq id no:174的重链可变区和seq id no:212的轻链可变区；g)seq id no:175的重链可变区和seq id no:213的轻链可变区；h)seq id no:176的重链可变区和seq id no:214的轻链可变区；i)seq id no:177的重链可变区和seq id no:215的轻链可变区；j)seq id no:178的重链可变区和seq id no:216的轻链可变区；k)seq id no:179的重链可变区和seq id no:217的轻链可变区；l)seq id no:180的重链可变区和seq id no:218的轻链可变区；m)seq id no:181的重链可变区和seq id no:219的轻链可变区；n)seq id no:181的重链可变区和seq id no:220的轻链可变区；o)seq id no:182的
重链可变区和seq id no:221的轻链可变区；p)seq id no:183的重链可变区和seq id no:222的轻链可变区；q)seq id no:184的重链可变区和seq id no:223的轻链可变区；r)seq id no:185的重链可变区和seq id no:224的轻链可变区；s)seq id no:186的重链可变区和seq id no:225的轻链可变区；t)seq id no:187的重链可变区和seq id no:226的轻链可变区；u)seq id no:188的重链可变区和seq id no:227的轻链可变区；v)seq id no:189的重链可变区和seq id no:228的轻链可变区；w)seq id no:190的重链可变区和seq id no:229的轻链可变区；x)seq id no:191的重链可变区和seq id no:230的轻链可变区；y)seq id no:192的重链可变区和seq id no:231的轻链可变区；z)seq id no:193的重链可变区和seq id no:232的轻链可变区；aa)seq id no:194的重链可变区和seq id no:233的轻链可变区；ab)seq id no:195的重链可变区和seq id no:234的轻链可变区；ac)seq id no:196的重链可变区和seq id no:235的轻链可变区；ad)seq id no:197的重链可变区和seq id no:236的轻链可变区；ae)seq id no:198的重链可变区和seq id no:237的轻链可变区；af)seq id no:199的重链可变区和seq id no:238的轻链可变区；ag)seq id no:197的重链可变区和seq id no:239的轻链可变区；ah)seq id no:200的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；ai)seq id no:201的重链可变区和seq id no:241的轻链可变区；aj)seq id no:202的重链可变区和seq id no:242的轻链可变区；ak)seq id no:203的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；al)seq id no:204的重链可变区和seq id no:243的轻链可变区；am)seq id no:205的重链可变区和seq id no:244的轻链可变区或an)seq id no:206的重链可变区和seq id no:245的轻链可变区。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0122]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括seq id no:246-286中的任何一个的重链(hc)序列。在一些实施方式中，图32中描绘了示例性hc序列。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0123]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括seq id no:287-324中的任何一个的轻链(lc)序列。在一些实施方式中，图33描绘了示例性hc序列。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0124]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段选自由下述组成的组中：13h12.2f8、19d9.2e5、14h10.2c9、2d10.2b2、4a11.2b5、6h6.2d6、20h5.a3、19b5.2e6、23h9.2e4、20d11.2c6、15g7.2a7、4g2.2g6、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、15f10.2d6、12g5.d7、24d12.2h9、13g4.2f8、9h2.2h1、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、f847.14h4(847.14h4)、mimt001、imt-001(tb0001)和imt-006(tb006)或其结合片段。在一些实施方式中，图36描绘了与每个前述抗体相关的重链和轻链cdr。在一些实施方式中，图37描绘了与每个前述抗体相关的vh和v
l
。在一些实施方式中，图38描绘了与每个前述抗体相关的hc和lc。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体
或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0125]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至gal3蛋白质内的特异性表位。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至具有根据图26中提供的seq id no:1的氨基酸序列的gal3蛋白质内的特异性表位。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0126]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段可结合至图27中阐释的肽内的至少1、2、3、4、5、6、10、15或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段可结合至seq id no:1的氨基酸残基1-20内的至少1、2、3、4、5、6、10、15或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段可结合至seq id no:1的氨基酸残基31-50内的至少1、2、3、4、5、6、10、15或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段可结合至seq id no:1的氨基酸残基51-70内的至少1、2、3、4、5、6、10、15或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段可结合至seq id no:1的氨基酸残基61-80内的至少1、2、3、4、5、6、10、15或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0127]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段可结合至肽1(seq id no:3)、肽2(seq id no:4)、肽3(seq id no:5)、肽4(seq id no:6)、肽5(seq id no:7)、肽6(seq id no:8)、肽7(seq id no:9)、肽8(seq id no:10)或肽17(seq id no:19)或其任何组合内至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，抗gal3或其结合片段可结合至肽6(seq id no:8)内至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸残基。在一些实施方式中，本文提供的任何抗gal3抗体或其结合片段或任何抗gal3抗体或结合片段的任何排列可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0128]
结合至肽1(seq id no:3)的一些示例性抗体是6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、19b5.2e6、15g7.2a7、23h9.2e4、f846c.1h5、f846tc.14a2、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.12f12、f847c.26f5和f847c.4b10。
[0129]
结合至肽2(seq id no:4)的一些示例性抗体是15f10.2d6、7d8.2d8、f846tc.14e4、f849c.8d10和f849c.8h3。
[0130]
结合至肽3(seq id no:5)的一些示例性抗体是15f10.2d6、7d8.2d8和f849c.8d10。
[0131]
结合至肽4(seq id no:6)的一些示例性抗体是4g2.2g6、3b11.2g2、13a12.2e5和15f10.2d6。
[0132]
结合至肽5(seq id no:7)的一些示例性抗体是imt001(tb001)、f846c.1b2和f846c.1h12。
[0133]
结合至肽6(seq id no:8)的一些示例性抗体是imt001(tb001)、imt006(tb006)、13h12.2f8、19d9.2e5、2d10.2b2、4a11.2b5、3b11.2d2、13a12.2e5、14h10.2c9、23h9.2e4、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h12、f846c.2h3和f846tc.16b5。
[0134]
结合至肽7(seq id no:9)的一些示例性抗体是6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、13h12.2f8、19b5.2e6、23h9.2e4、15g7.2a7、19d9.2e5、14h10.2c9、7d8.2d8、15f10.2d6、14h10.2c9、f846c.1b2、f846tc.14a2、f847c.10b9、f847c.12f12和f847c.26f5。
[0135]
结合至肽8(seq id no:10)的一些示例性抗体是23h9.2e4和f846tc.14a2。
[0136]
结合至肽17(seq id no:19)的一些示例性抗体是7d8.2d8、f846c.1f5、f846c.1h12、f846tc.16b5、f847c.11b1和f849c.8h3。
[0137]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是表位binned。示例性binning工艺在实施例3和18中描述。在一些实施方式中，抗体tb001被分类为bin 1。在一些实施方式中，抗体19d9.2e5被分类为bin 2。在一些实施方式中，抗体tb006、4a11.2b5、23b10.2b12、19b5.2e6、20h5.a3、23h9.2e4和2d10.2b2被分类为bin 3。在一些实施方式中，抗体6h6.2d6被分类为bin 4。在一些实施方式中，抗体15g7.2a7，20d11.2c6被分类为bin 5。在一些实施方式中，抗体4g2.2g6被分类为bin 6。在一些实施方式中，抗体13a12.2e5和3b11.2g2被分类为bin 7。在一些实施方式中，抗体14h10.2c9、15f10.2d6、7d8.2d8、f846tc.14e4、f846tc.7f10和f849c.8d10被分类为bin 8。在一些实施方式中，抗体6f7.c4被分类为bin9。在一些实施方式中，抗体12g5.d7被分类为bin 10。在一些实施方式中，抗体6b3.2d3被分类为bin 11。在一些实施方式中，抗体9h2.2h10和13g4.2f8被分类为bin 12。在一些实施方式中，抗体f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.2h3和f846tc.16b5被分类为bin 17。在一些实施方式中，抗体f847c.10b9、f847c.12f12和f847c.26f5被分类为bin 49。
[0138]
本文在一些实施方式中还公开了结合至人gal3并且与抗gal3抗体或其结合片段竞争结合至人gal3的抗体。在一些实施方式中，与之竞争的抗gal3抗体或其结合片段是本文公开的任何一种抗gal3抗体。在一些实施方式中，与之竞争的抗gal3抗体或其结合片段结合至肽1(seq id no:3)、肽2(seq id no:4)、肽3(seq id no:5)、肽4(seq id no:6)、肽5(seq id no:7)、肽6(seq id no:8)、肽7(seq id no:9)、肽8(seq id no:10)、肽17(seq id no:19)或其任何组合。在一些实施方式中，与之竞争的抗gal3抗体或其结合片段属于bin 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、17或49。在一些实施方式中，与之竞争的抗gal3抗体或其结合片段选自由下述组成的组中：6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、4g2.2g6、13h12.2f8、19b5.2e6、15g7.2a7、23h9.2e4、19d9.2e5、2d10.2b2、4a11.2b5、14h10.2c9、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、和15f10.2d6、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、847.14h4、mimt001、imt001(tb001)和imt006(tb006)或其结合片段。在一些实施方式中，结合至人gal3并且与抗gal3抗体竞争的抗体可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。在一些实施方式中，与之竞争的抗gal3抗体或其结合片段可以用结合至gal3的抗原结合分子取代。
[0139]
在一些情况下，抗gal3抗体或其结合片段包括人源化抗体或其结合片段。在其他情况下，抗gal3抗体或其结合片段包括嵌合抗体或其结合片段。在一些情况下，抗gal3抗体包括全长抗体或其结合片段。在一些情况下，抗gal3抗体或其结合片段包括双特异性抗体或其结合片段。在一些情况下，抗gal3抗体或其结合片段包括单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdab)或骆驼抗体或其结合片段。
[0140]
在一些情况下，抗gal3抗体或其结合片段是双特异性抗体或其结合片段。示例性双特异性抗体形式包括但不限于杵-入-臼(knobs-into-holes)(kih)、不对称再工程化技术-免疫球蛋白(art-ig)、triomab quadroma、双特异性单克隆抗体(bimab、bsmab、bsab、bsmab、bs-mab或bi-mab)、azymetric、biclonics、fab-scfv-fc、二合一/双重作用fab(daf)、finomab、scfv-fc-(fab)-融合、对接-和-锁定(dnl)、串联双抗体(tandab)、双亲和力再靶向(dart)、纳米抗体、三体(triplebody)、串联scfv(tafv)、三头、串联dab/vhh、三重dab/vhh或四价dab/vhh。在一些情况下，抗gal3抗体或其结合片段是双特异性抗体或其结合片段，其包括brinkmann和kontermann,“the making of bispecific antibodies,”mabs 9(2):182-212(2017)中阐释的双特异性抗体形式。
[0141]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段可包括igm、igg(例如，iggl、igg2、igg3或igg4)、iga或ige框架。igg框架可以是igg1、igg2、igg3或igg4。在一些情况下，抗gal3抗体或其结合片段包含igg1框架。在一些情况下，抗gal3抗体或其结合片段包括igg2框架。在一些情况下，抗gal3抗体或其结合片段包括igg4框架。抗gal3抗体或其结合片段可进一步包括fc突变。
[0142]
在一些实施方式中，fc区包括调节fc受体相互作用，例如以增强效应子功能比如adcc和/或cdc的一个或多个突变。在这种情况下，当突变时调节效应子功能的示例性残基包括s239、k326、a330、i332或e333，其中残基位置对应于iggl并且残基编号是根据kabat编号(kabat等，1991sequences of proteins of immunological interest的eu索引)。在一些情况下，一个或多个突变包括s239d、k326w、a330l、i332e、e333a、e333s或其组合。在一些情况下，一个或多个突变包括s239d、i332e或其组合。在一些情况下，一个或多个突变包括s239d、a330l、i332e或其组合。在一些情况下，一个或多个突变包括k326w、e333s或其组合。在一些情况下，突变包括e333a。使用的方法
[0143]
本文在一些实施方式中公开了涉及结合至gal3并且破坏gal3和另一种蛋白质之间的相互作用的抗gal3抗体或其结合片段的方法。在一些实施方式中，这可以是gal3和其他蛋白质之间的相互作用区的直接阻碍，或间接改变，比如导致gal3构象变化的结合，使其不再与其他蛋白质结合或具有活性。在一些实施方式中，其还可以通过结合至gal3的第一部分而产生，其中抗体或其结合片段的一些其他部分阻碍或改变gal3和其他蛋白质之间的相互作用。在一些实施方式中，gal3的第一部分是gal3的n-末端结构域、gal3的串联重复结构域(trd)或gal3的c-末端结构域。在一些实施方式中，结合至gal3的抗体或其结合片段不结合至gal3的c-末端结构域。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0144]
本文公开了破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间的相互作用的方法。在一些实施方式中，方法包括使gal3上的相互作用位点或表面(其中gal3与a)胰岛素受体或b)整联蛋白或c)二者相互作用)与选择性结合至gal3和破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间的相互作用的抗gal3抗体或其结合片段接触。在一些实施方式中，gal3由一个细胞或多个细胞表达。在一些实施方式中，gal3由一个或多个细胞分泌。在一些实施方式中，胰岛素受体或整联蛋白或二者由一个细胞或多个细胞表达。在一些情况下，方法包括使表达gal3的多个细胞和表达胰岛素受体或整联蛋白或二者的多个细胞与本公开的抗体或
其结合片段接触。在一些情况下，方法包括使由多个细胞和多个表达胰岛素受体或整联蛋白或二者的细胞分泌的gal3与本公开的抗体或其结合片段接触。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至gal3的n-末端结构域。在一些实施方式中，相互作用降低至不存在抗gal3抗体或其结合片段的情况下的相互作用的小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％、小于50％、小于45％、小于40％、小于35％、小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于5％或小于1％。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是本文公开的任何一种抗gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0145]
本文在一些实施方式中还公开了诊断受试者的疾病或紊乱或其症状的方法。在一些实施方式中，疾病或紊乱是糖尿病。在一些实施方式中，疾病或紊乱是胰岛素依赖性糖尿病。在一些实施方式中，疾病或紊乱是胰岛素非依赖性糖尿病。在一些实施方式中，疾病或紊乱是i型糖尿病。在一些实施方式中，疾病或紊乱是ii型糖尿病。在一些实施方式中，疾病或紊乱是炎症性肠病。在一些实施方式中，疾病或紊乱是非酒精性脂肪性肝病。在一些实施方式中，疾病或紊乱是非酒精性脂肪性肝炎。在一些实施方式中，方法包括使受试者或受试者的一部分(例如组织、血液/血清)与抗gal3抗体或其结合片段接触。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段缀合至可检测部分。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0146]
在本文公开的任何方法的一些实施方式中，胰岛素受体包括seq id no:2的序列。在一些实施方式中，gal3-insr相互作用可降低至小于80％、小于75％、小于70％、小于60％、小于59％、小于50％、小于40％、小于34％、小于30％、小于20％、小于14％、小于10％、小于7％、小于5％、小于4％或小于1％。
[0147]
在一些情况下，抗gal3抗体以小于1nm、小于1.2nm、小于2nm、小于5nm、小于10nm、小于13.5nm、小于15nm、小于20nm、小于25nm或小于30nm的解离常数(kd)结合至gal3。在一些情况下，抗gal3抗体以小于1nm的kd结合至gal3。在一些情况下，抗gal3抗体以小于1.2nm的kd结合至gal3。在一些情况下，抗gal3抗体以小于2nm的kd结合至gal3。在一些情况下，抗gal3抗体以小于5nm的kd结合至gal3。在一些情况下，抗gal3抗体以小于10nm的kd结合至gal3。在一些情况下，抗gal3抗体以小于13.5nm的kd结合至gal3。在一些情况下，抗gal3抗体以小于15nm的kd结合至gal3。在一些情况下，抗gal3抗体以小于20nm的kd结合至gal3。在一些情况下，抗gal3抗体以小于25nm的kd结合至gal3。在一些情况下，抗gal3抗体以小于30nm的kd结合至gal3。图41提供了示例性抗gal3抗体的gal3结合的kd值。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0148]
在本文公开的任何方法的一些实施方式中，整联蛋白选自整联蛋白α-1(itga1)、整联蛋白α-2(itga2)、整联蛋白α-3(itga3)、整联蛋白α-4(itga4)、整联蛋白α-5(itga5)、整联蛋白α-6(itga6)、整联蛋白α-7(itga7)、整联蛋白α-8(itga8)、整联蛋白α-9(itga9)、整联蛋白α-10(itga10)、整联蛋白α-11(itga11)、整联蛋白α-d(itgad)、整联蛋白α-e(itgae)、整联蛋白α-l(itgal)、整联蛋白α-m(itgam)、整联蛋白α-v(itgav)、整联蛋白α-2b(itga2b)、整联蛋白α-2x(itga2x)、整联蛋白β-1(itgb1)、整联蛋白β-2(itgb2)、整联蛋白β-3(itgb3)、整联蛋白β-4(itgb4)、整联蛋白β-5(itgb5)、整联蛋白β-6(itgb6)、整联蛋白
β-7(itgb7)、整联蛋白β-8(itgb8)或其任何组合。在一些实施方式中，整联蛋白选自整联蛋白β-1、整联蛋白α-3、整联蛋白β-3或整联蛋白α-v或其任何组合。在一些实施方式中，整联蛋白包括seq id no:339-342的序列。在一些实施方式中，破坏gal3和整联蛋白之间的相互作用降低淋巴细胞粘附。在一些实施方式中，淋巴细胞粘附减少至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％或由任何两个上述百分比限定的范围内的任何百分比。
[0149]
如应用于本文公开的任何使用方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至seq id no:3-26的一个或多个肽。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至由肽1(adnfslhdalsgsgnpnpqg；seq id no:3)、肽4(gaggypgasypgaypgqapp；seq id no:6)、肽6(gaypgqappgaypgapgayp；seq id no:8)、肽7(aypgapgaypgapapgvypg；seq id no:9)或其组合限定的gal3的区域内存在的表位。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0150]
如应用于本文所公开的任何使用方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至包括gxypg基序的gal3的表位，其中x是氨基酸丙氨酸(a)、甘氨酸(g)或缬氨酸(v)。在一些实施方式中，如本文所述的抗gal3抗体结合至包括由三个氨基酸隔开的两个gxypg基序的gal3的表位，其中x是a、g或v。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0151]
如应用于本文公开的任何使用方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括(1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区。在一些实施方式中，v
l-cdr1包括与根据seq id no:100-128的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
l-cdr2包括与根据seq id no:129-144的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
l-cdr3包括与根据seq id no:145-168的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
h-cdr1包括与根据seq id no:27-47的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
h-cdr2包括与根据seq id no:48-69的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
h-cdr3包括与根据seq id no:70-99的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0152]
如应用于本文公开的任何使用方法，在一些实施方式中，图28a中描绘了示例性v
h-cdr1序列。在一些实施方式中，图28b中描绘了示例性v
h-cdr2序列。在一些实施方式中，图28c中描绘了示例性v
h-cdr3序列。在一些实施方式中，图29a中描绘了示例性v
l-cdr1序列。在一些实施方式中，图29b中描绘了示例性v
l-cdr2序列。在一些实施方式中，图29c中描绘了示例性v
l-cdr3序列。
[0153]
如应用于本文公开的任何使用方法，在一些实施方式中，本文公开的任何抗gal3抗体或其结合片段的重链可变区包括与根据seq id no:169-206的任何序列具有至少
cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；r)seq id no:185内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:224内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；s)seq id no:186内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:225内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；t)seq id no:187内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:226内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；u)seq id no:188内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:227内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；v)seq id no:189内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:228内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；w)seq id no:190内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:229内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；x)seq id no:191内v
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h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:230内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；y)seq id no:192内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:231内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；z)seq id no:193内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:232内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；aa)seq id no:194内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:233内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ab)seq id no:195内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:234内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ac)seq id no:196内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:235内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ad)seq id no:197内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:236内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ae)seq id no:198内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:237内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；af)seq id no:199内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:238内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ag)seq id no:197内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:239内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ah)seq id no:200内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:240内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ai)seq id no:201内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:241内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；aj)seq id no:202内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:242内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ak)seq id no:203内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:240内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；al)seq id no:204内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:243内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；am)seq id no:205内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:244内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3或an)seq id no:206内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:245内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的vl-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3。在一些实施方式中，图34中描绘了重链可变区cdr的示例性组合。在一些实施方式中，图35中描绘了轻链可变区cdr的示例性组合。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0156]
如应用于本文公开的任何使用方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括：a)seq id no:169的重链可变区和seq id no:207的轻链可变区；b)seq id no:170的重链可变区和seq id no:208的轻链可变区；c)seq id no:171的重链可变区和seq id no:209的轻链可变区；d)seq id no:172的重链可变区和seq id no:210的轻链可变区；e)seq id no:173的重链可变区和seq id no:211的轻链可变区；f)seq id no:174的重链可变区和seq id no:212的轻链可变区；g)seq id no:175的重链可变区和seq id no:213的轻链可变区；h)seq id no:176的重链可变区和seq id no:214的轻链可变区；i)seq id no:177的重链可变区和seq id no:215的轻链可变区；j)seq id no:178的重链可变区和seq id no:216的轻链可变区；k)seq id no:179的重链可变区和seq id no:217的轻链可变区；l)seq id no:180的重链可变区和seq id no:218的轻链可变区；m)seq id no:181的重链可变区和seq id no:219的轻链可变区；n)seq id no:181的重链可变区和seq id no:220的轻链可变区；o)seq id no:182的重链可变区和seq id no:221的轻链可变区；p)seq id no:183的重链可变区和seq id no:222的轻链可变区；q)seq id no:184的重链可变区和seq id no:223的轻链可变区；r)seq id no:185的重链可变区和seq id no:224的轻链可变区；s)seq id no:186的重链可变区和seq id no:225的轻链可变区；t)seq id no:187的重链可变区和seq id no:226的轻链可变区；u)seq id no:188的重链可变区和seq id no:227的轻链可变区；v)seq id no:189的重链可变区和seq id no:228的轻链可变区；w)seq id no:190的重链可变区和seq id no:229的轻链可变区；x)seq id no:191的重链可变区和seq id no:230的轻链可变区；y)seq id no:192的重链可变区和seq id no:231的轻链可变区；z)seq id no:193的重链可变区和seq id no:232的轻链可变区；aa)seq id no:194的重链可变区和seq id no:233的轻链可变区；ab)seq id no:195的重链可变区和seq id no:234的轻链可变区；ac)seq id no:196的重链可变区和seq id no:235的轻链可变区；ad)seq id no:197的重链可变区和seq id no:236的轻链可变区；ae)seq id no:198的重链可变区和seq id no:237的轻链可变区；af)seq id no:199的重链可变区和seq id no:238的轻链可变区；ag)seq id no:197的重链可变区和seq id no:239的轻链可变区；ah)seq id no:200的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；ai)seq id no:201的重链可变区和seq id no:241的轻链可变区；aj)seq id no:202的重链可变区和seq id no:242的轻链可变区；ak)seq id no:203的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；al)seq id no:204的重链可变区和seq id no:243的轻链可变区；am)seq id no:205的重链可变区和seq id no:244的轻链可变区或an)seq id no:206的重链可变区和seq id no:245的轻链可变区。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0157]
如应用于本文公开的任何使用方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括seq id no:246-286的任何一个的重链(hc)序列。在一些实施方式中，图32中描绘了示例性hc序列。在一些实施方式中，本文公开的任何涉及抗gal3抗体或结合片段的方法可以用结合gal3的抗原结合分子进行。
[0158]
如应用于本文公开的任何使用方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括seq id no:287-324的任何一个的轻链(lc)序列。在一些实施方式中，图33中描绘了示例性hc序列。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0159]
如应用于本文公开的任何使用方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段选自由下述组成的组中：13h12.2f8、19d9.2e5、14h10.2c9、2d10.2b2、4a11.2b5、6h6.2d6、20h5.a3、19b5.2e6、23h9.2e4、20d11.2c6、15g7.2a7、4g2.2g6、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、15f10.2d6、12g5.d7、24d12.2h9、13g4.2f8、9h2.2h1、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、847.14h4、mimt001、imt-001(tb001)和imt-006(tb006)或其结合片段。在一些实施方式中，图36描绘了与每个前述抗体相关的重链和轻链cdr。在一些实施方式中，图37描绘了与每个前述抗体相关的vh和v
l
。在一些实施方式中，图38描绘了与每个前述抗体相关的hc和lc。
[0160]
如应用于本文公开的任何使用方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括载荷。在一些实施方式中，载荷缀合至抗gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，载荷是细胞毒素载荷、微管破坏剂、dna修饰剂、akt抑制剂、聚合酶抑制剂、可检测部分、免疫调节剂(immunomodulatory agent)、免疫调节器(immune modulator)、免疫毒素、核酸聚合物、适配体、肽或其任何组合。在一些实施方式中，载荷是可检测部分。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0161]
如应用于本文公开的任何使用方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是或包括人源化抗体。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是或包括全长抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是或包括双特异性抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗gal3-抗体或其结合片段是或包括单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdab)或骆驼抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是或包括igg框架。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是或包括igg1、igg2或igg4框架。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0162]
在一些情况下，如本文所述的抗gal3抗体或其结合片段可用于治疗受试者的疾病或紊乱或其症状。在一些情况下，疾病或紊乱是糖尿病。在一些情况下，疾病或紊乱是胰岛素依赖性糖尿病。在一些情况下，疾病或紊乱是胰岛素非依赖性糖尿病。在一些情况下，疾病或紊乱是i型糖尿病。在一些情况下，疾病或紊乱是ii型糖尿病。在一些情况下，疾病或紊乱是炎症性肠病。在一些情况下，疾病或紊乱是非酒精性脂肪性肝病(nafld)。在一些情况下，疾病或紊乱是非酒精性脂肪性肝炎(nash)。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0163]
在一些情况下，方法提供治疗受试者的疾病或紊乱。在一些情况下，方法包括将抗gal3抗体或其结合片段施用于患有、怀疑患有或处于发展如本文所述的疾病或紊乱风险的受试者。在一些实施方式中，方法包括将如本文所述的抗gal3抗体或其结合片段施用于患
有、怀疑患有或处于发展糖尿病风险的受试者。在一些实施方式中，方法包括将抗gal3抗体或其结合片段施用于患有、怀疑患有或处于发展ibd风险的受试者。在一些实施方式中，方法包括将如本文所述的抗gal3抗体或其结合片段施用于患有、怀疑患有或处于发展nafld风险的受试者。在一些实施方式中，方法包括将如本文所述的抗gal3抗体或其结合片段施用于患有、怀疑患有或处于发展nash风险的受试者。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0164]
在一些方面中，方法提供治疗受试者的与糖尿病相关的症状。在一些实施方式中，方法提供降低需要其的受试者的葡萄糖耐量，包括向受试者施用如本文所述的抗gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，施用抗gal3抗体或其结合片段降低受试者的葡萄糖耐量至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或由任何两个上述的百分比限定的范围内的任何百分比。在一些实施方式中，方法提供降低需要其的受试者的胰岛素抗性，包括向受试者施用如本文所述的抗gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，施用抗gal3抗体或其结合片段降低受试者的胰岛素抗性至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或由任何两个上述的百分比限定的范围内的任何百分比。在一些实施方式中，方法提供减少需要其的受试者的体重增加，包括向受试者施用如本文所述的抗gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，施用抗gal3抗体或其结合片段减少受试者的体重增加至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或由任何两个上述的百分比限定的范围内的任何百分比。在一些实施方式中，方法提供减少需要其的受试者的肝脂肪变性，包括向受试者施用如本文所述的抗gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，施用抗gal3抗体或其结合片段减少受试者的肝脂肪变性至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或由任何两个上述的百分比限定的范围内的任何百分比。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0165]
本文公开了治疗需要其的受试者的糖尿病的方法。在一些实施方式中，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的糖尿病。在一些实施方式中，糖尿病是胰岛素依赖性糖尿病。在一些实施方式中，糖尿病是胰岛素非依赖性糖尿病。在一些实施方式中，糖尿病是i型糖尿病。在一些实施方式中，糖尿病是ii型糖尿病。在一些实施方式中，治疗包括降低需要其的受试者的葡萄糖耐量。在一些实施方式中，治疗包括降低需要其的受试者的胰岛素敏感性。在一些实施方式中，治疗包括减少需要其的受试者的体重增加。在一些实施方式中，治疗包括减少需要其的受试者的肝脂肪变性。在一些实施方式中，方法进一步包括在施用步骤之前将受试者选择为患有糖尿病或处于患糖尿病的风险。在一些实施方式中，方法进一步包括在施用步骤之后检测受试者的与糖尿病相关的症状的改善。在一些实施方式中，胰岛素受体包括seq id no:2的序列。在一些实施方式中，整联蛋白选自itga1、itga2、itga3、itga4、itga5、itga6、itga7、itga8、itga9、itga10、itga11、itgad、itgae、itgal、itgam、itgav、itga2b、itga2x、itgb1、itgb2、itgb3、itgb4、itgb5、itgb6、itgb7、itgb8或其任何组合。在一些实施方式中，整联蛋白包括选自seq id no:339-342的序列。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段与一种或多种另外的治疗组合物一起施用。在一些实施方式中，一种或多种另外的治疗组合物包括胰岛素、胰岛素衍生物或其类
似物、门冬胰岛素、赖谷胰岛素、赖脯胰岛素、低精蛋白胰岛素、德谷胰岛素、地特胰岛素、锌胰岛素、甘精胰岛素、钒、双胍类、二甲双胍、苯乙双胍、丁双胍、噻唑烷二酮、罗格列酮、吡格列酮、曲格列酮、托利咪酮、磺酰脲、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、氯磺丙脲、格列吡嗪、格列本脲、格列美脲、格列齐特、格列吡脲、格列喹酮、格列奈类、瑞格列奈、那格列奈、α-葡萄糖苷酶抑制剂、米格列醇、阿卡波糖、伏格列波糖、肠促胰岛素、胰高血糖素样肽1、胰高血糖素样肽激动剂、艾塞那肽、利拉鲁肽、他斯波鲁肽、利西拉肽、索马鲁肽、度拉鲁肽、胃抑制肽、二肽基肽酶-4抑制剂、维格列汀、西格列汀、沙格列汀、利格列汀、阿格列汀、七格列汀、特力列汀、吉格列汀、普兰林肽、达格列汀、卡格列净、恩格列净或瑞格列净或其任何组合。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0166]
本文公开了治疗需要其的受试者的炎症性肠综合征的方法。在一些实施方式中，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和整联蛋白之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的炎症性肠综合征。在一些实施方式中，炎症性肠综合征是溃疡性结肠炎或克罗恩氏病或二者。在一些实施方式中，方法进一步包括在施用步骤之前选择受试者为患有炎症性肠综合征或处于患炎症性肠综合征的风险。在一些实施方式中，方法进一步包括在施用步骤后检测受试者的与炎症性肠综合征相关的症状的改善。在一些实施方式中，gal3和整联蛋白之间相互作用的破坏降低了受试者的淋巴细胞粘附或活性或二者。在一些实施方式中，淋巴细胞粘附或活性或二者降低至少至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％或任何两个上述百分比所定义的范围内的任何百分比。在一些实施方式中，整联蛋白选自itga1、itga2、itga3、itga4、itga5、itga6、itga7、itga8、itga9、itga10、itga11、itgad、itgae、itgal、itgam、itgav、itga2b、itga2x、itgb1、itgb2、itgb3、itgb4、itgb5、itgb6、itgb7、itgb8或其任何组合。在一些实施方式中，整联蛋白包括选自seq id no:339-342的序列。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段与一种或多种另外的治疗组合物一起施用。在一些实施方式中，一种或多种另外的治疗组合物包括美沙拉嗪、免疫抑制剂、强的松、tnf抑制剂、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤或利福昔明或其任何组合。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合gal3的抗原结合分子进行。
[0167]
本文公开了治疗需要其的受试者非酒精性脂肪性肝病的方法。在一些实施方式中，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的nafld。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0168]
本文公开了治疗需要其的受试者非酒精性脂肪性肝炎的方法。在一些实施方式中，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的nash。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0169]
在本文公开的任何方法的一些实施方式中，在一些实施方式中，在不存在抗gal3抗体或其结合片段的情况下，gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间的相互作用降低至小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％、小于50％、小于45％、小于40％、小于35％、小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于5％或小于1％的
相互作用。
[0170]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至gal3的n-末端结构域。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段以小于1nm、小于1.2nm、小于2nm、小于5nm、小于10nm、小于13.5nm、小于5nm、小于20nm、小于25nm或小于30nm的解离常数(kd)结合至gal3。
[0171]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至seq id no:3-26的一个或多个肽。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至由肽1(adnfslhdalsgsgnpnpqg；seq id no:3)、肽4(gaggypgasypgaypgqapp；seq id no:6)、肽6(gaypgqappgaypgapgayp；seq id no:8)、肽7(aypgapgaypgapapgvypg；seq id no:9)或其组合限定的gal3的区域内存在的表位。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0172]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段结合至包括gxypg基序的gal3的表位，其中x是氨基酸丙氨酸(a)、甘氨酸(g)或缬氨酸(v)。在一些实施方式中，如本文描述的抗gal3抗体结合至包括由三个氨基酸隔开的两个gxypg基序的gal3的表位，其中x是a、g或v。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0173]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括(1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区。在一些实施方式中，v
l-cdr1包括与根据seq id no:100-128的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
l-cdr2包括与根据seq id no:129-144的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
l-cdr3包括与根据seq id no:145-168的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
h-cdr1包括与根据seq id no:27-47的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
h-cdr2包括与根据seq id no:48-69的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，v
h-cdr3包括与根据seq id no:70-99的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。
[0174]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，图28a中描绘了示例性v
h-cdr1序列。在一些实施方式中，图28b中描绘了示例性v
h-cdr2序列。在一些实施方式中，图28c中描绘了示例性v
h-cdr3序列。在一些实施方式中，图29a中描绘了示例性v
l-cdr1序列。在一些实施方式中，图29b中描绘了示例性v
l-cdr2序列。在一些实施方式中，图29c中描绘了示例性v
l-cdr3序列。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0175]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，本文公开的任何抗gal3抗体或其结合片段的重链可变区包括与根据seq id no:169-206的任何序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，本文公开的任何抗gal3抗体或其结合片段的重链可变区选自由seq id no:169-206组成的组。在
cdr1、v
l-cdr2、v
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l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3。在一些实施方式中，图34描绘了重链可变区cdr的示例性组合。在一些实施方式中，图35描绘了轻链可变区cdr的示例性组合。在一些实施方式中，本文公
开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0178]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括：a)seq id no:169的重链可变区和seq id no:207的轻链可变区；b)seq id no:170的重链可变区和seq id no:208的轻链可变区；c)seq id no:171的重链可变区和seq id no:209的轻链可变区；d)seq id no:172的重链可变区和seq id no:210的轻链可变区；e)seq id no:173的重链可变区和seq id no:211的轻链可变区；f)seq id no:174的重链可变区和seq id no:212的轻链可变区；g)seq id no:175的重链可变区和seq id no:213的轻链可变区；h)seq id no:176的重链可变区和seq id no:214的轻链可变区；i)seq id no:177的重链可变区和seq id no:215的轻链可变区；j)seq id no:178的重链可变区和seq id no:216的轻链可变区；k)seq id no:179的重链可变区和seq id no:217的轻链可变区；l)seq id no:180的重链可变区和seq id no:218的轻链可变区；m)seq id no:181的重链可变区和seq id no:219的轻链可变区；n)seq id no:181的重链可变区和seq id no:220的轻链可变区；o)seq id no:182的重链可变区和seq id no:221的轻链可变区；p)seq id no:183的重链可变区和seq id no:222的轻链可变区；q)seq id no:184的重链可变区和seq id no:223的轻链可变区；r)seq id no:185的重链可变区和seq id no:224的轻链可变区；s)seq id no:186的重链可变区和seq id no:225的轻链可变区；t)seq id no:187的重链可变区和seq id no:226的轻链可变区；u)seq id no:188的重链可变区和seq id no:227的轻链可变区；v)seq id no:189的重链可变区和seq id no:228的轻链可变区；w)seq id no:190的重链可变区和seq id no:229的轻链可变区；x)seq id no:191的重链可变区和seq id no:230的轻链可变区；y)seq id no:192的重链可变区和seq id no:231的轻链可变区；z)seq id no:193的重链可变区和seq id no:232的轻链可变区；aa)seq id no:194的重链可变区和seq id no:233的轻链可变区；ab)seq id no:195的重链可变区和seq id no:234的轻链可变区；ac)seq id no:196的重链可变区和seq id no:235的轻链可变区；ad)seq id no:197的重链可变区和seq id no:236的轻链可变区；ae)seq id no:198的重链可变区和seq id no:237的轻链可变区；af)seq id no:199的重链可变区和seq id no:238的轻链可变区；ag)seq id no:197的重链可变区和seq id no:239的轻链可变区；ah)seq id no:200的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；ai)seq id no:201的重链可变区和seq id no:241的轻链可变区；aj)seq id no:202的重链可变区和seq id no:242的轻链可变区；ak)seq id no:203的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；al)seq id no:204的重链可变区和seq id no:243的轻链可变区；am)seq id no:205的重链可变区和seq id no:244的轻链可变区或an)seq id no:206的重链可变区和seq id no:245的轻链可变区。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0179]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括seq id no:246-286的任何一个的重链(hc)序列。在一些实施方式中，图32中描绘了示例性hc序列。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0180]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括seq id no:287-324的任何一个的轻链(lc)序列。在一些实施方式中，图33中描绘了
示例性hc序列。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0181]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段选自由下述组成的组中：13h12.2f8、19d9.2e5、14h10.2c9、2d10.2b2、4a11.2b5、6h6.2d6、20h5.a3、19b5.2e6、23h9.2e4、20d11.2c6、15g7.2a7、4g2.2g6、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、15f10.2d6、12g5.d7、24d12.2h9、13g4.2f8、9h2.2h1、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、847.14h4、mimt001、imt-001(tb001)和imt-006(tb006)或其结合片段。在一些实施方式中，图36描绘了与每个前述抗体相关的重链和轻链cdr。在一些实施方式中，图37描绘了与每个前述抗体相关的vh和v
l
。在一些实施方式中，图38描绘了与每个前述抗体相关的hc和lc。
[0182]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段通过肠内、口服、鼻内、肠胃外、颅内、皮下、肌内、皮内或静脉内或其任何组合施用。
[0183]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段包括载荷。在一些实施方式中，载荷缀合至抗gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，载荷是细胞毒素载荷、微管破坏剂、dna修饰剂、akt抑制剂、聚合酶抑制剂、可检测部分、免疫调节剂(immunomodulatory agent)、免疫调节器(immune modulator)、免疫毒素、核酸聚合物、适配体、肽或其任何组合。在一些实施方式中，载荷是可检测部分。
[0184]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是或包括人源化抗体。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是或包括全长抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是或包括双特异性抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是或包括单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdab)或骆驼抗体或其结合片段。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是或包括igg框架。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是或包括igg1、igg2或igg4框架。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0185]
如应用于本文公开的任何治疗方法，在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段被配制用于全身施用。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段被配制用于肠胃外施用。在一些实施方式中，施用多于一种抗gal3抗体或结合片段。在一些实施方式中，当施用多于一种抗gal3抗体或结合片段时，多于一种抗gal3抗体或其结合片段可选自本文公开的抗gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，本文公开的涉及抗gal3抗体或结合片段的任何方法可以用结合至gal3的抗原结合分子进行。
[0186]
如应用于本文公开的任何使用或治疗方法，受试者是哺乳动物。在一些实施方式中，哺乳动物是人、猫、狗、小鼠、大鼠、仓鼠、啮齿动物、猪、牛、马、绵羊或山羊。在一些实施方式中，哺乳动物是人。在一些实施方式中，受试者患有i型糖尿病或ii型糖尿病。抗体产生
[0187]
在一些情况中，抗gal3抗体或其结合片段通过标准方案通过用抗原组合物注射生
产动物来产生。参见，例如，harlow和lane，antibodies:a laboratory manual，cold spring harbor laboratory，1988。当利用整个蛋白质或蛋白质的较大部分时，抗体可以通过用蛋白质和合适的佐剂(例如，弗氏、弗氏完全、水包油乳液等)免疫生产动物来产生。当利用较小的肽时，将肽与较大的分子缀合以制备免疫刺激缀合物是有利的。商业上可获得的用于这种用途的常用缀合蛋白包括牛血清白蛋白(bsa)和匙孔血蓝蛋白(klh)。为了产生针对特定表位的抗体，可以利用源自完整序列的肽。可替选地，为了产生针对蛋白质靶的相对短的肽部分的抗体，如果将多肽连接至载体蛋白，比如卵白蛋白、bsa或klh，则可以引起优异的免疫应答。
[0188]
多克隆或单克隆抗gal3抗体或其结合片段可以从已经基因改变以产生人免疫球蛋白的动物产生。转基因动物可以通过最初产生不产生动物的天然抗体的“敲除”动物，并且用人抗体基因座稳定转化动物(例如，通过使用人的人工染色体)来产生。在这种情况下，然后通过动物仅制造人抗体。用于产生这种动物并且从其中衍生抗体的技术在美国专利号6,162,963和6,150,584中描述，各自通过引用以其整体完全并入本文。这种抗体可称为人异种抗体。
[0189]
可替选地，抗gal3抗体或其结合片段可以从含有人可变区的噬菌体文库产生。参见美国专利号6,174,708，通过引用以其整体完全并入本文。
[0190]
在本文公开的任何实施方式的一些方面中，抗gal3抗体或其结合片段由杂交瘤产生。
[0191]
对于单克隆抗gal3抗体，可以通过分离刺激的免疫细胞，比如来自接种动物的脾的那些来形成杂交瘤。然后这些细胞可融合至永生细胞，比如骨髓瘤细胞或转化细胞，其能够在细胞培养物中无限地复制，从而产生永生化的分泌免疫球蛋白的细胞系。利用的永生细胞系可被选择为缺乏利用某些营养素所必需的酶。许多这种细胞系(比如骨髓瘤)是本领域技术人员已知的，并且包括，例如：胸苷激酶(tk)或次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸基转移酶(hgprt)。这些缺陷允许根据它们在例如次黄嘌呤氨基蝶呤胸苷培养基(hat)上的生长能力来选择融合细胞。
[0192]
另外，抗gal3抗体或其结合片段可以通过基因工程化产生。
[0193]
本文公开的抗gal3抗体或其结合片段可具有降低的诱导人中非期望的免疫应答的倾向，例如，过敏性休克，并且还可展示出引发将防止用抗体治疗剂或显像剂重复剂量的免疫应答(例如，人-抗-鼠-抗体“hama”应答)的降低的倾向。这种抗gal3抗体或其结合片段包括但不限于人源化、嵌合或异种人抗gal3抗体或其结合片段。
[0194]
嵌合抗gal3抗体或其结合片段可以，例如，通过将从鼠(或其他动物来源的)杂交瘤克隆获得的鼠可变轻链和重链区(vk和vh)与人恒定轻链和重链区组合以便产生主要地具有人结构域的抗体的重组方式制备。这种嵌合抗体的产生是本领域熟知的，并且可以通过标准方式实现(如，例如在美国专利号5,624,659中描述的，通过引用完全并入本文)。
[0195]
适用于非人(例如啮齿动物或灵长类动物)抗体的术语“人源化”是杂交免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段，其含有源自非人免疫球蛋白的最少序列。在大多数情况下，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的互补决定区(cdr)的残基被来自具有所需特异性、亲和力和能力的非人类物种(供体抗体)比如小鼠、大鼠、兔子或灵长类动物的cdr的残基取代。在一些情况中，人免疫球蛋白的fv框架区(fr)残基被相应的非人残基取
代。此外，人源化抗体可包括既不在受体抗体中也不在输入的cdr或框架序列中发现的残基。进行这些修饰进一步改进和优化抗体性能并且最小化当引入人体时的免疫原性。在一些示例中，人源化抗体将包括基本上所有的至少一个，并且通常两个可变区，其中所有或基本上所有的cdr区对应于非人免疫球蛋白的那些并且所有或基本上所有的fr区是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体还可包括免疫球蛋白恒定区(fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的那些。
[0196]
可以工程化人源化抗体以含有人样免疫球蛋白结构域，并且仅并入动物源性抗体的互补决定区。这可以通过仔细检查单克隆抗原结合单位或单克隆抗体的可变区的高变环的序列，并且将它们与人抗原结合单位或人抗体链的结构相匹配来完成。参见，例如，美国专利号6,187,287，通过引用完全并入本文。
[0197]
用于人源化非人抗体的方法是本领域熟知的。“人源化”抗体是其中至少部分序列已经从其初始形式改变以使其更像人免疫球蛋白的抗体。在一些版本中，重(h)链和轻(l)链恒定(c)区用人序列取代。这可以是包括可变(v)区和异源免疫球蛋白c区的融合多肽。在一些版本中，互补决定区(cdr)包括非人抗体序列，而v框架区也已转化为人序列。参见，例如，ep 0329400。在一些版本中，v区通过设计人和小鼠v区的共有序列并且转换共有序列之间不同的cdr之外的残基来人源化。
[0198]
原则上，来自人源化抗体的框架序列可用作cdr移植的模板；然而，已经表明直接将cdr取代入这种框架中会导致对抗原的结合亲和力的显著丧失。glaser等(1992)j.immunol.149:2606；tempest等(1992)biotechnology 9:266和shalaby等(1992)j.exp.med.17:217。人抗体(huab)与原始鼠抗体(muab)的同源性越高，人框架将更不可能将可降低亲和力的畸变(distortions)引入鼠cdr。基于针对抗体序列数据库的序列同源性搜索，huab ic4为mum4ts.22提供了良好的框架同源性，尽管其他高度同源的huab也将适用，尤其是来自人亚组i的κl链或来自人亚组iii的h链。kabat等(1987)。各种计算机程序比如encad(levitt等(1983)j.mol.biol.168:595)可以用来预测v区的理想序列。本公开因此涵盖具有不同可变(v)区的huab。确定合适的v区序列并且优化这些序列在本领域技术人员的技能内。获得具有降低的免疫原性的抗体的方法也描述于美国专利号5,270,202和ep 699,755，各自通过引用以其整体并入本文。
[0199]
人源化抗体可以通过使用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物的过程来制备。三维免疫球蛋白模型是本领域技术人员熟悉的。可获得的计算机程序来阐释和显示选定的候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构。检查这些显示允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即，分析残基影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力。这样，可以从共有序列和输入序列中选择和组合fr残基，从而实现期望的抗体特征，比如对靶抗原的亲和力增加。
[0200]
用于人源化受试者抗原结合单元的过程可以如下。基于用于移植的人抗体种系的同源性、规范结构和物理性质选择最适合的种系受体重链和轻链可变区。进行mvh/vl与移植hvh/vl的计算机建模，并且生成原型人源化抗体序列。如果建模指示需要框架回复突变，则生成具有指示的fw改变的第二变体。合成编码选定种系框架和鼠cdr的dna片段。合成的dna片段被亚克隆至igg表达载体中，并且通过dna测序确认序列。人源化抗体在细胞，比如293f中表达，并且测试蛋白质，例如在mdm吞噬测定和抗原结合测定中。将人源化抗原结合
单位与亲本抗原结合单位的抗原结合亲和力比较，例如，通过对表达靶抗原的细胞进行facs。如果亲和力比亲本抗原结合单位低2倍以上，则可以如上所述生成和测试第二轮人源化变体。
[0201]
如上所述，抗gal3抗体或其结合片段可以是“单价”或“多价”。前者每个抗原结合单位具有一个结合位点，而后者含有能够结合不止一种相同或不同种类的抗原的多个结合位点。取决于结合位点的数量，抗原结合单元可以是二价的(具有两个抗原结合位点)、三价的(具有三个抗原结合位点)、四价的(具有四个抗原结合位点)等。
[0202]
多价抗gal3抗体或其结合片段可基于它们结合特异性进一步分类。“单特异性”抗gal3抗体或其结合片段是能够结合至相同种类的一种或多种抗原的分子。“多特异性”抗gal3抗体或其结合片段是对至少两种不同抗原具有结合特异性的分子。虽然这种分子通常仅将结合两种不同的抗原(即双特异性抗gal3抗体)，但在本文中使用时，具有另外特异性的抗体比如三特异性抗体也被该表达涵盖。本公开进一步提供了多特异性抗gal3抗体。多特异性抗gal3抗体或其结合片段是能够结合至少两种不同抗原的多价分子，例如，分别展示出对两种和三种不同抗原的结合特异性的双特异性和三特异性分子。
[0203]
在一些实施方式中，方法进一步提供筛选或鉴定能够破坏gal3与胰岛素受体或整联蛋白或二者之间的相互作用的抗体或其结合片段。在实施例1中描述了这种方法的非限制性示例。在一些方面中，方法可包括：(a)使gal3蛋白质与选择性结合至gal3的抗体或其结合片段接触，从而形成gal3-抗体复合物；(b)使gal3-抗体复合物与胰岛素受体或整联蛋白或二者接触；(c)去除未结合的胰岛素受体或整联蛋白或二者；和(d)检测结合至gal3-抗体复合物的胰岛素受体或整联蛋白或二者，其中当胰岛素受体或整联蛋白或二者在(d)中未检测到时，抗体或其结合片段能够破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者的相互作用。在一些情况下，方法包括免疫测定。在一些情况下，免疫测定是酶联免疫吸附测定(elisa)。多核苷酸和载体
[0204]
在一些实施方式中，本公开提供了编码本文公开的任何抗gal3抗体或其结合片段的分离的核酸。在另一实施方式中，本公开提供了包括编码本文公开的任何抗gal3抗体或其结合片段的核酸序列的载体。在一些实施方式中，本公开提供了编码本文公开的抗gal3抗体或其结合片段的轻链cdr和重链cdr的分离的核酸。
[0205]
在一些实施方式中是编码选自seq id no:27-47的重链cdr1肽序列的核酸。在一些实施方式中是编码选自seq id no:48-69的重链cdr2肽序列的核酸。在一些实施方式中是编码seq id no:70-99的重链cdr3肽序列的核酸选自。在一些实施方式中是编码选自seq id no:100-128的轻链cdr1肽序列的核酸。在一些实施方式中是编码选自seq id no:129-144的轻链cdr2肽序列的核酸。在一些实施方式中是编码选自seq id no:145-168的轻链cdr3肽序列的核酸。在一些实施方式中是编码选自seq id no:169-206的重链可变区肽序列的核酸。在一些实施方式中是编码选自seq id no:207-245的轻链可变区肽序列的核酸。在一些实施方式中是编码选自seq id no:246-286的重链肽序列的核酸。在一些实施方式中是编码选自seq id no:287-324的轻链肽序列的核酸。在一些实施方式中是编码图28a-33中表示的任何肽序列的核酸。
[0206]
本文所述的任何一种抗gal3抗体或其结合片段可以通过重组dna技术、合成化学
技术或其组合来制备。例如，使用本领域已知的标准分子技术，通常将编码抗gal3抗体的所需组分，包括轻链cdr和重链cdr的序列组装克隆至表达载体中。这些序列可以从编码所需蛋白质序列的其他载体、从使用各自的模板核酸的pcr生成的片段或通过编码所需序列的合成寡核苷酸的组装来组装。表达系统可以通过用包括感兴趣的抗gal3抗体或其结合片段的表达载体转染合适的细胞来创建。
[0207]
使用常规技术包括但不限于杂交、pcr和dna测序，可以容易地获得和测序对应于现有抗体的轻链或重链的各种区域的核苷酸序列。产生单克隆抗体的杂交瘤细胞用作抗体核苷酸序列的优选的来源。大量产生一系列单克隆抗体的杂交瘤细胞可以从公共或私人储存库中获得。最大的保藏机构是美国模式培养物保藏所，其提供了多样化的特征明确的杂交瘤细胞系的收集。可替选地，抗体核苷酸可以从免疫或未免疫的啮齿动物或人获得，并且形成器官比如脾和外周血液淋巴细胞。适用于提取和合成抗体核苷酸的具体技术在orlandi等(1989)proc.natl.acad.sci.u.s.a 86:3833-3837；larrick等(1989)biochem.biophys.res.commun.160:1250-1255；sastry等(1989)proc.natl.acad.sci.,u.s.a.86:5728-5732和美国专利号5,969,108中描述。
[0208]
编码抗gal3抗体或其结合片段的多核苷酸也可以被修饰，例如，通过人重链和轻链恒定区的编码序列代替同源非人序列来置换。在这种方式中，制备了保留原始抗gal3抗体或其结合片段的结合特异性的嵌合抗体。
[0209]
本文还公开了产生抗gal3抗体或其结合片段的方法。在一些实施方式中，方法包括在细胞中表达编码抗gal3抗体或其结合片段的核酸，并且从细胞中分离表达的抗gal3抗体或其结合片段。在一些实施方式中，方法进一步包括浓缩抗gal3抗体或其结合片段至期望的浓度。在一些实施方式中，细胞是哺乳动物细胞、昆虫细胞或细菌细胞。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段是本文公开的任何一种抗gal3抗体或结合片段。在细胞中表达抗体和分离表达的抗体的具体程序是常规已知的并且可由本领域技术人员实践。宿主细胞
[0210]
在一些实施方式中，本公开提供了表达本文公开的任何一种抗gal3抗体或其结合片段的宿主细胞。受试者宿主细胞通常包括编码本文公开的任何一种抗gal3抗体或其结合片段的核酸。
[0211]
本公开提供了用以上所述的多核苷酸、载体或载体文库转染的宿主细胞。可以通过许多适当的方式的任意一种，包括电穿孔、微弹轰击；脂质转染、感染(其中载体与致病原偶联)、采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、deae-葡聚糖或其他物质的转染，将载体引入合适的原核或真核细胞。引入载体的方法的选择通常将取决于宿主细胞的特征。
[0212]
对于大多数动物细胞，任何以上提到的方法都适合于载体递送。优选的动物细胞是脊椎动物细胞，优选地哺乳动物细胞，其能够大量，例如，以毫克水平表达外源引入的基因产物。优选的细胞的非限制性示例是nih3t3细胞、cos、hela和cho细胞。
[0213]
一旦引入至合适的宿主细胞，抗gal3抗体或其结合片段的表达可以使用本领域已知的任何核酸或蛋白质测定来确定。例如，轻链cdr或重链cdr或抗gal3抗体或其结合片段的转录mrna的存在可以通过常规杂交测定(例如northern印迹分析)、扩增程序(例如rt-pcr)、sage(美国专利号5,695,937)和基于阵列的技术(参见例如美国专利号5,405,783、5,412,087和5,445,934)，使用与编码抗gal3抗体或其结合片段的多核苷酸的任何区域互补
的探针来检测和/或量化。
[0214]
载体的表达还可以通过检查表达的抗gal3抗体或其结合片段来确定。本领域可获得用于蛋白质分析的各种技术。它们包括但不限于放射免疫测定、elisa(酶联免疫放射测定)、“夹心”免疫测定、免疫放射测定、原位免疫测定(使用例如，胶体金、酶或放射性同位素标记)、蛋白质印迹分析、免疫沉淀测定、免疫荧光测定和sds-page。载荷
[0215]
在一些实施方式中，本文公开的任何抗gal3抗体进一步包括载荷。在一些情况下，载荷包括小分子、蛋白质或其功能片段、肽或核酸聚合物。
[0216]
在一些情况下，与抗gal3抗体缀合的载荷的数量(例如，药物与抗体比例或dar)是约1:1，一种载荷对一种抗gal3抗体。在一些情况下，载荷与抗gal3抗体的比例是约2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1。在一些情况下，载荷与抗gal3抗体的比例是约2:1。在一些情况下，载荷与抗gal3抗体的比例是约3:1。在一些情况下，载荷与抗gal3抗体的比例是约4:1。在一些情况下，载荷与抗gal3抗体的比例是约6:1。在一些情况下，载荷与抗gal3抗体的比例是约8:1。在一些情况下，载荷与抗gal3抗体的比例是约12:1。
[0217]
在一些实施方式中，载荷是小分子。在一些情况下，小分子是细胞毒素载荷。示例性细胞毒素载荷包括但不限于微管破坏剂、dna修饰剂或akt抑制剂。
[0218]
在一些实施方式中，载荷包括微管破坏剂。示例性微管破坏试剂包括但不限于2-甲氧基雌二醇、澳瑞他汀(auristatin)、查尔酮、秋水仙碱、考布他汀、念珠藻素(cryptophycin)、dictyostatin、盘皮海绵内酯、dolastain、软珊瑚醇、埃博霉素、软海绵素、莱利霉素(laulimalide)、美登素、noscapaxin、紫杉醇、peloruside、拟茎点霉毒素(phomopsin)、鬼臼毒素、根瘤素、海绵抑制素、紫杉烷、tubulysin、长春花生物碱、长春瑞滨或其衍生物或类似物。
[0219]
在一些实施方式中，美登素是美登木素生物碱。在一些实施方式中，美登木素生物碱是dm1、dm4或安丝菌素。在一些实施方式中，美登木素生物碱是dm1。在一些实施方式中，美登木素生物碱是dm4。在一些实施方式中，美登木素生物碱是安丝菌素。在一些实施方式中，美登木素生物碱是美登木素生物碱衍生物或类似物，比如描述在美国专利号5208020、5416064、7276497和6716821或美国公开号2013029900和us20130323268中的。
[0220]
在一些实施方式中，载荷是海兔毒素，或其衍生物或类似物。在一些实施方式中，海兔毒素是海兔毒素10或海兔毒素15，其或衍生物或类似物。在一些实施方式中，海兔毒素10类似物是澳瑞他汀、soblidotin、symplostatin 1或symplostatin 3。在一些实施方式中，海兔毒素15类似物是西马多丁或他西多丁。
[0221]
在一些实施方式中，海兔毒素10类似物是澳瑞他汀或澳瑞他汀衍生物。在一些实施方式中，澳瑞他汀或澳瑞他汀衍生物是澳瑞他汀e(ae)、澳瑞他汀f(af)、澳瑞他汀e5-苯甲酰基戊酸酯(aevb)、一甲基澳瑞他汀e(mmae)、一甲基澳瑞他汀f(mmaf)或一甲基澳瑞他汀d(mmad)、澳瑞他汀pe或澳瑞他汀pye。在一些实施方式中，澳瑞他汀衍生物是一甲基澳瑞他汀e(mmae)。在一些实施方式中，澳瑞他汀衍生物是一甲基澳瑞他汀f(mmaf)。在一些实施方式中，澳瑞他汀是澳瑞他汀衍生物或类似物，比如在美国专利号6884869、7659241、7498298、7964566、7750116、8288352、8703714和8871720中描述的。
[0222]
在一些实施方式中，载荷包括dna修饰剂。在一些实施方式中，dna修饰剂包括dna切割剂、dna嵌入剂、dna转录抑制剂或dna交联剂。在一些情况下，dna切割剂包括博来霉素a2、加利车霉素或其衍生物或类似物。在一些情况下，dna嵌入剂包括多柔比星、表柔比星、pnu-159682、多米卡新、吡咯并苯二氮卓、寡霉素c、柔红霉素、戊柔比星、拓扑替康或其衍生物或类似物。在一些情况下，dna转录抑制剂包括更生霉素。在一些情况下，dna交联剂包括丝裂霉素c。
[0223]
在一些实施方式中，dna修饰剂包括安吖啶、蒽环霉素、喜树碱、多柔比星、多米卡新、烯二炔、依托泊苷、吲哚并苯二氮卓、纺锤菌素、替尼泊苷或其衍生物或类似物。
[0224]
在一些实施方式中，蒽环霉素是多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-c、更生霉素、光辉霉素、奈莫柔比星、匹蒽醌、沙巴比星或戊柔比星。
[0225]
在一些实施方式中，喜树碱的类似物是拓扑替康、依立替康、西拉替康、科西替康、依沙替康、勒托替康、吉马替康、贝洛替康、鲁比替康或sn-38。
[0226]
在一些实施方式中，多米卡新是多米卡新a、多米卡新b1、多米卡新b2、多米卡新c1、多米卡新c2、多米卡新d、多米卡新sa或cc-1065。在一些实施方式中，烯二炔是加利车霉素、埃斯帕霉素或达内霉素a。
[0227]
在一些实施方式中，吡咯并苯二氮卓是蒽霉素、赤霉素、契卡霉素、dc-81、甲基氨茴霉素(mazethramycin)、新茴霉素(neothramycins)a、新茴霉素b、porothramycin、prothracarcin、sibanomicin(dc-102)、西伯霉素或茅屋霉素。在一些实施方式中，吡咯并苯二氮卓是茅屋霉素衍生物，比如在美国专利号8404678和8163736中描述的。在一些实施方式中，吡咯并苯二氮卓是比如在美国专利号8426402、8802667、8809320、6562806、6608192、7704924、7067511、us7612062、7244724、7528126、7049311、8633185、8501934和8697688和美国公开号us20140294868中描述的。
[0228]
在一些实施方式中，吡咯并苯二氮卓是吡咯并苯二氮卓二聚体。在一些实施方式中，pbd二聚体是对称的二聚体。对称的pbd二聚体的示例包括但不限于sjg-136(sg-2000)、zc-423(sg2285)、sjg-720，sjg-738、zc-207(sg2202)和dsb-120。在一些实施方式中，pbd二聚体是非对称的二聚体。非对称的pbd二聚体的示例包括但不限于sjg-136衍生物，比如在美国专利号8697688和9242013和美国公开号20140286970中描述的。
[0229]
在一些实施方式中，载荷包括akt抑制剂。在一些情况下，akt抑制剂包括ipatasertib(gdc-0068)或其衍生物。
[0230]
在一些实施方式中，载荷包括聚合酶抑制剂，包括但不限于聚合酶ii抑制剂比如a-鹅膏菌素和聚(adp-核糖)聚合酶(parp)抑制剂。示例性parp抑制剂包括但不限于iniparib(bsi 201)、他拉唑帕尼(bmn-673)、奥拉帕尼(azd-2281)、奥拉帕尼、鲁卡帕尼(ag014699、pf-01367338)、维利帕尼(abt-888)、cep 9722、mk 4827、bgb-290或3-氨基苯甲酰胺。
[0231]
在一些实施方式中，载荷包括可检测部分。如本文使用的，“可检测部分”可包括用于诊断、检测或可视化靶分子、细胞、组织、器官等的位置和/或数量的原子、分子或化合物。可按照本文实施方式使用的可检测部分包括但不限于放射性物质(例如放射性同位素、放射性核素、放射性标记或放射性示踪剂)、染料、造影剂、荧光化合物或分子、生物发光化合物或分子、酶和增强剂(例如顺磁性离子)或特异性结合部分比如链霉抗生物素、抗生物素
蛋白或生物素。另外，一些纳米颗粒，例如量子点或金属纳米粒子可以适合用作可检测部分。
[0232]
按照本文实施方式可用作可检测部分的示例性放射性物质包括但不限于
18
f、
18
f-fac、
32
p、
33
p、
45
ti、
47
sc、
52
fe、
59
fe、
62
cu、
64
cu、
67
cu、
67
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68
ga、
75
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77
as、
86
y、
90
y、
89
sr、
89
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94
tc、
94
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99
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99
mo、
105
pd、
105
rh、
111
ag、
111
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123
i、
124
i、
125
i、
131
i、
142
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143
pr、
149
pm、
153
sm、
154-158
gd、
161
tb、
166
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166
ho、
169
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175
lu、
177
lu、
186
re、
188
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189
re、
194
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198
au、
199
au、
211
at、
211
pb、
212
bi、
212
pb、
213
bi、
223
ra和
225
ac。可用作可检测的标志物的示例性顺磁性离子物质包括但不限于过渡金属和镧系金属的离子(例如具有6至9、21-29、42、43、44或57-71的原子序数的金属)。这些金属包括cr、v、mn、fe、co、ni、cu、la、ce、pr、nd、pm、sm、eu、gd、tb、dy、ho、er、tm、yb和lu的离子。
[0233]
当可检测的标记物是放射性金属或顺磁性离子时，在一些实施方式中，标记物可以与具有长尾的试剂反应，所述长尾具有一个或多个附着至长尾的螯合基团以结合这些离子。长尾可以是聚合物比如聚赖氨酸、多糖或其他具有侧基的衍生的或可衍生的链，所述侧基可以结合至螯合基团以结合离子。可根据本文实施方式使用的螯合基团的示例包括但不限于乙二胺四乙酸(edta)、二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)、dota、nota、nogada、neta、去铁胺(dfo)、卟啉、聚胺、冠醚、双缩氨基硫脲、聚肟等基团。螯合物可以通过基团连接至抗原结合构建体，所述基团允许与分子形成键，而免疫反应性损失最小，并且聚集和/或内部交联最小。当与本文所述的抗原结合构建体和载体一起使用时，相同的螯合物在与非放射性金属比如锰、铁和钆复合时可用于mri。大环螯合物比如nota、nogada、dota和teta分别可用于各种金属和放射性金属，包括但不限于镓、钇和铜的放射性核素。可以使用对稳定结合放射性核素比如用于rait的镭-223感兴趣的其他环状型螯合物，比如大环聚醚。在某些实施方式中，螯合部分可用于将pet显像剂比如铝-18
f复合物，连接至用于pet分析的靶向分子。
[0234]
按照本公开的实施方式可用作可检测部分的示例性造影剂包括但不限于钡、泛影酸盐、乙碘化油、柠檬酸镓、碘卡酸、碘西他酸、碘酰胺、胆影酸、碘沙酸、iogulamide、己基碘(iohexyl)、碘帕醇、碘番酸、碘普西酸、碘西法酸、碘丝酸、碘砜葡胺、iosemetic acid、碘酞硫、碘替酸、碘他拉酸、碘托西酸、碘克沙酸、羟泛影酸、碘泊酸盐、葡甲胺、甲泛葡胺、甲泛影酸盐、丙碘酮、氯化亚铊或其组合。
[0235]
按照本公开的实施方式可用作可检测部分的生物荧光和荧光化合物或分子和染料包括但不限于荧光素、荧光素异硫氰酸酯(fitc)、oregon green
tm
、若丹明、德克萨斯红、四罗丹明异硫氰酸酯(tritc)、cy3、cy5等)、荧光标志物(例如，绿色荧光蛋白(gfp)、藻红蛋白等)、由肿瘤相关蛋白酶激活的自猝灭荧光化合物、酶(例如，荧光素酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)、纳米颗粒、生物素、地高辛或其组合。
[0236]
按照本公开的实施方式可用作可检测部分的酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酸酶或β-内酰胺酶。这种酶可与色原、荧光化合物或发光化合物组合使用以产生可检测的信号。
[0237]
在一些实施方式中，载荷是纳米颗粒。术语“纳米颗粒”是指其尺寸以纳米度量的微观颗粒，例如，具有至少一个小于约100nm的维度的颗粒。纳米颗粒可用作可检测物质，因为它们足够小，以散射可见光而不是吸收可见光。例如，金纳米颗粒拥有显著的可见光消光性质，并且在溶液中以深红色至黑色呈现。结果，包括缀合至纳米颗粒的抗原结合构建体的
组合物可用于受试者t细胞的体内成像。在尺寸范围小的一端，纳米颗粒通常被称为簇。已经形成了金属、电介质和半导体纳米颗粒，以及混合结构(例如核壳纳米颗粒)。纳米球、纳米棒和纳米杯只是已经形成的几种形状。半导体量子点和纳米晶体是其他类型的纳米颗粒的示例。这种纳米级颗粒可用作缀合至本文公开的任何一种抗gal3抗体的载荷。
[0238]
在一些实施方式中，载荷包括免疫调节剂。有用的免疫调节剂包括阻断激素对肿瘤作用的抗激素和抑制细胞因子产生、下调自身抗原表达或掩盖mhc抗原的免疫抑制剂。代表性的抗激素包括抗雌激素，包括例如它莫西芬、雷洛昔芬、抑制4(5)-咪唑的芳香酶、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛西芬、ly 117018、奥那司酮(onapnstone)和托瑞米芬；和抗雄激素比如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林；和抗肾上腺剂。阐释性免疫抑制剂包括但不限于2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶、硫唑嘌呤、环磷酰胺、溴隐亭、达那唑、氨苯砜、戊二醛、针对mhc抗原和mhc片段的抗独特型抗体、环孢菌素a、类固醇比如糖皮质激素、链激酶或雷帕霉素。
[0239]
在一些实施方式中，载荷包括免疫调节剂。示例性免疫调节剂包括但不限于更昔韦洛(gancyclovier)、依那西普、他克莫司、西罗莫司、伏环孢素、环孢菌素、雷帕霉素、环磷酰胺、硫唑嘌呤、吗替麦考酚酯(mycophenolgate mofetil)、甲氨蝶呤、糖皮质激素及其类似物、黄嘌呤、干细胞生长因子、淋巴毒素、造血因子、肿瘤坏死因子(tnf)(例如tnfα)、白细胞介素(例如，白细胞介素-1(il-1)、il-2、il-3、il-6、il-10、il-12、il-18和il-21)、集落刺激因子(例如，粒细胞集落刺激因子(g-csf)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf))、干扰素(例如干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ)、被称为“s1因子”的干细胞生长因子、促红细胞生成素和血小板生成素或其组合。
[0240]
在一些实施方式中，载荷包括免疫毒素。免疫毒素包括但不限于蓖麻毒蛋白、放射性核素、商陆抗病毒蛋白、假单胞菌外毒素a、白喉毒素、蓖麻蛋白a链、真菌毒素比如限制性蛋白和磷脂酶。一般而言，参见“chimeric toxins”，olsnes和pihl，pharmac.ther.15:355-381(1981)和“monoclonal antibodies for cancer detection and therapy,”eds.baldwin和byers，第159-179、224-266页，academic press(1985)。
[0241]
在一些情况下，载荷包括核酸聚合物。在这种情况下，核酸聚合物包括短干扰核酸(sina)、短干扰rna(sirna)、双链rna(dsrna)、微rna(mirna)、短发夹rna(shrna)、反义寡核苷酸。在其他情况下，核酸聚合物包括编码，例如细胞毒素蛋白或肽或细胞凋亡触发蛋白或肽的mrna。示例性细胞毒素蛋白或肽包括细菌细胞毒素比如α-孔形成毒素(例如，来自大肠杆菌的溶细胞素a)，β-孔形成毒素(例如，α-溶血素、pvl-杀白细胞毒素、气溶素、梭菌ε-毒素、产气荚膜梭菌肠毒素)、二元毒素(炭疽热毒素、水肿毒素、肉毒梭菌c2毒素、螺状梭菌毒素、产气荚膜梭菌(c.perfringens iota)毒素、艰难梭菌致死毒素(a和b))、朊病毒、副孢菌素、胆固醇依赖性溶细胞素(例如，肺炎球菌溶血素)、小孔形成毒素(例如，短杆菌肽a)、蓝藻毒素(例如，微囊藻毒素、节球藻素)、血液毒素、神经毒素(例如，肉毒杆菌神经毒素)、细胞毒素、霍乱毒素、白喉毒素、假单胞菌外毒素a、破伤风毒素或免疫毒素(伊达比星、蓖麻蛋白a、crm9、商陆抗病毒蛋白、dt)。示例性凋亡触发蛋白或肽包括凋亡蛋白酶激活因子-1(apaf-1)、细胞色素-c、半胱天冬酶起始蛋白(casp2、casp8、casp9、casp10)、凋亡诱导因子(aif)、p53、p73、p63、bcl-2、，bax、颗粒酶b、聚adp核糖聚合酶(parp)和p 21-活化激酶2(pak2)。在另外情况下，核酸聚合物包括核酸诱饵。在一些情况下，核酸诱饵是蛋白质结合
proc.natl.acad.sci.usa 1999,96,10068
–
10073或wu等“building complex glycopeptides:development of a cysteine-free native chemical ligation protocol,”angew.chem.int.ed.2006,45,4116
–
4125。在一些情况下，缀合是如美国专利号8,936,910中描述的。
[0248]
在一些情况下，通过利用“无痕”偶联技术(philochem)的定向位点方法将载荷缀合至本文所述的抗gal3抗体。在一些情况下，“无痕”偶联技术利用结合部分上的n-端1,2-氨基硫醇基团，然后将其缀合至含有醛基的聚核酸分子。(参见casi等，“site-specific traceless coupling of potent cytotoxic drugs to recombinant antibodies for pharmacodelivery,”jacs 134(13):5887-5892(2012))。
[0249]
在一些情况下中，通过利用并入结合部分的非天然氨基酸的定向位点方法将载荷缀合至本文所述的抗gal3抗体。在一些情况下，非天然氨基酸包括对乙酰苯丙氨酸(pacphe)。在一些情况下，pacphe的酮基选择性地偶联至烷氧基-胺衍生的缀合部分以形成肟键。(参见axup等，“synthesis of site-specific antibody-drug conjugates using unnatural amino acids,”pnas109(40):16101-16106(2012))。
[0250]
在一些情况下，通过利用酶催化工艺的定向位点方法将载荷缀合至本文所述的抗gal3抗体。在一些情况下，定向位点方法利用smartag
tm
技术(redwood)。在一些情况下，smartag
tm
技术包括在醛标签存在下通过甲酰甘氨酸生成酶(fge)通过氧化过程从半胱氨酸生成甲酰甘氨酸(fgly)残基，并且随后将fgly经肼基-pictet-spengler(hips)连接缀合至烷基乙酰肼(alkylhydrain)官能化的聚核酸分子。(参见wu等，“site-specific chemical modification of recombinant proteins produced in mammalian cells by using the genetically encoded aldehyde tag,”pnas 106(9):3000-3005(2009)；agarwal等，“a pictet-spengler ligation for protein chemical modification,”pnas 110(1):46-51(2013))。
[0251]
在一些情况下，酶催化工艺包括微生物转谷氨酰胺酶(mtg)。在一些情况下，利用微生物转谷氨酰胺酶催化工艺将载荷缀合至抗gal3抗体。在一些情况下，mtg催化识别序列内谷氨酰胺的酰胺侧链与官能化聚核酸分子的伯胺之间形成的共价键的形成。在一些情况下，mtg是从莫巴链霉菌(streptomyces mobarensis)产生的。(参见strop等，“location matters:site of缀合modulates stability and pharmacokinetics of antibody drug conjugates,”chemistry and biology 20(2)161-167(2013))。
[0252]
在一些情况下，载荷通过如pct公开号wo2014/140317中描述的方法缀合至抗gal3抗体，该方法利用序列特异性转肽酶并且其通过引用以其整体清楚地并入本文。
[0253]
在一些情况下，载荷通过如美国专利公开号2015/0105539和2015/0105540中描述的方法缀合至本文所述的抗gal3抗体。连接体
[0254]
在一些情况下，本文所述的连接体包括天然或合成的聚合物，其由支链或非支链单体的长链和/或二维或三维的单体交联网络组成。在一些情况下，连接体包括多糖、木质素、橡胶或聚烷撑氧化物(polyalkylen oxide)(例如，聚乙二醇)。
[0255]
在一些情况下，连接体包括但不限于α-、ω-二羟基聚乙二醇、可生物降解的内酯基聚合物，例如聚丙烯酸、聚乳酸(pla)、聚(乙醇酸)(pga)、聚丙烯、聚苯乙烯、聚烯烃、聚酰
胺、聚氰基丙烯酸酯、聚酰亚胺、聚乙烯对苯二甲酸酯(polyethylenterephthalat)(pet、petg)、聚对苯二甲酸乙二醇酯(polyethylene terephthalate)(pete)、聚四亚甲基二醇(ptg)或聚氨酯以及其混合物。如本文使用的，混合物是指在相同化合物中使用不同聚合物以及指嵌段共聚物。在一些情况下，嵌段共聚物是聚合物，其中聚合物的至少一个部分由另一聚合物的单体构成。在一些情况下，连接体包括聚环氧烷。在一些情况下，连接体包括peg。在一些情况下，连接体包括聚乙烯酰亚胺(pei)或羟乙基淀粉(hes)。
[0256]
在一些情况下，聚环氧烷(例如，peg)是多分散或单分散化合物。在一些情况下，多分散材料包括不同分子量的材料的分散分布，其特征在于平均重量(重量平均)大小和分散度。在一些情况下中，单分散peg包括一种大小的分子。在一些实施方式中，连接体是多分散或单分散聚环氧烷(例如，peg)并且指示的分子量代表聚环氧烷，例如，peg分子的平均分子量。
[0257]
在一些实施方式中，连接体包括聚环氧烷(例如，peg)并且聚环氧烷(例如，peg)的分子量是约200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1450、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000、3250、3350、3500、3750、4000、4250、4500、4600、4750、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、10,000、12,000、20,000、35,000、40,000、50,000、60,000或100,000da。
[0258]
在一些实施方式中，聚环氧烷(例如，peg)是离散的peg，其中离散的peg是包括不只一个重复环氧乙烷单元的聚合的peg。在一些情况下，离散的peg(dpeg)包括2至60、2至50或2至48个重复环氧乙烷单元。在一些情况下，dpeg包括约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22、24、26、28、30、35、40、42、48、50或更多个重复环氧乙烷单元。在一些情况下，dpeg包括约2或更多个重复环氧乙烷单元。在一些情况下，dpeg是由纯的(例如，约95％、98％、99％或99.5％)起始材料以逐步方式合成为单分子量化合物。在一些情况下，dpeg具有特定的分子量，而不是平均分子量。
[0259]
在一些情况下，连接体是离散的peg，任选地包括2至60、2至50或2至48个重复环氧乙烷单元。在一些情况下，连接体包括包含约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22、24、26、28、30、35、40、42、48、50或更多个重复环氧乙烷单元的dpeg。
[0260]
在一些实施方式中，连接体是多肽连接体。在一些情况下，多肽连接体包括至少2、3、4、5、6、7、8、10、15、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100或更多个氨基酸残基。在一些实施方式中，多肽连接体包括至少2、3、4、5、6、7、8或更多个氨基酸残基。在一些情况下，多肽连接体包括至多2、3、4、5、6、7、8或更少个氨基酸残基。在一些情况下，多肽连接体是可切割的多肽连接体(例如，酶促地或化学地)。在一些情况下，多肽连接体是非可切割的多肽连接体。在一些情况下，多肽连接体包括val-cit(缬氨酸-瓜氨酸)、gly-gly-phe-gly、phe-lys、val-lys、gly-phe-lys、phe-phe-lys、ala-lys、val-arg、phe-cit、phe-arg、leu-cit、ile-cit、trp-cit、phe-ala、ala-leu-ala-leu或gly-phe-leu-gly。在一些情况下，多肽连接体包括肽比如：val-cit(缬氨酸-瓜氨酸)、gly-gly-phe-gly、phe-lys、val-lys、gly-phe-lys、phe-phe-lys、ala-lys、val-arg、phe-cit、phe-arg、leu-cit、ile-cit、trp-cit、phe-ala、ala-leu-ala-leu或gly-phe-leu-gly。在一些情况下，多肽连接体包括l-氨基酸、d-氨基酸或l-和d-氨基酸二者的混合物。
[0261]
在一些情况下，连接体包括同基双功能连接体。示例性同基双功能连接体包括但
不限于lomant试剂二硫代双(琥珀酰亚胺基丙酸酯)dsp、3
’3’‑
二硫代双(磺基琥珀酰亚胺基丙酸酯(dtssp)、双琥珀酰亚胺基辛二酸酯(dss)、双(磺基琥珀酰亚胺基)辛二酸酯(bs)、双琥珀酰亚胺基酒石酸酯(dst)、双磺基琥珀酰亚胺基酒石酸酯(磺基dst)、乙二醇双(琥珀酰亚胺基琥珀酸酯)(egs)、双琥珀酰亚胺基戊二酸酯(dsg)、n,n
’‑
双琥珀酰亚胺基碳酸酯(dsc)、己二酰亚胺二甲酯(dma)、庚二酰亚胺二甲酯(dmp)、二甲基新二亚酰(dms)、二甲基-3,3
’‑
二硫代双丙酰亚胺酯(dtbp)、1,4-二-3
’‑
(2’'-吡啶基二硫基)丙酰胺基)丁烷(dpdpb)、双马来酰亚胺己烷(bmh)、含芳基卤化物的化合物(dfdnb)，比如例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯或1,3-二氟-4,6-二硝基苯、4,4
’‑
二氟-3,3
’‑
二硝基苯砜(dfdnps)、双-[β-(4-叠氮基水杨酰胺)乙基]二硫化物(based)、甲醛、戊二醛、1,4-丁二醇缩水甘油醚、己二酸二酰肼、碳酰肼、邻甲苯胺、3,3
’‑
二甲基联苯胺、联苯胺、α,α
’‑
对二氨基二苯、二碘-对二甲苯磺酸、n,n'-亚乙基-双(碘乙酰胺)或n,n
’‑
六亚甲基-双(碘乙酰胺)。
[0262]
在一些实施方式中，连接体包括异基双功能连接体。示例性异基双功能连接体包括但不限于胺反应性和巯基交联剂，比如n-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(spdp)、长链n-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(lc-spdp)、水溶性长链n-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(磺基-lc-spdp)、琥珀酰亚胺基氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫)甲苯(smpt)、磺基琥珀酰亚胺基-6-[α-甲基-α-(2-吡啶基二硫)甲苯胺]己酸酯(磺基-lc-smpt)、琥珀酰亚胺基-4-(n-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸酯(smcc)、磺基琥珀酰亚胺基-4-(n-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸酯(磺基-smcc)、间马来酰亚胺苯甲酰基-n-羟基琥珀酰亚胺酯(mbs)、间马来酰亚胺苯甲酰基-n-羟基磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-mbs)、n-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(siab)、磺基琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(磺基-siab)、琥珀酰亚胺基-4-(对马来酰亚胺苯基)丁酸酯(smpb)、磺基琥珀酰亚胺基-4-(对马来酰亚胺苯基)丁酸酯(磺基-smpb)、n-(γ-马来酰亚胺丁酰氧基)琥珀酸酰亚胺酯(gmb)、n-(γ-马来酰亚胺丁氧基)磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-gmb)、琥珀酰亚胺基6-((碘乙酰基)氨基)己酸酯(siax)、琥珀酰亚胺基6-[6-(((碘乙酰基)氨基)己酰基)氨基]己酸酯(siaxx)、琥珀酰亚胺基4-(((碘乙酰)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸酯(siac)、琥珀酰亚胺基6-(((((4-碘乙酰)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)氨基)己酸酯(siacx)、对硝基苯基碘乙酸酯(npia)、羰基反应性和巯基反应性交联剂，比如4-(4-n-马来酰亚胺苯基)丁酸酰肼(mpbh)、4-(n-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧基-酰肼-8(m2c2h)，3-(2-吡啶基二硫)丙酰基酰肼(pdph)，胺反应性和光反应性交联剂，比如n-羟基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基水杨酸(nhs-asa)、n-羟基磺基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基水杨酸(磺基-nhs-asa)、磺基琥珀酰亚胺基-(4-叠氮基水杨酰胺基)己酸酯(磺基-nhs-lc-asa)、磺基琥珀酰亚胺基-2-(对-叠氮基水杨酰胺基)乙基-1,3
’‑
二硫代丙酸酯(sasd)、n-羟基琥珀酰亚胺基-4-叠氮苯甲酸酯(hsab)、n-羟基磺基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基苯甲酸酯(磺基-hsab)、n-琥珀酰亚胺基-6-(4
’‑
叠氮基-2
’‑
硝基苯氨基)己酸酯(sanpah)、磺基琥珀酰亚胺基-6-(4
’‑
叠氮基-2
’‑
硝基苯氨基)己酸酯(磺基-sanpah)、n-5-叠氮基-2-硝基苯甲酰氧基琥珀酰亚胺(anb-nos)、磺基琥珀酰亚胺基-2-(间叠氮基-邻硝基苯甲酰胺)-乙基-1,3
’‑
二硫丙酸酯(sand)、n-琥珀酰亚胺基-4(4-叠氮苯基)1,3
’‑
二硫丙酸酯(sadp)、n-磺基琥珀酰亚胺基(4-叠氮苯基)-1,3
’‑
二硫丙酸酯(磺基-sadp)、磺基琥珀酰亚胺基4-(对叠氮苯基)丁酸酯(磺基-sapb)、磺基琥珀酰亚胺基2-(7-叠氮基-4-甲基香豆素-3-乙酰胺)乙基-1,3
’‑
二硫丙酸酯(saed)、磺基
琥珀酰亚胺基7-叠氮基-4-甲基香豆素-3-乙酸酯(磺基-samca)、对硝基苯基重氮丙酮酸酯(ρnpdp)、对硝基苯基-2-重氮-3,3,3-三氟丙酸酯(pnp-dtp)、巯基反应性和光反应性交联剂，比如1-(对叠氮水杨酰胺)-4-(碘乙酰胺)丁烷(asib)、n-[4-(对叠氮水杨酰胺)丁基]-3
’‑
(2
’‑
吡啶基二硫)丙酰胺(apdp)、二苯酮-4-碘乙酰胺、二苯酮-4-马来酰亚胺羰基反应性和光反应性交联剂，比如对叠氮苯甲酰肼(abh)、羧酸酯反应性和光反应性交联剂，比如4-(对叠氮基水杨酰胺)丁胺(asba)和精氨酸-反应性和光反应性交联剂，比如对叠氮苯基乙二醛(apg)。
[0263]
在一些实施方式中，连接体包括苯甲酸基团或其衍生物。在一些情况下，苯甲酸基团或其衍生物包括对氨基苯甲酸(paba)。在一些情况下，苯甲酸基团或其衍生物包括γ-氨基丁酸(gaba)。
[0264]
在一些实施方式中，连接体包括马来酰亚胺基团、肽部分和/或苯甲酸基团中的一种或多种，以任何组合。在一些实施方式中，连接体包括马来酰亚胺基团、肽部分和/或苯甲酸基团的组合。在一些情况下，马来酰亚胺基团是马来酰亚胺己酰基(mc)。在一些情况下，肽基团是val-cit。在一些情况下，苯甲酸基团是paba。在一些情况下，连接体包括mc-val-cit基团。在一些情况下，连接体包括val-cit-paba基团。在其他情况下，连接体包括mc-val-cit-paba基团。
[0265]
在一些实施方式中，连接体是自毁连接体(self-immolative linker)或自消除连接体。在一些情况下，连接体是自毁连接体。在其他情况下，连接体是自消除连接体(例如，环化自消除连接体)。在一些情况下，连接体包括在美国专利号9,089,614或pct公开号wo2015038426中描述的连接体。
[0266]
在一些实施方式中，连接体是树突型连接体。在一些情况下，树突型连接体包括分支的，多功能连接体部分。在一些情况下，树突型连接体包括pamam树枝状高分子。
[0267]
在一些实施方式中，连接体是无痕连接体或其中切割后不留下与抗体或载荷的连接体部分(例如，原子或连接体基团)的连接体。示例性无痕连接体包括但不限于锗连接体、硅连接体、硫连接体、硒连接体、氮连接体、磷连接体、硼连接体、铬连接体或苯酰肼连接体。在一些情况下，连接体是如hejesen等，“a无痕aryl-triazene linker for dna-directed chemistry,”org biomol chem 11(15):2493-2497(2013)中描述的无痕芳基-三氮烯连接体。在一些情况下，连接体是blaney等，“无痕solid-phase organic synthesis,”chem.rev.102:2607-2024(2002)中描述的无痕连接体。在一些情况下，连接体是如美国专利号6,821,783中描述的无痕连接体。药物制剂
[0268]
用于治疗如本文所述的疾病的药物制剂可包括上文描述的抗gal3抗体或其结合片段。抗gal3抗体或其结合片段可被配制用于全身施用。可替选地，抗gal3抗体或其结合片段可被配制用于肠胃外施用。
[0269]
在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段配制成药物组合物，所述药物组合物用于通过但不限于肠胃外(例如，静脉内、皮下、肌内、动脉内、皮内、腹膜内、玻璃体内、脑内或脑室内)、口服、鼻内、口腔、直肠或经皮施用途径向受试者施用。在一些情况下，本文所述的药物组合物被配制用于肠胃外(例如，静脉内、皮下、肌肉内、动脉内、皮内、腹膜内、玻璃体内、脑内或脑室内)施用。在其他情况下，本文所述的药物组合物被配制用于全身施用。
在其他情况下，本文所述的药物组合物被配制用于口服施用。在仍其他情况中，本文所述的药物组合物被配制用于鼻内施用。
[0270]
在一些情况下，药物组合物进一步包括ph调节剂或缓冲剂，其包括酸，比如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱，比如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠、三羟甲基氨基甲烷；和缓冲液，比如柠檬酸盐/右旋糖、碳酸氢钠和氯化铵。这种酸、碱和缓冲液以使组合物的ph保持在可接受范围内所需的量被包括。
[0271]
在一些情况下，药物组合物包括使组合物的渗透压为可接受范围所需的量的一种或多种盐。这种盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯化物、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、硼酸盐、磷酸盐、碳酸氢盐、硫酸盐、硫代硫酸盐或亚硫酸氢盐阴离子的盐；合适的盐包括氯化钠、氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。
[0272]
在一些情况下，药物组合物进一步包括用于稳定化合物的稀释剂，因为它们可以提供更稳定的环境。溶解在缓冲溶液中的盐(其也可以提供ph控制或维持)在本领域中用作稀释剂，包括但不限于磷酸盐缓冲盐水溶液。在某些情况下，稀释剂增加组合物的体积以促进压缩或产生足够的体积以用于胶囊填充的均质共混物。这种化合物包括例如，乳糖、淀粉、甘露醇、山梨糖醇、右旋糖、微晶纤维素比如磷酸氢钙，磷酸二钙二水合物；磷酸三钙、磷酸钙；无水乳糖、喷雾干燥乳糖；预糊化淀粉、可压缩糖，比如(amstar)；甘露醇、羟丙基甲基纤维素、醋酸硬脂酸羟丙基甲基纤维素、蔗糖基稀释剂、糖果糖；一水一碱式硫酸钙、二水硫酸钙；三水乳酸钙，葡萄糖结合剂；水解谷物固体，直链淀粉；粉状纤维素、碳酸钙；甘氨酸、高岭土；甘露醇、氯化钠；肌醇、膨润土等。
[0273]
在一些实施方式中，药物制剂包括但不限于水性液体分散体、自乳化分散体、固溶体、脂质体分散体、气溶胶、固体剂型、粉末、速释制剂、控释制剂、速溶制剂、片剂、胶囊、丸剂、缓释制剂、延长释放制剂、脉冲释放制剂、多颗粒制剂(例如，纳米颗粒制剂)以及混合的速释和控释制剂。
[0274]
在一些情况下，药物制剂可进一步包括另外的治疗剂。另外的治疗剂的非限制性示例包括：α-葡糖苷酶抑制剂，包括阿卡波糖和米格列醇双胍类药物，包括二甲双胍-阿格列汀二甲双胍-坎格列净二甲双胍-达格列净(xr)、二甲双胍-恩格列净二甲双胍-格列吡嗪、二甲双胍-格列本脲二甲双胍-利格列汀二甲双胍-吡格列酮二甲双胍-瑞格列奈二甲双胍-罗格列酮二甲双胍-沙格列汀(xr)和二甲双胍-西格列汀多巴胺激动剂，包括溴隐亭二肽基肽酶-4(dpp-4)抑制剂，包括阿格列汀阿格列汀-二甲双胍阿格列汀-吡格列酮利格列汀利格列汀-恩格列净利格列汀-二甲双胍沙格列汀沙格列汀-二甲双胍(xr)、西格列汀西格列汀-二甲双胍(
和xr)，以及西格列汀和辛伐他汀胰高血糖素样肽-1受体激动剂(glp-1受体激动剂)，包括阿必鲁肽度拉鲁肽艾塞那肽艾塞那肽缓释剂和利拉鲁肽索马鲁肽格列奈类，包括那格列奈瑞格列奈和瑞格列奈-二甲双胍钠-葡萄糖转运蛋白(sglt)2抑制剂，包括达格列净达格列净-二甲双胍(xr)、卡格列净卡格列净-二甲双胍恩格列净恩格列净-利拉利汀恩格列净-二甲双胍和埃格列净磺酰脲类，包括格列美脲格列美脲-吡格列酮格列美脲-罗格列酮格列齐特、格列吡嗪格列吡嗪-二甲双胍格列本脲格列本脲格列本脲-二甲双胍氯磺丙脲妥拉磺脲和甲苯磺丁脲噻唑烷二酮类，包括罗格列酮罗格列酮-格列美脲罗格列酮-二甲双胍吡格列酮吡格列酮-阿格列汀吡格列酮-格列美脲吡格列酮-二甲双胍(actoplusactoplusxr)。治疗性方案
[0275]
在一些实施方式中，本文公开的抗gal3抗体或其结合片段被施用用于治疗应用。在一些实施方式中，抗gal3抗体或其结合片段每天一次、每天两次、每天三次或更多次施用。抗gal3抗体或其结合片段日常、每天、每隔一天、每周五天、每周一次、每隔一周、每月两周、每月三周、每月一次、每月两次、每月三次或更多施用。抗gal3抗体施用至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、18个月、2年、3年或更长。
[0276]
在患者状态确实改善的情况下，根据医生的判断，继续给予抗gal3抗体或其结合片段的施用；可替选地，正在施用的抗gal3抗体或其结合片段的剂量被暂时减少或暂时暂停一段时间长度(即“休药期”)。在一些情况下，休药期的长度在2天和1年之间变化，包括仅作为示例，2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天或365天。在休药期期间的剂量减少为10％-100％，包括，仅通过示例，10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
[0277]
一旦患者的病症出现改善，必要时施用维持剂量。随后，由于症状的作用，将施用的剂量或频率或二者降低至维持治疗的疾病、紊乱或病症的水平。
[0278]
在一些实施方式中，对应于这种量的给定试剂的量取决于比如具体化合物、疾病的严重程度、需要治疗的受试者或宿主的特征(例如，体重)的因素，但是然而，根据围绕病
例的具体情况以本领域已知的方式常规地确定，包括例如正施用的特定药剂、施用途径和正被治疗的受试者或宿主。在一些情况下，所需剂量方便地以单一剂量或作为同时(或在短时间内)或以适当间隔，例如作为每天两个、三个、四个或更多个子剂量(sub-dose)施用的分开剂量提供。
[0279]
前述范围仅是建议性的，因为关于个体治疗方案的变量数量很大，并且与这些推荐值的相当大的偏移并不少见。这种剂量取决于许多变量而改变，不限于使用的化合物的活性、待治疗的疾病或病症、施用方式、个体受试者的要求、正治疗的疾病或病症的严重性，以及从业者的判断。
[0280]
在一些实施方式中，这种治疗性方案的毒性和治疗功效通过细胞培养或实验动物中的标准药物程序确定，包括但不限于ld50(对50％群体致死的剂量)和ed50(在50％的群体中治疗有效的剂量)。毒性作用与治疗作用之间的剂量比是治疗指数，并且用ld50和ed50之间的比表达。优选展示出高治疗指数的化合物。从细胞培养测定和动物研究中获得的数据用于制定一系列用于人的剂量。这种化合物的剂量优选地位于以最小毒性包括ed 50的循环浓度范围内。剂量在该范围内变化，这取决于所采用的剂型和所利用的施用途径。试剂盒/制品
[0281]
在某些实施方式中，本文公开了与本文所述的一种或多种组合物和方法使用的试剂盒和制品。这种试剂盒包括载体、包装或容器，其被隔开以容纳一个或多个容器，例如小瓶、管等，每个容器包括用于本文所述的方法的单独元件之一。合适的容器包括，例如瓶子、小瓶、注射器和试管。在一个实施方式中，容器由各种材料比如玻璃或塑料形成。
[0282]
本文提供的制品含有包装材料。药物包装材料的示例包括但不限于泡罩包装、瓶子、管、袋、容器、瓶子和任何适用于选定制剂和预期施用和治疗模式的包装材料。
[0283]
例如，容器包括本文公开的抗gal3抗体、用于产生本文所述的一种或多种抗体的宿主细胞和/或包括编码本文所述抗体的核酸分子的载体。这种试剂盒任选地包括与其在本文所述的方法中的使用相关的识别说明或标签或指令。
[0284]
试剂盒通常包括列出内容和/或使用说明的标签，以及具有使用说明的包装说插页。通常还将包括一组说明。
[0285]
在一个实施方式中，标签在容器上或与容器相关。在一个实施方式中，当形成标签的字母、数字或其他字符被附着、模制或蚀刻到容器本身中时，标签位于容器上；当标签存在于也容纳容器的贮器或载体中时，标签与容器相关，例如作为包装插页。在一个实施方式中，标签用于指示内容物将用于特定治疗应用。标签还指示比如在本文所述的方法中使用内容物的指导。
[0286]
在某些实施方式中，药物组合物存在于包含一种或多种含有本文提供的化合物的单位剂型的包装或分配器装置中。例如，包装含有金属或塑料箔，例如泡罩包装。在一个实施方式中，包装或分配器装置附有施用说明。在一个实施方式中，包装或分配器还附有与容器相关的通知，该通知以管理药物制剂的制造、使用或销售的政府机构规定的形式，该通知反映了该机构对用于人或兽医施用的药物形式的批准。例如，这种通知是美国食品和药物管理局批准的处方药物标签或批准的产品插页。在一个实施方式中，还制备含有在相容的药物载体中配制的本文提供的化合物的组合物，将其置于合适的容器中，并且标记用于治疗指定病症。
[0287]
本文提供的一些实施方式通过以下提供的带编号的排列进行描述，并且还提供为可能的组合或重叠实施方式：
[0288]
1.一种破坏半乳凝素-3(gal3)和胰岛素受体之间的相互作用的方法，方法包括：
[0289]
使gal3和胰岛素受体之间的相互作用与选择性结合gal3并且破坏gal3和胰岛素受体之间的相互作用的抗体或其结合片段接触。
[0290]
2.根据排列1所述的方法，其中gal3由细胞表达。
[0291]
3.根据排列1所述的方法，其中gal3由细胞分泌。
[0292]
4.根据排列1-3的任一项所述的方法，其中胰岛素受体由细胞表达。
[0293]
5.根据排列1-4的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段结合至gal3的n-末端结构域。
[0294]
6.根据排列1-5的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段结合至肽1(adnfslhdalsgsgnpnpqg；seq id no:3)、肽4(gaggypgasypgaypgqapp；seq id no:6)、肽6(gaypgqappgaypgapgayp；seq id no:8)、肽7(aypgapgaypgapapgvypg；seq id no:9)或其组合限定的gal3的区域内存在的表位。
[0295]
7.根据排列1-6的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段结合至包括gxypg的氨基酸序列的gal3的表位，其中x是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
[0296]
8.根据排列1-7的任一项所述的方法，其中相互作用降低至不存在抗体或其结合片段的情况下的相互作用的小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％、小于50％、小于45％、小于40％、小于35％、小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于5％或小于1％。
[0297]
9.根据排列1-8的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段以小于1nm、小于1.2nm、小于2nm、小于5nm、小于10nm、小于13.5nm、小于15nm、小于20nm、小于25nm或小于30nm的解离常数(kd)结合至gal3。
[0298]
10.根据排列1-9的任一项所述的方法，其中抗体包括(1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区；和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区，其中
[0299]vl-cdr1包括与根据seq id no:71-89的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0300]vl-cdr2包括与根据seq id no:90-100的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0301]vl-cdr3包括与根据seq id no:101-115的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0302]vh-cdr1包括与根据seq id no:27-38的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0303]vh-cdr2包括与根据seq id no:39-53的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，和
[0304]vh-cdr3包括与根据seq id no:54-70的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。
[0305]
11.根据排列1-10的任一项所述的方法，其中抗体包括表9中阐释的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3、v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的组合。
[0306]
12.根据排列1-11的任一项所述的方法，其中抗体选自由下述组成的组中：13h12.2f8、19d9.2e5、14h10.2c9、2d10.2b2、4a11.2b5、6h6.2d6、20h5.a3、19b5.2e6、23h9.2e4、20d11.2c6、15g7.2a7、4g2.2g6、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、15f10.2d6、12g5.d7、24d12.2h9、13g4.2f8、9h2.2h1、imt-001(tb001)和imt-006(tb006)。
[0307]
13.根据排列1-12的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段包括人源化抗体。
[0308]
14.根据排列1-13的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段包括全长抗体或其结合片段。
[0309]
15.根据排列1-14的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段包括双特异性抗体或其结合片段。
[0310]
16.根据排列1-15的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段包括单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdab)或骆驼抗体或其结合片段。
[0311]
17.根据排列1-16的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段包括igg框架。
[0312]
18.根据排列1-17的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段包括igg1、igg2或igg4框架。
[0313]
19.一种治疗需要其的受试者的糖尿病的方法，方法包括：向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体之间的相互作用的抗体或其结合片段，从而治疗受试者的糖尿病。
[0314]
20.根据排列19所述的方法，其中糖尿病是胰岛素依赖性糖尿病。
[0315]
21.根据排列19所述的方法，其中糖尿病是胰岛素非依赖性糖尿病。
[0316]
22.根据排列19所述的方法，其中糖尿病是i型糖尿病。
[0317]
23.根据排列19所述的方法，其中糖尿病是ii型糖尿病。
[0318]
24.根据排列19-23的任一项所述的方法，其中治疗包括降低需要其的受试者的葡萄糖耐量。
[0319]
25.根据排列19-24的任一项所述的方法，其中治疗包括降低需要其的受试者的胰岛素敏感性。
[0320]
26.根据排列19-25的任一项所述的方法，其中治疗包括降低需要其的受试者的体重增加。
[0321]
27.根据排列19-26的任一项所述的方法，其中治疗包括降低需要其的受试者的肝脂肪变性。
[0322]
28.治疗需要其的受试者的非酒精性脂肪性肝病(nafld)的方法，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体之间的相互作用的抗体或其结合片段，从而治疗受试者的nafld。
[0323]
29.治疗需要其的受试者的非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体之间的相互作用的抗体或其结合片段，从而治疗受试者的nash。
[0324]
30.根据排列19-29的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段结合至gal3的n-末端结构域。
[0325]
31.根据排列19-30的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段结合至由肽1
(adnfslhdalsgsgnpnpqg；seq id no:3)、肽4(gaggypgasypgaypgqapp；seq id no:6)、肽6(gaypgqappgaypgapgayp；seq id no:8)、肽7(aypgapgaypgapapgvypg；seq id no:9)或其组合限定的gal3的区域内存在的表位。
[0326]
32.根据排列19-31的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段结合至包括gxypg的氨基酸序列的gal3的表位，其中x是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
[0327]
33.根据排列19-32的任一项所述的方法，其中相互作用降低至不存在抗体或其结合片段的情况下的相互作用的小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％、小于50％、小于45％、小于40％、小于35％、小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于5％或小于1％。
[0328]
34.根据排列19-33的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段以小于1nm、小于1.2nm、小于2nm、小于5nm、小于10nm、小于13.5nm、小于15nm、小于20nm、小于25nm或小于30nm的解离常数(kd)结合至gal3。
[0329]
35.根据排列19-34的任一项所述的方法，其中抗体包括(1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区；和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区，其中
[0330]vl-cdr1包括与根据seq id no:71-89的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0331]vl-cdr2包括与根据seq id no:90-100的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0332]vl-cdr3包括与根据seq id no:101-115的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0333]vh-cdr1包括与根据seq id no:27-38的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0334]vh-cdr2包括与根据seq id no:39-53的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，和
[0335]vh-cdr3包括与根据seq id no:54-70的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。
[0336]
36.根据排列19-35的任一项所述的方法，其中抗体包括表9中阐述的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3、v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的组合。
[0337]
37.根据排列19-36的任一项所述的方法，其中抗体选自由下述组成的组中：13h12.2f8、19d9.2e5、14h10.2c9、2d10.2b2、4a11.2b5、6h6.2d6、20h5.a3、19b5.2e6、23h9.2e4、20d11.2c6、15g7.2a7、4g2.2g6、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、15f10.2d6、12g5.d7、24d12.2h9、13g4.2f8、9h2.2h1、imt-001和imt-006。
[0338]
38.根据排列19-37的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段包括人源化抗体。
[0339]
39.根据排列19-38的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段包括全长抗体或其结合片段。
[0340]
40.根据排列19-39的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段包括双特异性抗体或其结合片段。
[0341]
41.根据排列19-40的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段包括单价fab’、
二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdab)或骆驼抗体或其结合片段。
[0342]
42.根据排列19-41的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段包括igg框架。
[0343]
43.根据排列19-42的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段包括igg1、igg2或igg4框架。
[0344]
44.根据排列19-43的任一项所述的方法，其中受试者被诊断患有i型糖尿病或ii型糖尿病。
[0345]
45.根据排列19-44的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段被配制用于全身施用。
[0346]
46.根据排列19-45的任一项所述的方法，其中抗体或其结合片段被配制用于肠胃外施用。
[0347]
47.根据排列19-46的任一项所述的方法，其中受试者是哺乳动物。
[0348]
48.根据排列47所述的方法，其中哺乳动物是人。
[0349]
49.一种抗gal3抗体，其包括(1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区；和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区，其中
[0350]vl-cdr1包括与根据seq id no:71-89的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0351]vl-cdr2包括与根据seq id no:90-100的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0352]vl-cdr3包括与根据seq id no:101-115的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0353]vh-cdr1包括与根据seq id no:27-38的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0354]vh-cdr2包括与根据seq id no:39-53的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，和
[0355]vh-cdr3包括与根据seq id no:54-70的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。
[0356]
50.根据排列49所述的抗gal3抗体，其中抗gal3抗体包括表9中阐释的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3、v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的组合。
[0357]
51.根据排列49或50所述的抗gal3抗体，其中抗gal3抗体选自由下述组成的组中：6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、4g2.2g6、13h12.2f8、19b5.2e6、15g7.2a7、23h9.2e4、19d9.2e5、2d10.2b2、4a11.2b5、14h10.2c9、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、15f10.2d6、imt-001(tb001)和imt-006(tb006)。
[0358]
52.一种结合至人gal3并且与抗gal3抗体竞争结合至人gal3的抗体，其中抗gal3抗体选自由下述组成的组中：6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、4g2.2g6、13h12.2f8、19b5.2e6、15g7.2a7、23h9.2e4、19d9.2e5、2d10.2b2、4a11.2b5、14h10.2c9、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8和15f10.2d6、imt001和imt006。
[0359]
53.一种鉴定能够破坏gal3和胰岛素受体之间的相互作用的抗体的方法，方法包括：
[0360]
(a)使gal3蛋白质与选择性结合至gal3的抗体接触，从而形成gal3-抗体复合物；
[0361]
(b)使gal3-抗体复合物与胰岛素受体蛋白质接触；
[0362]
(c)去除未结合的胰岛素受体蛋白质；和
[0363]
(d)检测结合至gal3-抗体复合物的胰岛素受体蛋白质；
[0364]
其中当(d)中未检测到胰岛素受体蛋白质时，抗体能够破坏gal3和胰岛素受体的相互作用。
[0365]
54.根据排列53所述的方法，其中方法包括免疫测定。
[0366]
55.根据排列54所述的方法，其中免疫测定是酶联免疫吸附测定。
[0367]
56.一种破坏半乳凝素-3(gal3)和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间的相互作用的方法，方法包括：
[0368]
使gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间的相互作用与选择性结合至gal3并破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间的相互作用的抗gal3抗体或其结合片段接触。
[0369]
57.根据排列56所述的方法，其中gal3由细胞表达。
[0370]
58.根据排列56所述的方法，其中gal3由细胞分泌。
[0371]
59.根据排列56-58的任一项所述的方法，其中胰岛素受体或整联蛋白或二者由细胞表达。
[0372]
60.根据排列56-59的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段结合至gal3的n-末端结构域。
[0373]
61.根据排列56-60的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段结合至seq id no:3-26的一种或多种肽。
[0374]
62.根据排列56-61的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段结合至由肽1(adnfslhdalsgsgnpnpqg；seq id no:3)、肽4(gaggypgasypgaypgqapp；seq id no:6)、肽6(gaypgqappgaypgapgayp；seq id no:8)、肽7(aypgapgaypgapapgvypg；seq id no:9)或其组合限定的gal3的区域内存在的表位。
[0375]
63.根据排列56-62的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段结合至包括gxypg的氨基酸序列的gal3的表位，其中x是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
[0376]
64.根据排列56-63的任一项所述的方法，其中相互作用降低至不存在抗gal3抗体或其结合片段的情况下的相互作用的小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％、小于50％、小于45％、小于40％、小于35％、小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于5％或小于1％。
[0377]
65.根据排列56-64的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段以小于1nm、小于1.2nm、小于2nm、小于5nm、小于10nm、小于13.5nm、小于15nm、小于20nm、小于25nm或小于30nm的解离常数(kd)的结合至gal3。
[0378]
66.根据排列56-65的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括(1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区；和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区，其中
[0379]vl-cdr1包括与根据seq id no:100-128的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
id no:215内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0400]
j)seq id no:178内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:216内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0401]
k)seq id no:179内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:217内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0402]
l)seq id no:180内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:218内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0403]
m)seq id no:181内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:219内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0404]
n)seq id no:181内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:220内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0405]
o)seq id no:182内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:221内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0406]
p)seq id no:183内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:222内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0407]
q)seq id no:184内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:223内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0408]
r)seq id no:185内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:224内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0409]
s)seq id no:186内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:225内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0410]
t)seq id no:187内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:226内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0411]
u)seq id no:188内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:227内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0412]
v)seq id no:189内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:228内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0413]
w)seq id no:190内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:229内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0414]
x)seq id no:191内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:230内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0415]
y)seq id no:192内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:231内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0416]
z)seq id no:193内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:232内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0417]
aa)seq id no:194内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:233内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0418]
ab)seq id no:195内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:234内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0419]
ac)seq id no:196内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:235内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0420]
ad)seq id no:197内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:236内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0421]
ae)seq id no:198内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:237内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0422]
af)seq id no:199内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:238内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0423]
ag)seq id no:197内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:239内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0424]
ah)seq id no:200内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:240内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0425]
ai)seq id no:201内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:241内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0426]
aj)seq id no:202内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:242内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0427]
ak)seq id no:203内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:240内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0428]
al)seq id no:204内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:243内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0429]
am)seq id no:205内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:244内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3
[0430]
an)seq id no:206内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:245内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3。
[0431]
73.根据排列56-72的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括：
[0432]
a)seq id no:169的重链可变区和seq id no:207的轻链可变区；
[0433]
b)seq id no:170的重链可变区和seq id no:208的轻链可变区；
[0434]
c)seq id no:171的重链可变区和seq id no:209的轻链可变区；
[0435]
d)seq id no:172的重链可变区和seq id no:210的轻链可变区；
[0436]
e)seq id no:173的重链可变区和seq id no:211的轻链可变区；
[0437]
f)seq id no:174的重链可变区和seq id no:212的轻链可变区；
[0438]
g)seq id no:175的重链可变区和seq id no:213的轻链可变区；
[0439]
h)seq id no:176的重链可变区和seq id no:214的轻链可变区；
[0440]
i)seq id no:177的重链可变区和seq id no:215的轻链可变区；
[0441]
j)seq id no:178的重链可变区和seq id no:216的轻链可变区；
[0442]
k)seq id no:179的重链可变区和seq id no:217的轻链可变区；
[0443]
l)seq id no:180的重链可变区和seq id no:218的轻链可变区；
[0444]
m)seq id no:181的重链可变区和seq id no:219的轻链可变区；
[0445]
n)seq id no:181的重链可变区和seq id no:220的轻链可变区；
[0446]
o)seq id no:182的重链可变区和seq id no:221的轻链可变区；
[0447]
p)seq id no:183的重链可变区和seq id no:222的轻链可变区；
[0448]
q)seq id no:184的重链可变区和seq id no:223的轻链可变区；
[0449]
r)seq id no:185的重链可变区和seq id no:224的轻链可变区；
[0450]
s)seq id no:186的重链可变区和seq id no:225的轻链可变区；
[0451]
t)seq id no:187的重链可变区和seq id no:226的轻链可变区；
[0452]
u)seq id no:188的重链可变区和seq id no:227的轻链可变区；
[0453]
v)seq id no:189的重链可变区和seq id no:228的轻链可变区；
[0454]
w)seq id no:190的重链可变区和seq id no:229的轻链可变区；
[0455]
x)seq id no:191的重链可变区和seq id no:230的轻链可变区；
[0456]
y)seq id no:192的重链可变区和seq id no:231的轻链可变区；
[0457]
z)seq id no:193的重链可变区和seq id no:232的轻链可变区；
[0458]
aa)seq id no:194的重链可变区和seq id no:233的轻链可变区；
[0459]
ab)seq id no:195的重链可变区和seq id no:234的轻链可变区；
[0460]
ac)seq id no:196的重链可变区和seq id no:235的轻链可变区；
[0461]
ad)seq id no:197的重链可变区和seq id no:236的轻链可变区；
[0462]
ae)seq id no:198的重链可变区和seq id no:237的轻链可变区；
[0463]
af)seq id no:199的重链可变区和seq id no:238的轻链可变区；
[0464]
ag)seq id no:197的重链可变区和seq id no:239的轻链可变区；
[0465]
ah)seq id no:200的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；
[0466]
ai)seq id no:201的重链可变区和seq id no:241的轻链可变区；
[0467]
aj)seq id no:202的重链可变区和seq id no:242的轻链可变区；
[0468]
ak)seq id no:203的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；
[0469]
al)seq id no:204的重链可变区和seq id no:243的轻链可变区；
[0470]
am)seq id no:205的重链可变区和seq id no:244的轻链可变区
[0471]
an)seq id no:206的重链可变区和seq id no:245的轻链可变区。
[0472]
74.根据排列56-73的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段选自由下述组成的组中：13h12.2f8、19d9.2e5、14h10.2c9、2d10.2b2、4a11.2b5、6h6.2d6、20h5.a3、19b5.2e6、23h9.2e4、20d11.2c6、15g7.2a7、4g2.2g6、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、15f10.2d6、12g5.d7、24d12.2h9、13g4.2f8、9h2.2h1、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、847.14h4、mimt001、imt-001(tb001)和imt-006(tb006)。
[0473]
75.根据排列56-74的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括人源化抗体。
[0474]
76.根据排列56-75的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括全长抗体或其结合片段。
[0475]
77.根据排列56-76的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括双特异性抗体或其结合片段。
[0476]
78.根据排列56-77的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdab)或骆驼抗体或其结合片段。
[0477]
79.根据排列56-78的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括igg框架。
[0478]
80.根据排列56-79的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括igg1、igg2或igg4框架。
[0479]
81.根据排列56-80的任一项所述的方法，其中破坏gal3和整联蛋白之间的相互作用减少淋巴细胞粘附。
[0480]
82.根据排列81所述的方法，其中淋巴细胞粘附减少至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％或由任何两个上述的百分比限定的范围内的任何百分比。
[0481]
83.治疗需要其的受试者的糖尿病的方法，方法包括：向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的糖尿病。
[0482]
84.根据排列83所述的方法，其中糖尿病是胰岛素依赖性糖尿病。
[0483]
85.根据排列83所述的方法，其中糖尿病是胰岛素非依赖性糖尿病。
[0484]
86.根据排列83所述的方法，其中糖尿病是i型糖尿病。
[0485]
87.根据排列83所述的方法，其中糖尿病是ii型糖尿病。
[0486]
88.根据排列83-87的任一项所述的方法，其中治疗包括降低需要其的受试者的葡萄糖耐量。
[0487]
89.根据排列83-88的任一项所述的方法，其中治疗包括降低需要其的受试者的胰岛素敏感性。
[0488]
90.根据排列83-89的任一项所述的方法，其中治疗包括降低需要其的受试者的体重增加。
[0489]
91.根据排列83-90的任一项所述的方法，其中治疗包括降低需要其的受试者的肝脂肪变性。
[0490]
92.根据排列83-91的任一项所述的方法，其进一步包括在施用步骤之前将受试者选择为患有糖尿病或处于患糖尿病的风险。
[0491]
93.根据排列83-92的任一项所述的方法，其进一步包括在施用步骤之后检测受试者的与糖尿病相关症状的改善。
[0492]
94.根据排列83-93的任一项所述的方法，其中胰岛素受体包括seq id no:2的序列。
[0493]
95.根据排列83-94的任一项所述的方法，其中整联蛋白选自itga1、itga2、itga3、itga4、itga5、itga6、itga7、itga8、itga9、itga10、itga11、itgad、itgae、itgal、itgam、itgav、itga2b、itga2x、itgb1、itgb2、itgb3、itgb4、itgb5、itgb6、itgb7、itgb8或其任何组合。
[0494]
96.根据排列83-95的任一项所述的方法，其中整联蛋白包括选自seq id no:339-342的序列。
[0495]
97.根据排列83-96的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段与一种或多种另外的治疗组合物一起施用。
[0496]
98.根据排列97所述的方法，其中一种或多种另外的治疗组合物包括胰岛素、胰岛素衍生物或其类似物、门冬胰岛素、赖谷胰岛素、赖脯胰岛素、低精蛋白胰岛素、德谷胰岛素、地特胰岛素、锌胰岛素、甘精胰岛素、钒、双胍类、二甲双胍、苯乙双胍、丁双胍、噻唑烷二酮、罗格列酮、吡格列酮、曲格列酮、托利咪酮、磺酰脲、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、氯磺丙脲、格列吡嗪、格列本脲、格列美脲、格列齐特、格列吡脲、格列喹酮、格列奈类、瑞格列奈、那格列奈、α-葡萄糖苷酶抑制剂、米格列醇、阿卡波糖、伏格列波糖、肠促胰岛素、胰高血糖素样肽1、胰高血糖素样肽激动剂、艾塞那肽、利拉鲁肽、他斯波鲁肽、利西拉肽、索马鲁肽、度拉鲁肽、胃抑制肽、二肽基肽酶-4抑制剂、维格列汀、西格列汀、沙格列汀、利格列汀、阿格列汀、七格列汀、特力列汀、吉格列汀、普兰林肽、达格列汀、卡格列净、恩格列净或瑞格列净或其任何组合。
[0497]
99.治疗需要其的受试者的炎症性肠综合征的方法，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和整联蛋白之间的相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的炎症性肠综合征。
[0498]
100.根据排列99所述的方法，其中炎症性肠综合征是溃疡性结肠炎或克罗恩氏病或二者。
[0499]
101.根据排列99或100所述的方法，其进一步包括在施用步骤之前将受试者选择为患有炎症性肠综合征或处于患炎症性肠综合征的风险。
[0500]
102.根据排列99-101的任一项所述的方法，其进一步包括在施用步骤之后受试者的与炎症性肠综合征的相关症状的改善。
[0501]
103.根据排列99-102的任一项所述的方法，其中破坏gal3和整联蛋白之间的相互作用减少受试者的淋巴细胞粘附。
[0502]
104.根据排列103所述的方法，其中淋巴细胞粘附减少至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％或由任何两个上述的百分比限定的范围内的任何百分比。
[0503]
105.根据排列99-104的任一项所述的方法，其中整联蛋白选自itga1、itga2、itga3、itga4、itga5、itga6、itga7、itga8、itga9、itga10、itga11、itgad、itgae、itgal、itgam、itgav、itga2b、itga2x、itgb1、itgb2、itgb3、itgb4、itgb5、itgb6、itgb7、itgb8或其任何组合。
[0504]
106.根据排列99-105的任一项所述的方法，其中整联蛋白包括选自seq id no:339-342的序列。
[0505]
107.根据排列99-106的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段与一种或多种另外的治疗组合物一起施用。
[0506]
108.根据排列107所述的方法，其中一种或多种另外的治疗组合物包括美沙拉嗪、免疫抑制剂、强的松、tnf抑制剂、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤或利福昔明或其任何组合。
[0507]
109.一种治疗需要其的受试者的非酒精性脂肪性肝病(nafld)的方法，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体之间相互作用的抗gal3抗体
或其结合片段，从而治疗受试者的nafld。
[0508]
110.一种治疗需要其的受试者的非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的nash。
[0509]
111.根据排列83-110的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段结合至gal3的n-末端结构域。
[0510]
112.根据排列83-111的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段结合至seq id no:3-26的一种或多种肽。
[0511]
113.根据排列83-112的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段结合至由肽1(adnfslhdalsgsgnpnpqg；seq id no:3)、肽4(gaggypgasypgaypgqapp；seq id no:6)、肽6(gaypgqappgaypgapgayp；seq id no:8)、肽7(aypgapgaypgapapgvypg；seq id no:9)或其组合限定的gal3的区域内存在的表位。
[0512]
114.根据排列83-113的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段结合至包括gxypg的氨基酸序列的gal3的表位，其中x是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸。
[0513]
115.根据排列83-114的任一项所述的方法，其中相互作用降低至不存在抗gal3抗体或其结合片段的情况下的相互作用的小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％、小于50％、小于45％、小于40％、小于35％、小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于5％或小于1％。
[0514]
116.根据排列83-115的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段以小于1nm、小于1.2nm、小于2nm、小于5nm、小于10nm、小于13.5nm、小于15nm、小于20nm、小于25nm或小于30nm的解离常数(kd)结合至gal3。
[0515]
117.根据排列83-116的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括(1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区；和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区，其中
[0516]vl-cdr1包括与根据seq id no:100-128的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0517]vl-cdr2包括与根据seq id no:129-144的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0518]vl-cdr3包括与根据seq id no:145-168的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0519]vh-cdr1包括与根据seq id no:27-47的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0520]vh-cdr2包括与根据seq id no:48-69的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，和
[0521]vh-cdr3包括与根据seq id no:70-99的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。
[0522]
118.根据排列117所述的方法，其中重链可变区包括与根据seq id no:169-206的任何序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
[0523]
119.根据排117或118所述的方法，其中重链可变区选自由seq id no:169-206组
成的组。
[0524]
120.根据排列117-119的任一项所述的方法，其中轻链可变区包括与根据seq id no:207-245的任何序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
[0525]
121.根据排列117-120的任一项所述的方法，其中轻链可变区选自由seq id no:207-245组成的组。
[0526]
122.根据排列83-121的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括图36中阐释的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3、v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的组合。
[0527]
123.根据排列83-122的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括：
[0528]
a)seq id no:169内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:207内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0529]
b)seq id no:170内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:208内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0530]
c)seq id no:171内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:209内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0531]
d)seq id no:172内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:210内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0532]
e)seq id no:173内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:211内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0533]
f)seq id no:174内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:212内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0534]
g)seq id no:175内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:213内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0535]
h)seq id no:176内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:214内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0536]
i)seq id no:177内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:215内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0537]
j)seq id no:178内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:216内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0538]
k)seq id no:179内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:217内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0539]
l)seq id no:180内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:218内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0540]
m)seq id no:181内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:219内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0541]
n)seq id no:181内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:220内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0542]
o)seq id no:182内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:221内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
id no:241内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0563]
aj)seq id no:202内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:242内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0564]
ak)seq id no:203内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:240内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0565]
al)seq id no:204内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:243内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
[0566]
am)seq id no:205内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:244内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3
[0567]
an)seq id no:206内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:245内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3。
[0568]
124.根据排列83-123的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括：
[0569]
a)seq id no:169的重链可变区和seq id no:207的轻链可变区；
[0570]
b)seq id no:170的重链可变区和seq id no:208的轻链可变区；
[0571]
c)seq id no:171的重链可变区和seq id no:209的轻链可变区；
[0572]
d)seq id no:172的重链可变区和seq id no:210的轻链可变区；
[0573]
e)seq id no:173的重链可变区和seq id no:211的轻链可变区；
[0574]
f)seq id no:174的重链可变区和seq id no:212的轻链可变区；
[0575]
g)seq id no:175的重链可变区和seq id no:213的轻链可变区；
[0576]
h)seq id no:176的重链可变区和seq id no:214的轻链可变区；
[0577]
i)seq id no:177的重链可变区和seq id no:215的轻链可变区；
[0578]
j)seq id no:178的重链可变区和seq id no:216的轻链可变区；
[0579]
k)seq id no:179的重链可变区和seq id no:217的轻链可变区；
[0580]
l)seq id no:180的重链可变区和seq id no:218的轻链可变区；
[0581]
m)seq id no:181的重链可变区和seq id no:219的轻链可变区；
[0582]
n)seq id no:181的重链可变区和seq id no:220的轻链可变区；
[0583]
o)seq id no:182的重链可变区和seq id no:221的轻链可变区；
[0584]
p)seq id no:183的重链可变区和seq id no:222的轻链可变区；
[0585]
q)seq id no:184的重链可变区和seq id no:223的轻链可变区；
[0586]
r)seq id no:185的重链可变区和seq id no:224的轻链可变区；
[0587]
s)seq id no:186的重链可变区和seq id no:225的轻链可变区；
[0588]
t)seq id no:187的重链可变区和seq id no:226的轻链可变区；
[0589]
u)seq id no:188的重链可变区和seq id no:227的轻链可变区；
[0590]
v)seq id no:189的重链可变区和seq id no:228的轻链可变区；
[0591]
w)seq id no:190的重链可变区和seq id no:229的轻链可变区；
[0592]
x)seq id no:191的重链可变区和seq id no:230的轻链可变区；
[0593]
y)seq id no:192的重链可变区和seq id no:231的轻链可变区；
[0594]
z)seq id no:193的重链可变区和seq id no:232的轻链可变区；
[0595]
aa)seq id no:194的重链可变区和seq id no:233的轻链可变区；
[0596]
ab)seq id no:195的重链可变区和seq id no:234的轻链可变区；
[0597]
ac)seq id no:196的重链可变区和seq id no:235的轻链可变区；
[0598]
ad)seq id no:197的重链可变区和seq id no:236的轻链可变区；
[0599]
ae)seq id no:198的重链可变区和seq id no:237的轻链可变区；
[0600]
af)seq id no:199的重链可变区和seq id no:238的轻链可变区；
[0601]
ag)seq id no:197的重链可变区和seq id no:239的轻链可变区；
[0602]
ah)seq id no:200的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；
[0603]
ai)seq id no:201的重链可变区和seq id no:241的轻链可变区；
[0604]
aj)seq id no:202的重链可变区和seq id no:242的轻链可变区；
[0605]
ak)seq id no:203的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；
[0606]
al)seq id no:204的重链可变区和seq id no:243的轻链可变区；
[0607]
am)seq id no:205的重链可变区和seq id no:244的轻链可变区
[0608]
an)seq id no:206的重链可变区和seq id no:245的轻链可变区。
[0609]
125.根据排列83-124的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段选自由下述组成的组中：13h12.2f8、19d9.2e5、14h10.2c9、2d10.2b2、4a11.2b5、6h6.2d6、20h5.a3、19b5.2e6、23h9.2e4、20d11.2c6、15g7.2a7、4g2.2g6、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、15f10.2d6、12g5.d7、24d12.2h9、13g4.2f8、9h2.2h1、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、847.14h4、mimt001、imt-001(tb001)和imt-006(tb006)。
[0610]
126.根据排列83-125的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段通过肠内、口服、鼻内、肠胃外、颅内、皮下、肌内、皮内或静脉内或其任何组合施用
[0611]
127.根据排列83-126的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括人源化抗体。
[0612]
128.根据排列83-127的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括全长抗体或其结合片段。
[0613]
129.根据排列83-128的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括双特异性抗体或其结合片段。
[0614]
130.根据排列83-129的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdab)或骆驼抗体，或其结合片段。
[0615]
131.根据排列83-130的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括igg框架。
[0616]
132.根据排列83-131的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段包括igg1、igg2或igg4框架。
[0617]
133.根据排列83-132的任一项所述的方法，其中受试者被诊断患有i型糖尿病或ii型糖尿病。
[0618]
134.根据排列83-133的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段被配制
用于全身施用。
[0619]
135.根据排列83-134的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或其结合片段被配制用于肠胃外施用。
[0620]
136.根据排列83-135的任一项所述的方法，其中施用多于一种抗gal3抗体或结合片段。
[0621]
137.根据排列83-136的任一项所述的方法，其中受试者是哺乳动物。
[0622]
138.根据排列137所述的方法，其中哺乳动物是人。
[0623]
139.一种抗gal3抗体，其包括(1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区；和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区，其中
[0624]vl-cdr1包括与根据seq id no:100-128的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0625]vl-cdr2包括与根据seq id no:129-144的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0626]vl-cdr3包括与根据seq id no:145-168的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0627]vh-cdr1包括与根据seq id no:27-47的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，
[0628]vh-cdr2包括与根据seq id no:48-69的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，和
[0629]vh-cdr3包括与根据seq id no:70-99的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。
[0630]
140.根据排列139所述的抗gal3抗体，其中抗gal3抗体包括图36中阐释的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3、v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的组合。
[0631]
141.根据排列139或140所述的抗gal3抗体，其中抗gal3抗体选自由下述组成的组中：6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、4g2.2g6、13h12.2f8、19b5.2e6、15g7.2a7、23h9.2e4、19d9.2e5、2d10.2b2、4a11.2b5、14h10.2c9、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、15f10.2d6、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、847.14h4、mimt001、imt-001(tb001)和imt-006(tb006)。
[0632]
142.根据排列139-141的任一项所述的抗gal3抗体，其中抗gal3抗体选自由下述组成的组中：f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3和847.14h4。
[0633]
143.一种包括根据排列139-142的任一项所述的抗gal3抗体的药物制剂。
[0634]
144.根据排列143所述的药物制剂，用于治疗糖尿病。
[0635]
145.根据排列143所述的药物制剂，用于治疗炎症性肠病。
[0636]
146.根据排列143所述的药物制剂，用于治疗nafld和/或nash。
[0637]
147.一种结合至人gal3并且与抗gal3抗体竞争结合至人gal3的抗体，其中抗gal3
抗体选自由下述组成的组中：6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、4g2.2g6、13h12.2f8、19b5.2e6、15g7.2a7、23h9.2e4、19d9.2e5、2d10.2b2、4a11.2b5、14h10.2c9、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8和15f10.2d6、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、847.14h4、mimt001、imt001(tb001)和imt006(tb006)。
[0638]
148.一种用于鉴定能够破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间相互作用的抗体的方法，方法包括：
[0639]
(a)使gal3蛋白质与选择性结合至gal3的抗体或其结合片段接触，从而形成gal3-抗体复合物；
[0640]
(b)使gal3-抗体复合物与胰岛素受体或整联蛋白或二者接触；
[0641]
(c)去除未结合的胰岛素受体或整联蛋白或二者；和
[0642]
(d)检测结合至gal3-抗体复合物的胰岛素受体或整联蛋白或二者；
[0643]
其中当胰岛素受体或整联蛋白或二者在(d)中未检测到时，抗体或其结合片段能够破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者的相互作用。
[0644]
149.根据排列148所述的方法，其中方法包括免疫测定。
[0645]
150.根据排列149所述的方法，其中免疫测定是酶联免疫吸附测定。
[0646]
151.一种产生抗gal3抗体或其结合片段的方法，其包括：
[0647]
在细胞中表达编码抗gal3抗体或其结合片段的核酸；和
[0648]
从细胞分离表达的抗gal3抗体或其结合片段。
[0649]
152.根据排列151所述的方法，进一步包括浓缩抗gal3抗体或其结合片段至期望的浓度。
[0650]
153.根据排列151或152所述的方法，其中细胞是哺乳动物细胞、昆虫细胞或细菌细胞。
[0651]
154.根据排列151-153的任一项所述的方法，其中抗gal3抗体或结合片段是根据排列56-138所述的方法的任一项所述的抗gal3抗体或其结合片段。
实施例
[0652]
在以下实施例中更详细地公开了以上讨论的实施方式的一些方面，这些实施例不以任何方式旨在限制本公开的范围。本领域技术人员将理解，许多其他实施方式也落入本发明的范围内，如以上本文和权利要求中描述的。实施例1：具有和不具有gal3-insr阻断活性的gal3结合抗体的鉴定
[0653]
为了鉴定具有阻断gal3和insr组装能力的gal3结合抗体，在小鼠中进行了免疫活动。balb/c、fvb和cd-1f小鼠以7天间隔接种50μg的融合至连接体间隔的6-组氨酸标签，gal3-ecd-his(acro ga3-h5129；批号819-43ps1-5e)的gal3蛋白质连同tlr激动剂佐剂混合物(50μg mpl、20μg cpg、10μg聚(i:c)和10μg r848)，重复3次，随后接种仅50μg的gal3-his，其皮下施用至腹股沟、颈后和尾部部位的基底(base)以及飞节和腹膜内位点。按照iacuc方案处死动物，并且收获脾、股骨和淋巴结(腋窝的、副腋窝的、纵隔的、腹股沟浅层的、髂骨的、骶骨的和腘窝的)。在具有15ml dmem的组织培养皿中使用2个无菌磨砂载玻片
获得免疫化的淋巴结(ln)、脾和骨髓细胞的单细胞悬浮液。用装有18号针头的5ml注射器经端盖冲洗从股骨中提取骨髓。来自3只动物的细胞以1200rpm离心5分钟使形成小球，再悬浮于10ml的dmem(gibco 10564-011)中，并且通过血球计计数来计数(enumerate)有核细胞。将细胞以1200rpm使形成小球并且再悬浮于sc缓冲液(pbs、2％fbs和1mm edta)中，并且用制造商推荐的方案，以easysep
tm mouse cd138阳性选择试剂盒(stemcell technologies)分离浆细胞。富集的cd138阳性细胞以1200rpm离心5分钟使形成小球，再悬浮于50ml电融合缓冲液(eppendorf 940-00-220-6)中并且被计数。单独地，将sp2/0-mil6骨髓瘤细胞(atcc crl2016)以1200rpm离心5分钟使形成小球，再悬浮于50ml电融合缓冲液中并且被计数。骨髓瘤细胞和cd138阳性浆细胞以1:1比例组合，用电融合缓冲液将体积扩大至50ml，细胞以1200rpm离心5分钟使形成小球，并且丢弃上清液。在电融合缓冲液中反复洗涤和使形成小球的步骤后，将细胞再悬浮于电融合缓冲液中至10x10^6个细胞/ml的浓度，将达至9ml的细胞悬浮液添加至btx电融合腔室中，并且将细胞以800v电融合方案融合。融合的细胞静置5分钟，转移至含有40ml培养基mm(dmem、15％fbs、1％glutamax和1％pen/strep)的组织培养皿中，在37℃、8％co2孵育1小时，用移液管再悬浮，以1200rpm离心5分钟形成小球，再悬浮于clonacell hy liquid hat选择培养基(stemcell technologies)中，并且铺板于96孔组织培养平底板。10天后，对上清液取样并且通过elisa评估与分离的gal3的结合。将50μl的再悬浮于稀释剂(具有0.5％bsa的pbs)中的0.1μg/ml gal3-ecd-his(acro ga3-h5129；批号819-43ps1-5e)添加至每孔中45分钟，丢弃上清液并且用具有0.05％tween20的磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤板。将50μl的在稀释剂中1:5稀释的杂交瘤上清液添加至每个孔中1小时，随后用pbs/0.05％tween20连续5次300μl洗涤，然后50ul的稀释剂中1:3000稀释的缀合至辣根过氧化物酶(novex a16090)的山羊抗小鼠fc-特异性抗体添加至每个孔中1小时，随后用pbs/0.05％tween20连续5次300μl洗涤。洗涤后，将50μl的abts(novex#00-202-4)添加至每个孔中20-30分钟，然后在分光光度计(molecular devices)上以405nm的吸光度读数。
[0654]
评估阳性评分孔阻断gal3和insr缔合的能力。为了鉴定具有阻断gal3和insr相互作用能力的gal3靶向抗体，将纯化的gal3和insr蛋白质在以上描述的gal3免疫杂交瘤上清液存在下孵育，或没有抗体的情况下孵育，并且通过elisa评估蛋白质相互作用。将人半乳凝素-3蛋白质(acro biosystems，ga3-h5129)在pbs(corning，21-030-cm)中稀释至3μg/ml的浓度，并且添加至96孔elisa板(thermo fisher，44-2404-21)的孔中。在4℃孵育板过夜后，用pbst(具有0.05％tween 20[vwr,0777]的pbs)洗涤三次板。然后在室温轻轻振荡，用pbst中的2％bsa(emd millipore，126609)阻断板一小时。其后，丢弃pbst中的2％bsa，并且将pbst中2％bsa中的抗体或抑制剂(以20μg/ml、60μg/ml或180μm开始3倍稀释)添加至孔中。然后，以1:1的比例将pbst中2％bsa中的6μg/ml的人胰岛素受体(sino biological，11086-h08h)添加至孔中的抗体或抑制剂中。在室温轻轻振荡孵育板一小时。其后，用pbst洗涤三次板，并且将pbst中2％bsa中的0.3μg/ml的人insr生物素化抗体(r&d systems，baf1544)添加至孔中。轻轻振荡孵育板一小时，并且然后用pbst洗涤三次。然后，将抗生物素蛋白-hrp(1:2000)添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时，并且然后用pbst洗涤三次。然后，将tmb底物(thermo scientific，34029)添加至每个孔中。用1m hcl(jt baker，5620-02)终止反应并且使用酶标仪(molecular devices)在450nm的吸光度处读数。
[0655]
鉴定了几种具有强烈地阻断gal3与insr结合能力的hgal3结合抗体，图1和图2中
描绘，包括6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、4g2.2g6、13h12.2f8、19b5.2e6、15g7.2a7、23h9.2e4、19d9.2e5、2d10.2b2、4a11.2b5、14h10.2c9、3b11.2g2、13a12.2e5，其在3μg/ml的浓度将gal3和insr的结合降低至未阻断的样品的小于5％。此外，鉴定了具有在3μg/ml将抑制gal3-insr结合的能力降低至未阻断样品的15-25％水平的单克隆抗体，包括7d8.2d8和15f10.2d6。最后，鉴定了具有在3μg/ml对gal3-insr结合最小化影响30％或更少的能力的单克隆抗体，包括9h2.2h1、12g5.d7、13g4.2f8和24d12.2h9。
[0656]
为了评估用insr阻断gal3组装的能力是否是抗体对gal3的亲和力的功能，通过spr评估单克隆gal3抗体对gal3的亲和力。动力学实验在25℃在biacoret200上以高性能模式进行。将配体蛋白质、纯化抗体被捕获到与抗人fc或抗小鼠fc抗体偶联的cm5芯片上，一次将三种抗体分别捕获到流动池#2、3和4上，而流动池#1用作参考。将hbs-ep缓冲液中的分析物半乳糖凝集素-3以100、50、25、12.5、6.25、3.125和0nm的浓度以30μl/min的流速注入到所有四个流动池中。允许复合物分别缔合和解离240秒和300秒。用30秒注入10mm甘氨酸ph 1.7(流速30μl/min)再生表面。使用biacoret200评估软件v2.0内可获得的全局数据分析选项，将数据拟合到简单的1:1交互模型。
[0657]
gal3单克隆抗体的亲和力被确认对于所有研究的抗体都大于30nm(图3a)。重要地，15g7，在3μg/ml时将gal3和insr的组装减少大于99％的抗体展示出对gal3的27.8nm的亲和力，表明以具有等于或低于这个水平的亲和力的抗体阻断gal3和insr的组装的能力是可能的。相反地，很难阻断gal3-insr组装的gal3靶向抗体13g4.2f8、9h2.2h1、24d12.2h9和12g5.d7分别展示出18.4、2.53、4.13和1.9nm的亲和力。因此，小于10nm的对gal3的抗体亲和力不足以预测阻断gal3和insr组装的能力。实施例2：具有和不具有gal3-insr阻断活性的gal3靶向抗体结合至gal3的不同表位
[0658]
为了鉴定具有和不具有gal3-insr阻断活性的gal3抗体所结合的表位，产生了描述在图27中的表示gal3部分的24种氨基酸肽的文库，并且通过elisa评估每条肽结合gal3抗体的能力。将50μl的pbs中至少2μg/ml的hgal3肽或0.1μg/ml的全长人gal3蛋白(genscript)和人半乳凝素-3蛋白质(acro biosystems，ga3-h5129)在pbs(corning，21-030-cm)中分别稀释至至少2μg/ml或0.1μg/ml的浓度，并且添加至96孔elisa板(thermo fisher，44-2404-21)的孔中。在4℃孵育板过夜，用pbst(具有0.05％tween 20[vwr，0777]的pbs)洗涤三次板。然后在室温轻轻振荡，用2％bsa(emd millipore，126609)的pbst将板阻断一小时。其后，丢弃2％bsa的pbst并且在2％bsa的pbst中稀释人半乳凝素-3杂交瘤上清液或抗体至至少0.1μg/ml的浓度，并且添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时并且然后用pbst洗涤三次。然后，将2％bsa的pbst中稀释的山羊抗小鼠igg-hrp(jackson immunoresearch，115-036-1461)或山羊抗大鼠igg hrp(abcam，ab205720)(1:4000)添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板30分钟至1小时并且然后用pbst洗涤三次。然后，将tmb底物(thermo scientific，34029)添加至每个孔中。然后，将tmb底物(thermo scientific，34029)添加至每个孔中。用1m hcl(jt baker，5620-02)终止反应并且使用酶标仪(molecular devices)在450nm的吸光度处读数。
[0659]
在多个位置观察gal3结合抗体与肽阵列的结合，大多数结合在肽1-8(seq id no:3-10)中观察到，其总结在图3a中。显著地，所有具有强insr-gal3阻断活性的gal3结合抗体
都展示出与肽4、5、6或7结合的能力，对应于gal3的n-末端结构域中的肽序列。具体地，六种单独的具有强gal3-insr阻断活性的gal3结合抗体(6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、19b5.2e6、15g7.2a7、23h9.2e4)都结合了gal3的肽1，对应于gal3的氨基酸1-20，adnfslhdalsgsgnpnpqg(seq id no:3)。相反地，没有观察到具有差gal3-insr阻断活性的gal3靶向抗体结合肽1。综上所述，这些数据指示结合至gal3肽1是阻断gal3与insr相互作用的能力的预测。类似地，具有强gal3-insr阻断活性的两种单独的gal3结合抗体(4g2.2g6和3b11.2g2)结合gal3的肽4，对应于gal3的氨基酸31-50，gaggypgasypgaypgqapp(seq id no:6)。相反地，没有观察到具有差gal3-insr阻断活性的gal3靶向抗体结合肽4。综上所述，这些数据指示结合至gal3肽4是阻断gal3与insr相互作用的能力的预测。进一步，七种具有强gal3-insr阻断活性的gal3结合抗体(13h12.2f8、19d9.2e5、14h10.2c9、2d10.2b2、4a11.2b5、3b11.2d2和13a12.2e5)都结合gal3的肽6，对应于gal3的氨基酸51-70，gaypgqappgaypgapgayp(seq id no:8)。相反地，没有观察到具有差gal3-insr阻断活性的gal3靶向抗体结合肽6。综上所述，这些数据指示结合至gal3肽6是阻断gal3与insr相互作用的能力的预测。另外，十一种具有gal3-insr阻断活性的gal3结合抗体(6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、13h12.2f8、19b5.2e6、23h9.2e4、15g7.2a7、19d9.2e5、14h10.2c9、7d8.2d8和15f10.2d6)都结合gal3的肽7，对应于gal3的氨基酸61-80，aypgapgaypgaappgvypg(seq id no:9)。相反地，没有观察到具有差gal3-insr阻断活性的gal3靶向抗体结合肽7。综上所述，这些数据指示结合至gal3肽7是阻断gal3与insr相互作用的能力的预测。总之，这些数据指示抗gal3抗体对gal3肽1、4、5、6和7的效用(utility)作为阻断gal3与insr相互作用的能力的预测。
[0660]
如图27中阐释的，肽4、6和7共享包括脯氨酸-甘氨酸(pg)和酪氨酸-脯氨酸-甘氨酸(ypg)的重复氨基酸序列，指示可以解释gal3靶向抗体结合多种gal3肽的能力的共同特征。进一步，氨基酸序列甘氨酸-x-酪氨酸-脯氨酸-甘氨酸(gxypg)，其中x可以是氨基酸丙氨酸(a)、甘氨酸(g)或缬氨酸(v)，被共享于肽4、6和7中，每个都拥有由3个氨基酸隔开的两个这种序列。相应地，紧密并列的两个gxypg序列的存在可能是结合具有阻断gal3和insr的能力的gal3靶向抗体的能力的预测。另外，丙氨酸、甘氨酸和缬氨酸的grantham距离是ala-val：64、ala-gly：60、val-gly：109，从而预测具有类似低grantham距离的氨基酸可能类似地能够在可变区置换，包括脯氨酸和苏氨酸。实施例3：具有阻断活性的gal3-insr抗体竞争结合至gal3
[0661]
为了确定具有gal3-insr阻断活性的gal3结合抗体是否结合至gal3分子的相同或重叠区域，进行了抗体binning测定以评估抗体同时结合gal3的能力。将胺反应探针负载到gator生物传感器(probe life，palo alto，ca)上，在dh20中平衡60秒，浸入100μl edc 0.2m/nhs 0.05m激活缓冲液中30秒，然后浸入20μg/μl人gal3-his的10mm naoac缓冲液溶液ph 5中，直到结合饱和，并且在1m乙醇胺ph 8.5中淬灭300秒。gal3-his加载后，将吸头浸入20μg/ml饱和抗体中，然后依次浸入5μg/ml竞争抗体中。如图3a-b中显示的，具有竞争结合特征的抗体被分配bin，并且进行与阻断活性的关联。
[0662]
建立了对gal3的竞争抗体结合模式的独立的bin。显著地，观察到bin和阻断gal3-insr阻断活性之间的强关联。来自bin的1、2、3、4、5、6和7的所有抗体显著抑制gal3结合至tim3，总结在图3a中。相反地，bin 88中的抗体是对insr的gal3阻断的稍弱的阻断剂，尽管
对gal3具有强亲和力。bin 10、11和12中的抗体均不具有显著抑制gal3和insr缔合的能力。因此，1、2、3、4、5、6和7的竞争结合bin用于预测gal3结合抗体阻断gal3和insr组装的能力。实施例4：高脂肪饮食喂食的糖尿病小鼠中gal3-insr阻断抗体imt001-4(tb001)降低体重增加、胰岛素抗性、葡萄糖不敏感、肝脂肪变性和肝功能障碍
[0663]
为了评估gal3靶向抗体对gal3-insr阻断是否在功能上影响糖尿病生物学，采用了ii型糖尿病的小鼠模型。雄性c57bl6j小鼠购自jackson lab，并且从7周龄开始喂食高脂肪饮食(hfd，60％kcal来自脂肪，research diet，目录#12492i)8周、10或16周。将用标准饲料(chow diet)喂食的年龄匹配的雄性c57bl6j小鼠用作对照小鼠。将小鼠饲养在标准设施和带有过滤器顶部的一次性标准笼子中，在室温下06:00-18:00昼夜循环。小鼠被喂食标准饲料或hfd自由采食，除非实验中指示禁食时。分别在15周和16周龄(hfd后8周和9周)进行葡萄糖耐量测试(gtt)和胰岛素耐量测试(itt)，以确认胰岛素抗性和葡萄糖不耐受表型。对于gtt，通过将小鼠转移到没有食物或粪便但有饮用水的干净笼子中，将小鼠禁食6小时，并且然后注入2g/kg葡萄糖(sigma)，并且在葡萄糖注入后0、15、30、60、90和120分钟时抽血来测量葡萄糖水平。对于itt，小鼠禁食6小时，并且然后腹膜内注入0.75iu/kg体重的humalin-r(eli lilly)。使用hemocue glucose 201分析仪在0、15、30、45、60分钟时测量来自尾部血液的葡萄糖含量。基于来自itt的曲线下面积(auc)，将hfd喂食的小鼠随机分为两组：人igg4同种型组和imt001-4治疗组。在17周龄时，在19周龄和20周龄进行itt和gtt之前，通过每周两次腹膜内注入5剂量给予小鼠抗体治疗。人igg4同种型和imt001-4以10mg/kg以100μl/小鼠给药，并且bm以10mg/ml以100μl/小鼠给药。治疗一直持续到小鼠在21周龄时被解雇(sacked)。在小鼠到达设施后一周监测小鼠体重。使用天平每周一次测量体重。使用心脏穿刺收集小鼠血液。收集肝脏、腓肠肌和后部皮下白色脂肪并且称重。
[0664]
高脂肪饮食(hfd)喂食的小鼠被确认具有升高的基础葡萄糖水平，并且比对照饮食喂食的动物更快地增加体重。明显地，虽然用同种型对照处理的hfd喂食的小鼠在19天的研究中展示出超过7％体重的显著体重增加，但用imt001-4处理的hfd喂食的动物没有增加任何明显的体重(图4)。此外，虽然同种型对照处理的hfd喂食的小鼠展示出对葡萄糖挑战的延迟响应，但用imt001-4处理的hfd喂食的动物清除葡萄糖明显更快，其方式与用正常饮食喂食的小鼠更相似(图5)。此外，虽然用同种型对照处理的hfd喂食的动物展示出响应胰岛素挑战的延迟葡萄糖降低，但用imt001-4处理的hfd喂食的小鼠展示出与正常饮食喂食的非糖尿病小鼠无法区分的葡萄糖清除率(图6)。总的来说，这些数据支持gal3-insr阻断抗体imt001-4解决糖尿病的多个方面的发现，包括胰岛素抗性、葡萄糖不敏感和体重增加。
[0665]
为了进一步评估imt001-4影响糖尿病的病理后遗症的能力，检查来自如图3-5中处理的动物的肝切片的脂肪堆积，例如脂肪变性的迹象。简言之，肝样品在4％多聚甲醛中固定24小时，在70％etoh中放置3天，包埋在石蜡中，并且切下10μm切片，并且固定至载玻片，用苏木精和伊红染色，在revolve显微镜下以40x放大倍率观察。通过imagej评估图像以量化脂肪变性的程度。
[0666]
在用对照抗体处理的hfd喂食的动物中观察到中等水平的脂肪变性，由在h&e染色切片中存在圆形非染色区域所例证的(图7)。相比之下，用imt001-4处理的hfd喂食的动物展示出可以忽略不计的水平的脂肪变性，并且难以与用正常饮食喂食的非糖尿病动物的肝区分开来。视觉观察通过图像量化得到确认，这表明imt001-4处理的动物相对于同种型对
照处理的动物的疾病状态完全逆转。相应地，靶向gal3的gal3-insr阻断抗体imt001-4具有减少肝脂肪变性的效用。
[0667]
为了进一步表征组织学样品中观察到的肝病，通过elisa在如以上处理的动物中评估肝功能障碍的血清标志物。简而言之，从肝素锂收集管中的全血样品中获得小鼠血浆样品。通过样品口将100μl的血清分配到vetscan vs2血液化学分析仪(abaxis)的转子中。根据制造商的说明书确定alt水平。与相对于喂食正常饮食的非糖尿病小鼠，同种型对照处理的hfd喂食的糖尿病小鼠中观察的升高的脂肪变性水平观察一致，同种型对照hfd喂食的糖尿病小鼠展示出相对于正常饮食喂食的非糖尿病小鼠的alt增加了几乎3倍(图8)。引人注目地，相对于hfd喂食的同种型对照处理的小鼠，imt001-4处理的hfd喂食小鼠的alt水平显著降低，至与正常饮食喂食的非糖尿病小鼠的相当水平。相应地，靶向gal3的gal3-insr阻断抗体imt001-4具有降低血清肝酶的效用。实施例5：gal3特异性结合itgb1
[0668]
为了评估人半乳凝素-3(gal3)可以与人整联蛋白β-1(itgb1)物理地相互作用的可能性，用纯化的gal3和itgbl进行elisa评估。将人gal3蛋白(truebinding，qcb200349；r&d systems，8259-ga)在pbs(corning，21-030-cm)中稀释至10、5和2.5μg/ml的浓度，并且添加至96孔elisa板(thermo fisher，44-2404-21)的孔中。在4℃孵育板过夜后，用pbst(具有0.05％tween 20[vwr,0777]的pbs)洗涤三次板，并且然后在室温轻轻振荡，用2％bsa(emd millipore,126609)的pbst阻断一小时。按照制造商的说明书，用ez连接sulfo-nhs-lc-生物素(thermofisher scientific，a39257)生物素化重组人itgb1(sino biological，10587-h08h1)，并且使用zeba spin脱盐柱(thermofisher scientific，89882)脱盐。阻断板后，丢弃2％bsa的pbst，并且将2％bsa的pbst中的10、5和2.5μg/ml的生物素化重组itgb1添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时。其后，用pbst洗涤三次板。在2％bsa的pbst中稀释抗生物素蛋白hrp(biolegend，405103；1:2000稀释)，并且然后添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时，并且然后用pbst洗涤三次。然后，将tmb底物(thermo scientific，34029)添加至每个孔中。用1m hcl(jt baker，5620-02)终止反应并且使用酶标仪(molecular devices)在450nm的吸光度处读数。
[0669]
如图9中描绘的，itgb1强烈地结合gal3涂覆的孔。itgb1没有显著结合至未涂覆的elisa孔。相似地，在只有gal3涂覆的孔中没有观察到显著的结合信号。实施例6：具有gal3-itgb1阻断活性的gal3结合抗体的鉴定
[0670]
为了鉴定具有阻断gal3和itgbl相互作用能力的gal3靶向抗体，将纯化的gal3和itgbl在各种gal3靶向或对照抗体存在(或不存在)的情况下孵育，或没有抗体的情况下孵育，并且通过elisa评估蛋白质相互作用。
[0671]
将人gal3(truebinding，qcb200352)在pbs(corning，21-030-cm)中稀释至4μg/ml的浓度并且添加至96孔elisa板(thermo fisher，44-2404-21)的孔中。在4℃孵育板过夜后，用pbst(具有0.05％tween 20[vwr,0777]的pbs)洗涤三次板，并且然后在室温轻轻振荡，用2％bsa(emd millipore，126609)的pbst阻断一小时。按照制造商的说明书，用ez连接sulfo-nhs-lc-生物素(thermofisher scientific，a39257)生物素化重组人itgb1(sino biological，10587-h08h1)，并且使用zeba spin脱盐柱(thermofisher scientific，89882)脱盐。其后，丢弃2％bsa的pbst，并且将30μl的20、6.6或2.2μg/ml的对照或抗gal3抗
体添加至每个孔中，随后添加30μl的2μg/ml的生物素化的itgb1的2％bsa的pbst。在室温轻轻振荡孵育板一小时。其后，用pbst洗涤三次板。然后，在2％bsa的pbst中以1:2000稀释将抗生物素蛋白hrp(biolegend，405103)添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时，并且然后用pbst洗涤三次。然后，将tmb底物(thermo scientific，34029)添加至每个孔中。用1m hcl(jt baker，5620-02)终止反应并且使用酶标仪(molecular devices)在450nm的吸光度处读数。gal3-itgb1相互作用的阻断百分比计算为在没有抗体的情况下获得的信号分数减去背景信号。
[0672]
如图10中显示的，抗gal3抗体显示gal3和itgb1之间相互作用的不同阻断。三种抗体显示阻断》90％(tb001、tb006和846.1f5)，十二种抗体显示40％和60％之间的中级阻断(3b11、2d10、7d8、13a12、14h10、15f10、20d11、846.2h3、846t.14a2、847.10b9、847.12f12和847.26f5)和三种抗体没有显示阻断能力(6b3.2d3、847.14h4和数据未显示)。由于抗gal3抗体显示出阻断gal3与itgb1相互作用的不同能力，这表明单独的gal3结合不足以破坏gal3和itgb1的相互作用，并且这种破坏活性需要特定的特性。实施例7：gal3特异性结合itga3
[0673]
为了评估人半乳凝素-3(gal3)与人整联蛋白α-3(itga3)物理地相互作用的可能性，用纯化的gal3和itga3进行elisa评估。将人gal3蛋白(truebinding，qcb200349；truebinding，qcb200352)在pbs(corning，21-030-cm)中稀释至4、2和1μg/ml的浓度，并且并且添加至96孔elisa板(thermo fisher，44-2404-21)的孔中。在4℃孵育板过夜后，用pbst(具有0.05％tween 20[vwr,0777]的pbs)洗涤三次板，并且然后在室温轻轻振荡，用2％bsa (emd millipore，126609)的pbst阻断一小时。按照制造商的说明书，用ez连接sulfo-nhs-lc-生物素(thermofisher scientific，a39257)生物素化重组人itga3蛋白质抗原(novus biological,nbp2-48514pep)，并且使用zeba spin脱盐柱(thermofisher scientific，89882)脱盐。阻断板后，丢弃2％bsa 的pbst，并且将pbst中2％bsa中的并将4、2和1μg/ml的生物素化的重组体itga3添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时。其后，用pbst洗涤三次板。在2％bsa的pbst中稀释抗生物素蛋白hrp(biolegend，405103；1:2000稀释)，并且然后添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时，并且然后用pbst洗涤三次。然后，将tmb底物(thermo scientific，34029)添加至每个孔中。用1m hcl(jt baker，5620-02)终止反应并且使用酶标仪(molecular devices)在450nm的吸光度处读数。
[0674]
如图11中描绘的，itga3强烈地结合gal3涂覆的孔。itga3没有显著结合至未涂覆的elisa孔。相似地，在只有gal3涂覆的孔中没有观察到显著的结合信号。实施例8：具有gal3-itga3阻断活性的gal3结合抗体的鉴定
[0675]
为了鉴定具有阻断gal3和itga3相互作用能力的gal3靶向抗体，将纯化的gal3和itga3在各种gal3靶向或对照抗体存在(或不存在)的情况下孵育，或没有抗体的情况下孵育，并且通过elisa评估蛋白质相互作用。
[0676]
将人gal3(truebinding，qcb200352)在pbs(corning，21-030-cm)中稀释至4μg/ml的浓度并且添加至96孔elisa板(thermo fisher，44-2404-21)的孔中。在4℃孵育板过夜后，用pbst(具有0.05％tween 20[vwr,0777]的pbs)洗涤三次板，并且然后在室温轻轻振荡，用2％bsa(emd millipore，126609)的pbst阻断一小时。按照制造商的说明书，用ez连接sulfo-nhs-lc-生物素(thermofisher scientific，a39257)生物素化重组人itga3蛋白质
抗原(novus biological,nbp2-48514pep)，并且使用zeba spin脱盐柱(thermofisher scientific，89882)脱盐。其后，丢弃2％bsa的pbst，并且将30μl的20、6.6或2.2μg/ml的对照或抗gal3抗体添加至每个孔中，随后添加30μl的pbst中2％bsa中的4μg/ml的生物素化的itga3。在室温轻轻振荡孵育板一小时。其后，用pbst洗涤三次板。然后，在2％bsa的pbst中以1:2000稀释将抗生物素蛋白hrp(biolegend，405103)添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时，并且然后用pbst洗涤三次。然后，将tmb底物(thermo scientific，34029)添加至每个孔中。用1m hcl(jt baker，5620-02)终止反应并且使用酶标仪(molecular devices)在450nm的吸光度处读数。gal3-itga3相互作用的阻断百分比计算为在没有抗体的情况下获得的信号分数-减去背景信号。
[0677]
如图12中显示的，抗gal3抗体显示gal3和itga3之间相互作用的不同阻断。二十四种抗体显示》90％阻断能力(tb001、tb006、2d10、3b11、7d8、13a12、14h10、15f10、19b5、20d11.2c6、20h5、23h9、846.1b2、846.1f5、846.1h5、846.1h12、846.2h3、846t.14a2、846t.14e4、846t.16b5、847.4b10、847.10b9、84712f12和847.26f5)，同时十三种抗体显示《35％阻断能力(6b3.2d3、9h2.2h10、12g5.d7、13g4.2f8、847.14h4、847.11b1和数据未显示)。由于抗gal3抗体显示出阻断gal3与itga3相互作用的不同能力，这表明单独的gal3结合不足以破坏gal3和itga3的相互作用，并且这种破坏活性需要特定的特性。实施例9：gal3特异性结合itgb3
[0678]
为了评估人半乳凝素-3(gal3)可以与人整联蛋白β-3(itgb3)物理地相互作用的可能性，用纯化的gal3和itgb3进行elisa评估。将人gal3蛋白(truebinding，qcb200349；r&d systems，8259-ga)在pbs(corning，21-030-cm)中稀释至10、5和2.5μg/ml的浓度，并且添加至96孔elisa板(thermo fisher，44-2404-21)的孔中。在4℃孵育板过夜后，用pbst(具有0.05％tween 20[vwr,0777]的pbs)洗涤三次板，并且然后在室温轻轻振荡，用2％bsa(emd millipore,126609)的pbst阻断一小时。按照制造商的说明书，用ez连接sulfo-nhs-lc-生物素(thermofisher scientific，a39257)生物素化重组人itgb3蛋白质(abbexa，abx067294)，并且使用zeba spin脱盐柱(thermofisher scientific，89882)脱盐。阻断板后，丢弃2％bsa的pbst，并且将pbst中2％bsa中的10、5和2.5μg/ml的生物素化重组itgb3添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时。其后，用pbst洗涤三次板。在2％bsa的pbst中稀释抗生物素蛋白hrp(biolegend，405103；1:2000稀释)，并且然后添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时，并且然后用pbst洗涤三次。然后，将tmb底物(thermo scientific，34029)添加至每个孔中。用1m hcl(jt baker，5620-02)终止反应并且使用酶标仪(molecular devices)在450nm的吸光度处读数。
[0679]
如图13中描绘的，itgb3强烈地结合gal3涂覆的孔。itgb3没有显著结合至未涂覆的elisa孔。相似地，在只有gal3涂覆的孔中没有观察到显著的结合信号。实施例10：具有gal3-itgb3阻断活性的gal3结合抗体的鉴定
[0680]
为了鉴定具有阻断gal3和itgb3相互作用能力的gal3靶向抗体，将纯化的gal3和itgb3在各种gal3靶向或对照抗体存在(或不存在)的情况下孵育，或没有抗体的情况下孵育，并且通过elisa评估蛋白质相互作用。
[0681]
将人gal3(truebinding，qcb200352)在pbs(corning，21-030-cm)中稀释至4μg/ml的浓度并且添加至96孔elisa板(thermo fisher，44-2404-21)的孔中。在4℃孵育板过夜
后，用pbst(具有0.05％tween 20[vwr,0777]的pbs)洗涤三次板，并且然后在室温轻轻振荡，用2％bsa(emd millipore，126609)的pbst阻断一小时。按照制造商的说明书，用ez连接sulfo-nhs-lc-生物素(thermofisher scientific，a39257)生物素化重组人itgb3蛋白质(abbexa，abx067294)，并且使用zeba spin脱盐柱(thermofisher scientific，89882)脱盐。其后，丢弃2％bsa的pbst，并且将30μl的20、6.6或2.2μg/ml的对照或抗gal3抗体添加至每个孔中，随后添加30μl的pbst中2％bsa中的2μg/ml的生物素化的itgb3。在室温轻轻振荡孵育板一小时。其后，用pbst洗涤三次板。然后，在2％bsa的pbst中以1:2000稀释将抗生物素蛋白hrp(biolegend，405103)添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时，并且然后用pbst洗涤三次。然后，将tmb底物(thermo scientific，34029)添加至每个孔中。用1m hcl(jt baker，5620-02)终止反应并且使用酶标仪(molecular devices)在450nm的吸光度处读数。gal3-itgb3相互作用的阻断百分比计算为在没有抗体的情况下获得的信号分数减去背景信号。
[0682]
如图14中显示的，抗gal3抗体显示gal3和itgb3之间相互作用的不同阻断。二十种抗体显示》90％阻断能力(tb001、tb006、2d10、3b11.2g2、13a12.2e5、14h10.2c9、19b5、20d11.2c6、20h5.a3、23h9.2e4、846.1b2、846.1f5、846.1h12、846.2h3、846t.14a2、846t.14e4、846t.16b5、847.10b9、847.12f12和847.26f5)，同时十三种抗体显示《10％阻断能力(6b3.2d3、9h2.2h10、12g5.d7、13g4.2f8、847.11b1、847.14h4和数据未显示)。由于抗gal3抗体显示出阻断gal3与itgb3相互作用的不同能力，这表明单独的gal3结合不足以破坏gal3和itgb3的相互作用，并且这种破坏活性需要特定的特性。实施例11：gal3特异性结合itgav
[0683]
为了评估人半乳凝素-3(gal3)可以与人整联蛋白α-v(itgav)物理地相互作用的可能性，用纯化的gal3和itgav进行elisa评估。将人gal3蛋白(truebinding，qcb200349；r&d systems，8259-ga)在pbs(corning，21-030-cm)中稀释至4、2和1μg/ml的浓度，并且添加至96孔elisa板(thermo fisher，44-2404-21)的孔中。在4℃孵育板过夜后，用pbst(具有0.05％tween 20[vwr,0777]的pbs)洗涤三次板，并且然后在室温轻轻振荡，用2％bsa(emd millipore,126609)的pbst阻断一小时。按照制造商的说明书，用ez连接sulfo-nhs-lc-生物素(thermofisher scientific，a39257)生物素化重组人itgav蛋白质(abbexa，abx166523)，并且使用zeba spin脱盐柱(thermofisher scientific，89882)脱盐。阻断板后，丢弃2％bsa的pbst，并且将pbst中2％bsa中的4、2和1μg/ml的生物素化重组itgav添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时。其后，用pbst洗涤三次板。在2％bsa的pbst中稀释抗生物素蛋白hrp(biolegend，405103；1:2000稀释)，并且然后添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时，并且然后用pbst洗涤三次。然后，将tmb底物(thermo scientific，34029)添加至每个孔中。用1m hcl(jt baker，5620-02)终止反应并且使用酶标仪(molecular devices)在450nm的吸光度处读数。
[0684]
如图15中描绘的，itgav强烈地结合gal3涂覆的孔。itgav没有显著结合至未涂覆的elisa孔。相似地，在只有gal3涂覆的孔中没有观察到显著的结合信号。实施例12：具有gal3-itgav阻断活性的gal3结合抗体的鉴定
[0685]
为了鉴定具有阻断gal3和itgav相互作用能力的gal3靶向抗体，将纯化的gal3和itgav在各种gal3靶向或对照抗体存在(或不存在)的情况下孵育，或没有抗体的情况下孵
育，并且通过elisa评估蛋白质相互作用。
[0686]
将人gal3(truebinding，qcb200352)在pbs(corning，21-030-cm)中稀释至4μg/ml的浓度并且添加至96孔elisa板(thermo fisher，44-2404-21)的孔中。在4℃孵育板过夜后，用pbst(具有0.05％tween 20[vwr,0777]的pbs)洗涤三次板，并且然后在室温轻轻振荡，用2％bsa(emd millipore，126609)的pbst阻断一小时。按照制造商的说明书，用ez连接sulfo-nhs-lc-生物素(thermofisher scientific，a39257)生物素化重组人itgav蛋白质(abbexa，abx166523)，并且使用zeba spin脱盐柱(thermofisher scientific，89882)脱盐。其后，丢弃2％bsa的pbst，并且将30μl的20、6.6或2.2μg/ml的对照或抗gal3抗体添加至每个孔中，随后添加30μl的pbst中2％bsa中的8μg/ml的生物素化的itgb1。在室温轻轻振荡孵育板一小时。其后，用pbst洗涤三次板。然后，在2％bsa的pbst中以1:2000稀释将抗生物素蛋白hrp(biolegend，405103)添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时，并且然后用pbst洗涤三次。然后，将tmb底物(thermo scientific，34029)添加至每个孔中。用1m hcl(jt baker，5620-02)终止反应并且使用酶标仪(molecular devices)在450nm的吸光度处读数。gal3-itgav相互作用的阻断百分比计算为在没有抗体的情况下获得的信号分数减去背景信号。
[0687]
如图16中显示的，抗gal3抗体显示gal3和itgav之间相互作用的不同阻断。十八种抗体显示》90％阻断能力(tb001、tb006、2d10、3b11.2g2、14h10.2c9、19b5、20d11.2c6、20h5.a3、23h9.2e4、846.1b2、846.1f5、846.2h3、846t.14a2、846t.16b5、847.10b9、847.12f12、847.26f5和849.8d10)、两种抗体显示中级(40和60％之间)阻断能力(数据未显示)和十种抗体显示《30％阻断能力(6b3.2d3、9h2.2h10、12g5.d7、13g4.2f8、847.11b1、847.14h4和数据未显示)。由于抗gal3抗体显示出阻断gal3与itgav相互作用的不同能力，这表明单独的gal3结合不足以破坏gal3和itgav的相互作用，并且这种破坏活性需要特定的特性。实施例13：阻断gal3与整联蛋白相互作用的抗gal3抗体抑制jurkat t细胞粘附
[0688]
为了评估阻断gal3与整联蛋白相互作用的抗gal3抗体是否负面影响淋巴细胞归巢(炎症性疾病发展中的重要方面)，采用了利用淋巴细胞jurkat t细胞系的基于细胞的测定。简而言之，在冰上孵育重组gal-3(pbs中10mg/ml)和抗体(pbs中5mg/ml)30分钟，然后将涂覆混合物转移至96孔板并且另外孵育过夜。然后除去涂覆混合物并且用0.5％bsa阻断板45分钟。将jurkat t细胞(每孔105个细胞)接种于无血清的rpmi中。孵育三十分钟后，用无血清的培养基轻轻洗涤一次细胞，并且用4％pfa固定10分钟。用sytox
tm
橙色核酸染色(thermofisher,s11368)进一步染色粘附的细胞，并且通过cytation 1细胞成像多模式读取器(biotek)进行分析。
[0689]
如图17中描绘的，四种抗gal3抗体以》90％效力抑制jurkat t细胞粘附(3b11、20d11、tb001、tb006)。五种抗gal3抗体在40％和80％之间抑制jurkat t细胞粘附(6h6、7d8、15f10、20h5和846t.14e4)。克隆23h9不抑制淋巴细胞归巢。总而言之，需要抗gal3抗体的特定性质来抑制jurkat t细胞粘附。实施例14：抗gal3抗体在晚期ii型糖尿病模型中具有治疗潜力
[0690]
为了研究治疗性抗gal-3抗体对严重的ii型糖尿病病例的影响，实施了使用高脂肪饮食(hfd)喂食的db/db小鼠的小鼠模型。从jackson实验室获得的4周龄的雄性bks-db小
鼠(000642)被喂食60％kcal hfd(research diet，12492i)八周。对照动物(雄性c57bl6/j(000662)，jackson实验室)喂食正常饲料。db/db动物具有增加水平的gal-3循环(图18)。基于通过采用echomri-500tm(echomri)测量的身体成分对动物进行随机分组。用阴性对照(pbs)、阳性对照(semaglutide)或抗gal3 tb001抗体q1w(每周一次)处理hfd喂食的db/db动物。野生型动物用作对照(健康)组。给药动物十二周。tb001(抗gal3)处理显著延长了db/db动物的存活期(图19)。如图20中描述的，与pbs处理组相比，tb001处理的动物的延长存活期也与空腹血糖的水平没有变化相关。如实施例15中描述的，测量空腹血糖。简而言之，在有水且没有食物的干净的笼子中，小鼠禁食4-6小时。在使用hemocue glucose 201分析仪和比色皿(mercedes scientific110706)测量血糖水平之前，将来自尾部的血液稀释2.5倍。实施例15：抗gal3抗体在i型糖尿病的小鼠模型中具有治疗潜力
[0691]
为了评估抗gal3抗体在i型糖尿病中的治疗潜力，使用了i型糖尿病的小鼠模型。简而言之，将7周龄的雌性nod/shiltj小鼠(jackson lab(001976))和对照组动物nor/ltj(jackson lab(002050))饲养在具有过滤器顶部的标准一次性笼子中，在室温以6:00-18:00昼夜循环。在开始葡萄糖监测之前，允许小鼠休息一周。当葡萄糖水平连续两天达到250-400(mg/dl)时开始抗体处理。为了确定葡萄糖水平，在有水且没有食物的干净的笼子中饲养4-6小时之后，从实验动物的尾静脉收集血液样品。收集的样品通过hemocue glucose 201分析仪和比色皿(mercedes scientific 110706)进行分析。动物用抗gal3抗体(mtb001)或pbs对照每周两次(10mg/kg)给药。当葡萄糖水平达到》1000(mg/dl)或直到它们展示出发病症状(即驼背姿势、体温过低和活动不足)时，处死动物。在最后阶段，从有症状的动物中收集血浆样品。通过alpco小鼠c肽elisa试剂盒(alpco，80-cptms-e01)确定c肽水平。如图21中描绘的，抗gal3处理通过稳定血糖水平(图22a)和恢复c肽水平(图22b)延长了nod/shiltj动物的存活期并且恢复了β细胞功能。因此，抗gal3处理减轻了ii型和i型糖尿病的症状。实施例16：抗gal3抗体在慢性炎症性肠病(ibd)的小鼠模型中具有治疗潜力
[0692]
实施慢性炎症性肠病的小鼠模型以研究gal-3抗体的作用。简而言之，将7周龄的雄性c57bl/6j小鼠饲养在具有过滤器顶部的标准一次性笼子中，在室温以6:00-8:00昼夜循环。在开始处理之前，允许小鼠休息一周。
[0693]
将小鼠随机分为四个处理组：无硫酸葡聚糖钠盐(dss)、3％dss的水+pbs、3％dss+mtb001(10mg/kg)、3％dss+mtb001(1mg/kg)。连续五天给予dss水混合物，随后给予七天正常水，总计三个dss循环和两个正常水循环。每天监测体重、粪便稠度、总出血评分和hemoccult评分(fisher，sk-61130)。尸检时，保存血液、结肠、空肠、回肠、十二指肠和脾并且快速冷冻。使用多点分析系统(msd)促炎组1(小鼠)试剂盒(msd，k15048d)测量血浆炎症性细胞因子。对冷冻结肠样品进行rt-qpcr。简而言之，使用qiazol裂解缓冲液(qiagen,79306)和qiagen组织裂解液ii(qiagen,85300)破坏结肠组织。使用rneasy微型试剂盒(qiagen,74104)提取rna。在biorad c1000接触热循环仪(biorad,1851138)上用iscript逆转录超混器(biorad，1708841)合成cdna。使用ssoadvanced universal sybr绿色超混器(biorad，1725272)在cfx384接触实时pcr检测系统(biorad，1955485)上使用图23中的引物(seq id no:325-338)进行rt-qpcr。
[0694]
抗半乳凝素-3处理恢复了dss诱导的结肠长度减少(图24)并且减少了由ifn-γ的循环水平确定的dss诱导的炎症(图25)。另外，集中促炎基因(例如ifn-γ、il17a、il-1beta、il-21、il-22)的mrna水平在响应tb001处理时降低。实施例17：抗gal3抗体的序列
[0695]
使用clustalω比对来自各种bin的gal3结合抗体的互补决定区(图39)。bin 1抗体在vh cdr1和cdr2以及vl cdr1和cdr3区域共有显著的同源性。bin 2抗体在所有检查的cdr中共有显著的同源性，观察到相对保守的a/s、v/t、h/d和l/f取代。bin 3抗体稍微更加多样化，在cdr1中具有显著的序列同源性，但在其他cdr区域相对不同。bin 4抗体在所有检查的cdr中共有显著的同源性，观察到相对保守的a/t、i/v、d/g、s/n、qk和v/l取代。bin 5抗体在所有cdr中也共有显著的同源性，除了较不保守的t/i、n/y取代外，还观察到相对保守的y/f、n/k取代。最后，观察到bin 7抗体cdr几乎相同，在vl cdr2中具有单个v/l取代，将3b11.2g2与13a12.2e5区分开来。与图28a-c、29a-c、0-33中提供的任何其他序列的比对可以用本领域已知的技术来完成。实施例18：另外的示例性抗gal3抗体的binning和肽结合测定
[0696]
对另外的示例性抗gal3抗体进行大规模抗体binning测定。
[0697]
在基于高通量spr的carterra lsa单元(carterrabio，salt lake city，ut)上以夹心形式进行表位binning测定。首先，将纯化的抗体在10mm naoac(ph 5.0)中稀释至10μg/ml浓度，并且然后经胺基共价偶联到由edc和s-nhs激活的hc200m芯片上，以将抗体固定在384点阵列的不同位置。对固定的抗体的阵列进行了138次binning循环。在每个循环中，首先，将人gal3(acrobio ga3-h5129)注入到整个阵列上以结合不同的抗体(一抗)，然后在测试的150种抗gal3抗体的组中选择一种抗体(二抗)。在每个循环结束时，通过10mm甘氨酸(ph 2.0)再生阵列，以从阵列中去除结合的抗原和二抗。使用carterrabio的表位软件进行数据分析。
[0698]
在图40中显示binning结果。总计，120种抗gal3抗体鉴定了49个不同的bin，其表明结合至hgal3(当在固定在hc200m芯片上时，150种测试的抗体中有30种不结合至hgal3，因此被排除在进一步分析之外)。强烈地阻断gal3和app695缔合的抗体属于下面限定的许多不同的bin。这突出了这些bin作为gal3结合活性预测因子的效用。
[0699]
抗体imt001(tb001)限定了bin 1。克隆imt006(tb006)、19b5.2e6、20h5.a3、23h9.2e4、2d10.2b2展示出对gal3的相互竞争性结合，但没有阻止其余克隆的结合，从而限定了bin 3。克隆3b11.2g2、13a12.2e5展示出对gal3的相互竞争性结合，但没有阻止其余克隆的结合，从而限定了bin 7。克隆14h10.2c9、15f10.2d6、7d8.2d8、f846tc.14e4、f846tc.7f10、f849c.8d10展示出对gal3的相互竞争性结合，但没有阻止其余克隆的结合，从而限定了bin 8。克隆f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.2h3、f846tc.16b5展示出对gal3的相互竞争性结合，但没有阻止其余克隆的结合，从而限定了bin 17。克隆f847c.10b9、f847c.12f12和f847c.26f5展示对gal3的相互竞争性结合，但没有阻止其余克隆的结合，从而限定了bin 49。另外，许多克隆没有与其他测试的抗体一起竞争结合至gal3，因此分别限定了bin 5(克隆0d11.2c6)和bin 10(克隆12g5.d7)。
[0700]
用与图27中描述的相同的肽(seq id no:3-26)评估另外的示例性抗gal3抗体的gal3肽结合活性。人gal3肽(lifetein，定制订单)和人gal3蛋白(r&d systems，8259-ga；
truebinding，qcb200349)在pbs(corning，21-030-cm)中稀释至至少100μg/ml(肽)或1μg/ml(蛋白质)的浓度，并且添加到几个96孔elisa板(thermo fisher，44-2404-21)的孔中。在4℃孵育板过夜后，用pbst(具有0.05％tween 20[vwr,0777]的pbs)洗涤三次板。然后，在室温轻轻振荡，用2％bsa(emd millipore，126609)的pbst阻断板一小时。其后，丢弃2％bsa的pbst，并将gal3结合抗体(重新格式化的higg4[s228p])在2％bsa的pbst中稀释至5μg/ml的浓度并且添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时，并且然后用pbst洗涤三次。然后，将过氧化物酶affinipure f(ab')2片段山羊抗人igg(h+l)多克隆抗体(jackson immunoresearch，109-036-003)在2％bsa的pbst中稀释(1:4000)并且添加至孔中。在室温轻轻振荡孵育板一小时，并且然后用pbst洗涤三次。然后，将tmb底物(thermo scientific，34029)添加至每个孔中。用1m hcl(jt baker，5620-02)终止反应并且使用酶标仪(molecular devices)在450nm的吸光度处读数。
[0701]
在图40中描绘了肽结合结果。在多个位置观察到gal3结合抗体与肽阵列的结合，在肽1-8中观察到大部分结合，与肽17的结合有一些弱。13种单独的gal3结合抗体(19b5.2e6、20d11.2c6、20h5.a3、23h9.2e4、2d10.2b2、f846c.1h5、f846tc.14a2、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.26f5、f847c.4b10、f847c.12f12、15fg7.2a7)都结合gal3的肽1，对应于gal3的氨基酸adnfslhdalsgsgnpnpqg(seq id no:3)。类似地，15种单独的gal3结合抗体(imt006(tb006)、13a12.2e5、14h10.2c9、20d11.2c6、20h5.a3、23h9.2e4、2d10.2b2、3b11.2g2、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.2h3、f846tc.16b5、15fg7.2a7和imt001(tb001))结合gal3的肽6，对应于gal3的氨基酸gaypgqappgaypgapgayp(seq id no:8)。此外，13种gal3结合抗体(14h10.2c9、19b5.2e6、20d11.2c6、20h5.a3、23h9.2e4、2d10.2b2、3b11.2g2、f846c.1b2、f846tc.14a2、f847c.10b9、f847c.26f5、f847c.12f12、15fg7.2a7)都结合gal3的肽7，对应于gal3的氨基酸aypgapgaypgapapgvypg(seq id no:9)。实施例19：抗gal3抗体用于糖尿病的治疗
[0702]
患者现在患有i型或ii型糖尿病。一种或多种抗gal3抗体或其结合片段通过肠内、口服、鼻内、肠胃外、颅内、皮下、肌内、皮内或静脉内施用于患者。
[0703]
抗gal3抗体或其结合片段以1ng的量(或以替代方案：10、100、1000ng或1、10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000μg或1、10、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000mg或由任何两个上述的量限定的范围内的任何量或任何其他适合人的最佳功效的量)的剂量施用。剂量每1天(或以替代方案：每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36或48天或由任何两个上述的次数限定的范围内的任何次数)施用。
[0704]
在施用抗gal3抗体或其结合片段后，在患者中观察到糖尿病或与糖尿病相关的症状的治疗。抗gal3抗体或结合片段的施用可以与用于糖尿病的另一种疗法联合进行，例如胰岛素、胰岛素衍生物或其类似物、门冬胰岛素、赖谷胰岛素、赖脯胰岛素、低精蛋白胰岛素、德谷胰岛素、地特胰岛素、锌胰岛素、甘精胰岛素、钒、双胍类、二甲双胍、苯乙双胍、丁双胍、噻唑烷二酮、罗格列酮、吡格列酮、曲格列酮、托利咪酮、磺酰脲、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、氯磺丙脲、格列吡嗪、格列本脲、格列美脲、格列齐特、格列吡脲、格列喹酮、格列奈类、瑞格列奈、那格列奈、α-葡萄糖苷酶抑制剂、米格列醇、阿卡波糖、伏格列波糖、肠促胰岛素、胰高血糖素样肽1、胰高血糖素样肽激动剂、艾塞那肽、利拉鲁肽、他斯波鲁肽、利西拉
肽、索马鲁肽、度拉鲁肽、胃抑制肽、二肽基肽酶-4抑制剂、维格列汀、西格列汀、沙格列汀、利格列汀、阿格列汀、七格列汀、特力列汀、吉格列汀、普兰林肽、达格列汀、卡格列净、恩格列净或瑞格列净。实施例20：抗gal3抗体用于炎症性肠病的治疗
[0705]
患者现在患有炎症性肠病，比如但不限于克罗恩氏病或溃疡性结肠炎。一种或多种抗gal3抗体或其结合片段通过肠内、口服、鼻内、肠胃外、颅内、皮下、肌内、皮内或静脉内施用于患者。
[0706]
抗gal3抗体或其结合片段以1ng的量(或以替代方案：10、100、1000ng或1、10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000μg或1、10、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000mg或由任何两个上述的量限定的范围内的任何量或任何其他适合人的最佳功效的量)的剂量施用。剂量每1天(或以替代方案：每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36或48天或由任何两个上述的次数限定的范围内的任何次数)施用。
[0707]
在施用抗gal3抗体或其结合片段后，在患者中观察到炎症性肠病或与炎症性肠病相关的症状的治疗。抗gal3抗体或结合片段的施用可以与炎症性肠病的另一种疗法结合进行，例如手术、美沙拉嗪、免疫抑制剂、强的松、tnf抑制剂、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤或利福昔明。
[0708]
尽管本文已经显示和描述了本公开的优选的实施方式，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施方式仅通过示例的方式提供。在不背离本公开的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变和替换。应当理解，本文描述的本公开的实施方式的各种替代被采用于实践公开中。旨在所附权利要求限定本公开的范围，并且这些权利要求范围内的方法和结构和由此覆盖的它们的等同物。
[0709]
关于本文中基本上任何复数和/或单数术语的使用，本领域技术人员可以作为适合于上下文和/或应用从复数转换为单数和/或从单数转换为复数。为了清楚起见，本文可以明确地陈述各种单数/复数排列。
[0710]
本领域技术人员将理解，一般而言，本文使用的术语，尤其是所附权利要求书(例如，所附权利要求书的主体)中的，旨在作为“开放”术语(例如，术语“包括”(“including”)应解释为“包括但不限于”，术语“具有”应解释为“至少具有”，术语“包括”(“includes”)应解释为“包括但不限于”等)。本领域技术人员将进一步理解，如果打算引入特定数量的权利要求阐述，则将在权利要求中明确地阐述这种意图，并且在没有这种阐述的情况下不存在这种意图。例如，为了帮助理解，以下所附权利要求可能含有使用介绍性短语“至少一个/一种”和“一个或多个/一种或多种”来介绍权利要求的叙述。然而，这种短语的使用不应被解释为暗示通过不定冠词“一个/一种”(“a”)或“一个/一种”(“an”)引入权利要求阐述将含有这种引入的权利要求阐述的任何特定权利要求限制为仅含有一个这种阐述的实施方式，即使当相同权利要求包括介绍性短语“一个或多个/一种或多种”或“至少一个/一种”和不定冠词，比如“一个/一种”(“a”)或“一个/一种”(“an”)(例如，“一个/一种”(“a”)或“一个/一种”(“an”)应解释为“至少一个/一种”或“一个或多个/一种或多种”)；这同样适用于使用定冠词来介绍权利要求。另外，即使明确阐述了引入的权利要求引用的具体编号，本领域技术人员将认识到，这种阐述应该被解释为意味着至少表示引用的编号(例如，“两次引用”的裸引用，而不是其他修饰语，意味着至少两次引用，或两次或更两次引用)。此外，在那些类似
于“a、b和c等中的至少一个/一种”的约定的情况下被使用，一般而言，这种构造旨在在本领域技术人员将理解约定的意义上(例如，“具有a、b和c中的至少一个/一种系统”将包括但不限于以下系统：单独的a、单独的b、单独的c、a和b一起、a和c一起、b和c一起和/或a、b和c一起等)。在那些类似于“a、b或c等的至少一个/一种”的约定的情况下被使用，一般而言，这种构造旨在在本领域技术人员将理解约定的意义上(例如，“具有a、b或c中的至少一个/一种的系统”将包括但不限于以下系统：单独的a、单独的b、单独的c、a和b一起、a和c一起、b和c一起和/或a、b和c一起等)。本领域技术人员将进一步理解，实际上任何呈现两个或多个可替选的术语的分离词和/或短语，无论是在说明书、权利要求或附图中，都应被理解为考虑包括术语之一的可能性，其中一个术语，或两个术语。例如，短语“a或b”将被理解为包括“a”或“b”或“a和b”的可能性。
[0711]
另外，在根据马库什组描述本公开的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，因此也根据马库什组的任何个体成员或成员子组来描述本公开。
[0712]
如本领域技术人员将理解的，对于任何和所有目的，比如根据提供书面描述，本文公开的所有范围还涵盖任何和所有可能的子范围及其子范围的组合。任何列出的范围都可以很容易地被识别为足够描述并且能够将相同的范围分解为至少相等的一半、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作为非限制性实施例，本文讨论的每个范围都可以很容易地分解分为下三分之一、中三分之一和上三分之一等。如本领域技术人员还将理解的所有语言，比如“高达”、“至少”、“大于”、“小于”等和如包括所列举的数字，并且指可以随后分解为子范围的范围，如以上所讨论。最后，如本领域技术人员将理解的，范围包括每个单独的成员。因此，例如，具有1-3个主题的组是指具有1、2或3个主题的组。类似地，具有1-5个主题的组是指具有1、2、3、4或5个主题等的组。
[0713]
虽然本文已经公开了各种方面和实施方式，但其他方面和实施方式对于本领域技术人员来说将是显而易见的。本文公开的各种方面和实施方式是为了阐述的目的而不旨在限制性的，真实范围和精神是由以下权利要求指示的。
[0714]
本文引用的所有参考文献，包括但不限于已公开和未公开的申请、专利和参考文献，均通过引用以它们的整体并入本文，并且因此成为本说明书的一部分。在通过引用并入的出版物和专利或专利申请与说明书中含有的公开不一致的范围内，说明书旨在取代和/或优先于任何这种不一致的材料。

技术特征：
1.一种破坏半乳凝素-3(gal3)和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间的相互作用的方法，所述方法包括：使gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间的相互作用与选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间的相互作用的抗gal3抗体或其结合片段接触。2.根据权利要求1所述的方法，其中gal3由细胞表达。3.根据权利要求1所述的方法，其中gal3由细胞分泌。4.根据权利要求1-3的任一项所述的方法，其中所述胰岛素受体或整联蛋白或二者由细胞表达。5.根据权利要求1-4的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段结合至gal3的n-末端结构域。6.根据权利要求1-5的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段结合至seq id no:3-26的一种或多种肽。7.根据权利要求1-6的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段结合至由肽1(adnfslhdalsgsgnpnpqg；seq id no:3)、肽4(gaggypgasypgaypgqapp；seq id no:6)、肽6(gaypgqappgaypgapgayp；seq id no:8)、肽7(aypgapgaypgapapgvypg；seq id no:9)或其组合限定的gal3的区域内存在的表位。8.根据权利要求1-7的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段结合至包括gxypg的氨基酸序列的gal3的表位，其中x是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸。9.根据权利要求1-8的任一项所述的方法，其中相互作用降低至不存在抗gal3抗体或其结合片段的情况下的相互作用的小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％、小于50％、小于45％、小于40％、小于35％、小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于5％或小于1％。10.根据权利要求1-9的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段以小于1nm、小于1.2nm、小于2nm、小于5nm、小于10nm、小于13.5nm、小于15nm、小于20nm、小于25nm或小于30nm的解离常数(kd)结合至gal3。11.根据权利要求1-10的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括(1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区；和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区，其中v
l-cdr1包括与根据seq id no:100-128的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
l-cdr2包括与根据seq id no:129-144的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
l-cdr3包括与根据seq id no:145-168的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
h-cdr1包括与根据seq id no:27-47的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
h-cdr2包括与根据seq id no:48-69的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，和v
h-cdr3包括与根据seq id no:70-99的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少
80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述重链可变区包括与根据seq id no:169-206的任何序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述重链可变区选自由seq id no:169-206组成的组。14.根据权利要求11-13的任一项所述的方法，其中所述轻链可变区包括与根据seq id no:207-245的任何序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。15.根据权利要求11-14的任一项所述的方法，其中所述轻链可变区选自由seq id no:207-245组成的组。16.根据权利要求1-15的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括图36中阐释的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3、v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的组合。17.根据权利要求1-16的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括：a)seq id no:169内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:207内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；b)seq id no:170内v
h-cdr1、v
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l-cdr2、v
l-cdr3。18.根据权利要求1-17的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括：a)seq id no:169的重链可变区和seq id no:207的轻链可变区；b)seq id no:170的重链可变区和seq id no:208的轻链可变区；c)seq id no:171的重链可变区和seq id no:209的轻链可变区；d)seq id no:172的重链可变区和seq id no:210的轻链可变区；e)seq id no:173的重链可变区和seq id no:211的轻链可变区；f)seq id no:174的重链可变区和seq id no:212的轻链可变区；g)seq id no:175的重链可变区和seq id no:213的轻链可变区；h)seq id no:176的重链可变区和seq id no:214的轻链可变区；i)seq id no:177的重链可变区和seq id no:215的轻链可变区；j)seq id no:178的重链可变区和seq id no:216的轻链可变区；k)seq id no:179的重链可变区和seq id no:217的轻链可变区；l)seq id no:180的重链可变区和seq id no:218的轻链可变区；m)seq id no:181的重链可变区和seq id no:219的轻链可变区；n)seq id no:181的重链可变区和seq id no:220的轻链可变区；o)seq id no:182的重链可变区和seq id no:221的轻链可变区；p)seq id no:183的重链可变区和seq id no:222的轻链可变区；q)seq id no:184的重链可变区和seq id no:223的轻链可变区；r)seq id no:185的重链可变区和seq id no:224的轻链可变区；s)seq id no:186的重链可变区和seq id no:225的轻链可变区；t)seq id no:187的重链可变区和seq id no:226的轻链可变区；u)seq id no:188的重链可变区和seq id no:227的轻链可变区；v)seq id no:189的重链可变区和seq id no:228的轻链可变区；w)seq id no:190的重链可变区和seq id no:229的轻链可变区；
x)seq id no:191的重链可变区和seq id no:230的轻链可变区；y)seq id no:192的重链可变区和seq id no:231的轻链可变区；z)seq id no:193的重链可变区和seq id no:232的轻链可变区；aa)seq id no:194的重链可变区和seq id no:233的轻链可变区；ab)seq id no:195的重链可变区和seq id no:234的轻链可变区；ac)seq id no:196的重链可变区和seq id no:235的轻链可变区；ad)seq id no:197的重链可变区和seq id no:236的轻链可变区；ae)seq id no:198的重链可变区和seq id no:237的轻链可变区；af)seq id no:199的重链可变区和seq id no:238的轻链可变区；ag)seq id no:197的重链可变区和seq id no:239的轻链可变区；ah)seq id no:200的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；ai)seq id no:201的重链可变区和seq id no:241的轻链可变区；aj)seq id no:202的重链可变区和seq id no:242的轻链可变区；ak)seq id no:203的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；al)seq id no:204的重链可变区和seq id no:243的轻链可变区；am)seq id no:205的重链可变区和seq id no:244的轻链可变区；an)seq id no:206的重链可变区和seq id no:245的轻链可变区。19.根据权利要求1-18的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段选自由下述组成的组中：13h12.2f8、19d9.2e5、14h10.2c9、2d10.2b2、4a11.2b5、6h6.2d6、20h5.a3、19b5.2e6、23h9.2e4、20d11.2c6、15g7.2a7、4g2.2g6、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、15f10.2d6、12g5.d7、24d12.2h9、13g4.2f8、9h2.2h1、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、847.14h4、mimt001、imt-001(tb001)和imt-006(tb006)。20.根据权利要求1-19的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括人源化抗体。21.根据权利要求1-20的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括全长抗体或其结合片段。22.根据权利要求1-21的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括双特异性抗体或其结合片段。23.根据权利要求1-22的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdab)或骆驼抗体或其结合片段。24.根据权利要求1-23的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括igg框架。25.根据权利要求1-24的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括igg1、igg2或igg4框架。26.根据权利要求1-25的任一项所述的方法，其中破坏gal3和整联蛋白之间的相互作
用减少淋巴细胞粘附。27.根据权利要求26所述的方法，其中淋巴细胞粘附减少至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％或由任何两个上述的百分比限定的范围内的任何百分比。28.一种治疗需要其的受试者的糖尿病的方法，所述方法包括：向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的糖尿病。29.根据权利要求28所述的方法，其中所述糖尿病是胰岛素依赖性糖尿病。30.根据权利要求28所述的方法，其中所述糖尿病是胰岛素非依赖性糖尿病。31.根据权利要求28所述的方法，其中所述糖尿病是i型糖尿病。32.根据权利要求28所述的方法，其中所述糖尿病是ii型糖尿病。33.根据权利要求28-32的任一项所述的方法，其中所述治疗包括降低需要其的受试者的葡萄糖耐量。34.根据权利要求28-33的任一项所述的方法，其中所述治疗包括降低需要其的受试者的胰岛素敏感性。35.根据权利要求28-34的任一项所述的方法，其中所述治疗包括降低需要其的受试者的体重增加。36.根据权利要求28-35的任一项所述的方法，其中所述治疗包括降低需要其的受试者的肝脂肪变性。37.根据权利要求28-36的任一项所述的方法，其进一步包括在施用步骤之前将受试者选择为患有糖尿病或处于患糖尿病的风险。38.根据权利要求28-37的任一项所述的方法，其进一步包括在施用步骤之后检测受试者的与糖尿病相关的症状的改善。39.根据权利要求28-38的任一项所述的方法，其中所述胰岛素受体包括seq id no:2的序列。40.根据权利要求28-39的任一项所述的方法，其中所述整联蛋白选自itga1、itga2、itga3、itga4、itga5、itga6、itga7、itga8、itga9、itga10、itga11、itgad、itgae、itgal、itgam、itgav、itga2b、itga2x、itgb1、itgb2、itgb3、itgb4、itgb5、itgb6、itgb7、itgb8或其任何组合。41.根据权利要求28-40的任一项所述的方法，其中所述整联蛋白包括选自seq id no:339-342的序列。42.根据权利要求28-41的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段与一种或多种另外的治疗组合物一起施用。43.根据权利要求42所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗组合物包括胰岛素、胰岛素衍生物或其类似物、门冬胰岛素、赖谷胰岛素、赖脯胰岛素、低精蛋白胰岛素、德谷胰岛素、地特胰岛素、锌胰岛素、甘精胰岛素、钒、双胍类、二甲双胍、苯乙双胍、丁双胍、噻唑烷二酮、罗格列酮、吡格列酮、曲格列酮、托利咪酮、磺酰脲、甲苯磺丁脲、醋磺己脲、妥拉磺脲、氯磺丙脲、格列吡嗪、格列本脲、格列美脲、格列齐特、格列吡脲、格列喹酮、格列奈类、瑞格列奈、那格列奈、α-葡萄糖苷酶抑制剂、米格列醇、阿卡波糖、伏格列波糖、肠促胰岛素、胰高
血糖素样肽1、胰高血糖素样肽激动剂、艾塞那肽、利拉鲁肽、他斯波鲁肽、利西拉肽、索马鲁肽、度拉鲁肽、胃抑制肽、二肽基肽酶-4抑制剂、维格列汀、西格列汀、沙格列汀、利格列汀、阿格列汀、七格列汀、特力列汀、吉格列汀、普兰林肽、达格列汀、卡格列净、恩格列净或瑞格列净或其任何组合。44.一种治疗需要其的受试者的炎症性肠综合征的方法，所述方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和整联蛋白之间的相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的炎症性肠综合征。45.根据权利要求44所述的方法，其中所述炎症性肠综合征是溃疡性结肠炎或克罗恩氏病或二者。46.根据权利要求44或45所述的方法，其进一步包括在施用步骤之前将受试者选择为患有炎症性肠综合征或处于患炎症性肠综合征的风险。47.根据权利要求44-46的任一项所述的方法，其进一步包括在施用步骤之后检测受试者的与炎症性肠综合征相关症状的改善。48.根据权利要求44-47的任一项所述的方法，其中破坏gal3和整联蛋白之间的相互作用减少受试者的淋巴细胞粘附。49.根据权利要求48所述的方法，其中淋巴细胞粘附减少至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％或由任何两个上述的百分比限定的范围内的任何百分比。50.根据权利要求44-49的任一项所述的方法，其中所述整联蛋白选自itga1、itga2、itga3、itga4、itga5、itga6、itga7、itga8、itga9、itga10、itga11、itgad、itgae、itgal、itgam、itgav、itga2b、itga2x、itgb1、itgb2、itgb3、itgb4、itgb5、itgb6、itgb7、itgb8或其任何组合。51.根据权利要求44-50的任一项所述的方法，其中所述整联蛋白包括选自seq id no:339-342的序列。52.根据权利要求44-51的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段与一种或多种另外的治疗组合物一起施用。53.根据权利要求52所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗组合物包括美沙拉嗪、免疫抑制剂、强的松、tnf抑制剂、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤或利福昔明或其任何组合。54.一种治疗需要其的受试者的非酒精性脂肪性肝病(nafld)的方法，所述方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的nafld。55.一种治疗需要其的受试者的非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，所述方法包括向受试者施用选择性结合至gal3并且破坏gal3和胰岛素受体之间相互作用的抗gal3抗体或其结合片段，从而治疗受试者的nash。56.根据权利要求28-55的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段结合至gal3的n-末端结构域。57.根据权利要求28-56的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段结合至seq id no:3-26的一种或多种肽。
58.根据权利要求28-57的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段结合至由肽1(adnfslhdalsgsgnpnpqg；seq id no:3)、肽4(gaggypgasypgaypgqapp；seq id no:6)、肽6(gaypgqappgaypgapgayp；seq id no:8)、肽7(aypgapgaypgapapgvypg；seq id no:9)或其组合限定的gal3的区域内存在的表位。59.根据权利要求28-58的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段结合至包括gxypg的氨基酸序列的gal3的表位，其中x是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸。60.根据权利要求28-59的任一项所述的方法，其中相互作用降低至不存在抗gal3抗体或其结合片段的情况下的相互作用的小于80％、小于75％、小于70％、小于65％、小于60％、小于55％、小于50％、小于45％、小于40％、小于35％、小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于5％或小于1％。61.根据权利要求28-60的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段以小于1nm、小于1.2nm、小于2nm、小于5nm、小于10nm、小于13.5nm、小于15nm、小于20nm、小于25nm或小于30nm的解离常数(kd)结合至gal3。62.根据权利要求28-61的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括(1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区；和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区，其中v
l-cdr1包括与根据seq id no:100-128的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
l-cdr2包括与根据seq id no:129-144的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
l-cdr3包括与根据seq id no:145-168的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
h-cdr1包括与根据seq id no:27-47的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
h-cdr2包括与根据seq id no:48-69的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，和v
h-cdr3包括与根据seq id no:70-99的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。63.根据权利要求62所述的方法，其中所述重链可变区包括与根据seq id no:169-206的任何序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。64.根据权利要求62或63所述的方法，其中所述重链可变区选自由seq id no:169-206组成的组。65.根据权利要求62-64的任一项所述的方法，其中所述轻链可变区包括与根据seq id no:207-245的任何序列具有至少75％、80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列。66.根据权利要求62-65的任一项所述的方法，其中所述轻链可变区选自由seq id no:207-245组成的组。67.根据权利要求28-66的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括图36中阐释的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3、v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的组合。
no:225内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；t)seq id no:187内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:226内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；u)seq id no:188内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:227内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；v)seq id no:189内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:228内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；w)seq id no:190内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:229内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；x)seq id no:191内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:230内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；y)seq id no:192内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:231内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；z)seq id no:193内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:232内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；aa)seq id no:194内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:233内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ab)seq id no:195内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:234内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ac)seq id no:196内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:235内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ad)seq id no:197内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:236内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ae)seq id no:198内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
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h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:237内v
l-cdr1、v
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l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；af)seq id no:199内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:238内v
l-cdr1、v
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l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ag)seq id no:197内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
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h-cdr1、v
h-cdr2、v
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l-cdr1、v
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l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ah)seq id no:200内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
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h-cdr1、v
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h-cdr3和seq id no:240内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
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l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ai)seq id no:201内v
h-cdr1、v
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h-cdr1、v
h-cdr2、v
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l-cdr1、v
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l-cdr3；aj)seq id no:202内v
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h-cdr2、v
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h-cdr1、v
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l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；ak)seq id no:203内v
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l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；al)seq id no:204内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:243内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3；
am)seq id no:205内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
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l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3an)seq id no:206内v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3的v
h-cdr1、v
h-cdr2、v
h-cdr3和seq id no:245内v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3。69.根据权利要求28-68的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括：a)seq id no:169的重链可变区和seq id no:207的轻链可变区；b)seq id no:170的重链可变区和seq id no:208的轻链可变区；c)seq id no:171的重链可变区和seq id no:209的轻链可变区；d)seq id no:172的重链可变区和seq id no:210的轻链可变区；e)seq id no:173的重链可变区和seq id no:211的轻链可变区；f)seq id no:174的重链可变区和seq id no:212的轻链可变区；g)seq id no:175的重链可变区和seq id no:213的轻链可变区；h)seq id no:176的重链可变区和seq id no:214的轻链可变区；i)seq id no:177的重链可变区和seq id no:215的轻链可变区；j)seq id no:178的重链可变区和seq id no:216的轻链可变区；k)seq id no:179的重链可变区和seq id no:217的轻链可变区；l)seq id no:180的重链可变区和seq id no:218的轻链可变区；m)seq id no:181的重链可变区和seq id no:219的轻链可变区；n)seq id no:181的重链可变区和seq id no:220的轻链可变区；o)seq id no:182的重链可变区和seq id no:221的轻链可变区；p)seq id no:183的重链可变区和seq id no:222的轻链可变区；q)seq id no:184的重链可变区和seq id no:223的轻链可变区；r)seq id no:185的重链可变区和seq id no:224的轻链可变区；s)seq id no:186的重链可变区和seq id no:225的轻链可变区；t)seq id no:187的重链可变区和seq id no:226的轻链可变区；u)seq id no:188的重链可变区和seq id no:227的轻链可变区；v)seq id no:189的重链可变区和seq id no:228的轻链可变区；w)seq id no:190的重链可变区和seq id no:229的轻链可变区；x)seq id no:191的重链可变区和seq id no:230的轻链可变区；y)seq id no:192的重链可变区和seq id no:231的轻链可变区；z)seq id no:193的重链可变区和seq id no:232的轻链可变区；aa)seq id no:194的重链可变区和seq id no:233的轻链可变区；ab)seq id no:195的重链可变区和seq id no:234的轻链可变区；ac)seq id no:196的重链可变区和seq id no:235的轻链可变区；ad)seq id no:197的重链可变区和seq id no:236的轻链可变区；ae)seq id no:198的重链可变区和seq id no:237的轻链可变区；af)seq id no:199的重链可变区和seq id no:238的轻链可变区；ag)seq id no:197的重链可变区和seq id no:239的轻链可变区；
ah)seq id no:200的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；ai)seq id no:201的重链可变区和seq id no:241的轻链可变区；aj)seq id no:202的重链可变区和seq id no:242的轻链可变区；ak)seq id no:203的重链可变区和seq id no:240的轻链可变区；al)seq id no:204的重链可变区和seq id no:243的轻链可变区；am)seq id no:205的重链可变区和seq id no:244的轻链可变区；an)seq id no:206的重链可变区和seq id no:245的轻链可变区。70.根据权利要求28-69的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段选自由下述组成的组中：13h12.2f8、19d9.2e5、14h10.2c9、2d10.2b2、4a11.2b5、6h6.2d6、20h5.a3、19b5.2e6、23h9.2e4、20d11.2c6、15g7.2a7、4g2.2g6、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、15f10.2d6、12g5.d7、24d12.2h9、13g4.2f8、9h2.2h1、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、847.14h4、mimt001、imt-001(tb001)和imt-006(tb006)。71.根据权利要求28-70的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段通过肠内、口服、鼻内、肠胃外、颅内、皮下、肌内、皮内或静脉内，或其任何组合施用。72.根据权利要求28-71的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括人源化抗体。73.根据权利要求28-72的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括全长抗体或其结合片段。74.根据权利要求28-73的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括双特异性抗体或其结合片段。75.根据权利要求28-74的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括单价fab’、二价fab2、单链可变片段(scfv)、双抗体、微抗体、纳米抗体、单域抗体(sdab)或骆驼抗体或其结合片段。76.根据权利要求28-75的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括igg框架。77.根据权利要求28-76的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段包括igg1、igg2或igg4框架。78.根据权利要求28-77的任一项所述的方法，其中所述受试者被诊断患有i型糖尿病或ii型糖尿病。79.根据权利要求28-78的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段被配制用于全身施用。80.根据权利要求28-79的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或其结合片段被配制用于肠胃外施用。81.根据权利要求28-80的任一项所述的方法，其中施用多于一种抗gal3抗体或结合片段。82.根据权利要求28-81的任一项所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。
83.根据权利要求82所述的方法，其中所述哺乳动物是人。84.一种抗gal3抗体，其包括(1)包括v
l-cdr1、v
l-cdr2和v
l-cdr3的轻链可变区；和(2)包括v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的重链可变区，其中v
l-cdr1包括与根据seq id no:100-128的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
l-cdr2包括与根据seq id no:129-144的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
l-cdr3包括与根据seq id no:145-168的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
h-cdr1包括与根据seq id no:27-47的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，v
h-cdr2包括与根据seq id no:48-69的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列，和v
h-cdr3包括与根据seq id no:70-99的任何氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或100％序列同一性的氨基酸序列。85.根据权利要求84所述的抗gal3抗体，其中所述抗gal3抗体包括图36中阐释的v
l-cdr1、v
l-cdr2、v
l-cdr3、v
h-cdr1、v
h-cdr2和v
h-cdr3的组合。86.根据权利要求84或85所述的抗gal3抗体，其中所述抗gal3抗体选自由下述组成的组中：6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、4g2.2g6、13h12.2f8、19b5.2e6、15g7.2a7、23h9.2e4、19d9.2e5、2d10.2b2、4a11.2b5、14h10.2c9、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8、15f10.2d6、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、847.14h4、mimt001、imt-001(tb001)和imt-006(tb006)。87.根据权利要求84-86的任一项所述的抗gal3抗体，其中所述抗gal3抗体选自由下述组成的组中：f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3和847.14h4。88.一种包括根据权利要求84-87的任一项所述的抗gal3抗体的药物制剂。89.根据权利要求88所述的药物制剂，用于治疗糖尿病。90.根据权利要求88所述的药物制剂，用于治疗炎症性肠病。91.根据权利要求88所述的药物制剂，用于治疗nafld和/或nash。92.一种结合至人gal3并且与抗gal3抗体竞争结合至人gal3的抗体，其中所述抗gal3抗体选自由下述组成的组中：6h6.2d6、20h5.a3、20d11.2c6、4g2.2g6、13h12.2f8、19b5.2e6、15g7.2a7、23h9.2e4、19d9.2e5、2d10.2b2、4a11.2b5、14h10.2c9、3b11.2g2、13a12.2e5、7d8.2d8和15f10.2d6、23b10.2b12、6b3.2d3、f846c.1b2、f846c.1f5、f846c.1h12、f846c.1h5、f846c.2h3、f846tc.14a2、f846tc.14e4、f846tc.16b5、f846tc.7f10、f847c.10b9、f847c.11b1、f847c.12f12、f847c.26f5、f847c.4b10、f849c.8d10、f849c.8h3、847.14h4、mimt001、imt001(tb001)和imt006(tb006)。
93.一种用于鉴定能够破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者之间相互作用的抗体的方法，所述方法包括：(a)使gal3蛋白质与选择性结合至gal3的抗体或其结合片段接触，从而形成gal3-抗体复合物；(b)使gal3-抗体复合物与胰岛素受体或整联蛋白或二者接触；(c)去除未结合的胰岛素受体或整联蛋白或二者；和(d)检测结合至gal3-抗体复合物的胰岛素受体或整联蛋白或二者；其中当胰岛素受体或整联蛋白或二者在(d)中未检测到时，抗体或其结合片段能够破坏gal3和胰岛素受体或整联蛋白或二者的相互作用。94.根据权利要求93所述的方法，其中所述方法包括免疫测定。95.根据权利要求94所述的方法，其中所述免疫测定是酶联免疫吸附测定。96.产生抗gal3抗体或其结合片段的方法，包括：在细胞中表达编码抗gal3抗体或其结合片段的核酸；和从细胞种分离表达的抗gal3抗体或其结合片段。97.根据权利要求96所述的方法，进一步包括浓缩抗gal3抗体或其结合片段至期望的浓度。98.根据权利要求96或97所述的方法，其中细胞是哺乳动物细胞、昆虫细胞或细菌细胞。99.根据权利要求96-98的任一项所述的方法，其中所述抗gal3抗体或结合片段是根据权利要求1-83所述方法的任一项所述的抗gal3抗体或其结合片段。

技术总结
本文公开了破坏半乳凝素-3和胰岛素受体或整联蛋白之间相互作用的方法和组合物。本文进一步公开了用于治疗受试者的疾病或紊乱，比如治疗糖尿病、炎症性肠综合征、非酒精性脂肪性肝病和非酒精性脂肪性肝炎的方法和组合物。性肝病和非酒精性脂肪性肝炎的方法和组合物。性肝病和非酒精性脂肪性肝炎的方法和组合物。


技术研发人员：孙东旭 J
受保护的技术使用者：真和制药有限公司
技术研发日：2020.12.03
技术公布日：2022/11/1