1.本发明涉及干粉细胞培养基生产技术领域，尤其涉及一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法。
背景技术：2.细胞培养基通过模拟细胞在体内的生存环境，从而实现其在体外生长和增殖的效果。通常细胞培养基有两种不同的存在形式：液体细胞培养基和干粉细胞培养基。相较于液体细胞培养基而言，干粉细胞培养基具有贮存体积小，运输方便、稳定性高、有效期更长等优势。
3.干粉细胞培养基的生产需要保障成品的使用性能，以及批次间的一致性及稳定性，因此对成品组分的均一性要求特别高。研磨和混合是保障干粉细胞培养基成品组分均一性的重要工序。而在生产过程中研磨要先于混合，配方成分的研磨均一性可以降低混合的时间，减轻后续的批混合的工作量。
4.干粉培养基中的物料很多，而每种物料的理化属性都不相同，在生产中的处理方式也不一样。氨基酸能为细胞提供优质的氮源，且能参与细胞的生殖代谢，是干粉细胞培养基中含量最高且最为重要的组分。通常采用研磨的方式保障氨基酸半成品的均一性。
5.配方中各物料含量不同，但是一些含量低而功能上不可或缺组分的研磨均一性必须要得到保障。可通过hplc检测氨基酸半成品的研磨均一性，但是这种方式检测时间较长，成本花费较大。还有研究人员在研磨前往氨基酸组分中添加带颜色的指示剂，以此来判断研磨后半成品的均一性，但这种人为引入外来指示剂的方法，对培养基的使用性能可能会有不利的影响。因此，本领域迫切需要开发一种快速、安全的判定氨基酸半成品研磨均一性的方法，提高干粉细胞培养基成品的生产效率。
技术实现要素：6.本发明提供了一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法，以解决现有技术的上述问题。
7.本发明的方案是：
8.一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法，包括下列步骤：
9.1)称量配方中所有氨基酸组分以及含金属离子成分，将它们装进研磨机中，设置研磨机的转速300rpm与研磨的时间3h，进行研磨；
10.2)研磨结束后，半成品装桶，从桶的上部、中部以及下部各取10g的半成品干粉；
11.3)将3个取样点的半成品干粉分别加入到3个烧杯中，添加1000ml的20～30℃超纯水，在800rpm下磁力搅拌20min至完全溶解；
12.4)检测溶解后3个取样点半成品溶液中金属离子的浓度；
13.5)依据溶液中的金属离子的相对百分比浓度，判定干粉细胞培养基氨基酸半成品的研磨均一性。
14.作为优选的技术方案，所述金属离子成分为柠檬酸铁、柠檬酸铁铵与七水硫酸亚铁其中的一种，所述金属离子为铁离子。
15.作为优选的技术方案，所述金属离子成分为氯化钙与硫酸钙其中的一种，所述金属离子为钙离子。
16.作为优选的技术方案，所述金属离子成分为无水硫酸镁与无水氯化镁其中的一种，所述金属离子为镁离子。
17.本发明还公开了一种干粉细胞培养基，所述干粉细胞培养基的组分包含氨基酸、无机盐、微量元素、糖类。
18.本发明还公开了一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法的应用，所述干粉细胞培养基研磨均一性判定，通过检测培养基中的金属离子进行判定。
19.本发明还公开了一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法的用途，用于快速判定干粉类基础细胞培养基与补料细胞培养基的研磨均一性。
20.由于采用了上述技术方案一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法，1)称量配方中所有氨基酸组分以及含金属离子成分，将它们装进研磨机中，设置研磨机的转速300rpm与研磨的时间3h，进行研磨；2)研磨结束后，半成品装桶，从桶的上部、中部以及下部各取10g的半成品干粉；3)将3个取样点的半成品干粉分别加入到3个烧杯中，添加1000ml的20～30℃超纯水，在800rpm下磁力搅拌20min至完全溶解；4)检测溶解后3个取样点半成品溶液中金属离子的浓度；5)依据溶液中的金属离子的相对百分比浓度，判定干粉细胞培养基氨基酸半成品的研磨均一性。
21.本发明与现有技术相对，具有以下的优点和效果：
22.①
判定方法未引入颜色指示剂，所使用的柠檬酸铁或氯化钙或硫酸镁均为培养基的组分之一，因此对培养基的使用性能无影响。
23.②
氨基酸半成品的检测前处理方式简单，且仅需检测单一离子(铁或钙或镁)的浓度就能做出判断，能缩短时间，提高后续生产的效率。
附图说明
24.图1为实施例1中将氨基酸组分与柠檬酸铁一同研磨后，三个取样点铁离子相对浓度百分比数据图；
25.图2为实施例2中将氨基酸组分与氯化钙一同研磨后，三个取样点钙离子相对浓度百分比数据图；
26.图3为实施例3中将氨基酸组分与硫酸镁一同研磨后，三个取样点镁离子相对浓度百分比数据图；
27.图4为对比例1中将氨基酸组分与柠檬酸铁一同研磨后，三个取样点铁离子相对浓度百分比数据图；
28.图5为采用实施例1、2、3和对比例1所述氨基酸半成品生产得到的dn feed2培养基，用于培养chok1sv细胞的活细胞密度随时间的变化图；
29.图6为采用实施例1、2、3和对比例1所述氨基酸半成品生产得到的dn feed2培养基，用于培养chok1sv细胞的抗体蛋白产量图。
具体实施方式
30.为了弥补以上不足，本发明提供了一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法以解决上述背景技术中的问题。
31.一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法，包括下列步骤：
32.1)称量配方中所有氨基酸组分以及含金属离子成分，将它们装进研磨机中，设置研磨机的转速300rpm与研磨的时间3h，进行研磨；
33.2)研磨结束后，半成品装桶，从桶的上部、中部以及下部各取10g的半成品干粉；
34.3)将3个取样点的半成品干粉分别加入到3个烧杯中，添加1000ml的20～30℃超纯水，在800rpm下磁力搅拌20min至完全溶解；
35.4)检测溶解后3个取样点半成品溶液中金属离子的浓度；
36.5)依据溶液中的金属离子的相对百分比浓度，判定干粉细胞培养基氨基酸半成品的研磨均一性。
37.所述金属离子成分为柠檬酸铁、柠檬酸铁铵与七水硫酸亚铁其中的一种，所述金属离子为铁离子。
38.所述金属离子成分为氯化钙与硫酸钙其中的一种，所述金属离子为钙离子。
39.所述金属离子成分为无水硫酸镁与无水氯化镁其中的一种，所述金属离子为镁离子。
40.本发明还公开了一种干粉细胞培养基，所述干粉细胞培养基的组分包含氨基酸、无机盐、微量元素、糖类。
41.本发明还公开了一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法的应用，所述干粉细胞培养基研磨均一性判定，通过检测培养基中的金属离子进行判定。
42.本发明还公开了一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法的用途，用于快速判定干粉类基础细胞培养基与补料细胞培养基的研磨均一性。
43.现以公开授权发明专利《化学成分限定高效补料培养基及其制备方法和应用》(专利号：zl202010411627.1)为例进行详述。
44.该补料培养基a(dn feed 2)的配方如下：
45.[0046][0047]
上述配方中氨基酸含量最低的是甘氨酸349mg/l；而非氨基酸组分柠檬酸铁200mg/l、氯化钙234mg/l、硫酸镁320mg/l，它们的含量均低于甘氨酸。将于这3个非氨基酸原料分别与氨基酸组分共同研磨，若低含量的柠檬酸铁、氯化钙、硫酸镁已研磨均匀，则可推断出氨基酸半成品是研磨均匀的。
[0048]
本法发明所述干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法，实施方案如下：
[0049]
称量配方中所有氨基酸组分以及柠檬酸铁(或氯化钙或硫酸镁)，将它们装进研磨机中，设置研磨机的转速为300rpm、研磨时间3h，开始研磨。研磨结束后，半成品装桶，从桶的上部、中部以及下部各取10g的半成品干粉。将3个取样点的半成品干粉分别加入到3个烧杯中，添加1000ml 20～30℃超纯水，在800rpm下磁力搅拌20min至完全溶解，检测溶解后3个取样点半成品溶液中铁离子(或钙离子或镁离子)的浓度。
[0050]
将研磨后的氨基酸组分以及柠檬酸铁(或氯化钙或硫酸镁)半成品，与补料培养基a剩余组分继续生产加工制得成品。将制得的成品干粉培养基配置成完整的液体培养基用于细胞生长测试，评估本发明所述方法的适用性。
[0051]
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
[0052]
通过下列配方，对实施例进行详细的配合阐述。
[0053]
配方为公开授权发明专利《化学成分限定高效补料培养基及其制备方法和应用》
(专利号：zl202010411627.1)中提及的补料培养基a(dn feed 2)的成分及含量如下：
[0054][0055][0056]
实施例1
[0057]
生产2kg规模的氨基酸半成品，称量配方中所有氨基酸组分以及柠檬酸铁，将它们装进研磨机中，设置研磨机的转速为300rpm、研磨时间3h，开始研磨。研磨结束后，半成品装桶，从桶的上部、中部以及下部各取10g的半成品干粉。将3个取样点的半成品干粉分别加入到3个烧杯中，添加1000ml 20～30℃超纯水，在800rpm下磁力搅拌20min至完全溶解，检测
溶解后3个取样点半成品溶液中铁离子的浓度。数据以相对百分比显示，见图1。
[0058]
将研磨后的氨基酸以及柠檬酸铁半成品，与补料dn feed 2剩余组分继续生产加工制得成品。将制得的成品干粉培养基配置成完整的dn feed 2液体培养基用于细胞生长测试，评估本发明所述方法的适用性。
[0059]
采用chok1sv细胞进行培养基生长性能评估，测试方案如下：
[0060][0061]
chok1sv细胞的活细胞密度随时间的变化见图5，抗体蛋白的产量见图6。
[0062]
实施例2
[0063]
生产2kg规模的氨基酸半成品，称量配方中所有氨基酸组分以及氯化钙，将它们装进研磨机中，设置研磨机的转速为300rpm、研磨时间3h，开始研磨。研磨结束后，半成品装桶，从桶的上部、中部以及下部各取10g的半成品干粉。将3个取样点的半成品干粉分别加入到3个烧杯中，添加1000ml 20～30℃超纯水，在800rpm下磁力搅拌20min至完全溶解，检测溶解后3个取样点半成品溶液中钙离子的浓度。数据以相对百分比显示，见图2。
[0064]
将研磨后的氨基酸以及氯化钙半成品，与补料dn feed 2剩余组分继续生产加工制得成品。将制得的成品干粉培养基配置成完整的dn feed 2液体培养基用于细胞生长测试，评估本发明所述方法的适用性。
[0065]
采用chok1sv细胞进行培养基生长性能评估，测试方案如下：
[0066][0067]
chok1sv细胞的活细胞密度随时间的变化见图5，抗体蛋白的产量见图6。
[0068]
实施例3
[0069]
生产2kg规模的氨基酸半成品，称量配方中所有氨基酸组分以及硫酸镁，将它们装进研磨机中，设置研磨机的转速为300rpm、研磨时间3h，开始研磨。研磨结束后，半成品装桶，从桶的上部、中部以及下部各取10g的半成品干粉。将3个取样点的半成品干粉分别加入到3个烧杯中，添加1000ml 20～30℃超纯水，在800rpm下磁力搅拌20min至完全溶解，检测溶解后3个取样点半成品溶液中镁离子的浓度。数据以相对百分比显示，见图3。
[0070]
将研磨后的氨基酸以及硫酸镁半成品，与补料dn feed 2剩余组分继续生产加工制得成品。将制得的成品干粉培养基配置成完整的dn feed 2液体培养基用于细胞生长测试，评估本发明所述方法的适用性。
[0071]
采用chok1sv细胞进行培养基生长性能评估，测试方案如下：
[0072][0073]
chok1sv细胞的活细胞密度随时间的变化见图5，抗体蛋白的产量见图6。
[0074]
对比例1
[0075]
生产2kg规模的氨基酸半成品，称量配方中所有氨基酸组分以及柠檬酸铁，将它们装进研磨机中，设置研磨机的转速为300rpm、研磨时间0.5h，开始研磨。研磨结束后，半成品装桶，从桶的上部、中部以及下部各取10g的半成品干粉。将3个取样点的半成品干粉分别加入到3个烧杯中，添加1000ml 20～30℃超纯水，在800rpm下磁力搅拌20min至完全溶解，检测溶解后3个取样点半成品溶液中铁离子的浓度。数据以相对百分比显示，见图4。
[0076]
将研磨后的氨基酸以及柠檬酸铁半成品，与补料dn feed 2剩余组分继续生产加工制得成品。将制得的成品干粉培养基配置成完整的dn feed 2液体培养基用于细胞生长测试，评估本发明所述方法的适用性。
[0077]
采用chok1sv细胞进行培养基生长性能评估，测试方案如下：
[0078][0079]
chok1sv细胞的活细胞密度随时间的变化见图5，抗体蛋白的产量见图6。
[0080]
在干粉细胞培养基制备过程中，判断含量低但是功能上不可或缺的组分是否研磨均匀是一个难题。本发明通过将柠檬酸铁、氯化钙、硫酸镁分别与配方中氨基酸组分共同研磨，取样检测进行判定。因为柠檬酸铁、氯化钙、硫酸镁在配方中的含量比氨基酸组分中最低的甘氨酸含量还少，且实验结果可以看出，实施例1、2、3不同取样点铁离子、钙离子和镁离子的相对百分含量都无显著差异，间接表明氨基酸半成品中各组分都研磨均匀。相反，对比例1研磨时间缩短后，取样检测发现不同取样点铁离子的相对百分含量差别较大，即氨基酸半成品研磨不均匀。
[0081]
此外，实施例1、2、3中chok1sv细胞的生长和产物表达的数据结果无明显差异，而对比例1，与其他实施例相比培养效果均出现显著性差异。进一步表明本发明所述的氨基酸半成品研磨均一性的快速判定方法是可行且有效的。
[0082]
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
技术特征：1.一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法，其特征在于，包括下列步骤：1)称量配方中所有氨基酸组分以及含金属离子成分，将它们装进研磨机中，设置研磨机的转速300rpm与研磨的时间3h，进行研磨；2)研磨结束后，半成品装桶，从桶的上部、中部以及下部各取10g的半成品干粉；3)将3个取样点的半成品干粉分别加入到3个烧杯中，添加1000ml的20～30℃超纯水，在800rpm下磁力搅拌20min至完全溶解；4)检测溶解后3个取样点半成品溶液中金属离子的浓度；5)依据溶液中的金属离子的相对百分比浓度，判定干粉细胞培养基氨基酸半成品的研磨均一性。2.如权利要求1所述的一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法，其特征在于：所述金属离子成分为柠檬酸铁、柠檬酸铁铵与七水硫酸亚铁其中的一种，所述金属离子为铁离子。3.如权利要求1所述的一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法，其特征在于：所述金属离子成分为氯化钙与硫酸钙其中的一种，所述金属离子为钙离子。4.如权利要求1所述的一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法，其特征在于：所述金属离子成分为无水硫酸镁与无水氯化镁其中的一种，所述金属离子为镁离子。5.一种如权利要求1所述的干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法用干粉细胞培养基，其特征在于：所述干粉细胞培养基的组分包含氨基酸、无机盐、微量元素、糖类。6.一种如权利要求1所述干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法的应用，其特征在于：所述干粉细胞培养基研磨均一性判定，通过检测培养基中的金属离子进行判定。7.一种如权利要求1所述干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法的用途，其特征在于：用于快速判定干粉类基础细胞培养基与补料细胞培养基的研磨均一性。
技术总结本发明公开了一种干粉细胞培养基氨基酸半成品研磨均一性快速判定方法，1)称量配方中所有氨基酸组分以及含金属离子成分，进行研磨；2)研磨结束后，半成品装桶，从桶的上部、中部以及下部各取10g的半成品干粉；3)将3个取样点的半成品干粉分别加入到3个烧杯中，添加1000mL的20～30℃超纯水，在800rpm下磁力搅拌20min至完全溶解；4)检测溶解后3个取样点半成品溶液中金属离子的浓度；5)依据溶液中的金属离子的相对百分比浓度，判定干粉细胞培养基氨基酸半成品的研磨均一性。本发明判定方法未引入颜色指示剂，所使用的柠檬酸铁或氯化钙或硫酸镁均为培养基的组分之一，因此对培养基的使用性能无影响。用性能无影响。用性能无影响。
技术研发人员：纪明宇 王龙 王猛
受保护的技术使用者：无锡多宁生物科技有限公司
技术研发日：2022.07.04
技术公布日：2022/11/1
